全 文 ：第 27 卷 第 3 期
2015 年 9 月
塔 里 木 大 学 学 报
Journal of Tarim University
Vol． 27 No． 3
Sep． 2015
文章编号: 1009 － 0568( 2015) 03 － 0008 － 06
叉枝鸦葱总多糖、蛋白质及黄酮含量
的年动态变化规律研究
许世勋 隋月红 刘 丹 白红进*
( 塔里木大学生命科学学院 /新疆生产建设兵团塔里木盆地
生物资源保护利用重点实验室，新疆 阿拉尔 843300)
摘要 为了明确叉枝鸦葱植物地上部分中总多糖、蛋白质与黄酮等三种主要活性成分含量的动态变化规律，确定其最佳采收
期，分别采用苯酚 －硫酸法、考马斯亮蓝法和亚硝酸钠 －硝酸铝 －氢氧化钠比色法测定了总多糖、蛋白质及黄酮的含量。结
论表明叉枝鸦葱总多糖、总蛋白质和总黄酮的最佳收获期分别为 6 月上旬，9 月中旬和 5 月上旬。研究结果可为这些主要生
物活性成分的深入研究提供科学依据。
关键词 叉枝鸦葱;多糖;蛋白质;黄酮;动态变化
中图分类号: S852． 61; S853． 74 文献标识码: A DOI: 10． 3969 / j． issn． 1009 － 0568． 2015． 03． 002
Dynamic Change Ｒule of the Contents of Total Polysaccharides，Protein
and Flavonoids in the Aerial Parts of Scorzonera divaricata
Xu Shixun Sui Yuehong Liu Dan Bai Hongjin*
( College of Life Science / Key Laboratory of Protection and Utilization of Biological Ｒesource in Tarim Basin
of Xinjiang Production and Construction Corps，Tarim University，Alar，Xinjiang 843300)
Abstract In order to investigate the dynamic change rule and the best harvest period of three main active components of total polysac-
charide，protein and flavanone in Scorzonera divaricata aerial parts，Sulfuric acid － phenol method method and the coomassie brilliant
blue and the NaNO2 － Al( NO3 ) 3 － NaOH coloration system method were used to determinate the contents of total polysaccharide，total
protein and total flavanone respectively． Ｒesults showed that the best harvest period for total polysaccharide，protein and flavonoids were
in early June，in the middle of September and in early May respectively． The results will provides the scientific basis for potential appli-
cation of the three active constituents．
