全 文 ：第 3卷第 2 期 山 东 医 科 大 学 学 报 v ol .3 N o .2
19 95 年 6月 A C TA A C A n EM IA EM D E IC INA ES HA ND OG NJ un .5 9 9 1
· 药 学 ·
华北白前根中生物碱的分离
与衍生物的制备
娄红祥 `
(
’ 天然药物教研室
李 铣 2 初晓君 “ 姜志明 `
“ 沈阳药学院 “ 青岛制药厂
赵彦伟 `
`沈阳军区总医院 )
内容提要 从杭癌植物华北 白前 (C 万n a n ch um h a n co ck ia n um ) 根 中分 离到两 个菲 骄
联咤类 生物碱 。 通过波谱方 法确定 其 结 构 为 A nt ofn ie ( I) 和 5 一 0一 D e m et h y la n -
t o fine (亚 ) , 证明该生物碱 为植物 中的主要抗肿瘤活性成分 。 为降低该类生物碱的毒
性 , 对化合物 I 进行 降解 , 得 到化合物 l ( I s o a n t o f i n e m e t h i n e ) , 并发现该 降 解反
应 为非正常 H o f f m a n n 降解 , 利用加速 实验 法得到 I 的分解产物 F ( D e h y d r o a n t o f i n e ) 。
体外药理实验表明化 合物 I , 亚 , l 和 W对不同人癌细 胞株显示 了较 强的杀伤作 用 。
关键词 鹅绒藤属 ; 华北 白前 ; 生物碱类 ; 降解反应 ; 抗癌活性
华北白前系萝摩科鹅绒藤属多年生植
物 , 在我 国资源丰富 。 内蒙古牧民将全草置
于畜棚内以驱杀蚊虫 , 并发现该植物具有
抗癌活性 , 我们曾报道从华北白前的地上
部分分离到生 物 碱 [ ` 〕 , 从根中分离到三
菇 t “ l 、 c : , 街体试等化合物 [ “ J 。 我 们现
从根中分离得到两个生物碱 , 并进行 了结
构鉴定 , 衍生物的制备及体外抑瘤试验 。
1 试验部分
1
.
1 仪器与材料 熔 点用 日本 Y a n a 。 。 M P一 3S
型熔点测定仪测定 (未校正 ) ; IR用 P e r k i n 一 E l m e r
59 9 B型红外分光光度计测定 ; U V用 Sh i nr a z o U V -
26 0紫外一可见分光光度计侧定 , N M R用 B : u ke 卜
A
e
( E )一 2 50型和 V a r i a n 一 4 0 0型核磁共振波谱仪测
定 ( T M S作内标 ) ; M S用 V G一 70 S E型质谱仪测定 .
实验用瘤株由沈 阳军区总 医院肿瘤研究室提供 。
药材系五月份采集于 内蒙古伊克昭盟 。
1
.
2 生物碱的提取与分离 华北白 前 的干燥根
40 kg 粉碎 后以 95 % 乙醇提取 , 回收乙醇 后 得 提
取物 6 . 0 3 k g , 取 3 . 6 5k g 溶于 0 . 5 m o l 盐酸水溶液
中 , 滤除不溶物后的盐酸水溶液以氯仿萃取后加
氨 水调 p H值至 9 , 再 以氛仿羊取 , 萃取液 回收
氯仿得残留物1 509 ,取 8 09 进行硅胶柱层析分离 ,
分别以氯仿一甲醇不同浓度的混合溶剂 洗 脱 , 再
精制得化合物 工4 . 89 , 化合物 IJ 56 皿 g 。
1
.
3 生物碱衍生物的制备
1
.
3
.
1 化合物皿的制备 取化合物 工 0 . 59 溶解
于 10 m l氯仿中 , 在回流条件下与过量的碘甲烷反
应 i h ,定量生成 A n t 。 f i n e 。 。 t h i 。 d id e ( 孤 ) , m p
19 6~ 1 9 8℃ ( H Z O ) 。 化合物 孤 0 . 69 , A g : 0 1 . 5
g悬 浮于 5 0m l水中搅拌h4 , 过滤 , 滤液减 压条件
下蒸干 ( 温度不超过 50 ℃ ) 得到化合物孤 , VI 在
1 0℃ 2/ . 67 k aP 条件下发生反应 , 20 m in 后发现
蒸馏瓶壁上析出无色针品 , 继续加热 hl , 用苯溶
解所得产物 , 重结晶得化合 物 1 0 . 8 9 , 产 率
7 3
.
1 %
。
1
.
3
.
2 化合物 万的制备 取化合物 I 50 m g 用 20
m l氯仿溶解成溶液 , 在有阳光和通空气的条件下
搅拌 , 6h析出沉淀 , 继续搅拌Zh后蒸除溶剂 , 残
留物以干柱层析 , 氯仿一甲醇 ( 9 : 1 ) 洗 脱 ,
得化合物万 13 m g 。
化合物 工~ W的结构及化合物 l 的形成历程
见附图 。
1
.
