全 文 ：收稿日期:2010-09-12
作者简介:金艺淑(1962-), 女(朝鲜族), 进修生 , Tel.024-22871204, E-mailcelestial 516@163.com;李玉山(1958-),
男(汉族),辽宁锦州人 ,教授, 主要从事中药学研究 , Tel.024-23986496, E-mailliyushan8888@yahoo.com.cn。
文章编号:1006-2858(2011)04-0269-03
黏萼蝇子草蜕皮甾酮类成分的分离与鉴定
金艺淑1, 2 , 徐　伟 1 , 李玉山1
(1.沈阳药科大学 中药学院 ,辽宁 沈阳 110016;2.沈阳医学院 沈洲医院 , 辽宁 沈阳 110002)
摘要:目的 对黏萼蝇子草根的化学成分进行研究。方法 采用反复硅胶柱色谱 、SephadexLH-20柱
色谱和反相半微量制备型高效液相色谱分离纯化 ,根据 ESI-MS、1H-NMR和 13C-NMR等谱学数据进
行结构鉴定。结果 从黏萼蝇子草根的乙醇提取物分离得到 5个蜕皮甾酮类化合物 , 分别鉴定为
20-羟基蜕皮激素(20-hydroxyecdysone, 1)、1-epi-integristeroneA(2)、abutasterone(3)、旌节花甾酮 A
(stachysteroneA, 4)和 15-羟基旌节花甾酮 A(15-hydroxystachysteroneA, 5);另外得到胡萝卜苷
(daucosterol, 6)和 β-谷甾醇(β-sitosterol, 7)2个甾醇类化合物。结论 化合物 2-5为蝇子草属植物
中首次分离的化合物。
关键词:黏萼蝇子草;化学成分;蜕皮甾酮;甾醇;结构鉴定
中图分类号:R914;R284　　　文献标志码:A
　　石竹科 (Caryophylaceae)植物黏萼蝇子草
(SileneviscidulaFranch.)的干燥根在云南民间作
为民族药瓦草使用 ,具有清热 、利湿 、通淋之功效。
用于治疗肺热咳嗽 、湿热淋病 、风湿骨痛 、头痛 、牙
痛 、脘腹疼痛 、跌打伤痛 、产后宫缩痛和手术后痛
等症[ 1-2] 。瓦草临床药效确切 ,但对其化学成分
及药理作用的研究几乎为空白 。为了探索瓦草药
效的物质基础 ,寻找生物活性成分 ,作者对云南产
黏萼蝇子草根的乙醇提取物进行了化学成分研
究 ,分离得到 5个蜕皮甾酮类(1-5)和 2个甾醇类
化合物(6、7)。根据理化性质和光谱数据分析鉴
定 5个蜕皮甾酮类化合物为 20-羟基蜕皮激素
(20-hydroxyecdysone, 1)、 1-epi-integristeroneA
(2)、abutasterone(3)、旌节花甾酮 A(stachyste-
roneA, 4)和 15-羟基旌节花甾酮 A(15-hydroxys-
tachysteroneA, 5);2个甾醇类化合物为胡萝卜苷
(daucosterol, 6)和 β-谷甾醇(β-sitosterol, 7)。化
合物 1-5的化学结构式见图 1。
Fig.1　Structuresofcompounds1-5
1　仪器与材料
BrukerARX300和 BrukerAV-600核磁共振
波谱仪(瑞士 Bruker公司), QuatroMicro质谱仪
(美国 Waters公司), LC-10AT高效液相色谱仪
[ RID-10A视差折光检测器 、YMC-packODS-AM
324色谱柱(300 mm×10 mm, 5 μm,日本 Shimad-
zu公司 ] 。
第 28卷 第 4期
2 0 1 1 年 4 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
JournalofShenyangPharmaceuticalUniversity
Vol.28　　No.4
Apr.2011 p.269
薄层色谱用硅胶 GF254和柱色谱用硅胶(青岛
海洋化工厂), ODS柱色谱填料(50 μm,日本 Na-
calaiTesqueInc公司),羟丙基葡聚糖凝胶 Sepha-
dexLH-20(瑞典 AmershamBioSciences公司),其
他所用试剂均为市售分析纯。
　　瓦草药材 2006年 6月 10日购于云南省昆明
市 ,由沈阳药科大学中药学院生药学教研室李玉
山教授鉴定为石竹科植物黏萼蝇子草(Silenevis-
cidula Franch.)的 干 燥 根 。 标 本 编 号 为
WC20060610,保存在沈阳药科大学中药学院生药
学教研室。
2　提取分离
取黏萼蝇子草干燥根 3.5 kg,用体积分数为
70%的乙醇 10 L加热回流提取 3次 ,每次 2 h,合
并提取液减压浓缩得乙醇提取物 700 g。将乙醇
提取物用 1 L水制成混悬溶液 ,依次用等体积的
石油醚 、乙酸乙酯和正丁醇各萃取三次 ,得石油醚
萃取物 3.5 g、乙酸乙酯萃取物 20 g和正丁醇萃
取物234 g。采用反复硅胶柱色谱 、开放 ODS柱色
谱 、羟丙基葡聚糖凝胶 SephadexLH-20柱色谱 、
