全 文 ：育苗技术　Ｓｅｅｄｌｉｎｇ　Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ
２０　 ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ　ＦＯＲＥＳＴＲＹ　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ
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不同培养基及ｐＨ值对细叶小羽藓配子体生长的影响＊
陈文佳　张　楠　杭璐璐　王　媛　季梦成
（浙江农林大学园林与建筑学院　浙江　临安　３１１３００）
［摘要］　以细叶小羽藓（Ｈａｐｌｏｃｌａｄｉｕｍ　ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌｕｍ）的配子
体为试验材料进行组织培养，通过观察外观变化并定期记录其
芽体长度、芽体个数和原丝体直径等指标，研究了不同培养基、
ｐＨ值对细叶小羽藓生长的影响。结果表明：相同时间内，５种
培养基中以 ＭＳ培养基对细叶小羽藓的芽体长度、芽体个数和
原丝体直径的影响最显著，其芽体长度可达２．６８ｃｍ，芽体个数
为１．２７个，原丝体直径为１．５３ｃｍ。将细叶小羽藓芽体接种在
ＭＳ培养基上，设置７种不同ｐＨ值梯度，定时观察芽体的生长
情况，ｐＨ值为７时对芽体长度、芽体个数和原丝体直径影响最
显著，说明细叶小羽藓的芽体的生长适宜于中性环境，为细叶
小羽藓的快速繁殖技术的推广应用提供参考。
［关键词］　细叶小羽藓　培养基　ｐＨ值　配子体
苔藓植物是高等植物中最原始的类群，其结构简
单，生长速度快，对环境污染敏感，是研究环境中大
气、水体污染监测的良好指示植物［１］。此外，苔藓植
物含有许多具有生物活性的化合物，人们对很多苔藓
植物的化学成分做过分析，从苔藓植物中分离到的次
生代谢物质中有生物碱﹑黄酮﹑萜类﹑木脂体及酚
类化合物等［２］。就次生物质来讲，许多苔藓植物中还
含有重要的药用成分，其中还是一些具有新颖的结构
骨架和值得重视的生物活性内含物［３］。有学者甚至
从两种苔藓植物中分离得到具有较强的抗癌活性的
美登素类化合物［４］，通过苔藓植物组织培养可以获得
对其进行生理生化及药用成分分析所需的大量材料。
但目前对苔藓植物组织培养方面的研究，已被报道的
种类不多，仅有牛角藓、刺叶墙藓、尖叶匍灯藓、暖地
大叶藓等［５－８］。
羽藓科细叶小羽藓（Ｈａｐｌｏｃｌａｄｉｕｍ　ｍｉｃｒｏｐｈｙｌ－
ｌｕｍ）对Ｃｕ、Ｐｂ、Ｚｎ、Ｃｒ、Ｃｄ五种重金属的富集能力很
强，对污染物质的胁迫会产生非常明显而直观的伤害
病症，能较为及时地指示环境污染状况，是优良的环境
＊国家自然科学基金（３１０７０１８８）项目、浙江省科技计划项目
（２００９Ｃ３２０６６）、浙江省大学生科技创新项目（２０１０Ｒ４１２０３９）资助。
作者简介：陈文佳（１９８７－ ），浙江农林大学研究生，硕士，从事园
林植物应用研究。
通讯作者简介：季梦成（１９６６－ ），浙江农林大学教授，研究生导
师，从事苔藓植物分类及园林植物应用研究。
污染监测植物［２，９］。细叶小羽藓还有清热解毒之功
效，可用于治疗扁桃体炎、肺炎、中耳炎等，用其制成
的青苔素针剂功效与青霉素相似［１０］，因此它具有很大
的药用开发价值。但其有药用价值的化学成分和药
理活性分析尚未开展，而组培是研究这项工作的基
础。此外，由于它植株矮小，需要养分少，在组织培
养瓶中不容易污染，是微型景观特别是密封性景观
的理想材料［１１］。因此开展细叶小羽藓组培研究，掌
