全 文 :139
第 33 卷第 2 期
2015 年 4 月
广 东 医 学 院 学 报
JOURNAL OF GUANGDONG MEDICAL COLLEGE
Vol. 33 No. 2
Apr. 2015
Abstract: Objective To investigate the effects of extracts of pericarp of Garcinia mangostana on proliferation and
differentiation of mouse osteoblast-like cells MC3T3-E1. Methods Bioactivity-guided separation was carried out on the 80%
EtOH extract of the pericarp of Garcinia mangostana. The aqueous-soluble part was chromatographied by D101 macroporous
resin column. MTT method was adopted in proliferation analysis and the intracellular alkaline phosphatase (ALP) activity was
assayed in differentiation detection after incubated with different doses of extractions and fractions for different times. The
chemical constituent of the active fraction was identified by tube tests and its tannin content was measured according to
Appendix XB of Pharmacopoeia of People’s Republic of China (2010 Edition Subdivision One). Results The aqueous-soluble
part could increase proliferation and differentiation of MC3T3-E1 cells, while the ethyl acetate-soluble part had significant
cytotoxicity to MC3T3-E1 cells. The 70% EtOH eluted part (SZ-S7) from D101 column at doses ranging from 12.5 mg/L to 50.0
mg/L could remarkably promote the proliferation of MC3T3-E1 after incubated 24, 48 and 72 h, and the ALP activity after
incubated 3, 5 and 7 days, respectively, which were better than other eluted parts. Based on the chemical analysis, the major
constituent of SZ-S7 was detected as condensed tannin, whose content was up to 87.8%. Conclusion The aqueous-soluble part
of the pericarp of Garcinia mangostana has effects on stimulating the proliferation and differentiation of MC3T3-E1 cells, and its
active constituent is recognized as condensed tannin in the 70% EtOH eluted part (SZ-S7) from D101 column, which supposes
that the pericarp of Garcinia mangostana may have potential in preventing osteoporosis, and deserve further study.
Key words: Garcinia mangostana; MC3T3-E1; osteoporosis; condensed tannin
山竹壳提取物对小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1增殖和分化的影响
(1. 广东医学院药理学教研室, 广东湛江
524023;2. 广东医学院天然药物研究与开发实验室,广东湛江 524023)
