全 文 ：河 南 师范 大学学报
一九 八六 年第三 期 ( 总第 5 1期 )
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3, 一 。 5 6 ( G e n e r a l N u m b o r 5 1 )
大丽花 ( D ah iaI p泊。 ; at C a V . )的组织培养
与继代培养
李大卫 刘志强 刁晓歌
( 主物 系 )
摘 要
用 大丽花的 茎段 、 花甘 、 叶片 和肚 芽 认 为 { 植 体 . r M S 为基本培养羞 , 添加适 当配比 的激 素 ,
均 可诱导出愈伤组 织 . 再进 一 步培养 , 可 、 ` 化形 仄 完 整玉 株 . 移植后 , 极 易成活 . ’探讨 了继代培 养 过 程
中 . 保持愈伤组 织 分化 能力的方法 , 以及有关 问题 .
材 料 和 方 法
一 、 试验材料 :
大丽花 ( D a h l i a p i n n a t a C a v . ) 的茎段 、 叶片 、 腋芽和花蕾 .
二 、 方法 :
取下的材料 , 先用自来水 冲净 。 用了5 %的洒精浸洗半分钟 , 再放入 0 . 1肠二氯化 汞 溶
掖中消毒 5 分钟 。 用无菌水 浸洗 4 一 5 次 。 消毒过的材料放在无菌的吸水纸上 , 吸去多余
水 分 。 将 叶 片切成 l 平方厘米的小块 , 茎段切成 l 厘米长的小段 , 花蕾切成。 . 5平 方 厘
米的小块 , 腋芽保持原状 。 在无菌条件下 , 接入培养基 。
三 、 培养基 :
( 一 ) 基本培养基为 M a ar o h i g e一 S k 。 。 g培养 基 , 蔗 糖 3 肠 , 琼脂 0 . 7一 0 . 8 务 ,
P H S
.
8
。
( 二 ) 脱分化培养基 :
1
、
M S + 蔡 乙酸。 . 5毫克 + 6 一糠基氨基嚷吟 0 . 5毫克 + 赤霉素 0 . 05 毫克 ( 脱 l ) ; :
2
、
M S十蔡乙酸 0 . 5毫克 + 6 一糠基氨基嚷岭 。 . 2毫克 + 赤霉素 0 . 05 毫克 ( 脱 2 ) ; !
3
、
M S + 蔡乙酸 0 . 75 毫克 + 6 一糠基氨基嗓吟 。 . 2毫克 + 赤霉素 0 . 05 毫克 ( 脱 3 ) ;
4
、
M S十 2 , 4一 二氯苯氧 乙酸。 . 2毫克十 6 一苇基腺嗓吟。 . 2毫克 ( 脱 4 ) ;
5
、
M S + 2
,
4一二氯苯氧乙酸0 . 2毫克 + 6 一苇基腺漂吟 0 . 1毫克 ( 脱 5 ) ;
( 三 ) 再分化培养基 :
1
、
M S十茶 乙酸。 . 1毫克十 6 一糠基氨基喋岭0 . 4毫克 ( 再 1 ) ;
2
、
M S十 呢1垛乙酸 0 . 1毫克 + 6 一糠基氮基嘿吟。 . 4毫克 ( 再 2 ) ;
3
、
M S十 叫噪丁酸 0 . 1毫克+ 6 一糠基氨基嚷吟0 . 5毫克 ( 再 3 ) ;
4
、
M S + 叫噪下酸0 . 05 毫克+ 6 一糠基氨基嚷吟。 . 5毫克 ( 再 4 ) ;
皿2 4
DOI : 10. 16366 /j . cnki . 1000 -2367. 1986. 03. 018
( 四 )继代培养基
z
、
M S( 继 l ) ;
2
、
M S十 6一 苇基腺嚷吟 0 .,毫克 ( 继 2 ) ;
( 五 ) 生根培养基
1
、 五叹S ( 根 l ) ;
2
、
M s + 茶乙 酸 0 . 1毫克 ( 根 2 ) 。
结 果
一 产生愈伤组织 :
将外植体接入脱分化培养基 内 , 在 25 O C的弱光下培养 . 10 天后 , 外植体开始膨大 。 20
天后产生愈伤组织 , 质地疏松 , 呈绿色或浅黄色 ( 图 1 ) 。 各个脱分化培养基均易于形成
愈伤组织 。 其中 , “脱 l ” 培养基适于花蕾外植体 ; “脱 2 ” 培养基适于叶片和 腋 芽 :
“ 脱 4 ” 培养基适于茎段 。
二 再分化 :
将新生 成的愈 伤组织转入再分化培养基 内 。 14 天后 , 愈伤组织呈鲜绿色 , 表面出现很
多的芽和叶状体 ( 图 2 ) 。 共中有少势的芽继续生长成苗 ( 图 3 ) 。 数天后 , 少数苗还能
长出新根 。 据观察 , 再分化培养基以 “ 再 l ” 最佳 . 试验表明 , 在具有同量的细胞分裂素
的基础上 , 叫嵘乙酸虽也可取得类似茶 乙酸的结果 , 但仍不如蔡乙酸为佳 . 说明对大丽花
愈伤组织的诱 导分化来说 , 茶乙酸比呵嵘 乙酸具有更高的生 长素活性 . “ ’ 见表 l :
表 l 再分 化培 养鉴对 愈伤组 织 再分化 的影响
.