握该种快速繁殖技术参数，对细叶小羽藓资源药用、
环境监测等方面的应用具有重要价值。本文研究了
不同基本培养基及ｐＨ 值对细叶小羽藓配子体生长
的影响，以期为细叶小羽藓的组织培养及开发利用提
供参考。
１　材料与方法
１．１　试验材料
细叶小羽藓的无菌配子体于浙江农林大学园林
学院实验室获得。
１．２　试验方法
１．２．１　培养基配方　本实验采用 ＭＳ，１／２ＭＳ，Ｋｎｏｐ，
改良Ｋｎｏｐ，Ｂｅｎｅｃｋ　５种培养基配方。琼脂为ＳＩＧＭＡ
公司出品，ｐＨ值取４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０。
１．２．２　培养基的制备　以上５种培养基配方，加６．７ｇ／Ｌ
的琼脂，并分别加入适量蔗糖，用ＰＨｓ－１０Ａ型数字显
示离子计将ｐＨ值调至７．０，煮沸，倒入直径为６０ｍｍ
的培养瓶中，凝固后成固体培养基。用报纸包好，
１２１℃下高温灭菌１５ｍｉｎ，冷却凝固后放入超净工作
台上待用。
１．２．３　不同ｐＨ值 ＭＳ培养基的配制　配制 ＭＳ培养
基，用１ｍｏｌ／Ｌ盐酸和１ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠将ｐＨ值分别
调成４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０，将不同ｐＨ的培
养基分装入培养瓶中，整个过程要求动作迅速，以防止
培养基凝固。高温灭菌锅中１２１℃下灭菌１５ｍｉｎ。
１．２．４　接种　将无菌的细叶小羽藓配子体剪为
０．５ｃｍ左右茎段，在超净工作台上接入事先准备好的
无菌培养基中。
１．２．５　培养条件　培养瓶放在ＲＸＺ－３００Ｂ型光照
DOI:10.13456/j.cnki.lykt.2012.04.018
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培养箱中培养。培养条件为：温度２３±２℃，空气相
对湿度８０％～９０％，光照时间１２ｈ／ｄ，光照强度
２　０００～３　０００ｌｘ。
１．２．６　统计方法培养３０ｄ后，将培养基打开观察细
叶小羽藓生长的情况，通过肉眼观察和游标卡尺测量
统计细叶小羽藓的芽体长度、芽体个数、原丝体直径。
统计 时，每 种 处 理 ５ 个 茎 段，重 复 ３ 次。采 用
ＳＰＳＳ１８．０统计软件进行统计分析，采用Ｅｘｃｅｌ　２００３
软件制图。
２　结果与分析
２．１　不同培养基对细叶小羽藓芽体生长的影响
细叶小羽藓配子体的生长主要从细叶小羽藓芽体
长度、芽体个数和原丝体直径的变化等方面来观测。从
图１可以看出，不同的培养基对细叶小羽藓配子体的生
长的影响有差异，ＭＳ培养基对细叶小羽藓芽体生长最
合适，其芽体长度为２．６８ｃｍ，芽体个数为１．２７个，原丝
体直径为１．５３ｃｍ。其他４种培养基中以芽体Ｂｅｎｅｃｋ
培养中细叶小羽藓芽体生长较快，芽体长度为２．１３ｃｍ，
芽体个数为１．０１个，原丝体直径为１．１３ｃｍ。而
Ｋｎｏｐ培养基上细叶小羽藓芽体生长最慢，其芽体长
度为１．０１ｃｍ，芽体个数为０．４７个。除了１／２ＭＳ和
改良Ｋｎｏｐ培养基，改良Ｋｎｏｐ和Ｂｅｎｅｃｋ培养基差异
不显著外，其余差异明显。在不同培养基下，对细叶
小羽藓的芽体长度、芽体个数和原丝体直径进行方差
分析可以看出，不同培养基对细叶小羽藓的芽体长
度、芽体个数和原丝体直径差异极显著。
图１　不同培养基对细叶小羽藓生长的影响
注：不同小写字母表示０．０５水平上的差异显著性，下
同。
在不同培养基下，对细叶小羽藓的芽体长度、芽
体个数和原丝体直径进行方差分析可以看出，不同培