The effects on proliferation and differentiation of mouse osteoblast- like cells MC3T3-E1 of
the extracts from pericarp of Garcinia mangostana
1 2 2 1 1 1
LIAO Hong-bo , WU Xin , CUI Liao , LIU Yu-yu , LUO Shi-ying , LV Xiao-hua (1. Department of
Pharmacology, Guangdong Medical College, Zhanjiang 524023, China; 2. Guangdong Key Laboratory for Research and
Development of Natural Drugs, Guangdong Medical College, Zhanjiang 524023, China)
基金项目:国家自然科学基金面上项目(No.81273518);广东医学院建博科技创新团队项目 (No. TD1104);广东医学院博士
启动项目(No. XB1301)
收稿日期:2014-11-19,修订日期:2015-03-26
作者简介:廖红波(1983-),女,硕士,助理实验师。
通信作者:巫 鑫,男,博士,助理研究员,E-mail: woodbirdlhb@163.com。
摘 要:目的 研究山竹壳提取物对小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1增殖和分化的影响。方法 采用活性追踪的方
法,用不同终质量浓度的山竹壳提取物和D101大孔树脂柱层析样品溶液进行干预,分别以MTT法和细胞内碱性磷酸酶
(ALP)活性检测法评价各样品对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响;用试管反应方法鉴别活性部位的主要化学成分类
型,再按照2010 版《中国药典》附录XB法测定活性部位的鞣质含量。结果 山竹壳水溶性成分有一定的促MC3T3-
E1细胞增殖和分化的作用,而脂溶性成分具有显著的细胞毒性;水溶性成分经D101大孔树脂柱层析的70%乙醇洗脱部
位(SZ-S7)在12.5~50.0 mg/L范围内培养24、48、72 h时均可显著促进MC3T3-E1细胞增殖,培养3、5、7 d时均能显著促
进MC3T3-E1细胞内ALP的形成,且其作用明显优于其它洗脱部位;化学成分分析表明,SZ-S7主要为缩合鞣质,总缩
合鞣质含量达87.8% 。结论 山竹壳水溶性成分具有促进小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1的增殖和分化的作用,且经
D101大孔树脂柱层析的70%乙醇洗脱部位为主要活性部位,可能对预防和治疗骨质疏松有一定的作用。
关键词:山竹;小鼠成骨细胞株;骨质疏松;缩合鞣质
中图分类号:R 282.705 文献标识码:A 文章编号:1005-4057(2015)02-0139-05
DOI: 10.3969/j.issn.1005-4057.2015.02.003
2 2 1 1 11廖红波 ,巫 鑫 ,崔 燎 ,刘钰瑜 ,罗世英 ,吕小华
山竹(Garcinia mangostana L.)学名莽吉柿,又名
[1]
山竹子、凤果、倒捻子等 ,是藤黄科藤黄属常绿
乔木山竹的果实,主要分布于泰国、越南、印度尼
西亚、马来西亚菲律宾等东南亚国家,我国海南、
[2]
广东、广西、云南、福建等地均有种植 。山竹果
皮(壳)呈紫褐色,约占单果鲜重的52%~68%,是少
[3]
数几种厚皮果实之一 。山竹壳在东南亚传统医药
中被用于治疗腹泻、创伤、疟疾、败血病等,还具有
[4]
抗炎、抗溃疡、抗过敏、抗肿瘤以及平喘等功效 。
本文就山竹壳提取物对小鼠成骨样细胞株MC3T3-
E1增殖和分化的影响进行研究。
1 材料和方法
1.1 材料
山竹于2013年7月购自湛江市华润万家超市,产
地为广东电白县,小鼠成骨样细胞MC3T3-E1 购自
中国协和医科大学细胞中心;3-(4, 5-二甲基噻唑-
2)-2, 5-二苯基-四唑氢溴酸盐(MTT)为Sigma 公司产
品 ; Dulbecco’s Modified Eagles Medium(DMEM)培
养基及胰蛋白酶为Gibco 公司产品;胎牛血清(FBS)
为Hyclone公司产品;对硝基苯酚磷酸钠(PNPP)为
Sigma分装;磷酸、碳酸钠、三氯化铁、明胶和氢氧
化钙为西陇化工股份有限公司产品;溴水为天津市
富宇精细化工有限公司产品;干酪素和没食子酸为
上海晶纯生化科技股份有限公司产品;钨酸钠和钼
酸钠为昆山兴邦钨钼科技有限公司产品;盐酸为北
京北化精细化学品有限公司产品。
1.2 方法
1.2.1 提取物的制备和分离 山竹壳提取物为本实
验室自制:取山竹1 500 g,剥壳,得山竹壳900 g,
粉碎,加80%乙醇5L渗漉提取3次,回收提取液得山
