全 文 ：　２０１３，３９（２）：１２８－１３３　 Ｐｌａｎｔ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ
收稿日期：　２０１２－０７－１６　　　修订日期：　２０１２－０９－２４
基金项目：　农业部“９４８”项目（２０１１－Ｚ４０）；山东省农业良种工程［鲁农良种字（２０１０）６号］；公益性行业（农业）科研专项（２００９０３０１９）
＊ 通信作者 Ｔｅｌ：０５３８－８２６６６０５；Ｅ－ｍａｉｌ：ｑｚｌｉｕ＠ｓｄｉｐ．ｃｎ
环渤海湾地区甜樱桃小果病毒及
樱桃病毒Ａ的鉴定与调查
王文文，　宗晓娟，　王甲威，　魏海蓉，
　 徐　丽，　陈　新，　柳金伟，　刘庆忠＊
（山东省果树研究所，山东省果树生物技术重点实验室，泰安　２７１０００）
摘要　为了解环渤海湾地区甜樱桃［Ｃｅｒａｓｕｓ　ａｖｉｕｍ （Ｌｉｎｎ．）Ｍｏｅｎｃｈ］中樱桃病毒的发生情况，选取该地区代表性樱
桃示范园中甜樱桃品种‘红灯’为研究对象，以生长期功能叶片为材料，根据樱桃小果病毒－１（Ｌｉｔｔｌｅ　ｃｈｅｒｒｙ　ｖｉｒｕｓ－１，
ＬＣｈＶ－１）、樱桃小果病毒－２（Ｌｉｔｔｌｅ　ｃｈｅｒｒｙ　ｖｉｒｕｓ－２，ＬＣｈＶ－２）和樱桃病毒Ａ（Ｃｈｅｒｒｙ　ｖｉｒｕｓ　Ａ，ＣＶＡ）基因组序列设计特
异性检测引物进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增，结果扩增出与ＬＣｈＶ－２、ＣＶＡ预期片段３３７ｂｐ和６５２ｂｐ大小相符的目的片段，测
序结果与基因组（基因登录号ＮＣ－００５０６５、ＮＣ－００３６８９）对应片段一致性分别为８９．０％、９８．２％，未检测到ＬＣｈＶ－１。
本研究完成了对环渤海湾地区甜樱桃‘红灯’样品ＬＣｈＶ－２、ＣＶＡ的检测调查，ＬＣｈＶ－２检出率４３．１％，ＣＶＡ检出率
６０．８％；在该地区首次发现ＬＣｈＶ－２、ＣＶＡ复合侵染植株，复合检出率３７．３％。结果表明该地区ＣＶＡ发生较为普
遍，可与ＬＣｈＶ－２等其他病毒共同加重对甜樱桃的危害。
关键词　甜樱桃；　樱桃小果病毒；　樱桃病毒Ａ；　鉴定
中图分类号：　Ｓ　４３６．６２９　　文献标识码：　Ａ　　ＤＯＩ：　１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．０５２９－１５４２．２０１３．０２．０２６
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｌｉｔｔｌｅ　ｃｈｅｒｒｙ　ｖｉｒｕｓ　ａｎｄ
Ｃｈｅｒｒｙ　ｖｉｒｕｓ　Ａｏｎ　ｓｗｅｅｔ　ｃｈｅｒｒｙ　ａｒｏｕｎｄ　Ｂｏｈａｉ　ｂａｙ
Ｗａｎｇ　Ｗｅｎｗｅｎ，　Ｚｏｎｇ　Ｘｉａｏｊｕａｎ，　Ｗａｎｇ　Ｊｉａｗｅｉ，　Ｗｅｉ　Ｈａｉｒｏｎｇ，
　Ｘｕ　Ｌｉ，　Ｃｈｅｎ　Ｘｉｎ，　Ｌｉｕ　Ｊｉｎｗｅｉ，　Ｌｉｕ　Ｑｉｎｇｚｈｏｎｇ
（Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｐｏｍｏｌｏｇｙ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｆｒｕｉｔ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ，Ｔａｉａｎ　２７１０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ　ｏｆ　ｖｉｒｕｓｅｓ　ｏｎ　ｓｗｅｅｔ　ｃｈｅｒｒｙ（Ｃｅｒａｓｕｓ　ａｖｉｕｍ Ｌｉｎｎ．）ａｒｏｕｎｄ　Ｂｏｈａｉ
