全 文 ：巨噬细胞的酶活性。实验结果显示一定浓度的艾叶多糖能增强
ACP、NSE以及 SDH的活性。巨噬细胞受到刺激进一步分化成熟，
成为活化巨噬细胞，使细胞内多种酶活性显著增强，有效地执行其
运动、吞噬、对抗原的处理及活性物质的分泌等功能［8］。因此，实
验结果说明艾叶多糖对巨噬细胞具有激活作用，可使巨噬细胞的
ACP、NSE以及 SDH的活性增强，更有效地执行其免疫功能。可见
艾叶多糖对巨噬细胞具有免疫增强作用。研究发现生物活性多糖
具有多种免疫调节作用，提示艾叶多糖增强巨噬细胞胞内酶活性
可能是其免疫调节的部分药理作用，对巨噬细胞分泌细胞因子以
及对其它免疫细胞的调节作用有待进一步研究。
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收稿日期:2012-12-07; 修订日期:2013-05-03
基金项目:新疆维吾尔自治区自然科学基金( No． 2012211A027)
作者简介:杨建华( 1971-) ，男( 壮族) ，广西邕宁人，现任新疆医科大学第
一附属医院主任药师，副教授，博士学位，主要从事中药新药研究与开发
工作．
* 通讯作者简介:胡君萍( 1971-) ，女( 汉族) ，甘肃酒泉人，现任新疆医科
大学药学院教授，博士学位，主要从事天然药物研究与开发工作．
沙枣总酚抗辐射活性研究
杨建华1，2，闫 瑶1，胡君萍2* ，柳惠斌3，热娜·卡斯木2
(1．新疆医科大学第一附属医院，新疆 乌鲁木齐 830011;
2．新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830011;
3．新疆医科大学 附属肿瘤医院，新疆 乌鲁木齐 830011)
摘要:目的 对沙枣总酚的辐射防护作用进行研究。方法 采用不同剂量 X射线照射人皮肤成纤维细胞( Human Skin Fi-
broblasts，HSF) ，构建辐射损伤模型，以MTT法检测不同剂量沙枣总酚对 HSF增殖的影响。结果 X射线对 HSF的增殖抑
制作用与辐射剂量呈正相关。与 2、4、8 Gy辐射组比较，16 Gy辐射组增殖抑制作用有显著差异( P ＜ 0． 01) 。采用 16 Gy
一次性 X射线照射构建辐射损伤模型，模型组与不同剂量沙枣总酚组在 2，24，48 h( 除 100 μg /ml － 48 h组以外) 时段均
有显著统计学差异( P ＜ 0． 01) 。照射后 2 h，辐射防护作用呈现剂量依赖性，但各剂量给药组的辐射防护作用均随辐射
后时间延长而减弱。结论 X射线辐射对 HSF具有明显损伤作用，而沙枣总酚对其具有一定的保护作用。
关键词:沙枣; 总酚; 辐射防护; 人皮肤成纤维细胞
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 09． 026
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 09-2120-03
Anti － radiation activity screening of total polyphenols from Elaeagnus angustifolia Seeds
YANG Jian － hua1，2，YAN Yao1，HU Jun-ping2* ，LIU Hui-bin3，ＲENA Kasimu2
( 1． First Affiliated Hospital，Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China; 2． Pharmacy College，Xinjiang
Medical University，Urumqi 830011，China; 3． Affiliated Tumor Hospital，Xinjiang Medical University，Urumqi
830011，China)
Abstract: Objective To screen the anti － radiation activity of total polyphenols from Elaeagnus angustifolia seeds．Methods The
radiation injury model of Human skin fibroblasts ( HSF) were established by irradiating HSF with different dosages of X － ray，then