Key words Scorzonera divaricata ; polysaccharose; protein; total flavonoids; dynamic change
1 前言
叉枝鸦葱 ( Scorzonera divaricata ) 又名拐轴鸦
葱，系菊科，多年生草本，是一种耐干旱、耐盐碱的植
物［1 － 3］，全草入药能解热清毒［4］，主要治疗毒恶疮，其
收稿日期: 2015 － 01 － 15
基金项目:塔里木大学校长基金重点项目( TDZKZD05002) 。
作者简介:许世勋( 1990 － ) ，男，在读硕士，研究方向为植物活性成分的研究。 E － mail: 384464363@ qq． com
* 为通讯作者 E － mail: bhj67@ 163． com
第 3 期 许世勋等:叉枝鸦葱总多糖、蛋白质及黄酮含量的年动态变化规律研究
次还有很强的固沙能力［5］。现有学者认为该植物属
于菊 科 河 西 菊 属 ( Hexinia ) 河 西 菊 ( Hexinia
polydichotoma ( Ostenf． ) H． L． Yang ) 植物［6］。叉枝
鸦葱在新疆主要分布于若羌、乌恰、阿克苏、轮台、托
克逊等地，另外，在甘肃，内蒙古等地也有分布［7］。
现有研究表明鸦葱主要有治疗腹泻、抗炎作用［8 － 9］、
治疗带状疱疹［10］、抗抑郁作用［11］、治乳水不足［12］等
药理作用。此外，鸦葱属植物亦有很好的食用价值，
在许多国家和地区也被用作蔬菜食品［13］、婴儿食
品［14］和牧草［15］以及蚕饲料。目前，国内外学者对鸦
葱属植物化学成分开展了较为深入的研究，其主要化
学成分为挥发油、氨基酸、甾体类、萜类、黄酮类化合
物和鞣质等［16］。
大量文献证明植物多糖、活性蛋白和黄酮具有多
种药理功效，是天然产物研究的主要代谢成分。因
此，测定叉枝鸦葱地上部分中总多糖、总蛋白质及总
黄酮含量，研究其含量动态变化规律，确定其最佳采
收期，可为该植物的深入研究提供科学依据。
2 材料与方法
2． 1 材料、仪器与试剂
材料: 在叉枝鸦葱的生长期内 ( 2011、2012 和
2013 年的 5 月至 10 月) ，每隔半个月到阿拉尔市十
二团沙漠公路湿地采集适量的叉枝鸦葱，分别标记
为: 5． 1( 日期 1) 、5． 15 ( 日期 2 ) 、6． 1 ( 日期 3 ) 、6． 15
( 日期 4) 、7． 1( 日期 5) 、7． 15( 日期 6) 、8． 1( 日期 7) 、
8． 15( 日期 8 ) 、9． 1 ( 日期 9 ) 、9． 15 ( 日期 10 ) 、10． 1
( 日期 11) ，自然阴干至恒重。
试剂:葡萄糖，浓硫酸，苯酚，亚硝酸钠，乙醇，硝
酸铝，氢氧化钠，考马斯亮蓝 G － 250，均为国产分析
纯;芦丁( Dr． Ehrdnstor fvr 德国，批号: 60922) 。
仪器: KQ －400KDE 台式通用超声波清洗器( 昆
山市超声仪器有限公司) ; CW － 2000 超声微波协同
萃取仪( 中山大学 －上海新拓联合研制) ; JA － 1203
电子天平( 上海恒平仪器有限公司) ;水浴锅( 上海申
生科技有限公司) ; CAＲY －100 紫外可见分光光度计
( 澳大利亚 VAＲIAN 公司) ; FW － 100 高速万能粉碎
机( 北京市永光明医疗仪器厂) ; SXKW 数显控温电
热套( 北京市永明医疗仪器厂) 。
2． 2 试验方法
2． 2． 1 样品的处理
将叉枝鸦葱地上部分阴干后粉碎，过 60 目筛，放
入样品袋内密封保存，标记，备用。
2． 2． 2 样液的制备
水浴回流法提取多糖、蛋白质: 分别精密称取
2． 2． 1中制备的粉末样 1． 000 0 g置于 100 mL圆底烧
