全 文 ：　第 20卷第 6期 宿 州 学 院 学 报 Vol. 20, No. 6
　 2 0 0 5年 1 2月 Journal of Suzhou Col lege Dec . 2 0 0 5
三角紫叶酢浆草叶片外植体组织培养研究
高贵珍 ,　　张兴桃
(宿州学院 生化分析实验室 ,安徽 宿州　 234000)
摘要: 以三角紫叶酢浆草 ( Oxa lis triangularis A. St. Hil)的叶片为材料进行组织培养研究 ,结果表明: 叶片在适宜的
培养基上可以形成愈伤组织 ,并分化成小苗。 经筛选适宜诱导愈伤组织形成和芽分化的培养基为 M S+ 6- BA 1. 0
mg / L+ N AA0. 2mg / L+ 蔗糖 30g /L+ 琼脂 0. 8% ;丛生芽生长最佳培养基 M S+ 6- BA2. 0mg /LN AA+ 0. 3mg /L+
蔗糖 30g /L+ 琼脂 0. 8% ;生根最佳培养基为 1 /2M S+ N AA0. 2mg /L+ 蔗糖 30g /L+ 琼脂 0. 8%。
关键词: 三角紫叶酢浆草 ;外植体 ;组织培养
中图分类号: Q945　　文献标识码: A　　文章编号: 1673- 2006( 2005) 06- 0090- 03
收稿日期: 2005-08-12
基金项目: 安徽省教育厅自然科学研究项目 ( 2001Kj243)
作者简介: 高贵珍 ( 1962- ) ,女 ,安徽五河人 ,教授 ,主要从事植物生理生化研究。
　　三角紫叶酢浆草 ( Oxalis t riangula ris A. St.
Hil )是酢浆草科酢浆草属的多年生彩叶草本植物 ,
原产于热带美洲。 植株丛生 ,地下块茎粗大而透明 ,
根状茎直立有残留的鳞片状叶柄基 ,丛生叶长柄 ,三
小叶倒阔三角形 ,顶端凹缺 ,常年紫红色 ,形似飞舞
的 “紫蝴蝶” ,是一种观赏价值高的花卉 ,在城市绿
化、家庭装饰中具有广阔的应用前景 [1 ]。酢浆草的繁
殖过去多采用切分块茎的方法 ,使每块块茎都具有
突起的芽或茎叶 ,带土扦插 ,但这样的繁殖速度慢 ;
也可用种子繁殖 ,但其结种率低 ,周期长 ,远远不能
满足市场需要。有关植物组织培养和快速繁殖的研
究很多 [ 2～ 5] ,三角紫叶酢浆草的同属植物紫叶酢浆
草 ( Oxalis violacea)的快速繁殖已获得成功 [6, 7 ] ,有
关三角紫叶酢浆草组培快繁的研究仅见文献 [ 8]
和 [9 ]。为此 ,本课题组以三角紫叶酢浆草的叶片为外
植体进行组织培养研究 ,旨在为花卉市场提供组织
培养苗 ,满足市场对三角紫叶酢浆草的观赏需求。
1　材料与方法
1. 1　材料
本试验的材料取自盆栽的三角紫叶酢浆草 (购
于合肥花卉公司 ) ,用叶片作为接种的外植体。
1. 2　方法
1. 2. 1　消毒
先用自来水冲洗外植体 10min,用少量加酶洗
衣粉浸泡 2h左右后 ,用流水冲洗干净 ,移入无菌接
种室。将每片叶剪成三小片后浸入 0. 1% HgCl2溶
液中振荡消毒 2min,用无菌水冲洗 5～ 8次 ,即可
接种。
1. 2. 2　培养基配方 [10 ]
( 1)愈伤组织诱导培养基: ① MS+ 6- BA 1. 0
mg /L+ N A A0. 1mg /L;② M S+ 6- BA 1. 0mg /L+
N AA0. 2mg /L;③ M S+ 6- BA2. 0mg /L+ N AA
1. 0mg /L;④ MS+ NAA0. 5mg /L;⑤ MS+ 6- BA
1. 0mg /L。
( 2)丛生芽生长培养基: ① MS+ 6- BA0. 5mg /
L+ IBA0. 2mg /L;② M S+ 6- BA1. 0mg /L+ IBA
0. 2mg /L;③ MS+ 6- BA1. 0mg /L+ IBA0. 2mg /L
+ KT0. 5mg /L。
( 3)生根培养基: ① 1 /2M S;② 1 /2M S+ N AA
0. 1mg /L;③ 1 /2M S+ N AA0. 2mg /L;④ 1 /2MA+
NAA0. 3mg /L。
各培养基的蔗糖浓度均为 30g /L,加 0. 8%的琼
脂固化 , PH控制在 5. 8～ 6. 2。
1. 2. 3　培养条件
培养的温度控制在 22～ 25℃ ,光照强度为
2000lx左右 ,光照时间为 12h /d。
1. 2. 4　培养方法
( 1)愈伤组织的诱导:将消过毒的叶片在无菌条
件下切成约 1cm2小块 ,将叶片的背面向上置于诱导
分化的 5组培养基上 ,每瓶内接种 3个外植体。
( 2)丛生芽的生长:将已分化的丛生芽取出分别