养基对细叶小羽藓的芽体长度、芽体个数和原丝体直
径差异极显著。
２．２　不同ｐＨ 值培养基对细叶小羽藓茎段生长的
影响
如图２所示，在 ＭＳ培养基中不同的ｐＨ 值对细
叶小羽藓配子体生长都有影响，其中ｐＨ 值为４～９
时，细叶小羽藓的配子体都能生长，而ｐＨ值为１０时
细叶小羽藓配子体全部死亡。试验证明，当ｐＨ 值为
７时，３０ｄ培养后细叶小羽藓芽体长度最长，为
１．５５ｃｍ，芽体个数也最多，达１．４３个，原丝体直径为
０．７８ｃｍ；其次为ｐＨ值为８，其芽体长度为１．４２ｃｍ，
原丝体直径为０．６５ｃｍ。随酸性和碱性的增强，生长
速率变慢，其长势也变弱。细叶小羽藓配子体生长
ｐＨ值适宜范围为４～９，最适为７～８。过酸或过碱都
会影响细叶小羽藓生长速度且长势弱，除了ｐＨ值５、
６和９，ｐＨ值为８和９，ｐＨ值为７和８差异不明显外，
其余差异显著。在不同ｐＨ值下，对细叶小羽藓的芽
体长度、芽体个数和原丝体直径进行方差分析可知，
不同ｐＨ值对细叶小羽藓的芽体长度、芽体个数和原
丝体直径差异极显著。这一结果与细叶小羽藓在野
外生境中偏中性环境时相一致的。
图２　不同ｐＨ值对细叶小羽藓配子体生长的影响
２．３　基本培养基对细叶小羽藓叶绿素含量的影响
由表３可知，细叶小羽藓在 ＭＳ培养基ｐＨ 值为
７．０的情况下，叶绿素含量最高，叶绿素含量高于其他
组，且存在显著性差异；其次为Ｂｅｎｅｃｋｅ培养基ｐＨ值
为７．０的情况，其叶绿素含量也高于除 ＭＳ培养基的
其他组，存在差异显著性。细叶小羽藓在 Ｋｎｏｐ培养
基ｐＨ值为７．０的情况下，叶绿素ａ／ｂ比率最小，要低
于其他组，但与其他组相比有显著性差异。这一结果
与细叶小羽藓通过观测所得的数据是一致的。在同
种ｐＨ值５种培养基的情况下，其叶绿素含量出现较
大的差异显著性，但叶绿素ａ／ｂ比值没有出现较大的
差异显著性，说明在不同的培养基的情况下，细叶小
羽藓保持其阴生的生物学特性。
３　结论
对影响细叶小羽藓配子体生长的固体培养基和
ｐＨ值的试验结果进行单因素方差分析及多重比较发
现，不同种类的培养基和ｐＨ 值对细叶小羽藓配子体
的生长有不同程度的影响。细叶小羽藓的无菌外植体
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表３　基本培养基对细叶小羽藓叶绿素含量的影响（Ｘ±ＳＤ，ｎ＝３）
培养基 总叶绿素（ｍｇ／ｇ） 叶绿素ａ（ｍｇ／ｇ） 叶绿素ｂ（ｍｇ／ｇ） 类胡萝卜素（ｍｇ／ｇ） 叶绿素ａ／ｂ比率
Ｂｅｎｅｃｋ　 １．３７８　８±０．００９　０ｂ ０．９６３　９±０．００１　８ｂ ０．４１４　９±０．００７　８ｂ ０．３２２　８±０．００２　６ｂ ２．３２３　１±０．０４１　２ｂ
１／２ＭＳ　 ０．９１４　４±０．０２１　６ｃ ０．６３７　７±０．００９　６ｃ ０．２７６　７±０．０１２　０ｃ ０．２２２　７±０．００１　３ｃ ２．３０４　４±０．０６４　３ｃ
Ｋｎｏｐ　 ０．４６１　０±０．００７　９ｅ ０．２７８　０±０．００５　３ｅ ０．１８３　０±０．００２　６ｄ ０．１１６　４±０．００１　５ｅ １．５１９　１±０．００７　４ｅ
改Ｋｎｏｐ　 ０．８３８　０±０．０２４　８ｄ ０．５６６　７±０．０１０　５ｄ ０．２７１　３±０．０１４　３ｃ ０．２１０　３±０．０００　８ｄ ２．０８９　０±０．０７４　４ｄ
ＭＳ　 １．５８０　４±０．００３　０ａ １．１１６　６±０．００５　５ａ ０．４６３　８±０．００８　０ａ ０．３４９　１±０．００５　７ａ ２．４０７　２±０．０５２　６ａ
在不同的培养基中生长３０ｄ后，ＭＳ培养基最适宜细
叶小羽藓的生长，其次为Ｂｅｎｅｃｋｅ培养基，继续培养细