瓶中，再分别加入 30 mL蒸馏水，水浴加热 1． 5 h( 温
度调至 80 ℃ ) ，漏斗过滤，将滤液置于 100 mL 容量
瓶中，再将残渣重复以上操作两次，合并滤液，然后用
蒸馏水定容至 100 mL，盖上瓶塞，备用。
乙醇回流法提取总黄酮:分别精密称取 2． 2． 1 中
制备的粉末样 1． 000 0 g置于 100 mL圆底烧瓶中，再
分别加入 30 mL 70%乙醇溶液，用水浴箱加热 1 h
( 温度调至 80 ℃ ) ，漏斗过滤，将滤液置于 100 mL 容
量瓶中，再将残渣重复以上操作三次，合并滤液，然后
用蒸馏水定容至 100 mL，盖上瓶塞，备用。
2． 2． 3 叉枝鸦葱中多糖、蛋白质及总黄酮的定性分
析
多糖的定性分析: 采用菲林试剂法、Molish 反应
和银镜反应来鉴定叉枝鸦葱多糖的存在。
蛋白质的定性分析: 采用双缩脲反应、茚三酮显
色法和黄蛋白反应定性检识蛋白质。
黄酮的定性分析: 采用盐酸镁粉反应、三氯化铝
反应定性检验黄酮。
2． 2． 4 叉枝鸦葱中多糖、蛋白质及总黄酮定量分析
采用苯酚 －硫酸法［17］测定总多糖含量; 采用考
马斯亮蓝法［18］测定蛋白质含量; 采用亚硝酸钠 －硝
酸铝 －氢氧化钠比色法［17］测定总黄酮，具体测定方
法见各部分“测定方法”。
2． 2． 4． 1 叉枝鸦葱中多糖含量的测定
葡萄糖标准溶液的配制:精密称取经 120 ℃干燥
至恒重的葡萄糖对照品 0． 010 3 g 置于 1 000 mL 容
量瓶中，定容，备用。
葡萄糖标准曲线的制备:精密吸取葡萄糖对照品
溶液 0． 0 、0． 2、0． 4、0． 6、0． 8、1． 0、1． 2 和
1． 4 mL，分别置于具塞刻度试管中，加入蒸馏水至
2． 0 mL，再各加 6%苯酚溶液 1． 0 mL摇匀。迅速加
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塔 里 木 大 学 学 报 第 27 卷
入浓硫酸溶液 5 mL，振摇 5 min，放置 10 min，置沸水
浴中加热 15 min，取出冷却至室温，于 490 nm处测定
吸光度，吸光度( A) 为纵坐标，浓度( c) 为横坐标，绘
制标准曲线。
多糖含量的测定: 精确吸取 2． 2． 2 中的提取液
0． 1 mL分别加入 11 个试管中，再分别加入 6%苯酚
溶液 1． 0 mL 摇匀，迅速加入浓硫酸溶液 5． 0 mL。
振摇 5 min，放置 10 min，置于沸水浴中加热 10 min，
冷却至室温，于 490 nm 处测定吸光度。以相应试剂
为空白对照。根据葡萄糖标准曲线和回归方程计算
一年中叉枝鸦葱不同生长期中多糖含量，并做动态曲
线。
2． 2． 4． 2 叉枝鸦葱中蛋白质含量的测定
蛋白质含量的测定:采用考马斯亮蓝法测定蛋白
质含量。
蛋白质标准曲线的制备: 分别量取浓度为 0． 01
g /1 000 mL 的标准牛血清蛋白溶液 0，0． 1，0． 2，
0． 3，0． 4，0． 5，0． 6，0． 7 和 0． 8 mL，加入蒸馏水至
1 mL，再加入 5 mL，0． 01 g /1 000 mL 考马斯亮蓝溶
液，反应 2 － 6 min。在波长 595 nm处测定吸光度，吸
光度( A) 为纵坐标，浓度 ( c) 为横坐标，绘制标准曲
线。
蛋白质含量的测定:精密吸取 1 mL 样品分别加
入 11 个试管中，然后再分别加入 5 mL考马斯亮蓝 G
－250 溶液，振摇，在 595 nm 处测定样品的吸光度。
用蒸馏水代替样品作空白对照实验，平行测定三次。
根据蛋白质标准曲线和回归方程计算叉枝鸦葱不同
生长期中蛋白质含量，并做动态曲线。
2． 2． 4． 3 叉枝鸦葱中总黄酮含量的测定
