全 文 ： ·1024· Chin JMAP, 2010 November, Vol.27 No.11 中国现代应用药学 2010 年 11 月第 27 卷第 11 期
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收稿日期：2010-02-26



HPLC 测定毛兰素乳液型注射液中毛兰素及有关物质含量

杨兵勋，沈春香，夏克中，孙继军，王增，陈武兵，陈立钻，楼正家，于善凯，杨芳亮，张旭峰(浙江天皇
药业有限公司，杭州 310012)

摘要：目的 建立一种测定一类新药毛兰素乳液型注射液中毛兰素及有关物质鼓槌联苄含量的方法。方法 采用 Agilent
XDB C18 柱(4.6 mm×250 mm，5 µm)，流动相为甲醇-乙腈-水(30 30 40)∶ ∶ ，检测波长：232 nm；流速：1.0 mL·min−1。
结果 毛兰素及有关物质鼓槌联苄达到完全分离；毛兰素在 5.562 5~89.0 µg·mL−1 内线性关系良好(Y=13 504X+2 146.6，
r=0.999 9)，平均回收率 100.8%；有关物质鼓槌联苄在 9.292~46.462 µg·mL−1 内亦有良好线性关系(Y=14.033 1X+2.388 6，
r=0.999 9)，平均回收率达 99.8%。结论 本法灵敏，准确，专属性强，可用于测定注射液中毛兰素的含量和有关物质的检
查。
关键词：毛兰素乳液型注射液；毛兰素；有关物质；鼓槌联苄；高效液相色谱法
中图分类号：R917.101 文献标志码：B 文章编号：1007-7693(2010)11-1024-05

Determination of Erianin and Its Related Constituent Chrysotobibenzyl in Erianin Emulsion Injection by
HPLC

YANG Bingxun, SHEN Chunxiang, XIA Kezhong, SUN Jijun, WANG Zeng, CHEN Wubing, CHEN Lizuan,
LOU Zhengjia, YU Shankai, YANG Fangliang, ZHANG Xufeng(Zhejiang Tianhuang Medicinal Plant Pharmaceutical
Co., Ltd., Hangzhou 310012, China)

ABSTRACT: OBJECTIVE To establish an HPLC method for determining the contents of erianin and related constituent
chrysotobibenzyl in Erianin emulsion injection. METHODS Agilent EclipseXDB-C18 column(4.6 mm×250 mm, 5 µm) was
used. The mobile phase consisted of methanol-acetonitrile-water(30 30 40∶ ∶ ), the flow rate was 1.0 mL·min-1, and the detective
wavelength was 232 nm. RESULTS Erianin and its related constituent chrysotobibenzyl were separated completely in Erianin
emulsion injection. The calibration curves of both erianin and chrysotobibenzyl showed good linearity in the range of
5.562 5−89.0 µg·mL−1 and 9.292−46.462 µg·mL−1, respectively(erianin: Y=13 504X+2 146.6, r=0.999 9; chrysotobibenzyl:
Y=14.033 1X+2.388 6, r=0.999 9). The average recovery of erianin and chrysotobibenzyl was 100.8% and 99.82%, respectively.
CONCLUSION The method is accurate, sensitive and with high specific, it can be applied for determining the contents of
erianin as well as its related constituent chrysotobibenzyl in Erianin emulsion injection.
KEY WORDS: Erianin emulsion injection; erianin; related constituent; chrysotobibenzyl; HPLC