ｂａｙ，ｌｅａｆ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｗｅｅｔ　ｃｈｅｒｒｙ　ｃｕｌｔｉｖａｒ‘Ｈｏｎｇｄｅｎｇ’ｗｅｒｅ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｅｌｅｖｅｎ　ｏｒｃｈａｒｄｓ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｒｅｇｉｏｎ．
Ｐｒｉｍｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｓｉｇｎｅｄ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｇｅｎｏｍｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｌｉｔｔｌｅ　ｃｈｅｒｒｙ　ｖｉｒｕｓ－１（ＬＣｈＶ－１），Ｌｉｔｔｌｅ　ｃｈｅｒｒｙ　ｖｉｒｕｓ－２
（ＬＣｈＶ－２）ａｎｄ　Ｃｈｅｒｒｙ　ｖｉｒｕｓ　Ａ（ＣＶＡ）．Ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ－ＰＣＲ）ａｎａｌｙｓｉｓ　ｉｎｄｉｃａ－
ｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｃｔｅｄ　ＤＮＡ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｏｆ　ＬＣｈＶ－２　ａｎｄ　ＣＶＡ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓｉｚｅ　ｏｆ　３３７　ｂｐ　ａｎｄ　６５２　ｂｐ　ｗｅｒｅ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｙ
ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｌｅａｆ　ｓａｍｐｌｅｓ，ｗｈｉｌｅ　ｎｏ　ｅｘｐｅｃｔｅｄ　ＤＮＡ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｏｆ　ＬＣｈＶ－１　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｔｈｅ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｆｒａｇ－
ｍｅｎｔｓ　ｓｈａｒｅｄ８９．０％ａｎｄ９８．２％ｉｄｅｎｔｉｔｙ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ｔｈｅ　ｇｅｎｏｍｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ＬＣｈＶ－２（ＧｅｎＢａｎｋ　Ｎｏ．：
ＮＣ－００５０６５）ａｎｄ　ＣＶＡ（ＧｅｎＢａｎｋ　Ｎｏ．：ＮＣ－００３６８９），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　５１　ｓａｍｐｌｅｓ，４３．１％ ｗｅｒｅ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ
ｂｙ　ＬＣｈＶ－２　ａｎｄ　６０．８％ｂｙ　ＣＶＡ．Ｍｉｘｅｄ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ　ｗｉｔｈ　ＬＣｈＶ－２　ａｎｄ　ＣＶＡ　ｗｅｒｅ　ｆｉｒｓｔ　ｒｅｐｏｒｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｒｅｇｉｏｎ　ｗｉｔｈ