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另外 , 观察表 明 , 不 同状态的愈伤组织的分化能力不同 ` 么 , 3 ’一般结构疏松 , 颜色 嫩
绿者 ( 疏松型 ), 易于再分化 . 而结 沟致密 , 颜色呈暗绿色者 ( 致密型 ) , 不易再分化 。
见表 2 :
衰 2 不 间状念愈伤 组 织 冉 , 化能力情况 比较
愈 伤 组 织 数 目 分 化 芽 的 您 伤
}
分 “ 率 ( ” ’
组 织 数 目
2〔、 2 0 盆0 0
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四 绝代培养试验 :
为 了能长期保持愈伤组织再分化的能功 . 又做了继代培养的试验 。 结果发现 , 只 用
M S基本培养基作为大丽花的继代培养基 , 效果很好 . 加入 6 一糠基氨基漂吟的培养 基 ,
反而不如前者 。 见表 3 :
表 3 继代培养基对愈伤组织出苗的 影响
序 二
} 愈伤 组 织 1愈 伤` 织 1 二 , , 1出 , 愈伤 } 出苗 率 1、 , 苗 。一二-一 l一巡判-兰鉴少鳌 i一 )~ }竺主一十止书上 一土一! 生 一阵上上…二士二 {一洲二生兰一…上里继 止
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用基本培养基作为继代培养基 , 能保持愈伤组织继续脱分化和再分化 , 不断形成芽和
幼苗 ( 图 4 ) . 这一现象证明 , 愈伤组织一经分化 , 就具有相对稳定性 ; 即使除去细胞分
裂素后 , 愈伤组织仍能保持继续分化 , 并通过细胞分裂加以传递 “ ’ 。
对脱分化不 良的愈伤组织和致密型愈伤组织 , 用 “继 1 ” 培养基进行培养 , 也有较好
结果 。
五 生根 :
将切下的苗转入两种生根培养基中 , 14 天后统计 , 结果见表 4 :
表 4 不 同培养墓 对幼苗生根 的作用
}二
一
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I 根 “ j “ o { “ “ } 7 0 } 3一 ,
接种两周 后 , 即可看到 “ 根 2 ” 优于 “ 根 1 ” . 随后 , M S + 蔡乙酸 0 . 1毫克 /升培 养
基中的苗 , 全部生根 , 根轮生 , 数量多而粗壮 ( 如图 5 ) . 而 “ 根 1 ” 培养基中 , 一直有
少 数 苗 完全不生根 , 根量也少 。 由此可见 , 对于生根 , 加入适量 的蔡乙酸 , 确有促进作
用 . 与 K O h 1e n b a c h , H . W . 结论相同 ( 5 ’ 。
六 移植 :
待幼苗 的根长到 1 厘米以上时 , 取出冲去附着的培养基 , 转入砂质土中 . 用塑料薄膜
罩上 , 注意保持湿度 . 一周后 , 揭开罩膜 , 幼苗即成活 。
1 2 6
分 析 与 讨 论
一 激素的影晌
(一 ) 2, 4一二氯苯氧乙酸对大丽花外植体的分化 , 有较好效果 , 却不利于再分化 。
试验中 , 曾用 2 , 4一二氯苯氧 乙酸诱导出苗 , 无效果 . 去掉 2 , 4一二氯苯氧 乙酸 , 代 以蔡
乙酸和 6 一糠基氨基嗦吟 , 则很快 就有芽分化 。
( 二 ) 再分化阶段 , 基本培养基和细胞分裂素相同的情况下 , 加用蔡乙酸的效果优于
叫噪 乙酸 , 而叫噪 乙酸又优于叫噪丁酸 : 使用叫噪丁酸 , 再分化所需的时间长 , 分 化 率
低。
以上情况说明 , 大丽花的组织培养 , 以应用蔡化合物优于被取代的苯氧基脂族酸的盐
类和叫噪类化合物
二 愈伤组织的初始状态对再分化的影响
再分化培养中 , 愈伤组织的初始状态不同 , 再分化的能力相差很大 , 见表 2 . 疏松型
与致密型愈伤组织的产生 , 仅在培养时 间的长短 . 疏松型愈伤组织是外植体在脱分化过程
中 , 最早 、 最快分化出来的愈伤组织块 ; 「 而致密型愈伤组织 , 贝提在脱分化 过程中 , 生长较慢的组织块 , 以后又继续用脱分化培养基 , 连续培养出来的 . 所以 , 再分化培养时 , 应