竹壳提取物(SZ-E),提取物加水混悬,等体积乙酸
乙酯萃取3次,回收萃取液得乙酸乙酯部位(SZ-Y)和
水溶性部位(SZ-S),水溶性部位加水溶解后过滤,
过D101大孔树脂柱层析(柱体积1.5 L),依次用水、
30%、50%、70% 乙醇洗脱,各洗脱10 L体积,回收
洗脱液,得各洗脱部位(SZ-S0、SZ-S3、SZ-S5和SZ-
S7)。
1.2.2 细胞培养 将小鼠成骨样细胞MC3T3-E1 接
种于含体积分数为10% 的胎牛血清、100 mg/L 青霉
素和100 mg/L 链霉素的DMEM 培养基中,置于37
℃、5% CO2培养箱中培养。当细胞生长到足以覆盖
瓶底壁的大部分表面时,用0.25% 胰蛋白酶消化,
传代。
1.2.3 药物对MC3T3-E1细胞增殖的影响 取对数
生长期生长状态良好的MC3T3-E1细胞,消化后,
用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM 培养基配成
4
活细胞浓度为5×10 个/mL,接种于96 孔培养板中,
0. 1 mL/孔,培养24 h,细胞完全贴壁后,分为对照
组和实验组,对照组只加等体积的溶剂,实验组加
入 终 质 量 浓 度 分 别 为 50.0、 25.0、 12.5 mg/L的 药
物;每组设6个复孔。继续培养24、48、72 h后每孔
加MTT (5 g/L) 20 μL,37 ℃、5%CO2 培养箱中孵育
4 h后 倒 掉 培 养 基 , 每 孔 加 入 150 μL 二 甲 基 亚 砜
(DMSO),在摇板机上震荡10 min,用酶标仪,于
570 nm下测定各孔吸光度值 (A)。
1.2.4 药物对MC3T3-E1细胞内ALP活性的影响
4
调整细胞浓度为3×10 个/mL,各取0. 1 mL 接种于
96 孔培养板,置37 ℃、5% CO2温箱中培养。待24 h
细胞完全贴壁后,按上述对照组和各质量浓度实验
组加入相应的药物。每组设6 个复孔。加药3、5、7 d
后,将细胞用PBS 缓冲液冲洗3 次,最后一次吸干
PBS,每孔加50 μL0.05% Triton X-100,-20 ℃冰箱
放置12 h后,常温融化,超声处理,每孔加100 μL
反应底物37 ℃孵育30 min,加0.4 mol/L NaOH 50 μL
终止反应,用酶标仪于405 nm处测量各孔吸光度值
(A)。
1.2.5 活性部位SZ-S7的化学成分定性分析 根据样
品状态和文献分析,初步推测活性部位SZ-S7为鞣质
[5]
类成分,故采用试管反应实验 对活性部位进行定
性分析:准确称取SZ-S7粉末50 mg五份,加水20
mL溶解,分别滴入三氯化铁溶液、明胶溶液、氢氧
化钙溶液、溴水数滴,观察反应现象。
1.2.6 活性部位SZ-S7鞣质的定量测定 采用2010版
《中国药典》附录XB项下鞣质含量测定法并参考文
[6-7]
献进行测定 :精密称取没食子酸对照品10.2 mg,
置20 mL棕色量瓶中,加水溶解,定容至刻度,精
密量取5 mL,置25 mL棕色量瓶中,加水至刻度,
摇匀,制得对照品溶液;精密吸取没食子酸对照品
溶液0. 5、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5. 0 mL,分别置于
25 mL棕色量瓶中,分别加磷钼钨酸试液1 mL,依
次精密加20%碳酸钠溶液12 mL,加水稀释至刻度,
摇匀,放置30 min,以水为空白,于760 nm 处测定
吸光度值(A),以A为纵坐标,质量浓度为横坐标,
建立没食子酸标准曲线;取5份SZ-S7样品,各100.0
mg,精密称定,置 250 mL 棕色容量瓶中,加水150
mL,放置过夜,超声处理 10 min,放冷,用水稀释
至刻度,摇匀,静置,滤过,弃去初滤液,取续滤
140 广 东 医 学 院 学 报 2015 年 第 33 卷
液20 mL,置100 mL 棕色容量瓶中,用水稀释至刻
度,摇匀,制得供试品溶液;量取供试品溶液2 mL,
置25 mL 棕色容量瓶中,参照标准曲线的制备方法,
自“加入磷钼钨酸试液1 mL”起,加水10 mL,依法
测定吸光度,依据标准曲线计算样品中总酚的含量
(以没食子酸计mg),精密量取供试品溶液25 mL,加
至已盛有干酪素0.6 g的100 mL具塞锥形瓶中,密
塞,置30 ℃水浴中保温1 h,振摇,取出,放冷,摇
匀,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液2 mL,置
25 mL棕色容量瓶中,参照标准曲线的制备方法,
自“加入磷钨酸试液1 mL”起,加水10 mL,依法测
定吸光度,依据标准曲线中样品中不被吸附的总酚
含量(以没食子酸计mg),鞣质含量=总酚量-不被吸
附多酚量。
1.3 统计学处理
所有数据使用SPSS16. 0 统计软件中的单因素方
差分析(One-Way ANOVA)进行检验,先用Levene’s
test 对数据进行方差齐性检验,如方差齐则采用LSD