移入 3组丛生芽生长培养基中培养 ,每瓶移入丛生
芽 5～ 10个。
( 3)试管苗的生根培养:将培养 30d生长至 2～
3cm的试管苗转至生根培养基中培养 ,每瓶 5个。
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1. 3　实验测定
每 3d观察统计一次外植体的生长状况 ,除去污
染外 ,测定出芽数、出芽率、不定芽增殖率和生根数、
生根率、根生长状态。 出芽率= 出芽的外植体 /接种
外植体总数。
2　结果与分析
2. 1　愈伤组织的诱导和芽的分化
接种在愈伤组织诱导培养基上的叶片在接种
7d后开始出现拱起 ,叶片颜色变淡 , 10d后在叶片
的切口边缘处开始出现白色点状的愈伤组织 (图
1) ,愈伤组织形成后 4d左右即接种 14d后在愈伤组
织处开始生出白色的不定根 (图 2) ,不定根表面有
白色绒毛覆盖 ,此白色绒毛组织为组织培养中伴随
小苗形成过程出现的愈伤组织 ,此现象与参考文
献 [6 ]一致。接种 23d后叶片上形成的愈伤组织开始
分化出卷曲的紫色的幼芽 (图 3)。继续培养发育生
长出丛生叶 ,每叶有长的叶柄顶端着生三个紫色小
叶 (图 4)。
图 1　叶片诱导形成愈伤组织
图 2　愈伤组织形成不定根
图 3　愈伤组织分化出幼芽
图 4　生长出丛生叶
2. 2　叶片外植体愈伤组织诱导和芽分化结果
表 1　叶片外植体愈伤组织诱导和芽分化结果
外植体 接种外植体数 出现愈伤组织时间 (d ) 愈伤组织数
诱导率
(% )
分化的芽数
叶片 60 10 50 83. 3 518
　　与叶柄为外植体比较 ,叶片愈伤组织形成和芽的
分化较早、愈伤组织诱导率高、分化的速度快、形成
的芽多。因此 ,选择叶片为外植体进行组织培养和快
速繁殖效果最佳。
2. 3　不同培养基对三角紫叶酢浆草叶片分化形成
不定芽的影响
由于五种培养基外源激素 6- BA和 NAA比例
不同 ,对三角紫叶酢浆草叶片分化形成不定芽影响
不同 ,结果见表 2。
由表 2可见外源激素 6- BA或 NAA单独存在
时对叶片诱导形成不定芽效果都不好 , 6- BA和
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NAA激素组合诱导叶片形成不定芽效果较好 ,当
两者浓度为 1. 0∶ 0. 2时出芽率最高达 95%。 因此 ,
三角紫叶酢浆草叶片外植体诱导分化芽的最佳培养
基为 MS+ 6- BA1. 0mg /L+ N AA0. 2mg /L。
表 2　不同培养基对叶片诱导分化芽的影响
培养基代号 6- BA N AA 接种数 出芽的外植体数 出芽率
① 1. 0 0. 1 40 25 62. 5%
② 1. 0 0. 2 40 38 95%
③ 2. 0 1. 0 40 36 90%
④ 0. 5 40 15 37. 5%
⑤ 1. 0 40 10 25%
2. 4　不同培养基对丛生芽生长的影响
将已分化的丛生芽取出分别移入 3组丛生芽生
长培养基中培养 ,结果见表 3。由表 3可见 , M S+ 6-
BA2. 0mg /L+ N AA0. 3mg /L+ 蔗糖 30g /L+ 琼脂
0. 8%是丛生芽的生长的最佳培养基 ,丛生芽在培养
基 MS+ 6- BA2. 0mg /L+ N AA0. 3mg /L上不仅成
苗率高 ,而且苗粗壮 ,长势好。
表 3　不同培养基对丛生芽生长的影响*
培养基 成苗数 成苗率 (% ) 生长状况* *
M S+ 6- BA0. 5+ NAA0. 1 106 85. 5 + + +
M S+ 6- BA1. 0+ NAA0. 2 316 87. 8 + +
M S+ 6- BA2. 0+ NAA0. 3 139 90. 3 + + + +
　　* 培养 50天后的记录
* * + + 、+ + + 、+ + + + 分别表示生长较弱、较强、强。
2. 5　不同培养基对三角紫叶酢浆草生根的影响
从培养基中选取 3cm以上的壮苗 ,转入生根培
养基中诱导生根 ,结果见表 4。
表 4　不同培养基对三角紫叶酢浆草生根培养的影响
培养基代号 N AA 平均根数 根生长状态
① 0 4. 1 +
② 0. 1 5. 1 + +
③ 0. 2 6. 0 + + +
④ 0. 3 5. 0 + + +
　　注: + 、+ + 、+ + + 分别表示生长较弱、较强、强。
四种培养基上的苗都能长出一定数量的根 ,且
在不添加任何激素的基本培养基上就可生根 ,但是
数目相对较少 ,生长较弱 ,若添加 NAA,数量多、根
粗壮、生长较强 ,但以 1 /2M S+ N AA0. 2mg /L培养