ａｎ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　３７．３％．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗ　ｔｈａｔ　ＣＶＡ　ｏｃｃｕｒｓ　ｃｏｍｍｏｎｌｙ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｒｅｇｉｏｎ　ａｎｄ　ｍａｙ　ｅｎｈａｎｃｅ　ｔｈｅ　ｓｅ－
ｖｅｒｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｙｍｐｔｏｍｓ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｏｔｈｅｒ　ｖｉｒｕｓ　ｓｐｅｃｉｅｓ，ｓｕｃｈ　ａｓ　ＬＣｈＶ－２．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ｃｅｒａｓｕｓ　ａｖｉｕｍ；　Ｌｉｔｔｌｅ　ｃｈｅｒｒｙ　ｖｉｒｕｓ（ＬＣｈＶ）；　Ｃｈｅｒｒｙ　ｖｉｒｕｓ　Ａ（ＣＶＡ）；　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
　　樱桃小果病严重危害甜樱桃［Ｃｅｒａｓｕｓ　ａｖｉｕｍ
（Ｌｉｎｎ．）Ｍｏｅｎｃｈ］和酸樱桃（Ｃ．ｖｕｌｇａｒｉｓ　Ｍｉｌ．），发生
遍布世界各地，美国［１］、日本［２］、新西兰［３］、波兰［４］等
均有相关病例报道。虫媒传播介体为苹果粉蚧
３９卷第２期 王文文等：环渤海湾地区甜樱桃小果病毒及樱桃病毒Ａ的鉴定与调查
（Ｐｈｅｎａｃｏｃｃｕｓ　ａｃｅｒｉｓ）［５］，对果树产量造成严重影
响［６－７］。樱桃小果病毒病主要是由樱桃小果病毒－１
（Ｌｉｔｔｌｅ　ｃｈｅｒｒｙ　ｖｉｒｕｓ　１，ＬＣｈＶ－１）和樱桃小果病毒－２
（Ｌｉｔｔｌｅ　ｃｈｅｒｒｙ　ｖｉｒｕｓ　２，ＬＣｈＶ－２）侵染所致，均属于
长线形病毒科（Ｃｌｏｓｔｅｒｏｖｉｒｉｄａｅ）［８］。１９９５年，德国
的Ｊｅｌｋｍａｎｎ在克隆樱桃小果病毒（ＬＣｈＶ－１）的ｃＤ－
ＮＡ时意外发现了樱桃病毒 Ａ（Ｃｈｅｒｒｙ　ｖｉｒｕｓ　Ａ，
ＣＶＡ）［９－１０］。ＣＶＡ 为发形病毒属（Ｃａｐｉｌｌｏｖｉｒｕｓ）成员，
是我国近来发现的一种侵染樱桃的潜隐性病毒，可以
侵染樱桃、桃、杏等李属植物，但主要危害樱桃，在世
界范围内发生普遍，分布较广［１１］，可通过嫁接传播。
ＣＶＡ 经常和樱桃小果病毒等其他病毒复合侵染，使
果实产量和品质明显下降［１２］。目前在国内尚未有樱
桃小果病毒与樱桃病毒Ａ复合侵染的调查报道。
环渤海湾地区是我国甜樱桃栽培历史最早，栽
培面积最大，发展速度最快的地区，主要包括山东大
部、辽宁、天津、北京、河北等地［１３］。２００９年全国甜
樱桃栽培面积５．６２万ｈｍ２［１４］，仅烟台、大连两地面
积已超过３．５万ｈｍ２［１５］，约占全国总栽培面积的
７０％。在进行病害调查时，发现该地区许多甜樱桃
叶片表现窄小、扭曲现象，在夏末和秋季变为红色，
花量减少且发育不良，果个小、畸形等疑似病毒病的
症状，严重影响了甜樱桃的产量和品质。为此，２０１０
－２０１１年间，在环渤海湾地区具有代表性的甜樱桃
生产园共采集甜樱桃品种‘红灯’样品５１份，通过田
间症状观察结合 ＲＴ－ＰＣＲ检测技术对樱桃常见病
毒进行检测鉴定，在该地区首次发现了ＬＣｈＶ－２与
ＣＶＡ复合感染植株。
１　材料与方法
１．１　试验材料
在山东泰安、烟台，辽宁大连１１个代表性的甜
樱桃生产园（ＤＪ、ＤＷＮ、ＨＳＫ、ＸＹ、ＱＺ、ＨＳＹ、ＤＬ１、