反相 ODS半制备型 HPLC等色谱法进行分离纯
化 ,从正丁醇提取物 (100g)分离得到化合物 1
(400.0 mg)、2(8.1 mg)、3(6.6 mg)、4(6.0 mg)
和 5(4.0 mg),从乙酸乙酯提取物(20 g)分离得
到化合物 6(15.0 mg)和 7(8.0 mg)。
3　结构鉴定
化合物 1:白色针状结晶(甲醇)。 ESI-MS图
谱给出准分子离子峰 m/z503[ M+Na] +(posi-
tivemode)和 m/z515 [ M +Cl] - (negative
mode),结合氢谱数据确定分子式为 C27 H44O7。
1H-NMR(CD3OD, 300 MHz)图谱中 ,给出 5个甲
基质子信号 δ0.91(3H, s, H3 -18)、 0.99(3H, s,
H3 -19)、1.21(3H, s, H3-27)、1.22(3H, s, H3 -26)
和 1.22(3H, s, H3-21), 3个次甲基质子信号 δ
2.38(1H, m, H-17)、 2.42(1H, m, H-5)和 3.17
(1H, brt, J=8.7 Hz, H-9), 3个连氧次甲基质子
信号 δ3.35(1H, brd, J=11.7 Hz, H-22)、3.86
(1H, brt, J=11.4, 3.3 Hz, H-2)和 3.97(1H, br
s, H-3), 1个烯氢质子信号 δ5.83(1H, d, J=
1.8 Hz, H-7)等蜕皮甾酮的特征峰 。以上数据与
文献 [ 3]中报道的 20-羟基蜕皮激素波谱数据基
本一致 ,故鉴定化合物 1为 20-羟基蜕皮激素(20-
hydroxyecdysone)。
化合物 2:白色针状结晶(甲醇)。 ESI-MS图
谱给出准分子离子峰 m/z497[ M+H] -(negative
mode),结合氢谱数据确定分子式为 C27 H44 O8。
1H-NMR(CD3OD, 300 MHz)图谱给出蜕皮甾酮
5个甲基质子信号 δ0.87(3H, s, H3-18)、 0.98
(3H, s, H3 -19)、1.24(3H, s, H3-27)、1.26(3H, s,
H3 -26)和 1.27(3H, s, H3 -21), 3个次甲基质子信
号 δ2.37(1H, m, H-17)、 2.41(1H, m, H-5)和
3.17(1H, brt, J=8.7 Hz, H-9), 4个连氧次甲基
质子信号 δ3.35(1H, brd, J=11.7 Hz, H-22)、
3.86(1H, brt, J=11.7, 3.6 Hz, H-2)、3.93(1H,
brd, J=8.1 Hz, H-1)和 3.97(1H, brs, H-3), 1
个烯氢质子信号 δ5.83(1H, d, J=2.1 Hz, H-7)
等特征峰。以上数据与文献 [ 4]中报道的 1-epi-
integristeroneA波谱数据基本一致 ,故鉴定化合
物 2为 1-epi-integristeroneA。
化合物 3:白色针状结晶(甲醇)。 ESI-MS图
谱给出准分子离子峰 m/z519[ M+Na] +(posi-
tivemode)和 m/z495[ M-H] -(negativemode),
结合 1H-NMR和 13C-NMR波谱数据确定分子式为
C27H44O8。 1H-NMR(CD3OD, 300 MHz)图谱给
出蜕皮甾酮的特征峰 ,包括 5个甲基质子信号 δ
0.91(3H, s, H3 -18)、 0.99(3H, s, H3 -19)、 1.17
(3H, s, H3 -27)、1.21(3H, s, H3-26)和 1.25(3H,
s, H3-21), 3个次甲基质子信号 δ2.37(1H, m, H-
17)、2.41(1H, m, H-5)和 3.17(1H, brt, J=8.1
Hz, H-9), 4个连氧次甲基质子信号 δ3.55(1H,
dd, J=9.3, 1.5 Hz, H-24)、3.68(1H, brd, J=8.7
Hz, H-22)、3.86(1H, brt, J=11.4 , 3.3 Hz, H-2)
和 3.97(1H, d, J=2.1 Hz, H-3), 1个烯氢质子信
号 δ5.81(1H, d, J=2.1 Hz, H-7)。 13C-NMR
(CD3OD, 75 MHz)谱中 , 给出碳信号峰 δc 37.5
(C-1)、68.8(C-2)、68.7(C-3)、32.6(C-4)、51.9
(C-5)、210.5(C-6)、122.3(C-7)、 168.1(C-8)、
35.2(C-9)、39.4(C-10)、21.7(C-11)、 31.6(C-
12)、49.0(C-13)、85.4(C-14)、31.9(C-15)、21.7
(C-16)、50.6(C-17)、18.2(C-18)、24.6(C-19)、
78.6(C-20)、21.4(C-21)、77.9(C-22)、33.1(C-