毛兰素乳液型注射液是利用超临界萃取技术和
色谱层析技术从传统中药鼓槌石斛 (Dendrobium
chrysotoxum)中提取获得联苄类单体化合物毛兰素
(erianin，dihydrocombretastatin A4)，经乳化技术制
备而成供静脉注射用脂肪乳剂。研究证明，毛兰素
对体外培养的人体白血病细胞株 K562、人体白血病
HL-60、人体肺腺癌 A-549、人体结肠癌 HT-29、人
体乳腺癌 MCF-7、HepG2 人体肝癌、SKMEL-5 和
MLM 黑色瘤等肿瘤细胞株生长均有较强的抑制作
用[1]。在体内，其药动学遵从开放型二房室模型，并
对 S180，ESC，HePA 等动物移植性肿瘤亦有明显
疗效[2-4]。机制研究发现，毛兰素能够选择性地抑制
基金项目：浙江省中药现代化重点项目(2007C13025)
作者简介：杨兵勋，男，博士，副主任医师 Tel: (0571)88858168 Email: yangbx001@yahoo.com.cn
DOI:10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2010.11.027
中国现代应用药学 2010 年 11 月第 27 卷第 11 期 Chin JMAP, 2010 November, Vol.27 No.11 ·1025·
增殖期血管内皮细胞的增殖，并破坏其细胞骨架蛋
白 M 和骨架蛋白 F，使正常的血管内皮细胞从扁平
形转变成圆形，进而导致血管腔狭窄，肿瘤组织血
流灌注量下降，最终导致肿瘤组织出现广泛的出血
性坏死[4-5]。该作用与血管靶向剂(vascular disrupting
agents，VDA)CA4P(combretastatin A4 phosphate)极
为相似，目前，CA4P 已在美国进入 III 期临床试验。
本试验旨在建立一套测定具有潜在治疗临床肿瘤作
用的毛兰素乳液型注射液毛兰素含量及其相关物质
的方法，为本品质量控制提供可靠的检测手段。
1 仪器与材料
1.1 仪器
Metter AE240 精密分析天平[0.01 mg，梅特勒
-托利多仪器(上海)有限公司]；Agilent 1100 高效液
相色谱仪 (DAD 检测器，美国安捷伦公司 )；
TGL-16C 台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。
1.2 药品与试剂
毛兰素乳液型注射液(浙江天皇药业有限公司，
批号：030315，030521，030529，030530，030531，
规格：100 mL∶200 mg)；毛兰素对照品(批号：0201，
纯度：99.4%)，鼓槌联苄对照品(批号：0401，纯度：
99.8%)，均由浙江天皇药业有限公司提供；甲醇、
乙腈为色谱纯；水为重蒸亚沸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent XDB-C18 柱(250 mm×4.6 mm，
5 µm)；流动相：甲醇-乙腈-水(30∶30∶40)；检测
波长：232 nm；流速：1.0 mL·min−1。
2.2 溶液的制备
2.2.1 供试品溶液的制备 精密量取本品 1 mL，
置 100 mL 量瓶中，加甲醇破乳并稀释至刻度，摇
匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2.2.2 对照品溶液 A 的制备 取毛兰素对照品适
量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每 1 mL 含
0.02 mg 的溶液，即得对照品 A 溶液。
2.2.3 对照品溶液 B 的制备 称取鼓槌联苄对照
品适量，加甲醇制成每 1 mL 含 0.02 mg 的鼓槌联
苄对照品溶液。
2.3 专属性
2.3.1 分离度试验 取供试品溶液和两对照品溶液
各 10 µL，分别进样，按“2.1”项下色谱条件测定。
结果显示，毛兰素主色谱峰与主要相关物质鼓槌联苄
色谱峰完全分离，分离度为 11.19，见图 1。