ＤＬ２、ＹＦ１、ＹＦ２、ＹＰ）中，选取具有典型症状的甜樱
桃‘红灯’叶片５１份，用于病害鉴定及调查。以无病
毒组培苗及ｄｄＨ２Ｏ 作为阴性对照，以 ＬＣｈＶ－２与
ＣＶＡ外壳蛋白基因重组质粒作为ＲＴ－ＰＣＲ检测的
阳性对照。样品液氮速冻置于－７０ ℃冰箱保存
备用。
ＲＮＡ提取采用北京天根植物总 ＲＮＡ提取试
剂；反转录ｃＤＮＡ 第一条链合成试剂盒购自 Ｆｅｒ－
ｍｅｎｔａｓ公司；克隆载体选用宝生物公司ｐＭＤ　１８－Ｔ
载体。
１．２　引物合成
根据基因 ＮＣ－００１８３６、ＮＣ－００５０６５、ＮＣ－００３６８９
设 计 特 异 引 物 ＬＣｈＶ１－Ｓ／ＬＣｈＶ１－Ａ、ＬＣｈＶ２－Ｓ／
ＬＣｈＶ２－Ａ、ＣＶＡ－Ｓ／ＣＶＡ－Ａ，序列见表１，由上海博
尚生物技术公司合成。
表１　ＲＴ－ＰＣＲ检测引物
Ｔａｂｌｅ　１　Ｐｒｉｍｅｒｓ　ｆｏｒ　ＲＴ－ＰＣＲ
引物
Ｐｒｉｍｅｒ
序列
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
位置
Ｌｏｃａｔｉｏｎ
产物大小／ｂｐ
Ｓｉｚｅ　ｏｆ　ｐｒｏｄｕｃｔ
　　ＬＣｈＶ－１－Ｓ
　　ＬＣｈＶ－１－Ａ
ＧＧＴＴＡＧＣＣＧＡＴＴＧＡＡＣＴＴＴＧ
ＣＴＴＴＧＴＧＣＡＴＴＧＧＴＧＴＡＧＣＧ
ＮＣ－００１８３６（１２６３５～６１２５４）
ＮＣ－００１８３６（１３１２４～１３１４３）
５０９
　　ＬＣｈＶ－２－Ｓ
　　ＬＣｈＶ－２－Ａ
ＴＣＣＧＡＡＴＡＧＴＣＡＧＴＴＣＡＡＡＧ
ＡＡＴＡＧＣＣＣＴＣＡＴＡＡＡＴＣＴＣＣ
ＮＣ－００５０６５（１３５１１～１３５３０）
ＮＣ－００５０６５（１３８２８～１３８４７）
３３７
　　ＣＶＡ－Ｓ
　　ＣＶＡ－Ａ
ＡＴＧＣＴＴＣＧＣＡＧＧＴＧＡＣＧＡＴＡ
ＧＣＴＴＧＴＴＴＧＴＧＧＡＧＧＧＡＧＡＣ
ＮＣ－００３６８９（４５６８～４５８７）　
ＮＣ－００３６８９（５２００～５２１９）　
６５２
１．３　总ＲＮＡ的提取、反转录及ＰＣＲ扩增
总ＲＮＡ的提取及反转录（ＲＴ）步骤参照宗晓娟
报道的方法［１６］。
以引物ＬＣｈＶ－１－Ｓ、ＬＣｈＶ－１－Ａ用于ＬＣｈＶ－１的
鉴定，反应条件为９４℃５ｍｉｎ，９４℃５０ｓ，５６℃５０ｓ，
７２℃５０ｓ，３５个循环；７２℃１０ｍｉｎ；以引物ＬＣｈＶ－２－
Ｓ、ＬＣｈＶ－２－Ａ 用于 ＬＣｈＶ－２的鉴定，反应条件为
９４℃５ｍｉｎ，９４℃５０ｓ，５４℃５０ｓ，７２℃５０ｓ，３５个
循环；７２ ℃１０ｍｉｎ；以引物 ＣＶＡ－Ｓ、ＣＶＡ－Ａ 用于
ＣＶＡ的鉴定，反应条件为９４℃５ｍｉｎ，９４℃５０ｓ，
５８℃５０ｓ，７２℃５０ｓ，３５个循环；７２℃１０ｍｉｎ。ＰＣＲ
产物经１．５％琼脂糖凝胶电泳检测。
１．４　ＰＣＲ片段的克隆测序及序列分析
ＰＣＲ产物连接至ｐＭＤ　１８－Ｔ载体，转化大肠杆
菌ＤＨ５α感受态细胞，经菌落ＰＣＲ筛选阳性菌落，
提取质粒，酶切鉴定后样品送Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司测序，
对测序结果在ＮＣＢＩ数据库里进行ＢＬＡＳＴ分析，最
后采用ＤＮＡＭＡＮ软件与已知序列进行序列比对。
·９２１·
２０１３
１．５　环渤海湾地区甜樱桃病毒感染情况调查
田间症状观察：采用田间调查和定点观察相结
合的方法，对疑似病毒病的植株进行叶片采样、植株
及枝条标号，２０１１年春对植株进行整个生长季的症
状跟踪观察并拍照记录。
分子生物学检测：利用ＲＴ－ＰＣＲ检测方法对环
渤海湾地区ＬＣｈＶ－１、ＬＣｈＶ－２与ＣＶＡ的感染情况
进行检测，试验共选取１１个甜樱桃生产园，采取５１
份‘红灯’叶片样品。调查所选的１１个甜樱桃生产
园特点见表２。