检验方法,如方差不齐则采用Dunnett’ T3 检验方
法。以P<0.05 表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 各部位的质量和收率
山竹壳80%乙醇提取物得率较高,其中水溶性
成分占总提取物的65.4%;水溶性成分经D101大孔
树脂柱层析的各乙醇洗脱部位中水洗脱部位(SZ-
S0)最多,70% 乙醇洗脱部位(SZ-S7)最少。详见表
1。
2.2 山竹壳粗提物对MC3T3-E1细胞增殖的影响
与空白对照组相比,山竹壳80%乙醇提取物(SZ-
E)50.0 mg/L质量浓度组在24、48、72 h时均能显著
促进MC3T3-E1细胞增殖(P<0.05或0.01);乙酸乙酯
部位(SZ-Y)各测试质量浓度组在24、48、72 h时均对
MC3T3-E1细胞有显著的细胞毒性(P<0.01);而水溶
性部位(SZ-S)各测试质量浓度组在各测试时间点均
能显著促进MC3T3-E1细胞增殖(P<0.05或0.01),其
中水溶性部位(SZ-S)50.0 mg/L质量浓度组24、48、
72 h细胞存活率分别为对照组的108.3%、121.4%和
125.7%。详见表2。
2.3 山竹壳粗提物对MC3T3-E1细胞分化的影响
与空白对照组相比,给药第3天时,山竹壳80%
乙醇提取物(SZ-E)仅50.0 mg/L质量浓度组能显著促
进细胞内ALP的形成(P<0.05);给药第5、7天时,
25.0 mg/L和 50.0 mg/L质 量 浓 度 组 均 能 显 著 促 进
MC3T3-E1细胞内ALP的形成(P<0.05或0.01);乙酸
乙酯部位(SZ-Y)各测试质量浓度组均对MC3T3-E1细
胞内ALP的影响差异无统计学意义(P>0.05);而水溶
性部位(SZ-S)各测试质量浓度组在各测试时间点均
能显著促进MC3T3-E1细胞内ALP的形成(P<0.01),
其中水溶性部位(SZ-S)50.0 mg/L质量浓度组在24、
48、72 h时细胞内ALP活力分别为对照组的132.8%、
154.7%和164.7%。见表3。
2.4 D101大孔树脂分离的各部位对MC3T3-E1细胞
增殖的影响
与空白对照组相比,水洗脱部位(SZ-S0)各测试
质量浓度组均对MC3T3-E1 细胞增殖的影响差异无
统计学意义(P>0.05);30%乙醇洗脱部位(SZ-S3)各测
试质量浓度仅在48、72 h 时能显著促进MC3T3-E1
细胞增殖(P<0.05或0.01);50%乙醇洗脱部位(SZ-S5)
和70%乙醇洗脱部位(SZ-S7)各测试质量浓度组在各
时间点均能显著促进MC3T3-E1 细胞增殖(P<0.01),
且SZ-S7 25.0 mg/L和50.0 mg/L浓度组促MC3T3-E1
细胞增殖作用均显著高于SZ-S0、SZ-S3和SZ-S5各
测试质量浓度组(P<0.01),25.0 mg/L和50.0 mg/L浓
表1 各部位的得量和收率
样品
质量/g
收率/%
SZ-E
115.2
12.8
SZ-Y
35.2
3.9
SZ-S
75.3
8.4
SZ-S0
22.6
2.5
SZ-S3
20.3
2.2
SZ-S5
18.2
2.0
SZ-S7
10.6
1.2
表2 山竹壳提取物SZ-E、SZ-Y和SZ-S在12.5~50.0mg/L
范围内对MC3T3-E1细胞增殖的影响 ( ,n=3)
组别
细胞增殖(A值)
空白对照组
SZ-E
12.5 mg/L
25.0 mg/L
50.0 mg/L
SZ-Y
12.5 mg/L
25.0 mg/L
50.0 mg/L
SZ-S
12.5 mg/L
25.0 mg/L
50.0 mg/L
24 h
0.545±0.015
0.537±0.012
0.547±0.019
a
0.571±0.022
b
0.404±0.010
b
0.388±0.006
b
0.125±0.008
a
0.569±0.010
a
0.586±0.017
b
0.591±0.015
48 h
0.601±0.023
0.601±0.051
0.625±0.033
a
0.712±0.043
b
0.292±0.063
b
0.247±0.021
b
0.094±0.006
a
0.699±0.051
b
0.713±0.037
b
0.730±0.044
72 h
0.667±0.029
0.683±0.052
0.710±0.052
b
0.740±0.042
b
0.374±0.051
b
0.292±0.063
b
0.086±0.007
a
0.722±0.056
b
0.795±0.033
b
0.839±0.039
a b
与空白对照组比较: P<0.05, P<0.01。
x±s
141第 2 期 廖红波,等. 山竹壳提取物对小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1增殖和分化的影响
度组在24、48、72 h时细胞存活率分别为122.7%、