总黄酮含量的测定:采用亚硝酸钠 －硝酸铝 －氢
氧化钠显色法测定总黄酮含量。
芦丁标准溶液的配制:精密称取经 120 ℃干燥至
恒重的芦丁对照品 25． 2 mg，加入 70%乙醇，定容至
50 mL容量瓶中，超声使其完全溶解。芦丁对照品浓
度为 0． 504 mg /mL，备用。
芦丁标准曲线的绘制: 分别精密吸取 0、0． 4、
0． 6、0． 8、1． 0、1． 2、1． 4 和 1． 6 mL 的 2． 2． 4． 3 中
的芦丁标准溶液定容至 10 mL，分别得到浓度为 0 、
20． 16、30． 24、40． 32、50． 4、60． 48 、70． 56 和
80． 64 μg /mL芦丁溶液;分别精密吸取上述不同浓度
溶液1 mL置于 8 个试管中，依次加入 1 mL 70%乙醇
溶液，0． 5 mL 5%亚硝酸钠，放置 6 min。然后再加
入 0． 5 mL 10% AgNO3 放置 6 min，最后加入 2 mL
4%NaOH，摇匀放置 15 min。在 506 nm 处测吸光度
的值。吸光度( A) 为纵坐标，浓度( c) 为横坐标，绘制
标准曲线。
样品中总黄酮含量的测定:精确吸取 2． 2． 2 中的
提取液 0． 4 mL于试管中，分别向各试管中依次加入
1 mL 70%乙醇溶液，0． 5 mL 5%亚硝酸钠溶液，摇匀
静置 6 min;再加入 0． 5 mL 10% Al( NO3 ) 3 溶液摇
匀，放置 6 min; 最后加入 2 mL 4% NaOH 溶液，摇匀
放置 15 min。以相应试剂为空白，在 506 nm 处测吸
光度。根据芦丁标准曲线和回归方程计算一年中叉
枝鸦葱不同生长期中总黄酮含量，并做动态曲线。
2． 2． 5 数据处理
采用 Excel和 DPS 7． 05 软件对数据进行统计分
析处理。
3 结果与分析
3． 1 定性分析结果
3． 2 叉枝鸦葱中多糖、蛋白质及总黄酮的测定结果
与分析
3． 2． 1 葡萄糖、蛋白质及芦丁标准曲线
根据试验结果绘制葡萄糖标准曲线，求得回归方
程为: A =10． 357c + 0． 01 ( Ｒ2 = 0． 999 7) 。表明葡
萄糖溶液在 2． 2． 4． 1 浓度范围内，样品检测浓度与吸
光度的线性关系良好。
根据试验结果绘制蛋白质标准曲线，求得回归方
程为: A =5． 671 5c － 0． 003 0 ( Ｒ2 = 0． 999 4 ) 。表
明牛血清蛋白溶液在 2． 2． 4． 2 浓度范围内，样品检测
浓度与吸光度线性关系良好。
根据试验结果绘制芦丁标准曲线，求得回归方程
为: A =0． 010 4c － 0． 008 8 ( Ｒ2 = 0． 999 6 ) 。表明
芦丁溶液在 2． 2． 4． 3 浓度范围内，样品检测浓度与吸
光度的线性关系良好。
因此根据上述葡萄糖、蛋白质及芦丁回归方程的
相关系数，说明测定具体样品时可以采样此工作曲
01
第 3 期 许世勋等:叉枝鸦葱总多糖、蛋白质及黄酮含量的年动态变化规律研究
线，且通过实验使待测样品的浓度在此范围内，能准 确测定其含量。
表 1 多糖、蛋白质及黄酮的定性试验结果
鉴识方法 现 象 结 论
多糖
A、菲林试剂反应 A、生成红色沉淀 ( + )
B、Molish反应 B、有紫色环 ( + ) 叉枝鸦葱中含有多糖
C、银镜反应 C、有银镜 ( + )
蛋白质
A、双缩脲反应 A、有紫玫瑰色出现 ( + )
B、茚三酮显色法 B、由粉色变紫红再变蓝色 ( + ) 叉枝鸦葱中含有蛋白质
C、黄蛋白反应 C、变黄色 ( + )
黄酮
A、三氯化铝反应 A、黄色且紫外灯下有荧光 ( + ) 叉枝鸦葱中含有黄酮
B、盐酸镁粉反应 B、变红色 ( + )
3． 2． 2 不同月份多糖、蛋白质及总黄酮含量及结果比较