表２　甜樱桃病毒调查地点
Ｔａｂｌｅ　２　Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｓｉｔｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｖｉｒｕｓｅｓ　ｏｎ　ｓｗｅｅｔ　ｃｈｅｒｒｙ
调查地区
Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｒｅｇｉｏｎ
调查地点
Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｓｉｔｅ
果园特点（地形、密度）
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｏｒｃｈａｒｄ
（ｌａｎｄｓｃａｐｅ，ｄｅｎｓｉｔｙ）
果树特点（树龄、砧木类型）
Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｔｒｅｅｓ（ａｇｅ，ｓｔｏｃｋ　ｔｙｐｅｓ）
山东泰安地区 山东泰安市泰山区北集坡镇对旧村甜樱桃果园（ＤＪ） 丘陵，２ｍ×３ｍ 　　≥５年，乔化、矮化
山东泰安地区 山东泰安市肥城市边院镇大王村甜樱桃果园（ＤＷＮ） 山地，２ｍ×３ｍ 　　≥８年，矮化
山东泰安地区 山东泰安市肥城市仪阳镇槐树口村甜樱桃示范园（ＨＳＫ） 丘陵，２ｍ×３ｍ 　　≥８年，乔化
山东泰安地区 山东泰安市泰山区省庄镇西苑庄村甜樱桃基地（ＸＹ） 平原，３ｍ×４ｍ 　　≥８年，乔化
山东泰安地区 山东泰安市肥城市安驾庄镇前寨子村甜樱桃果园（ＱＺ） 山地，３ｍ×４ｍ 　　≥１５年，乔化、矮化
山东泰安地区 山东泰安市岱岳区良庄镇黄石崖甜樱桃基地（ＨＳＹ） 丘陵，３ｍ×４ｍ 　　≥５年，矮化
山东烟台地区 山东烟台市福山区门楼镇甜樱桃果园（ＹＦ１） 丘陵，３ｍ×４ｍ 　　≥１５年，乔化、矮化
山东烟台地区 山东烟台市福山区张格庄镇甜樱桃果园（ＹＦ２） 山地，３ｍ×４ｍ 　　≥８年，乔化、矮化
山东烟台地区 山东烟台市蓬莱市刘家沟镇赵庄村甜樱桃果园（ＹＰ） 丘陵，２ｍ×３ｍ 　　≥８年，乔化
辽宁大连地区 辽宁省大连市农业科学院甜樱桃观光示范园１（ＤＬ１） 平原，２ｍ×３ｍ 　　≥８年，乔化
辽宁大连地区 辽宁省大连市农业科学院甜樱桃观光示范园２（ＤＬ２） 平原，２ｍ×３ｍ 　　≥５年，矮化
２　结果与分析
２．１　ＲＴ－ＰＣＲ检测ＬＣｈＶ－１、ＬＣｈＶ－２与ＣＶＡ
ＬＣｈＶ－１无扩增条带；ＬＣｈＶ－２图中２２条泳道
扩增出约３００ｂｐ的条带，与阳性对照及目的片段
（３３７ｂｐ）大小相符；ＣＶＡ图中３１条泳道均扩增出
约７００ｂｐ的条带，与阳性对照及目的片段（６５２ｂｐ）
大小亦相符。无病毒组培苗及ｄｄＨ２Ｏ对照均无扩
增条带（图１）。多次试验证明该方法重复性好，扩
增结果稳定。
图１　ＬＣｈＶ－２与ＣＶＡ的ＲＴ－ＰＣＲ检测
Ｆｉｇ．１　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＬＣｈｖ－２ａｎｄ　ＣＶＡ　ｂｙ　ＲＴ－ＰＣＲ
２．２　序列分析
将ＬＣｈＶ－２、ＣＶＡ阳性重组质粒测序并进行序
列比对显示，测序结果与 ＧｅｎＢａｎｋ 中 ＬＣｈＶ－２、
ＣＶＡ基因组基因（ＮＣ－００５０６５、ＮＣ－００３６８９）相应片
·０３１·
３９卷第２期 王文文等：环渤海湾地区甜樱桃小果病毒及樱桃病毒Ａ的鉴定与调查
段相似性分别为８９．０％、９８．２％，部分位点存在碱
基突变（图２Ａ、Ｂ）。序列分析表明，检测样品感染了
ＬＣｈＶ－２与ＣＶＡ，该分离物外壳蛋白基因序列部分位
点碱基存在变异，推测该病毒在不同宿主或不同地