MTT assay was used to detect the cell＇s proliferation activity after being treated by different concentrations of total polyphenols． Ｒe-
sults The proliferation inhibition effect of X － ray on HSF was positively correlated with the irradiated dose． This kind of effect in
16 Gy group was more significant compared with 2 Gy，4 Gy and 8 Gy groups ( P ＜ 0． 01 ) respectively． Compared with model
group，after the cell was irradiated by 16 Gy X － ray，every total polyphenols group was statistically significant at all － time points
( P ＜ 0． 01) except 100 μg /ml － 48 h． After irradiation for 2h，radiation protection effect became dose dependent，but the radiation
protection effect of the dosage groups decreased with the elongation of time． Conclusion X － ray irradiation can induce obvious
damage to HSF． Total polyphenols can protect HSF from radiation．
Key words: Elaeagnus angustifolia; Total polyphenols; Anti － radiation; Human skin fibroblasts
辐射对人体的危害较大，可引起机体从细胞损伤到整个机构
功能异常和器质性改变甚至死亡。多年来各国科学家一直致力
于抗辐射药物的研究，由于中药来源广、易获得、毒副作用小，人
们期望能从天然药物中寻找到理想的辐射防护剂。天然药物含
有多种成分，所以其抗辐射作用是多方面的，其作用机制主要包
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 9 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 9
括对 DNA、免疫系统、造血系统的保护作用及抗自由基作用，能
够降低辐射对 DNA的损伤，促进外周血象恢复，促进造血系统功
能，抑制出血倾向，提高巨噬细胞吞噬率、吞噬指数和细胞面积，
促进淋巴细胞转化和 IL － 2 的分泌，抑制脂质过氧化反应等［1］。
植物多酚是一类广泛存在于植物体内的多酚类物质，具有抑菌、
抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抗炎等多方面的生物活性［2 ～ 4］，目前开
发成功的葡萄籽多酚、茶多酚和苹果多酚等均有抗辐射作
用［5 ～ 7］。
沙枣(Elaeagnus angustifolia L．)为胡颓子科(Elaeagnus)胡颓
子属的落叶小乔木，是新疆、甘肃、宁夏等地的经济树种［8］。沙
枣果实具有一定营养价值和药用价值。沙枣富含鞣质，课题组前
期已建立了沙枣种子总酚的提取和纯化方法［9，10］。本文采用 X
射线照射人皮肤成纤维细胞(Human Skin Fibroblasts，HSF)构建
辐射损伤模型，以 MTT法检测不同剂量沙枣总酚对 HSF 增殖的
影响，探索沙枣总酚抗辐射活性，评价其辐射防护作用，以期对沙
枣资源的深入开发提供基础研究资料。
1 仪器与材料
1． 1 仪器 Benchmark Plus 全波长酶标仪(BIO － ＲAD 公司) ;
Varian 2300C /D医用直线加速器(美国 Varian公司)。
1． 2 试剂与药物 四甲基偶氮唑盐，美国 Sigma 公司产品，批号:
MKBF7873V;DMSO，上海生工公司产品，批号:SJ0412S4012J;胎
牛血清，上海生工公司产品，批号:LJ0816S0211Z;DMEM(Dulbec-
co＇s modified eagle medium，高糖)培养液，上海生工公司产品，批
号:LJ0905S1611J;沙枣总酚提取物，自制(沙枣果实去除果皮和