全部选取疏松型愈伤组织 , 以利于大量出苗 。
其它植物的愈伤组织中 , 也有类似的情况 . 如豌豆 《 。 ’ 和白云杉 《 , ’ , 这两种植物的愈
伤组织 , 也有疏松型和致密型之分 . 但是 , 这两种植物的愈伤组织 , 只能从致密型转化为
疏松型 , 却不能反转 . 而在单冠毛菊 ` “ ’ 和蚕豆根 `“ ’ 的两种类型的两种愈伤组织 , 却可 以
互变 . 而大丽花的情况 , 正好和豌豆 、 白云杉相反 , 其愈伤组织是从疏松型转化为致密型
的 。
不 同类型的愈伤组织 , 其质地和物理性状也有着明显的差别 . 一般疏松型的 愈 伤 组
织 ,其细胞组成或排列很分散 ; 而致密型的愈伤组织却是由排列较紧密的细胞所组成 。 二者
的化学组成也有较大的区别 , 致密型愈伤组织含有大量的多糖 , 细胞壁部分也多 . 多糖是
果胶 、 半纤维素和纤维素的组成成分 , 纤维素能增加细胞的硬度 , 而果胶会促使细胞紧密
地粘在一起 .
三 愈伤组织再分化能力的保持
如上所述 , 在植物的细胞和组织培养中 , 普遍存在的障碍是 : 离体培养的细胞和组织
的分化能力 , 随着培养时间的增长 , 而逐渐降低或丧失 , 以致使遗传上稳定的无性系的繁
殖受到影响 , 严重地妨碍组织培养技 术的应用 . 一些研究者对此问题做了大量的工作 , 找
到了一些保持愈 伤组织分化能力的方法 。 例如 , 有人用长期连续人工筛选措施 , 以保持愈
伤组织的分化能力 ( “ ’ 。 但是 , 这种方法的手续 过于繁杂 , 且不易稳定 。
试验采 用了一个较简易的方法 , 就是选用刚产生的 , 具有较强分化能力的疏松型愈伤
组织 ; 它虽具有多量的芽 , ` 但尚未出苗 , 用这样的愈伤组织进行继代培养 , 则既不会影响
愈伤组织量的增长 , 又能较长期地保持其分化能力 . 试验证明用这种状态 的愈伤组织继代
培养 10 个月后 , 仍然具有很强的分化能力 , 与刚开始时的状态 , 无明显的差别 。 此时 , 若
需大量出苗时 , 转入再分化培基 , 即可得到茁壮的幼苗。
1 2 7

参 考 文 献
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( 3 〕 G r a n t , M E . & F u l l e r , K . W . , I O6 8 J . E x 户. B o t . , 盆g : 6 6 7一 仁8 乃
〔 4 〕 许智宏 1 9 79 植物 的细脸分化 、 植物生理学通讯 弓期
〔 5 〕 K o h l e n b a e五 , H · W . 19 7 7 . B a s ie a s p e e t s o f d i f f e r e n t 三a t i o n a n d 、
p l a o t r e g e o e r a t i o n f r o tn e e l l a n d t i s s o e e u l亡“ r e
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.
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3 5 e
( 6 〕 T o r r e 了 . J . G . & S h i g e 边 u r e , J , , 1 9 5 7 . A m . J . B o t . , 4 4 : 3 3心一 3 4 4
〔 7 〕 R e i n e r t , J . & w h i t e , P . R . , l g 5 6 . P五y s i。 l。 g i a P一 , 9 : 一7 丁一 、 8 )
〔 8 〕 谷 明义 等 . J , 3 2 . 在继 代珍养 中玉 米花粉愈伤组 织 的分化能 力及其染 色休 稳定性 . 植物学娜 , , 4
T I S S U E C U L T U R E O F G A R D E N D A H L I A
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