区的传播过程中可能发生基因突变所致。
２．３　调查检测结果
田间症状记录：叶片窄小细长或扭曲畸形，叶片
夏末秋初呈现红铜色症状，植株开花延迟，落花、落
果严重，花、果实发育不全及花而不实现象普遍，不
同感病植株症状差异较大（如图３）。
环渤海湾地区１１个代表性果园病毒检测结果
显示：未检测到ＬＣｈＶ－１阳性样品；ＬＣｈＶ－２阳性结
果２２份，检出率为４３．１％；ＣＶＡ阳性结果３１份，检
出率为６０．８％；两者复合侵染结果１９份，检出率为
３７．３％（表３）。ＣＶＡ在我国主要甜樱桃种植区普
遍发生，与ＬＣｈＶ－２共同加重对甜樱桃的危害。
图２　ＬＣｈＶ－２与ＣＶＡ的ＲＴ－ＰＣＲ扩增片段序列比对
Ｆｉｇ．２　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　ｏｆ　ＲＴ－ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ｏｆ　ＬＣｈＶ－２ａｎｄ　ＣＶＡ
３　结论与讨论
２００９年４月，云南昆明的Ｒａｏ等在甜樱桃样品
上检测到ＣＶＡ［１７］，这是ＣＶＡ在中国甜樱桃上的首
次报道；２０１１年１１月，Ｒａｏ等在我国云南樱花和甜
樱桃中首次发现ＬＣｈＶ－２［１８］。迄今，我国对ＬＣｈＶ－２
·１３１·
２０１３
与ＣＶＡ的研究报道较少，在环渤海湾地区至今未
有两者的发生报道，国内也未有对ＬＣｈＶ－２与ＣＶＡ
复合侵染以及发生调查的研究。
我国进境检疫危险性有害生物目录中并不包含
ＬＣｈＶ－２和ＣＶＡ，但这两种病毒在国外已普遍发生，
其危害不容小视。一方面，ＬＣｈＶ－２单独侵染时，会
对果树产量和质量造成严重危害［８］；另一方面，
ＬＣｈＶ－２、ＣＶＡ与其他病毒复合侵染，给甜樱桃产业
造成重大损失［１２］。因此，对我国甜樱桃主要产区
ＬＣｈＶ－２、ＣＶＡ的发生检测十分必要。
图３　甜樱桃病毒病不同发育期症状比对
Ｆｉｇ．３　Ｔｈｅ　ｓｙｍｐｔｏｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｖｉｒｕｓ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｏｎ　ｓｗｅｅｔ　ｃｈｅｒｒｙ
表３　甜樱桃果园病毒感染情况
Ｔａｂｌｅ　３　Ｖｉｒｕｓ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｓｗｅｅｔ　ｃｈｅｒｒｙ　ｏｒｃｈａｒｄｓ
果园名称
Ｎａｍｅ　ｏｆ
ｏｒｃｈａｒｄ
样品数
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ
ｓａｍｐｌｅｓ
阳性样品数Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｓａｍｐｌｅｓ
ＬＣｈＶ－２ ＣＶＡ　 ＬＣｈＶ－２＋ ＣＶＡ
　　ＤＪ　 ８　 ２　 ８　 ２
　　ＤＷＮ　 ４　 ０　 １　 ０
　　ＨＳＫ　 ４　 １　 １　 １
　　ＸＹ　 ４　 ２　 ３　 ２
　　ＱＺ　 ９　 ４　 ４　 ４
　　ＨＳＹ　 ８　 ４　 ５　 ４
　　ＹＦ１　 ２　 ２　 １　 １
　　ＹＦ２　 ３　 ２　 ２　 ２
　　ＹＰ　 １　 ０　 １　 ０
　　ＤＬ１　 ６　 ５　 ５　 ３
　　ＤＬ２　 ２　 ０　 ０　 ０
　　合计 ５１　 ２２　 ３１　 １９
　检出率／％
　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
　ｒａｔｅ
４３．１　 ６０．８　 ３７．３
本研究利用田间症状观察法和分子生物学方法