图 1 HPLC 色谱图
A−供试品溶液；B−毛兰素对照品溶液；C−鼓槌联苄对照品溶液；1−
毛兰素；2−鼓槌联苄
Fig 1 HPLC chromatograms
A−Erianin emulsion injection; B−erianin control solution;
C−chrysotobibenzyl control solusion; 1−erianin; 2−chrysotobibenzyl
2.3.2 空白乳剂干扰试验 精密量取空白乳剂和
含药制剂各 25 mL，分别置于 100 mL 量瓶中，加
甲醇定容至刻度，摇匀，经台式离心机 14 500
r·min−1 离心 10 min，取其上清液，再经台式离心
机 14 500 r·min−1 离心 10 min，取其上清液，即得
空白对照品液和供试品溶液；取空白对照溶液和
该供试品溶液各 10 µL，分别注入液相色谱仪，按
“2.1”项下色谱条件测定，结果见图 2。可见，
空白对照品溶液在供试品溶液主峰毛兰素保留时
间 10.4 min 处和主要相关物质鼓槌联苄色谱峰保
留时间 15.5 min 处均不出峰，表明本品乳剂中所
用辅料对主峰毛兰素和主要相关物质鼓槌联苄峰
均不产生干扰。
2.3.3 破坏试验 分别精密量取毛兰素乳液型注
射液(批号 030521)25 mL 共 3 份，置于 100 mL 量
瓶中，其中 2 份分别加入 10 mol·L−1 盐酸 10 mL、
10 mol·L−1 氢氧化钠 10 mL 进行强酸、强碱破坏，
然后再分别用 10 mol·L−1 氢氧化钠或 10 mol·L−1
盐酸中和至 pH 值为 7.0。另 1 份加 30%双氧水 25
mL，90 ℃水浴加热，反应 30 min 后取出，冷却；
另取本品(批号：030521)2 瓶，1 瓶置电热恒温干燥
箱中，60 ℃温度下放置 10 d。另 1 瓶放置于光照仪
器内，在照度为(4 500±500)1x 的条件下放置 10 d。
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图 2 空白乳剂干扰试验高效液相色谱图
A−空白乳剂；B−供试品溶液；1−毛兰素；2−鼓槌联苄
Fig 2 HPLC chromatograms of interference assay
A−blank emulsion; B−Erianin emulsion injection; 1−erianin;
2−chrysotobibenzyl
上述各种处理后的样品按“2.3.2”项下方法制得
供试品溶液。精密吸取该供试品溶液各 10 µL 进
样，按“2.1”项下色谱条件进行测定。
结果显示，本品经强碱、双氧水作用后均产
生降解，而在强酸、高温、光照后未见变化。但
经以上各种处理样品无论降解与否，其色谱图中
相关峰均与毛兰素主峰和相关物质鼓槌联苄次峰
完全分离。
2.4 线性关系考察
2.4.1 毛兰素线性关系考察 分别精密吸取按
“2.2.2”项下方法制备的 89.0，44.5，22.25，11.125，
5.562 5 µg·mL−1 浓度的毛兰素对照品溶液各 10 µL
注入液色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，
以毛兰素峰面积(Y)对毛兰素进样浓度(X，µg·mL−1)
作标准曲线，得毛兰素线性方程：Y=13 504X+
2 146.6，r=0.999 9。可见毛兰素在 5.562 5~89.0
µg·mL−1 内线性关系良好。
2.4.2 主要相关物质鼓槌联苄线性关系考察 分
别精密吸取依照“2.2.3”项下方法制备的 9.292，
18.584，27.876，37.168，46.460 µg·mL−1 不同浓度
的鼓槌联苄对照品溶液各 5 µL 注入液色谱仪，按
“2.1”项下色谱条件测定峰面积，以鼓槌联苄峰
面积(Y)为纵坐标，进样浓度(X，µg·mL−1)为横坐
标作回归方程，得鼓槌联苄线性方程： Y=
14.033 1X+2.388 6，r=0.999 9。结果显示，鼓槌联
苄在 9.292~46.462 µg·mL−1 内线性关系良好。
2.5 检测限
将对照品 A 和 B 两溶液逐步稀释进样，结果
主要相关物质鼓槌联苄最低检测限为 0.2 µg·mL−1，
毛兰素定量限为 0.4 µg·mL−1。
2.6 重复性试验
取批号 030521 的毛兰素乳液型注射液，按
“2.2.1”项下方法制备 6 份毛兰素含量测定的供
试品溶液，分别精密吸取 10 µL 进样，按“2.1”
项下色谱条件测定。结果毛兰素峰平均峰面积为
495.7，RSD 为 0.66%(n=6)，结果表明本法有良好
的重复性。
按“2.3.2”项下制备方法，用同一批毛兰素
注射液制备 6 份供鼓槌联苄测定用的供试品溶液，
各精密吸取 10 µL，进样，计算鼓槌联苄峰平均面
积为 669.6，RSD 为 1.2%(n=6)。
2.7 稳定性考察
取批号为 030529 的毛兰素注射液，按“2.2.1”
项下方法制备供试品溶液，每次取 10 µL 进样，按
“2.1”项下色谱条件每 4 h 测定 1 次，共测 6 次，
结果毛兰素的峰面积 RSD 为 1.034%，鼓槌联苄的
峰面积 RSD 为 0.35%，表明依照本法测定在 24 h
内稳定。
2.8 回收率试验
2.8.1 毛兰素回收率试验 采用空白加样回收试
验法，分别精密吸取 0.1 mL 不含毛兰素的空白乳
剂 12 份，各置于 10 mL 量瓶中，其中 3 瓶用甲醇
直接稀释至刻度，作为阴性对照溶液；其余 9 个
量瓶每 3 个各精密加入 107.4 µg·mL−1 毛兰素对照
品储备液 1.5，2.0，2.5 mL，各平行制备 3 份，然