4 休外抑瘤实验 取对数生长期细胞 1 X 1 0 5
个 / 。 l细胞悬浮液按悬浮细胞法培 养 , 药 液 以
娄红祥 , 等 . 华北白前根中生物碱的分离与衍生物的制备 1 5 9
V M e O M e
O M e
一1卜 加l
附图
F 1 9
.
化合物 工一 W的结构及化合物 l 的形成历程
C o m p o u n d
s 1 t o 万 a n d t h e f o r m a t i o n m e e h a n i s nr o f
1 0% J/’ 牛血清 R p M I一 1 64 0稀释成 4” g加 l , 2卜 g /
m1
, 娜 g /ml , 在37 ℃、 5 % C O Z完全饱和 的条件
下培养 2 h4 后 , 加入 1 %的台盼蓝计数活细胞 。
2 结 果
2
.
1 生物碱的结构鉴定
2
.
1
.
1 化合物 I 的结构鉴定 I 为无色针
晶 , 置于空气中易变黄 , H R 一 E IM S M 十 /
2 3 6 3
.
1 8 3 3 确定分子式为 C 2 3 H 2 。 N o 3 ,
m P Z i o ~ Z 1 2 C ( C H C一: ) , [ a 〕 n “ “
8 6
.
0 ( C H C 1
3
)
。
I R v m 。 、 ( K B
r ) e m
一 :
2 8 2 5 , 2 7 3 0 , 1 6 1 0 , 1 5 2 5 , 1 5 1 0
。
U V 入
m : 、
( 0
.
o l N H C I ) n m
: 3 1 0 , 2 8 3 , 2 5 5 ,
2 4 0 , 2 2 5
。
E IM S m /
z
(
r e l
.
i n t e n
.
)
:
3 6 3 ( M
+ , 2 0 )
, 2 9 4 ( 1 0 0 )
。 ’
H N M R 数
据 ( 表 1 ) 与 ’ “ C N M R数据 ( 表 2 ) 确定
该化合物为A n t o f i n e 。
2
。
1
.
2 化合物 亚的结构鉴定 五为白色无
定型 ,置于空气中易变黄 , H R 一 E IM s M 十 .z/
3 4 9
.
1 6 5 7确定分子式为 C Z 。 H : , N o 3 , m P
2 2 5 ~ 2 2 7 oC
, 〔a 〕 D “ “ 一 5 1 . 5 ( p y r i d i n e ) 。
I R v m
a 、
( K B
r ) Cm
一 : 3 4 2 5 ( o H )
,
2 7 0 5 , 1 6 1 5 , 1 6 0 0 , 1 5 1 5
。
U V 入m 。 x ( 0 。 0 1
m o l H C I )
n m
: 3 1 0
, 2 8 3
, 2 5 7 , 2 4 0 ,
2 2 5
。
E IM S m /
z
(
r e l
.
i n t e n
.
)
: 3 4 9
( M
+ , 3 0 )
, 2 5 0 ( 2 0 0 )
。 ’
H N M R数据
( 表 1 ) 与 ’ “ C N M R数据 ( 表 2 ) 确定该
化合物为 6 一。 一 n e m e t h y l a n t o f i n e 。
2
.
2 生物碱衍生物的结构鉴定
2
.
2
.
1 化合物 l 的结构桨定 皿为 无 色
针 晶 , m p 1 5 6 ~ 2 5 8℃ ( e H e 1 3 ) , E IM s
m /
z
(
r e l
.
i n t e n
.
)
: 3 7 7 ( M
+ , 1 0 0 )
,
2 6 2 ( 3 5 )
, 2 9 5 ( 3 0 )
, 1 8 9 ( 8 2 )
。 分
子式 C : ; H Z 7 N 0 3 , 元 素 分 析 : 计 算 值
( % )
: C
,
7 6
.
3 9 ; H
, 7
.
1 6 ; N
, 3
.
7 1
。
实验值 : C , 7 6 . 5 2 ; H , 7 . 2 6 ; N , 3 . 6 9 。
I R v m
。 x
( K B r )
。m 一 : 2 9 5 0 , 2 8 0 0 ,
2 6 4 9 , 1 6 1 2 , 1 5 2 5 5 1 5 0 2 , 1 4 7 4 , 1 2 6 0 ,
1 1 9 5 , 1 1 6 0 , 8 6 0 , 8 2 6 , ` H N M R数据见
衷 i , ’ “ e N M R数据见表 2 。
1 6 0山 东 医 科 大 学 学 报 3 3卷 2期
表 1化合物 I, 亚 , 班 和 W 的 立H N M R数据
化学位移值 (各 ) t I J
I 五 l 开
一一一 ~ .~ . . . . . . . . . ., . . . . . ~ ~ ~ ~ . , . . . . ~ ~ 叫, ~ ~ . . . . . . . ,. . . . ` ., , .勺1一H4一HS一H7一H8一H9一 H 7 . 6 2 57 . 8 7 57 . 8 6d ( 2 . 5 )7 . 1 8 d d( 9 . 1 , 2 . 5 )7 . 98 d ( 9 . 0 )2 . 67 5 ( H s ) 8 . 1 7 58 . 0 3 58 . 08 d ( 2 . 1 )7 . 4 4( 9 . 1 , 2 . 1 )8 . 7 4d ( 9 . 0 )1 0 _ 3 8 ,1 1一 H 7 . 29 57 . 8 9 57 . 88 d ( 2 . 3 )7 . 1 9 d d( 9 . 0 , 2 . 3 )7 . 8 0d ( 9 . 0 )3 . 6 6d t( H a 1 4 . 弓, 1 . 5 )4 . 6 7 d( H 日, 1 4 . 5 )2 . 4 3q
( H
a , 9
.