基生根效果较好 ,不但生根早、生根率高 ,而且根粗
壮 ,同时发现有些苗的基部形成组织块 ,此组织块以
后发育成块茎 ,这样的苗移栽极易成活。因此 ,最佳
生根培养基是 1 /2M S+ N AA0. 2mg /L。
实验结果表明 ,三角紫叶酢浆草的叶片可以作
为外植体进行组织培养快速繁殖 ,而且叶片愈伤组
织形成和芽的分化较早、愈伤组织诱导率高、分化的
速度快、形成的芽多 ,故以叶片为外植体最佳。通过
比较 ,最佳诱导分化培养基 MS+ 6- BA1. 0mg /L+
N AA0. 2mg /L+ 30g /L蔗糖+ 0. 8%琼脂 ;丛生芽
生长最佳培养基 MS+ 6 - BA2. 0mg /L+ N AA
0. 3mg /L+ 30g /L蔗糖+ 0. 8%琼脂 ;生根最佳培养
基为 1 /2M S+ 0. 2mg /LN AA+ 30g /L蔗糖+ 0. 8%
琼脂。 培养的最佳条件: 温度为 250C,光照强度
2000lx ,光照时间 12h /d。
参考文献:
[1 ]龙金花 .彩蝶纷飞的三角紫叶酢浆草 [ J].植物杂志 ,
2000, ( 2): 48
[2 ]舒娈 ,高山林 .桔梗的组织培养 [ J].植物资源与环境 ,
2001, 10( 3): 63～ 64
[ 3]冯晓英 .勿忘我组织培养快速繁殖研究 [ J].贵州农业科
学 , 2002, 30( 1): 9～ 13
[ 4]黄清俊 ,谢维荪 ,季大方 .狄氏芦荟的离体培养和快速繁
殖 [ J].植物生理学通讯 , 2002, 38( 5): 455
[5 ]高山林 ,金雍安 ,蔡朝晖 ,刘立军 .大蒜分生组织培养脱病
毒和快速繁殖技术 [ J].植物资源与环境 , 2000, 9( 3): 15
～ 18
[ 6]李霖 ,宋宝颖 ,鲁润龙等 .紫叶酢浆草的组织培养 [ J].植
物生理学通讯 , 2002, 38( 4): 360
[ 7]余朝秀 ,李枝林 ,王玉英 .紫叶酢浆草鳞茎培养及快繁研
究 [ J].云南农业大学学报 , 2004, 19( 4) 433～ 435
[ 8]邓小梅 ,况小宝 ,万小婷 .三角紫叶酢浆草的组培快繁技
术研究 [ J].江西林业科技 , 2003, ( 6): 8～ 9
[ 9]高贵珍 ,张兴桃 ,刘小阳等 .三角紫叶酢浆草快速繁殖研
究 [ J].植物资源与环境 , 2004, 21( 1):
[ 10 ]谭文澄 ,戴策刚 .观赏植物组织培养技术 [M ].北京: 中
国林业出版社 , 1991
Research on Tissue Culture of Oxalis Triangularis by Leaf Blade
GAO Gui-Zhen,　　 ZHANG Xing-Tao
( Biochemist ry Reso lutione Labo rato ry Suzhou Col leg e, Suzhou Anhui　 234000)
Abstract: Rapid propagation o f Oxalis t riangular by tissue cul ture using i ts leaf blade has been studied.
The results show tha t the callus can occur from bo th leaf, and then dif ferentiate y oung plants in the proper
medium. The optimum medium fo r the inducing o f callus and the dif ferentiation of buds is M S with 1.
0mg /L 6- BA, N A A0. 2mg /L , 30g /L sucro se and 0. 8% agar. The optimum medium for the grow th of
crow d buds is M S w ith 2. 0mg /L 6- BA, 0. 3mg /L N AA, 30g /L sucrose and 0. 8% agar. The optimum
medium for roo ting is 1 /2M S with 0. 2mg /L N AA, 30g /L sucrose and 0. 8% agar.
Key words: Oxalis t riangularis; adventi tious; ti ssue culture
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