果肉，种子晾干后粉碎，过 40 目筛，按文献操作制备沙枣总酚提
取物［9，10］，纯度为 51． 04%)。
2 方法
2． 1 细胞培养 HSF 购自上海复祥生物科技有限公司，在含
10%胎牛血清的 DMEM培养液中，5% CO2、37 ℃孵箱恒温培养，
选择对数生长期细胞进行实验。
2． 2 绘制 HSF生长曲线 收集对数生长期 HSF，调整细胞悬液
浓度至 2． 5 × 104 个 /ml，接种于 96 孔板，每孔 200 μl，置于 5%
CO2、37 ℃孵箱恒温培养。接种后每隔 24 h，采用 MTT 法，利用
全波长酶标仪检测 OD570，每组 6 个复孔，连续检测 8 天后绘制生
长曲线。
2． 3 HSF辐射损伤模型的建立 以直线加速器造辐射损伤模型。
实验分为 6 组:阴性对照组(不辐射)、2 Gy 组、4 Gy 组、8 Gy 组、
16 Gy组、32 Gy组。收集对数生长期 HSF，接种于 96 孔板，接种
方法同“2． 2”项下。5% CO2、37 ℃孵箱恒温培养 48 h后，除阴性
对照组外，其余各组按辐射剂量的不同，分别采用 6 MV X 射线
一次性辐射，辐射剂量率为 3 Gy /min，辐射野大小为 25 cm × 25
cm，辐射源距靶中心距离为 100 cm。辐射时，96 孔板上面放置 1
cm厚等效散射板，下面放置 3 cm 厚等效散射板。辐射后，分别
在 2，24，48，72 h 采用 MTT 法，检测各组细胞的 OD570，每组 6 个
复孔。
2． 4 不同剂量沙枣总酚抗辐射作用 实验分为 7 组:阴性对照组
(不辐射，不给药)、模型组(只辐射，不给药)、5 个剂量沙枣总酚
组(给药 +辐射，各药物均用含 10%胎牛血清的 DMEM 配制，终
浓度分别为 5，25，50，100，200 μg /ml)。按照“2． 2”项下方法接
种细胞，5% CO2、37 ℃孵箱恒温培养 48 h后，各药物干预组分别
给药。给药后 2 h，除阴性对照组外，其余各组均采用 6 MV 16 Gy
X射线一次性辐射，辐射条件同“2． 3”项下。辐射后，分别在 2，
24，48，72 h，采用 MTT法，检测各组细胞的 OD570，每组 6 个复孔。
2． 5 统计学处理 实验数据均为计量资料，以 珋x ± s 表示。应用
SPSS 13． 0 统计软件进行 t检验，P ＜ 0． 05 为差异有统计学意义。
3 结果
3． 1 HSF的生长曲线 本实验中 HSF以 5 × 103 个 /孔接种于 96
孔板，细胞于第 6 天长满。生长曲线结果见图 1。1 ～ 6 d为指数
分裂期，6 ～ 8 d为平台期。该实验结果与文献报道基本一致［11］。
图 1 HSF生长曲线
3． 2 HSF辐射损伤模型 除 2 Gy /72 h 组外，其余各辐射组与阴
性对照组在相同时段比较，辐射组 HSF的增殖活性均明显降低，
差异有统计学意义(P ＜ 0． 05 或 P ＜ 0． 01)。在 24，48，72 h，X 射
线对 HSF 的增殖抑制作用均随辐射剂量的增大而增强
(见表 1)。而不同辐射剂量组 X 射线辐射后 24 h，对 HSF 增殖
抑制作用均最强(见图 2) ，其中除了 4 Gy /2 h 组外，其余辐射组
对 HSF的增殖抑制作用与平行辐射剂量 24 h 组相比，均具有统
计学差异(P ＜ 0． 05 或 P ＜ 0． 01)。由图 2 可知，32 Gy /24 h 组
的增殖抑制作用最明显，但 32 Gy组与 16 Gy 组在各个平行时段
比较时，两组对 HSF 的增殖活性影响无统计学差异。考虑到辐
射时间和成本，最终确定选择 16 Gy X射线一次性照射构建辐射
损伤 HSF模型。
表 1 不同辐射剂量辐射后各时间点 HSF增殖活性(珋x ± s)
分组
OD570
2 h 24 h 48 h 72 h
阴性对照组 0． 817 ± 0． 015 0． 972 ± 0． 044 1． 031 ± 0． 006 0． 965 ± 0． 043
2 Gy组 0． 759 ± 0． 0151) 0． 809 ± 0． 0171) 1． 002 ± 0． 0112) 0． 915 ± 0． 014
4 Gy组 0． 704 ± 0． 0141) 0． 809 ± 0． 0301) 0． 951 ± 0． 0091) 0． 863 ± 0． 0041)
8 Gy组 0． 721 ± 0． 0061) 0． 744 ± 0． 0221) 0． 918 ± 0． 0131) 0． 864 ± 0． 0031)
16 Gy组 0． 698 ± 0． 0221) 0． 708 ± 0． 0301) 0． 838 ± 0． 0221) 0． 833 ± 0． 0091)