叶小羽藓至５０ｄ后，所有培养基上均有藓株形成，其
中 ＭＳ及Ｂｅｎｅｃｋｅ培养基上藓株量差别不大，量最大，
Ｂｅｎｅｃｋｅ培养基上藓株最高，但藓株为黄绿色，生长势
较差，原丝体变为褐色、松散状态，ＭＳ培养基上藓株
低矮，但藓株为绿色，生长势较好，原丝体仍为绿色、
致密状态。综合考虑，ＭＳ培养基最适宜细叶小羽藓
配子体的生长。由于所有的培养条件均相同，比如继
代材料、温度、光强、光周期、ｐＨ 值等，推测产生这种
差别最主要的原因就是培养基成分的不同。ＭＳ培养
基有利于原丝体的生长，却抑制了藓株的伸长生长，
可能是由于其多成分产生的高渗透压造成的。
不同的苔藓植物适宜生长的ｐＨ值范围不同。尖
叶扭口藓（Ｂａｒｂｕｌａ　ｃｏｎｓｔｒｉｃｔａ）在ｐＨ 值为４～９范围
内均能生长，反扭藓（Ｔｉｍｍｉｅｌｌａ　ａｎｏｍａｌａ）适宜生长
的ｐＨ值范围为５～９，而尖叶提灯藓适宜生长的ｐＨ
值范围为３～８［１２］。培养条件的最适ｐＨ值取决于藓
类植物的种类和该种植物生长的原始生境。高永超
等［１３］认为，苔藓植物的最适ｐＨ 值范围在５．０～５．７
之间，尖叶提灯藓的最适ｐＨ值为５．０［１２］，但对于生长
在特殊生境中的苔藓植物来说，对培养基ｐＨ 值要求
很严格。经过调查发现，细叶小羽藓生境土壤的ｐＨ值
范围为５．９６～８．００，但在对其配子体进行组织培养时发
现，细叶小羽藓在生长的不同阶段需要的最适ｐＨ值不
同。经分析发现，为获得大量配子体材料时，培养基的
ｐＨ值为７～８比较合适，而当细叶小羽藓配子体开始
伸长生长时，ｐＨ值为６～７比较合适。而ｐＨ值过高
或过低都对细叶小羽藓的生长有一定的影响，当ｐＨ
值大于１０时，细叶小羽藓的配子体甚至全部死亡。
绿色植物的产量形成取决于其叶片的光能利用
率，而叶片的光能利用率高低与叶片叶绿素含量的多
少成正相关，因此研究植物叶片的叶绿素含量意义重
大［１４］。通过测定发现，在 ＭＳ培养基中培养的细叶小
羽藓叶绿素含量最高，说明成分多的培养基更适合细
叶小羽藓的生长，５种不同培养基对细叶小羽藓叶绿
素含量均有不同的影响，这一结果从另一角度再次证
明 ＭＳ是最适宜细叶小羽藓生长的培养基。
组织培养在某些程度上可能改变了细叶小羽藓
配子体的代谢机制。此外，影响苔藓生长和繁殖的因
素还有很多，如光照、湿度、温度、ｐＨ值、水分、植物激
素等［１５］。开展多因素、多水平正交组合实验，深入探
讨影响细叶小羽藓生长的最佳组培条件，才能更好的
构建其扩繁体系，使细叶小羽藓实现规模生产。
参考文献：
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育苗技术　Ｓｅｅｄｌｉｎｇ　Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ
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虎杖嫩枝全光喷雾扦插育苗技术
杨金库１　武惠肖１　王杰凡２
（１．廊坊市农林科学院　河北　廊坊　０６５０００；２．石家庄市桥东区园林局　石家庄　０５００３１）
［摘要］　虎杖因种子寿命短，保存不易，繁殖上一直依赖分根
繁殖。而夏季利用全光喷雾技术繁殖虎杖，给虎杖扩繁提供了
良好途径。利用人工全光喷雾育苗床，由草炭土、河沙、蛭石以
１∶１∶１比例配成基质，通过嫩枝扦插，配以严格的水分管理
和合理的病虫害防治手段，能使每床出苗量５万～６万株，每
年繁殖４～５次，大大提高了繁殖效率，为虎杖的大规模生产提
供了育苗保障。
［关键词］　虎杖　草木植物　全光喷雾　嫩枝扦插　无性繁
殖　园林绿化　中药材