后用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得低、中、高加
样回收率试验供试品。分别精密吸取低、中、高
加样回收率试验供试品溶液 10 µL 进样，按“2.1”
项下色谱条件测定，以外标一点法计算含量，结
果见表 1。平均回收率为 100.8%，RSD 为 1.24%。
表 1 毛兰素回收率测定结果(n=9)
Tab 1 Recovery of erianin (n=9)
加入量/µg 测得量/µg 回收率/% 平均值/% RSD/%
161.1 164.2 101.94 101.9 0.089
161.1 164.3 101.97
161.1 164.0 101.80
214.8 217.3 101.16 101.2 0.692
214.8 218.9 101.90
214.8 215.9 100.50
268.5 269.4 100.35 99.4 0.987
268.5 267.4 99.57
268.5 264.2 98.40
中国现代应用药学 2010 年 11 月第 27 卷第 11 期 Chin JMAP, 2010 November, Vol.27 No.11 ·1027·
2.8.2 主要相关物质鼓槌联苄回收率试验 采用
空白加样回收试验法，分别精密量取 25 mL 不含
毛兰素的空白静脉乳剂，置于 100 mL 量瓶中，各
精密加入 217.5 µg·mL−1 鼓槌联苄对照品溶液 5，
10，15 mL，各平行制备 3 份(共 9 份)，然后用甲
醇稀释至刻度，摇匀，按“2.3.2”项下方法离心，
取上清，得低、中、高加样回收率试验供试品溶
液。分别精密吸取低、中、高加样回收率试验供
试品溶液 10 µL，注入液相色谱仪，以外标一点法
计算含量，计算回收率结果见表 2，平均回收率为
99.8%，RSD 为 0.46%。
表 2 鼓槌联苄回收率测定结果(n=9)
Tab 2 Recovery of chrysotobibenzyl determination(n=9)
加入量/mg 测得量/mg 回收率/% 平均值/% RSD/%
1.087 5 1.092 3 100.44
1.087 5 1.080 0 99.31
1.087 5 1.077 4 99.07
2.175 0 2.171 4 99.83
2.175 0 2.173 2 99.92 99.8 0.46
2.175 0 2.162 5 99.43
3.262 5 3.267 0 100.14
3.262 5 3.269 0 100.20
3.262 5 3.263 4 100.03
2.9 3 批样品含量及有关物质测定
取 3 批样品 (批号为 030529， 030530 和
030531)，按“2.2.1”项下方法制得供含量测定用
供试品溶液。按“2.3.2”项下方法制得供相关物
质鼓槌联苄测定用供试品溶液。分别取供含量测
定用供试品溶液、供鼓槌联苄测定用供试品溶液、
对照品溶液 A 与对照品溶液 B 各 10 µL 进样，按
“2.1”项下色谱条件进行测定。结果显示，3 批
样品毛兰素含量以及主要相关物质鼓槌联苄含量
均较接近，见表 3。
表 3 3 批毛兰素乳液型注射液毛兰素含量及有关物质测
定结果(n=2)
Tab 3 The contents of erianin and its related compounds in
three batches of Erianin emulsion injection(n=2)
批号 毛兰素含量/% 鼓槌联苄含量/mg·mL−1
030529 100.2 0.076
030530 99.2 0.075
030531 100.1 0.076
3 讨论
3.1 测定波长的选择
毛兰素乳液型注射液的原料药毛兰素是从传
统中药材鼓槌石斛中提取分离的联苄类单体化合
物，纯度在 96%以上。经 CG、CG-MS、TOF 技
术分析发现，其中主要相关物质为鼓槌联苄，含
量占 3%左右，此外还含有极微量的毛兰菲。由于
毛兰素原料中所有这些化学成分其分子中均含有
苯环结构，因此对紫外均有吸收。对照品溶液 A
在 200~400 nm 波长范围扫描发现，本品的甲醇溶
液 λmax 在 207 nm 处靠近末端吸收，279 nm 处吸收
值偏小。故选择 220 nm 和 279 nm 之间，选择±2 nm
间响应值差异相对较小的 232 nm 为检测波长。有
关物质对此检测波长灵敏，所以有关物质检查也
选此波长。
3.2 洗脱条件的选择
本试验比较了采用不同洗脱剂和不同洗脱梯度
测定毛兰素的效果。结果显示，以甲醇-乙腈或甲醇
-水为洗脱剂时，主要成分与相关物质分离度不及甲
醇-乙腈-水为洗脱剂的分离度。而采用甲醇-乙腈-水
(30∶30∶40)进行梯度洗脱与 1.0 mL·min−1 恒速洗
脱比较，结果，无论在分离效果还是在分离测定时
间上两者未见明显差异。为便于方法普及，选择甲
醇-乙腈-水(30∶30∶40)为洗脱剂，以 1.0 mL·min−1
流速恒速洗脱为宜。
3.3 鼓槌联苄检测方法比较
鼓槌联苄与毛兰素互为同系物，是毛兰素 3
位 C 原子上的羟基被甲氧基取代的产物，其化学
名为 3，4，3’，4’，5’-五甲氧基联苄。本试验比较
了外标法和加校正因子的主成分自身对照法鼓槌
联苄含量测定，结果两者测得结果相似。其中加
校正因子的主成分自身对照法测得的 f 校正因子
值为 0.927 6，该方法操作简便，亦可用于本品中
该相关物质的检测。
从结果看，本研究所建立的测定方法，不仅
专属性强，重复性好，而且方法灵敏、准确，适
用于本品中毛兰素含量测定及有关物质鼓槌联苄
的检测。
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收稿日期：2010-01-28