进行环渤海湾地区病毒的发生调查，结果显示：所选
不同地形、不同树龄树形的园区均有ＬＣｈＶ－２、ＣＶＡ
检出，检出率不等；树龄较高的平原、丘陵区甜樱桃
植株病毒感染率相对较高，复合侵染病例普遍，这可
能与老树抗病性减弱，平原、丘陵区病毒传播因素较
多有关。调查证明环渤海湾地区ＬＣｈＶ－２、ＣＶＡ发
生普遍，复合侵染率较高，调查症状与文献报道樱桃
病毒病症状基本相符，危害较为严重，对甜樱桃的产
量和品质造成严重影响，亟须对此采取防治措施。
本研究发现复合侵染植株比单独一种病毒侵染植株
症状表现严重，这与病毒复合侵染危害结果相符。
但观察症状是否均由ＬＣｈＶ－２、ＣＶＡ侵染所致，感病
植株是否存其他病毒的复合侵染等问题还有待进一
步研究确定。
·２３１·
３９卷第２期 王文文等：环渤海湾地区甜樱桃小果病毒及樱桃病毒Ａ的鉴定与调查
参考文献
［１］　Ｕｙｅｍｏｔｏ　Ｊ　Ｋ，Ｓｃｏｔｔ　Ｓ　Ｗ．Ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｄｉｓｅａｓｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｕｎｕｓ　ｃａｕｓｅｄ
ｂｙ　ｖｉｒｕｓｅｓ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｇｒａｆｔ－ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｓ　ｉｎ　Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ
ａｎｄ　Ｓｏｕｔｈ　Ｃａｒｏｌｉｎａ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｄｉｓｅａｓｅ，１９９２，７６：５－１１．
［２］　Ｍａｓａｍｉｃｈｉ　Ｉｓｏｇａｉ，Ｊｕｎ　Ａｏｙａｇｉ，Ｍｅｇｕｍｉ　Ｎａｋａｇａｗａ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｏ－
ｌｅｃｕｌａｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｉｖｅ　ｃｈｅｒｒｙ　ｖｉｒｕｓｅｓ　ｆｒｏｍ　ｓｗｅｅｔ　ｃｈｅｒｒｙ　ｔｒｅｅｓ
ｉｎ　Ｊａｐａｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｐｌａｎｔ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２００４，７０（５）：
２８８－２９１．
［３］　Ｆｒｙ　Ｐ　Ｒ，Ｗｏｏｄ　Ｇ　Ａ．Ｌｉｔｔｌｅ　ｃｈｅｒｒｙ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎ　Ｎｅｗ　Ｚｅａｌａｎｄ［Ｊ］．
Ｎｅｗ　Ｚｅａｌａｎｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９７０，１３（１）：
１１１－１１８．
［４］　Ｋｏｍｏｒｏｗｓｋａ　Ｂ，Ｃｉｅｓｌｉｎｓｋａ　Ｍ．Ｆｉｒｓｔ　ｒｅｐｏｒｔ　ｏｆ　Ｃｈｅｒｒｙ　ｖｉｒｕｓ　Ａ
ａｎｄ　Ｌｉｔｔｌｅ　ｃｈｅｒｒｙ　ｖｉｒｕｓ－１ｉｎ　Ｐｏｌａｎｄ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｄｉｓｅａｓｅ，２００４，８８
（８）：９０９．
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