虎杖（Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ　ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍｓｉｅｂ．ｅｔ　ｚｕｃｃ．）多
年生高大草本，蓼科，又名阴阳莲、酸秆、斑根、斑杖、
活血龙、紫金龙等，自然分布在黄河以南。虎杖用途
广泛，可用于园林绿化，提取天然色素及白藜芦醇等
药用成分，用于医药行业等，全国各省区均有种植。
虎杖是一味传统的中药材，具有杀菌、止咳平喘、抗
癌、降血脂、增强免疫力等作用，已经应用了数千年。
由于其具备的特殊经济价值，故虎杖野生资源遭到
了严重破坏，于是全国各省区开展了虎杖的人工种
植。其繁殖方法主要是分根繁殖和种子繁殖，但其
种子存活时间短，在北方又很难得到成熟的种子，故
种子繁殖受到限制；分根繁殖由于受到产量的限制，
也很难大面积应用。于是，有人开始采用组培等生
物技术进行快繁［４］，但是技术难度大，成本偏高，不
宜推广。近年来也有人采用压条繁殖的方法，但因
为只用主茎繁殖，一年一次，效率偏低。鉴于以上繁
殖方法都有一定限制，本文采用夏季全光喷雾扦插
育苗方法，每年可多次繁殖，取得了非常好的扩繁效
果，为虎杖的快速繁殖，实现工厂化育苗提供了良好
依据。
１　原材料与方法
１．１　育苗材料
１．１．１　苗床建设　选择光照良好、排水方便、交通便
利、水电充足、易于管理的地段建设育苗床。
育苗床为圆形，育苗面积１１０ｍ２，直径为１２ｍ２，
在育苗床的中央安装臂旋转式全光喷雾育苗设备；圆盘
上用砖间隔砌成花墙，高３０ｃｍ、宽１２ｃｍ、间距６０ｃｍ，
砖墙上放置长方形育苗托盘，规格为６０ｃｍ×２４ｃｍ；
育苗床上方设置可以折叠的防雨设施。
１．１．２　基质处理　将营养基质装入采用无纺布制成
的基质袋中，截成规格为４ｃｍ×１０ｃｍ 的营养基质
袋，进行容器育苗。基质选用营养丰富的草炭土和通
透性良好的河沙、蛭石，以１∶１∶１的比例混配而成。
扦插育苗前，先用５０％多菌灵０．１７％浓度药液进行基
质消毒，待消毒液浸透过基质后用清水冲洗干净。
１．１．３　插穗剪截　采用虎杖当年生枝条，枝条长到
有一定的硬度即可采穗，长度１０～１４ｃｍ，保留１～２
个节间，顶端一节保留一片叶片，在节前１ｃｍ剪断枝
条。插穗底端要求有节，除去叶片，节下保留１ｃｍ枝
条。插穗处理好后浸水保湿准备扦插。
１．２　育苗方法
采用直接扦插法，不用激素处理，插穗底端插入
基质２．４ｃｍ 左右，注意底端枝节要插入基质当中
１ｃｍ以下。插完一盘马上码放到育苗床上，喷水，保
持湿润。
２　插后管理
２．１　水分管理
插穗扦插到移栽要做好水分管理，因插穗自扦插、
［１１］　Ｓａｘｅｎａ　Ｄ　Ｋ，Ｈａｒｉｎｄｅｒ．Ｕｓｅｓ　ｏｆ　Ｂｒｙｏｐｈｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｒｅｓｏ－
ｎａｎｃｅ，２００４，５５－６５．
［１２］　陈蓉蓉，刘　宁，杨　松，等．ｐＨ值对黔灵山喀斯特生
境中几种苔藓植物生长的影响［Ｊ］．贵州环保科技，
１９９８，４（１）：２３－２８．
［１３］　高永超，沙　伟，张　晗 ．苔藓植物的组织培养［Ｊ］．植
物生理学通讯，２００２，３８（６）：６０７－６１０．
［１４］　周金川，熊源新，王莉爽，等 ．不同浓度植物生长调节剂
对三种藓类植物光合色素含量的影响［Ｊ］．山东科学，
２００９，２２（６）：３０－３４．
［１５］　曹　同，陈静文，娄玉霞 ．苔藓植物组织培养繁殖技术
及其应用前景［Ｊ］．上海师范大学学报（自然科学版），
２００５，３４（４）：５２－５８．★