126.6%、138.3%和 131.1%、135.2%、147.9%。见 表
4。
2.5 D101大孔树脂分离的各部位对MC3T3-E1细胞
分化的影响
与空白对照组相比,SZ-S0、SZ-S3、SZ-S5各测
试质量浓度中仅SZ-S5 50 mg/L浓度组在给药第3 天
时显著促进MC3T3-E1细胞内ALP的形成(P<0.05),
其它各组均在给药第5天和第7天时显著促进MC3T3-
E1细胞内ALP的形成(P<0.05或0.01);而SZ-S7各测
质量试浓度在各测试时间均能显著促进MC3T3-E1
细胞内ALP的形成(P<0.01),且12.5、25、50 mg/L三
个质量浓度组促MC3T3-E1细胞内ALP形成作用均显
著高于SZ-S0、SZ-S3和SZ-S5各测试质量浓度组(P<
0.01),12.5、25.0、50.0 mg/L三个质量浓度组24、48、
72 h时 细 胞 内ALP活 力 分 别 为 对 照 组 的(121.0%、
137.4%、 143.6%)、 (138.5%、 178.6%、 200.2%)和
(180.5%、211.5%、226.8%)。见表5。
2.6 活性部位SZ-S7的化学成分分析
在试管反应实验中,往活性部位SZ-S7溶液中滴
入三氯化铁溶液后,溶液由淡黄色变为黑绿色,而
滴入明胶溶液后有白色沉淀生成,上述两个反应表
明活性部位SZ-S7含鞣酸类成分;滴入氢氧化钙溶液
表3 山竹壳提取物SZ-E、SZ-Y和SZ-S在12.5~50.0mg/L范
围内对MC3T3-E1细胞内ALP的影响 ( ,n=3)
组别
ALP活性
3 d 5 d 7 d
空白对照组 0.121±0.003 0.138±0.005 0.153±0.004
SZ-E
0.122±0.003
b
0.149±0.003 0.154±0.005
0.126±0.004
b
0.154±0.003
a
0.161±0.003
a
0.130±0.014
b
0.164±0.005
b
0.171±0.007
SZ-Y
0.113±0.003 0.137±0.005 0.147±0.005
0.113±0.001 0.132±0.008 0.143±0.007
0.116±0.002 0.129±0.007 0.148±0.008
SZ-S
b
0.140±0.006
b
0.171±0.005
b
0.198±0.005
b
0.149±0.007
b
0.177±0.007
b
0.214±0.009
b
0.161±0.004
b
0.214±0.008
b
0.252±0.009
a b
与空白对照组比较: P<0.05, P<0.01。
12.5 mg/L
25.0 mg/L
50.0 mg/L
12.5 mg/L
25.0 mg/L
50.0 mg/L
12.5 mg/L
25.0 mg/L
50.0 mg/L
x±s
表4 D101大孔树脂各洗脱部位SZ-S0、SZ-S3、SZ-S5和
SZ-S7在12.5~50.0mg/L范围内对MC3T3-E1细胞增
殖的影响 ( ,n=3)
组别
细胞增殖(A值)
24 h 48 h 72 h
空白对照组 0.543±0.017 0.600±0.033 0.661±0.042
0.531±0.004 0.633±0.024 0.708±0.020
0.532±0.016 0.626±0.043 0.731±0.050
0.535±0.017 0.638±0.038 0.762±0.070
0.549±0.018
b
0.690±0.004
a
0.773±0.060
0.565±0.016
b
0.671±0.037
a
0.792±0.054
0.535±0.017
b
0.644±0.037
a
0.800±0.064
a
0.569±0.016
b
0.690±0.037
a
0.792±0.043
b
0.571±0.022
b
0.696±0.028
b
0.813±0.038
b
0.600±0.016
b
0.705±0.035
b
0.837±0.038
SZ-S0
SZ-S3
SZ-S5
SZ-S7
b
0.589±0.024
b
0.738±0.024
b
0.847±0.057
bc
0.666±0.036
bc
0.759±0.053
bc
0.914±0.036
mg/L
mg/L
12.5 mg/L
25.0 mg/L
50.0
12.5 mg/L
25.0 mg/L
50.0 mg/L
12.5 mg/L
25.0 mg/L
50.0
12.5 mg/L
25.0 mg/L
50.0 mg/L
bc
0.712±0.025
bc
0.793±0.023
bc
0.978±0.077
a b
与空白对照组比较: P<0.05, P<0.01;
c
与SZ-S0、SZ-S3、SZ-S5各组比较: P<0.01。
x±s
表5 D101大孔树脂各洗脱部位SZ-S0、SZ-S3、SZ-S5和