图 1 枝鸦葱中总多糖、蛋白质及总黄酮含量的年动态曲线
通过对叉枝鸦葱中多糖，蛋白质和总黄酮含量的
年动态变化曲线分析，可以得出: 叉枝鸦葱中多糖类
化合物年周期含量在 6 月 1 日最高，含量可达到 4．
779 4 mg /g，然后含量逐渐减少到达 9 月 1 日时最
低，含量是 2． 014 7 mg /g。叉枝鸦葱中多糖含量从
高到低的次序依次为: 6 月 1 日 ＞ 7 月 1 日 ＞ 7 月 15
日 ＞ 6 月 15 日 ＞ 8 月 1 日 ＞ 10 月 1 日 ＞ 9 月 15 日 =
5 月 1 日 ＞ 8 月 15 日 ＞ 5 月 15 日 ＞ 9 月 1 日。总体
变化呈现 S型曲线变化规律，其主要原因是植物体内
的多糖为淀粉和纤维素，其中淀粉作为植物体内的储
能物质存在于植物细胞内，而纤维素是细胞壁的主要
组成成分。植物生长初期需要消耗大量的能量，同时
生成细胞壁，所以多糖含量最高。秋季，植物生理功
能下降，茎叶开始脱落，生命活动减弱，因而多糖含量
最低。
叉枝鸦葱蛋白质年周期含量在 9 月 15 日最高，
含量可达到 9． 838 7 mg /g，然后含量逐渐减少到达 9
月 1 日时最低，含量为 7． 852 1 mg /g。叉枝鸦葱中
蛋白质含量从高到低的次序依次是: 9 月 15 日 ＞ 7 月
1 日 ＞ 8 月 1 日 ＞ 8 月 15 日 ＞ 7 月 15 日 ＞ 5 月 15 日
11
塔 里 木 大 学 学 报 第 27 卷
＞ 5 月 1 日 ＞ 10 月 1 日 ＞ 6 月 1 日 ＞ 6 月 15 日 ＞ 9 月
1 日。总体变化不大，其主要原因是蛋白质是构成机
体组织、器官的重要成分，各组织、器官无一不含蛋白
质。同时各种组织细胞的蛋白质始终在不断更新，植
物生命活动逐渐减弱，体内器官逐渐开始衰落，因而
含量落差比较大。
叉枝鸦葱总黄酮年周期含量在 5 月 1 日最高，含
量可达到 8． 078 2 mg /g，然后含量逐渐减少到达 9
月 1 日时最低( 2． 482 1 mg /g) 叉枝鸦葱中总黄酮含
量从高到低的次序依次是: 5 月 1 日 ＞ 7 月 1 日 ＞ 8
月 1 日 ＞ 7 月 15 日 ＞ 8 月 15 日 ＞ 6 月 15 日 ＞ 6 月 1
日 ＞ 9 月 15 日 ＞ 10 月 1 日 ＞ 5 月 15 日 ＞ 9 月 1 日。
导致总黄酮含量变化的主要原因是天然黄酮类化合
物多以苷类形式存在 ，并且由于糖的种类、数量、联
接位置及联接方式不同可以组成各种各样黄酮苷类，
黄酮苷一般易溶于水、乙醇、甲醇等极性强的溶剂中，
糖链越长则水溶度越大。随着植物生命活动的减弱，
器官的衰竭，体内矿物质以及糖类的流失，果实的生
成，总黄酮的含量也逐渐减少，所以植物生长初期体
内含量较高，末期含量较少。
3． 3 叉枝鸦葱不同生长期的多糖、蛋白质及总黄酮
含量的差异性分析
表 2 年周期中不同生长期的样品中总多糖、蛋白质及黄酮含量的差异分析
日期 多糖( mg /g) 蛋白质( mg /g) 总黄酮( mg /g)
5． 01( 日期 1) 2． 816 1 ± 0． 587 7 DEde 8． 722 0 ± 0． 974 9 ABbcd 8． 078 2 ± 0． 212 Aa
5． 15( 日期 2) 2． 259 3 ± 0． 2174 Eef 8． 886 5 ± 0． 484 8 ABabc 3． 369 9 ± 0． 249 7 Gg
6． 01( 日期 3) 4． 779 4 ± 0． 063 3 Aa 8． 5574 ± 0． 585 4 ABcd 6． 206 4 ± 0． 276 2 Dd
