全 文 ：中国食用菌 E DIB L E U FH GI O N F CN rAV ol。 2 4, N o 。 3
一盐析法提取一香菇 、 草菇多糖的探讨
胡稳奇 张志光 张天晓
`翻南师范大学生物系 长沙 4 1。。。6 )
目前 , 国内从各种真菌中提取多糖主要采用热
水抽提后用乙酵沉淀的方法。 该方法虽可得到较好
的提取效果 , 但需用大量的95 % 乙酵 , 由于乙醇价
格较贵 , 因而造成提取费用太高 , 不适应于大规模生
产 。 为此 , 我们根据食用菌多糖的特性 , 探讨了盐
析法提取食用菌多糖的可能性 , 取得了较好效果 。
现将初步研究结果报道如下。
l 材杆 与方法
1
.
1 材料 市售香菇 、 草液子实 体 , 均为 千品 ,
( X H
` ) 5 0 ` (工业级 ) 多 95 % 乙醉 , 无水乙醉 , 丙
酮 , 乙醚 (化学纯 ) , 硫酸 、 氢氧化钠 (化学纯 ) ,
葡萄糖 (分析纯 ) 。
1
.
2 试脸方法
1
.
2
.
1 多糖的提取与纯化步骤
1
.
2
.
1
.
1 称取适量 (一般为 5 0 9 ) 干 子 实 体 , 粉
碎后加 5 ~ 10 倍水 (或稀盐 、 稀碱液 ) 浸泡 4 小时
(切℃ ) , 置冰箱冷冻柜中过夜 ;
1
.
2
.
1
.
2 从冰箱取出 , 解冻后加热沸煮抽 提 30 ~
6。分钟 , 纱布过滤后收集滤液 。 再加 5 倍水抽提一
次 , 纱布过滤后收集过滤液 , 合并两次滤液 ,
1
_
.
2
.
1
.
3 将上述滤液于 90 ℃下浓缩 , 收集浓缩液 ,
切 00r p二离心 15 分钟后收集上清液 ,
1
.
.2 1
. 雌 加入适量 95 % 乙醇或适当饱和度的 硫 酸
按后 , 静置过夜 12 小时以上 ,
i 。 2
.
2
.
5 取出 , s 0 0 0 r p m 离心 2 5分钟 , 沉淀用 少
盒热水溶解后置透析袋 中 , 过夜 (透析 ) ,
.1 2
.
1
.
6 取出 , 用无水 乙醇 、 丙酮和乙 醚 涤洗后
真空抽 千 , 即为真菌多糖粗品 。
1
.
2
.
2 多糖的测定方法
1
.
2
.
2
.
1 标准曲线的制作 , 精密称取葡萄糖 ( 1 0 5℃
干操 月小时 ) 50 m g , 定容至 I 0 0 0 m l , 配成浓度 为
5 0林 g/ m l 的葡萄糖溶液。 取上述 溶 液 0 . 2 、 0 . .4
。 . 6 、 。 . 8 、 1 . 。和 1 . 2m l分别于 6 支试管中 , 加蒸馏
水至 2 m l , 加入 l m 1 5 % 苯酚溶液 , 摇匀后 迅 速
加入 s m l浓硫酸 , 摇匀后静置 10 分钟 , 置沸水浴中
加热 1 5分钟 , 于 4 g o n m处比色测定 0 D J 9 0 , 以蒸馏
水的反应液作空白。 以 O D J 90 作横座标 、 对应的糖
量值作纵座标作标准曲线 ;
.1
.
2
.
2
.
2 多糖的测定 : 称取粗多糖 s m g , 加 热水
洛解后定容至 10 o rn l , 取 2也 l按上述 方 法 测 定 O D
弓9 0 , 查标准曲线 , 计算结果 。
2 结果与分析
2
.
1 稀碱 、 稀盐溶液对抽提的 影 晌 分别称取若
干份等重的香菇 、 草菇干子实体 ( 5 0 9) , 分 别 用
o
.
I N N a O H
、
0
.
I N N a C I和水浸泡 、 冷冻 及煮沸
抽提 , 然后用 70 % 饱和度的硫酸按沉淀 , 以比较不
同抽提液的抽提效果 。 结果表明 , 在其它工艺相同
时 , 以 O . I N N a O H 溶液的抽提效 果 最 好 (见 表
1 )
。
表 1 不 同 抽 提 液 的 提 取 效 果 比 较
\ 侮 10 0 9
抽提板
\ 0
.