HPLC 同时测定乳癖消颗粒中三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1 和人参皂
苷 Rb1 的含量

蒲艳春，徐艳丽，崔静茹(哈尔滨医科大学附属第四医院，哈尔滨 150001)

摘要：目的 建立高效液相色谱法测定乳癖消颗粒中三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1 和人参皂苷 Rb1 含量。 方法 色谱柱
为 CAPCELL PAK C18(150 mm×4.6 mm，5 µm)；流动相 A 为乙腈，B 为水；流速：1.0 mL·min−1；检测波长为 203 nm；
洗脱程序：0~12 min，A 相 19%，B 相 81%；12~60 min，A 为 19%→36%，B 为 81%→64%。结果 三七皂苷 R1、人参
皂苷 Rg1 和人参皂苷 Rb1 保留时间分别为 21，25，51 min，与各自相邻峰的分离度均在 1.5 以上。三七皂苷 R1、人参皂
苷 Rg1 和人参皂苷 Rb1 的线性范围分别为 0.100 2~2.00 4 µg、0.418 8~8.376 µg 和 0.187~3.74 µg。三七皂苷 R1、人参皂
苷 Rg1 和人参皂苷 Rb1 的回收率分别为 98.5%，99.6%和 96.5%，RSD 分别为 1.9%，1.3%和 1.9%。结论 本法简便、准
确、重现性好，可用于乳癖消颗粒中三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1 和人参皂苷 Rb1 含量的同时测定。
关键词：高效液相色谱法；乳癖消颗粒；三七皂苷 R1；人参皂苷 Rg1；人参皂苷 Rb1
中图分类号：R917.101 文献标志码：B 文章编号：1007-7693(2010)11-1028-03

Determination of Notoginsenoside R1, Ginsenoside Rg1 and Ginsenoside Rb1 in Rupixiao Granule by
HPLC

PU Yanchun, XU Yanli, CUI Jingru (The Fourth Hospital of Harbin Medical University, Harbin 150001, China)

ABSTRACT: OBJECTIVE To establish an HPLC method for determination of notoginsenoside R1, ginsenoside Rg1 and
ginsenoside Rb1 in Rupixiao granule. METHODS The chromatographic conditions included C18 column(CAPCELL PAK, 150
mm×4.6 mm, 5 µm), acetonitrile as mobile phase A, water as mobile phase B. The flow rate was 1.0 mL·min−1. The detection
wavelength was 203 nm. Gradient elution: 0−12 min, A: 19%, B: 81%; 12−60 min, A:19%→36%, B: 81→64%. RESULES
The retention time of notoginsenoside R1, Ginsenoside Rg1 and Ginsenoside Rb1 was 21, 25, 51 min, respectively. The
resolution was above 1.5. The linear range of notoginsenoside R1, ginsenoside Rg1 and ginsenoside Rb1 was 0.100 2−2.004 µg,
0.418 8−8.376 µg and 0.187−3.74 µg. The average recovery was 98.5%, 99.6% and 96.5%, RSD was 1.9%,1.3% and 1.9%,
respectively. CONCLUSION The method is simple, accurate and reproduciable. It can be used for routine analysis of
notoginsenoside R1, ginsenoside Rg1 and ginsenoside Rb1 in Rupixiao granule simultaneously.
KEY WORDS: HPLC; Rupixiao granule; notoginsenoside R1; ginsenoside Rg1; ginsenoside Rb1

乳癖消颗粒是由鹿角、蒲公英、昆布、鸡血
藤、三七、海藻、玄参、天花粉、红花等 15 味药
材提取加工制成，具有软坚散结，活血消痈，清
热解毒的功效，用于乳癖结块、乳痈初起、乳腺
囊性增生病及乳腺炎前期。乳癖消颗粒原标准[1]
中的含量测定是应用薄层扫描法测定处方中三七
作者简介：蒲艳春，女，主任药师 Tel: 13945043639 E-mail: puyanchun1957@126.com.