6． 15( 日期 4) 3． 949 0 ± 0． 423 5 ABCbc 8． 533 9 ± 0． 397 ABcd 6． 296 2 ± 0． 028 8 Dd
7． 01( 日期 5) 4． 428 6 ± 0． 680 4 ABab 9． 656 5 ± 0． 331 Aab 7． 408 3 ± 0． 081 8 Bb
7． 15( 日期 6) 4． 032 7 ± 0． 381 ABCbc 9． 098 1 ± 0． 461 1 ABabc 6． 562 2 ± 0． 167 2 CDcd
8． 01( 日期 7) 3． 456 6 ± 0． 412 5 BCDcd 9． 392 0 ± 0． 327 7 Aabc 7． 023 7 ± 0． 375 2 BCbc
8． 15( 日期 8) 2． 809 7 ± 0． 580 3 DEde 9． 227 4 ± 0． 236 8 Aabc 6． 334 6 ± 0． 436 5 CDd
9． 01( 日期 9) 2． 014 7 ± 0． 160 5 Ef 7． 852 1 ± 0． 483 Bd 2． 482 1 ± 0． 515 1 Hh
9． 15( 日期 10) 2． 816 1 ± 0． 121 5 DEde 9． 838 7 ± 0． 335 Aa 5． 376 3 ± 0． 212 0 Ee
10． 1( 日期 11) 3． 311 8 ± 0． 290 1 CDcd 8． 675 0 ± 0． 642 3 ABbcd 4． 712 8 ± 0． 223 9 Ff
注: 差异性分析，同列小和大写字母分别表示 P ＜ 0． 05 和 P ＜ 0． 01 显著水平的差异。
年周期中 11 个日期的多糖、蛋白质和总黄酮含
量差异极大，具体差异分析见表 2。在 3 种物质中，
对同一物质，不同日期之间的进行差异性分析。统计
分析表明:多糖以日期 3 含量最高，极显著高于日期
7、11、10、1、8、2 和 9，显著高于日期 4 和 6; 日期 5 极
显著高于日期 11、10、1、8、2 和 9，显著高于日期 7; 日
期 4 和 6 极显著高于日期 10、1、8、2 和 9; 日期 7 和
11 极显著高于日期 2 和 9; 日期 10、1 和 8 显著高于
日期 9。
蛋白质以日期 10 含量最高，极显著高于日期 9，
显著高于日期 1、11、3 和 4; 日期 5 极显著高于日期
9，显著高于日期 3 和 4; 日期 7 和 8 极显著高于日期
9; 日期 6 和 2 显著高于日期 9。总黄酮以日期 1 含量
最高，极显著高于其他日期; 日期 5 极显著高于日期
6、8、4、3、10、11、2 和 9; 日期 7 极显著高于日期 4、3、
10、11、2 和 9，显著高于日期 8; 日期 6、8、4 和 3 极显
著高于日期 10、11、2 和 9; 日期 10、11、2 和 9 之间差
异极显著。
从表 2 及上述分析可知，11 个日期中三种物质
的含量由高到低的次序依次是:总蛋白质 ＞总黄酮 ＞
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第 3 期 许世勋等:叉枝鸦葱总多糖、蛋白质及黄酮含量的年动态变化规律研究
总多糖。
4 结论
叉枝鸦葱中总多糖含量在 6 月 1 日最高，9 月 1
日最低。总蛋白质含量在 9 月 15 日最高，9 月 1 日
最低。总黄酮含量在 5 月 1 日最高，9 月 1 日最低。
三种主要成分的适宜收获期在该植物的花期生长期。
因此，要获得多糖，适宜在 6 月上旬采收;若要获得总
黄酮，适宜采收期为 4 月下旬和 5 月上旬; 若要获得
蛋白质，适宜在 9 月中旬采收。
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