23)、80.5(C-24)、73.6(C-25)、 26.4(C-26)和
24.6(C-27)。以上数据与文献 [ 5]中报道的
abutasterone波谱数据基本一致 ,故鉴定该化合物
为 abutasterone。
化合物 4:白色针状结晶(甲醇)。 ESI-MS图
270 沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 28卷　
谱给出准分子离子峰 m/z495 [ M-H] -和 531
[ M+Cl] - (negativemode), 结合 1H-NMR和
13C-NMR波谱数据确定分子式为 C27 H42 O6。
1H-NMR(CD3OD, 300 MHz)谱中 ,给出蜕皮甾酮
的 5个甲基质子信号 δ0.92(3H, s, H3 -18)、1.21
(3H, s, H3 -19)、1.21(3H, s, H3-27)、1.24(3H, s,
H3 -26)和 1.26(3H, s, H3 -21), 3个连氧次甲基质
子信号 δ3.53(1H, d, J=9.0 Hz, H-22)、 3.80
(1H, brd, J=11.7 Hz, H-2)和 3.98(1H, brs, H-
3), 2个烯氢质子信号 δ5.94(1H, brs, H-7)和
6.06(1H, d, J=8.1 Hz, H-12)等特征峰。
13C-NMR(CD3OD, 150 MHz)图谱给出碳信号峰
δc37.5(C-1)、68.6(C-2)、68.8(C-3)、32.7(C-
4)、50.4(C-5)、205.8(C-6)、123.4(C-7)、148.5
(C-8)、 40.0(C-9)、40.6(C-10)、 25.8(C-11)、
121.7(C-12)、178.6(C-13)、50.0(C-14)、 41.2
(C-15)、22.5(C-16)、50.1(C-17)、23.6(C-18)、
26.0(C-19)、77.4(C-20)、20.7(C-21)、77.6(C-
22)、27.4(C-23)、42.3(C-24)、71.5(C-25)、29.1
(C-26)和 29.9(C-27)。以上数据与文献报 [ 6]
道的旌节花甾酮 A的波谱数据基本一致 ,故鉴定
化合物 4为旌节花甾酮 A(stachysteroneA)。
化合物 5:白色针状结晶(甲醇)。 1H-NMR
(CD3OD, 300 MHz)图谱给出蜕皮甾酮的特征
峰 ,包括 5个甲基质子信号 δ0.94(3H, s, H3 -
18)、1.19(3H, s, H3 -19)、1.20(3H, s, H3 -27)、
1.21(3H, s, H3 -26)和 1.28(3H, s, H3-21), 4个连
氧次甲基质子信号 δ3.43(1H, d, J=2.7 Hz, H-
22)、3.78(1H, brd, J=10.5 Hz, H-2)、3.95(1H,
brs, H-3)和 4.05(1H, d, J=2.7 Hz, H-15), 2个
烯氢质子信号 δ5.98(1H, brs, H-7)和 6.14(1H,
d, J=8.1 Hz, H-12)。以上数据与文献 [ 7]中报
道的 15-羟基旌节花甾酮 A的波谱数据基本一
致 ,故鉴定该化合物为 15-羟基旌节花甾酮 A(15-
hydroxystachysteroneA)。
化合物 6:白色不定型粉末(甲醇)。质量分
数为 10%的硫酸乙醇溶液显紫红色 , Liebermann-
Burchard反应及 Molish反应均为阳性 ,提示可能
为甾醇类或三萜皂苷类成分。经与胡萝卜苷对照
品共 TLC分析 , 3种溶剂系统展开的 Rf值均一
致 ,故鉴定化合物 6为胡萝卜苷(daucosterol)。
化合物 7:白色针状结晶 (氯仿)。质量分数
为 10%的硫酸乙醇溶液显紫红色 , Liebermann-
Burchard反应阳性。将该化合物与 β-谷甾醇对照
品共 TLC分析 , 3种溶剂系统展开的 Rf值均一
致 ,故鉴定化合物 7为 β-谷甾醇 。
4　结论
从黏萼蝇子草根的乙醇提取物中 ,分离得到
5个蜕皮甾酮类化合物 20-羟基蜕皮激素 (20-
hydroxyecdysone, 1)、 1-epi-integristeroneA(2)、
abutasterone(3)、旌节花甾酮 A(stachysteroneA,
4)和 15-羟基旌节花甾酮 A(15-hydroxystachyste-
roneA, 5)。同时得到胡萝卜苷(daucosterol, 6)
和 β-谷甾醇(β-sitosterol, 7)2个甾醇类化合物。
其中化合物 2-5为蝇子草属(Silene)植物中首次
分离的化合物 。据文献报道 ,蜕皮甾酮类化合物
具有对心脑血管系统的作用 、昆虫拒食作用 、皮肤
再生作用和促进核酸和蛋白代谢等药理作用。这
些分离到的蜕皮甾酮类化合物的药理活性有待进
一步研究。
参考文献:
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(下转至第 282页)
271第 4期 金艺淑等:黏萼蝇子草蜕皮甾酮类成分的分离与鉴定
Simultaneousdeterminationofsalidrosideandtyrosol
inHongjingtianoralsolutionbyRP-HPLC
WANGQiu-di, LIQing, FANGLi-na, WANGYang, CHENXiao-hui, BIKai-shun
(SchoolofPharmacy, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016, China)
Abstract:ObjectiveToestablishanRP-HPLCmethodfordeterminationofsalidrosideandtyrosolin
Hongjingtianoralsolution(traditionalChinesemedicines).MethodsThechromatographicmethodwascar-
riedoutonKromasilC18 column(250 mm×4.6 mm, 5 μm)usingmethanol-water(V∶V=20∶80)asthemo-
bilephase, withthecolumntemperatureat30 ℃.Thedetectionwavelengthwassetat275 nm, andtheflow
ratewas1.0 mL·min-1.ResultsThelinearrangeswere0.048-0.96 g·L-1(r=0.999 9, n=6)forsalidro-
sideand0.013-0.39 g·L-1(r=1.000 0, n=6)fortyrosol, respectively.Theaveragerecoveries(n=9)were
92.5%(RSD=1.3%)and95.2%(RSD=1.6%), respectively.ConclusionsThemethodcanbeusedfor
thequalitycontrolofHongjingtianoralsolution.
Keywords:Rhodiola;Hongjingtianoralsolution;HPLC;salidroside;tyrosol
(上接第 271页)
Isolationandidentificationofecdysteronesfromroot
ofSileneviscidulaFranch.
JINYi-shu1, 2 , XUWei1 , LIYu-shan1
(1.SchoolofTraditionalChineseMateriaMedica, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016,
China;2.ShenzhouHospital, ShenyangMedicalColege, Shenyang110002, China)
Abstract:ObjectiveTostudytheconstituentsoftheextractfromtherootofSileneviscidulaFranch.Meth-
odsThechemicalconstituentswereisolatedbysilicagelcolumn, openODScolumn, SephadexLH-20 col-
umnchromatography, andsemi-preparativeHPLC.Chemicalcharactersandspectroscopicanalysiswereem-
ployedforthestructuralidentification.ResultsFiveecdysteronecompoundswereobtainedandtheirstruc-
tureswereidentifiedas20-hydroxyecdysone(1), 1-epi-integristeroneA(2), abutasterone(3), stachysterone
(4)and15-hydroxystachysteroneA(5), alongwithtwosterolcompoundsdaucosterol(6)andβ-sitosterol
(7).ConclusionsCompounds2-5 areobtainedfromthegenusSileneforthefirsttime.
Keywords:Sileneviscidula;chemicalconstituent;ecdysterone;sterol;structuralidentification
282 沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 28卷