I N N
a
0 H O
。
I N N a C I 水
干 子实休
香菇
草菇
3 4 5
。 0
3 0 2
。
6
2 8 7
。 8
忍6 5。 2
2 5 9
。 3
2 2 9
.
9
2
.
2 热水抽提时间对提取效果的影晌 本试验 比
较了不 同热水抽提时间的多糖提取效果 。 试验结果
表明 , 在其它工艺相同时 (0 . I N N a O H 抽提 , 75 % 硫
酸铁沉淀 ) , 热水抽提时间适当延长 , 可使煮提充分 ,
多糖充分释放并溶解于热水中 , 从而取得更好的提
取效果 , 从表 2 可以看出 , 以煮提60 分钟为宜 , 60
分钟后继续煮提对提取效果并无明显增加 。
表 2 不同煮提时间的相对提取得率 (% )
煮提时 间 (分 ) 3 0 6 0 9 0
香菇
草菇
6了。 7
了3一 2 ::::
1 00
10 0
2
.
3 不同浓度 N a O H 溶液的抽提效果比较 各 取
了 3 份等重的香菇 、 草菇干子实体 , 分别用不同浓度
的N a O H溶液煮提 60 分钟后 , 用 70 % 饱和度的硫酸
按沉淀析出多糖以比较其提取得率 。 结果表明 , 以
。 . 2N 的N a 0 H溶液的抽提效 果 最 好 (见表 3 ) 。
但考虑生产成本等因素 ) 以采用。 . I N N a O H溶液
为宜 , 因为 0 . 2N N a O H 溶液的抽提效果仅略优于
0
.
i N N a 0 H 溶液 。
表 3 不同浓度N a OH抽提的多糖得率如 g l/ 。 g0 干于实体》
N
a
0 H浓度 ( N ) o 。 0 5 0 。 1 0 0 。 2 0
香菇
草菇
2 5 5
。
0
2 0 4一 0
3连5 。 0
2 3 6
。
8
3 9 0
。
6
2 4 0
。
5
2
.
4 不同饱和度硫破按的提取效果 比较 称取适
最 的香菇 、 草菇子实体加入 0 . I N N a O H 溶 液 浸
泡 、 冷冻 、 解冻并加热煮提后 ( 60 分钟 ) , 分别收集
滤液经浓缩 , 离心后 , 将收集的上清液分为均等的
3 份 , 分别加入 70 % 、 80 %和 90 %饱和度的硫酸铰
进行沉淀处理 , 以比较其提取效果 。 试验结果列于
表 4 , 从表 4 可以看出 , 香菇多糖的提取以 90 % 饱
和度的硫酸按最好 , 草菇多糖的提取以采用 80 %饱
DOI : 10. 13629 /j . cnki . 53 -1054. 1995. 03. 026
第 14卷 第 3期 中国食用菌 E DIB LE E UI N GO FI C HN A
金针菇深层发酵培养基的筛选研究
高述民 周 燕 樊新 民
(新祖石河 子农学院园林系 石河子市 83 2 0 03 )
摘要 本文采用六种根食作物 .制成七种液体培 养基
培养金针菇 菌丝体 , 菌丝生物全经 F 浏脸及新复极 差浏 验
多重比较 , 结果表明 , 菌丝生物产黄由天到小依次 为 . 白
面 标准粉> 玉米粉 + F A早地龙 > 玉米粉 > 大 米 > 红 薯>
马铃芳 > 黄豆 , 共中白 面标 准粉 、 玉未粉 、 大术 、 红 薯之
间的菌丝生 物产量 差异达极显著水乎 , 而玉 米 粉 + F A 早
地龙与白 面标 准粉之 间无显著差异 , 各种塔养基 pH 位在菌
丝 J吝养前后 无明显 变化 。
关键词 金针菇 深层 发酵培养签 菌丝 生 物量 筛
选
金针菇深层发酵培养生产食品、 饮料 、 医药乃
至化妆品等在国内外已有报道 , 但在我 区 尚 属 空
白, 国内外生产也存在着培养原料较单一 , 易受地
域及时间的制约 。 为此 , 我们试图选用六种常见粮
食作物配制成七种培养基培养金针菇菌丝体 , 以寻
求生物量高的培养基 , 为金针菇发酵工程选择优良
培养基提供依据 , 同时在降低 生 产 成本 , 增加品
质 , 增加经济效益方面也具有重要作用 。
1 材抖与方法
1
.