32 Gy组 0． 683 ± 0． 0241) 0． 694 ± 0． 0171) 0． 809 ± 0． 0201) 0． 817 ± 0． 0061)
与阴性对照组比较，1)P ＜0． 01，2)P ＜0． 05;n =6
图 2 不同辐射剂量辐射后各时间点 HSF抑制率
3． 3 不同剂量沙枣总酚抗辐射作用 与模型组比较，不同浓度沙
枣总酚在 2，24，48 h(除 100 μg /ml － 48 h组以外)时段均能够显
著提高辐射损伤 HSF 的细胞增殖活性(P ＜ 0． 01)。见表 2。照
射后 2 h，辐射防护作用随给药剂量的增大而增强，呈现剂量依赖
性，但各剂量给药组的辐射防护作用均随辐射后时间延长而减弱
(见图 3)。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 9 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 9 期
表 2 16 Gy辐射后各组各时段 HSF增殖活性(珋x ± s)
分组
OD570
2 h 24 h 48 h 72 h
阴性对照组 0． 288 ± 0． 025 0． 287 ± 0． 019 0． 437 ± 0． 037 0． 576 ± 0． 075
模型组 0． 355 ± 0． 0221) 0． 297 ± 0． 032 0． 358 ± 0． 0201) 0． 425 ± 0． 0761)
5 μg /ml 0． 545 ± 0． 0152) 0． 575 ± 0． 0382) 0． 429 ± 0． 0242) 0． 448 ± 0． 039
25 μg /ml 0． 604 ± 0． 0192) 0． 574 ± 0． 0372) 0． 417 ± 0． 0242) 0． 407 ± 0． 037
50 μg /ml 0． 655 ± 0． 0322) 0． 651 ± 0． 0512) 0． 404 ± 0． 0272) 0． 425 ± 0． 041
100 μg /ml 0． 738 ± 0． 0362) 0． 651 ± 0． 0752) 0． 418 ± 0． 093 0． 477 ± 0． 043
200 μg /ml 0． 787 ± 0． 0342) 0． 545 ± 0． 0872) 0． 457 ± 0． 0592) 0． 512 ± 0． 0563)
模型组与阴性对照组比较，1)P ＜ 0． 01;各药物组与模型组比较，2)P ＜ 0． 01;
3)P ＜0． 05;n =6
图 3 不同浓度沙枣总酚干预后 HSF存活率
4 讨论
随着辐射技术在生产、科研、医疗、军事等方面的广泛应用，
人体受放射线辐射的机会越来越多，辐射对人体的危害也日趋明
显和严重。辐射对生物体具有相当大的危害，其可以直接作用于
DNA、蛋白质及酶类，引起电离激发化学键断裂，使分子变性和细
胞结构破坏;也可以作用于机体内水分子，使其发生水解，产生大
量具有强氧化性的自由基，间接使组织细胞变性、坏死，以致机体
代谢紊乱，引起免疫、神经和内分泌等系统的调节功能障碍。因
此，从抗氧化、清除自由基的角度寻找有效的辐射防护剂已成为
现代医药研发的一个重要思路［12］。
近年来从中药中发掘辐射防护剂成为抗辐射研究领域的新
热点。研究显示沙枣多糖具有一定的抗辐射作用，能增强辐射损
伤小鼠的免疫功能［13］，但沙枣多酚抗辐射作用未见报道。沙枣
多酚是有效的抗氧化剂［14］，基于此本研究对其辐射防护活性进
行了初步探讨。
皮肤组织作为在任何情况下接受外照射的必经途径，是被人
们最早认知的受到辐射损伤的组织［15］。皮肤中 HSF 是真皮的
主要功能细胞和结构基础，是辐射的重要靶位之一。HSF对辐射
损伤凋亡敏感，受到辐射后往往不再具备分裂生长的能力［16］，从
而导致放射性皮肤损伤，因此本研究在细胞水平上选择 HSF 构
建了辐射损伤模型。
细胞增殖活性水平是反映细胞生命力强弱的一个重要指标。
当细胞发生氧化损伤时，细胞增殖活性可不同程度的降低。本文
以 X射线照射 HSF细胞构建辐射损伤模型，X 射线对 HSF 的增
殖抑制作用与辐射剂量呈正相关，其中 16 Gy辐射组增殖抑制作
用显著(P ＜ 0． 01)。以 MTT法检测不同剂量沙枣总酚对 HSF增
殖的影响，结果显示沙枣总酚对损伤 HSF 具有一定的保护作用
(P ＜ 0． 01) ，说明沙枣总酚具有一定的辐射防护作用，其作用机
制及其活性成分有待进一步深入研究。
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