SZ-S7在12.5~50.0mg/L范围内对MC3T3-E1细胞内
ALP的影响 ( ,n=3)
组别
ALP活性
3 d 5 d 7 d
空白对照组 0.122±0.003 0.143±0.002 0.156±0.006
SZ-S0
0.123±0.003
a
0.153±0.003
b
0.170±0.010
0.122±0.003
a
0.154±0.002
b
0.175±0.011
0.124±0.005
a
0.155±0.004
b
0.180±0.015
SZ-S3
0.126±0.003
a
0.153±0.003
b
0.174±0.011
0.125±0.005
a
0.152±0.002
b
0.184±0.006
0.127±0.006
a
0.153±0.006
b
0.182±0.008
SZ-S5
0.126±0.004
b
0.162±0.003
b
0.176±0.010
0.125±0.006
b
0.160±0.002
b
0.192±0.007
a
0.132±0.008
b
0.161±0.004
b
0.198±0.004
SZ-S7
bc
0.148±0.005
bc
0.197±0.008
bc
0.224±0.007
bc
0.169±0.005
bc
0.255±0.007
bc
0.312±0.009
12.5 mg/L
25.0 mg/L
50.0 mg/L
12.5 mg/L
25.0 mg/L
50.0 mg/L
12.5 mg/L
25.0 mg/L
50.0 mg/L
12.5 mg/L
25.0 mg/L
50.0 mg/L
bc
0.220±0.021
bc
0.303±0.011
bc
0.354±0.014
a b
与空白对照组比较: P<0.05, P<0.01;
c
与SZ-S0、SZ-S3、SZ-S5各组比较: P<0.01。
x±s
142 广 东 医 学 院 学 报 2015 年 第 33 卷
和溴水后,均有棕色沉淀生成,表明所含鞣质为缩
合鞣质。
2.7 活性部位SZ-S7鞣质的含量
没食子酸标准曲线的回归方程y = 0.048x+0.012
2
(r =0.9997),表明没食子酸在2.04~20.4 mg/L与y呈
良好线性关系。5份样品含量测定结果表明,鞣质含
量较高,达到87.8%,且含量测定方法稳定可靠。含
量测定结果见表6。
表6 SZ-S7中鞣质含量测定结果
平均值/%
87.8
RSD/%
1.0
样品
1
2
3
4
5
取样量/mg
103.3
104.6
99.5
101.2
99.5
总酚/%
94.3
93.7
94.5
95.3
93.8
不被吸附多酚/%
6.2
7.2
5.9
6.7
6.4
鞣质含量/%
88.0
86.5
88.6
88.6
87.4
3 讨论
MC3T3-E1细胞是从新生C57BL/6小鼠颅顶骨中
分离培养所建立的一种成骨细胞株,具有ALP活
性、I型胶原合成的能力和基质钙化等成骨细胞典型
的生物学特征。MC3T3-E1细胞株在体外培养可以
经历成骨细胞典型的增殖、分化和矿化的过程。目
前MC3T3-E1作为成骨细胞模型被广泛应用于骨代
谢研究领域,尤其是预防和治疗骨质疏松药物和功
[8]
能食品筛选的首选模型 。
山竹是一种典型的热带果实,其肉质鲜美,具
有降燥、清凉解热的作用,素有“果中皇后”之
称。山竹壳在东南亚的传统医学中被广泛应用,化
学成分研究表明,其主要含以倒捻子素为代表的双
[9] [10]
苯吡酮类化合物 及植物多酚类物质 。目前对山
竹壳功效成分的研究主要集中在中低极性的双苯吡
酮类成分,而对其中含量较高的大极性多酚类物质
的成分和活性研究较为少见。因此,有必要进一步
挖掘山竹壳中的水溶性成分的药理活性和应用价
值。
本实验以MC3T3-E1细胞作为活性评价的体外模
型,采用活性追踪的方法,筛选山竹壳提取物中抗
骨质疏松的活性物质。结果表明,山竹壳80%乙醇
提 取 物 中 的 水 溶 性 成 分 具 有 一 定 的 促 进 MC3T3-
E1细胞增殖和分化的作用,而乙酸乙酯萃取物(主要
为脂溶性的双苯吡酮类成分)对MC3T3-E1细胞具有
显著的细胞毒性。进一步的活性追踪分离表明,水
溶性成分经D101大孔树脂分离得到的70%乙醇洗脱
部位(SZ-S7)各测试质量浓度均能显著促进MC3T3-
E1 细胞的增殖及细胞内碱性磷酸酶的形成,且显著
强于其它乙醇洗脱部位。化学成分分析表明SZ-S7部
位 主 要 为 水 溶 性 缩 合 鞣 质 类 成 分 , 且 含 量 高 达
80%。因此,本研究认为山竹壳水溶性成分具有促
进小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1的增殖和分化的作
用,且经D101大孔树脂柱层析的70%乙醇洗脱部位
为主要活性部位,可能对预防和治疗骨质疏松有一
定的作用,值得进一步的研究和开发。
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