1 菌种 金针菇一金针 19 # , 引自新疆农垦科学
院 。
1
.
2 培养鑫配方 选用玉米粉 、 白 面 标 准 粉 、 大
米 、 红薯 、 黄豆和马铃薯六种粮食作物配制成七种
培养基 :
I : 白面标准粉 3 % , K H : P O ` 0 . 2% , M g S O `
0
.
8%
,
3 0 0m l ,
兀: 玉米粉 3 % , F A早地龙。 . 16 % , K H Z PO `
0
.
2%
,
M g S O
` 0 . 8%
,
3 0 0 m l ,
l
: 玉米粉 3% , K H Z P O ` 0 . 2% , 入1 9 5 0 ` 0 . 8 ,,。 ,
30 0m l ,
万 : 大米 3 % , K H : P O 。 0 . 2% , M g S O ; 0 . 5% ,
3 0 0m l
:
V
: 红薯 3 % , K H Z P O ` 0 . 2 % , M g S O ` 0 . 8% ,
3 0 0 m l ,
f1 : 马铃薯 3 ;百, K H Z P O ` 0 . 2 % , M g S O `
0
.
8%
,
3 0 0m l ,
和度硫酸按为最好 . 但从生产成本方面考虑 , 香菇
多糖的提取仍以采用 80 %饱和度硫酸按为宜 , 其相
对得率已为采用 90 %饱和度硫酸按的98 % 。
表 4 采用不饱和度 N( H ,) 声 O`沉淀的多糖得率
(二 g / 20 0 9干于实体 )
水 H一) : 5 0 一饱和度 (% ) 7 0 8 0 9 0
香菇
草菇
3 45
一 0
2 0 3
一 O
4 5 4
。
0
2 5 7
. 0
4 6 3
。
8
2 3 0
。 0
2
.
5 硫 . 缺盐析与乙醉沉淀提取多抽的效果比较
如前所述 , 目前从真菌中提取多糖的方法主要为乙
醇沉淀法 , 硫酸按盐析法则未见报道 。 为此 , 我们
初步比较了两种方法的提取效果 。 试 验 结 果 (表
5 ) 表明 , 对于草菇多糖的提取来说 , 70 %饱和度
表 5 硫醉铁盐析与乙醇沉淀的多搪得率
( m以 l 。。g干子实体 )
处 理 香 菇 草 菇
等盆 95% 乙醉沉 淀 3 3 2。 ` 2` 0。 0
7 0 %饱和度硫按 5 3 7 一 0 2 6 5 。 2
名0 % 饱柑度硫按 4 2 3 。 1 3 0 2 。 l
9 0 %饱和崔硫按 4 40 。 3 2 30 。 9
的硫酸钱盐析与等量 95 % 乙醇沉淀的效果相当 , 但
80 %饱和度硫酸按盐析的效果比等量 95 % 乙醉沉淀
更好 。 对于香菇多糖的提取来说 , 两种方法的提取
效果差异与上述类似 (见表 5 )
3 讨论与结论
3
.
1 目前国内从食用菌子实体中提取多糖主要采用
乙醇沉淀的方法 , 乙醇用量大 , 而且价格昂贵 , 生
产成本高 。 本试验初步表明 , 采用一定饱和度的硫
酸铰进行沉淀处理 , 可取得较好的提取效果 , 从而
为食用菌多糖的提取提供了一新的途径 。
3
.
2 与乙醇沉淀法比较 , 硫酸按盐析法具有 生 产
成本低 、 简便易行的优点 。 本试验研究表明 , 影响
多搪提取效率的因素是多方面的 , 如抽提液的种类
及浓度 、 煮提时间 、 硫酸按饱和度等 , 本文仅在单
因子水平进行了一些初步探讨 , 要建立一适应于工
业化生产的工艺流程 , 尚有待更进一步的研究。