0 )
3
.
4 5d t
( H p
,
9
.
0
,
2
.
0 )
1
.
9 2 m
2
.
2 2m
2
.
4 6 m
3
.
1 0扭
4
.
1 0 5
4
.
0 5 5
4
.
01 5
7
.
3 1 5
7
.
9 2 5
7
.
59 d ( 2
.
5 )
7
.
0 9 d d
( 8
.
7
,
2
.
5 )
7
.
7 3d ( 8
.
7 )
3
.
5 1d
( H a
,
1 5
.
0 )
4
.
5 5d
( H p
,
1 5
.
0 )
2
.
3 1 q
( H
a ,
9
.
0 )
2
.
3 0m
( H 日)
1
.
8 4m
2
.
1 5m
2
.
37 m
3
.
1 2m
3
.
9 9
5
3
.
93 5
3
.
1 8d d ( 6
.
8 ) 4
.
9 6 t ( 7
,
4 )
1 2
一H
1 3一H a
1 3
一H 日
1 4 一H
O M e
7 6 xn
1 6m
2
.
5 7m
3
.
58 t ( 7
.
4 )
21076945
.
1 5
4
.
1 0
4
.
0 2
3
.
99
注 , J括号内数据为偶和常数 , 单位H z
表 2 化合 物 I , 卫 , l 和 w 的 : 3 C N M R 数 据
化学位移值 (各)
I 亚 lI
1 0 4 2 2 d 1 0 3
.
4 5d
1 4 8
.
88
5
1 4 7
.
9 2 5
1 04
.
32 d
1 2 3
.
2 6 5
1 30
.
0 6 5
1 0 7
.
5 1 d
1 57
.
1 5 5
1 14
.
50d
1 2 6
.
6 5d
1 26
.
6 7 5
1 3 1
.
0 0 5
1 7
.
00 q
5 4
.
7 4 t
2 1
.
6 1 t
2 9
.
3 0 t
1 5 1
.
2 2
5
8 8
.
1 3 d
1 2 8
.
3 1 5
1 2 8
.
2 4
5
5 5
.
8 1 q
5 5
.
8 1 q
5 5
.
4 9 q
3 4
_
7 5 q
入m 。 、 ( M e 0 H ) n m : 2 8 2 . 6 , 3 7 2 . 0 。
`
H N M R数据见表 1 。
2
.
3 体外抑瘤实验结果见表 3 。
3 讨 论
3
.
1 从华北 白前根中分离所得 的 两个生
物碱通过理化性质实验及波谱测定确定其
结构为 A n t o f i n e 和 6 一 0 一 n e m e t h y l a n t o -
if n e
, 属 于 菲骄联陡类生物碱 , 该 类 结
构的生物碱 具有 较 强的抗肿瘤活性 , 但
亦具有较严重的毒副作用 [ 4 ] , 为降 低 该
类化合物的毒性 , 我们对得量多的化合物
I 进行了降解反应 , 按化合物 V 制备 VI 的
方法 [ ” 〕 , 得到了结构类型完全不同 的 化
合物 l 。 和正常的 H of f m a n n 降解反 应历
程不同 , 该化合物的生成是在碱 性 条 件
下 , 脱掉N 原子日位的氢 ( 13 一 H ) , 接 着
发生 二键的离域生成中间体 双 , 然后 电子
发生 1 , 5 一 。 迁移生成化合物 l ( s c h e m e ) 。
3
.
2 菲骄联陡类生物碱在光照条件下易分
解 , 我们采用加速实验法制得化合物 I 的
s陈Jd5Sds`dtttq1907胳咯5抒42物f8)(J沁神9习240矛Olfù了0402引O夕如Z么11工jl,土工
旧515JUd
3092574的8,
0684215“9
,Jg
一吕3伟工JCU4斤Jn4n曰2八jC已J1Zc`11山J土1上,l,月`]
26534130邪
9 5q
8 2 q
4 7 q
U`几工J11ù曰上J土n内凡úú`t了哎lj口妇ú、ù一52几J乙U,J弓山八`目匀é、C1占刁l,上
e
a
j
b才以
a
.
D卜U,土口山IJ勺月斗d.q峥
曰土234415
J
O门了80口9
J
l`1Jl1
.之
0
N
一 M e
2
.
2
.
2 化合物W的结构鉴定 该 化 合物
为棕红色结晶 , m p 2 6 0 oC ( 分解 ) 。 U V
娄红祥 , 等 . 华北 白前根中生物碱的分离与衍生物的制备
表 3 化合物 工 , 亚 , l 和 W体外抑瘤实验结果 ( n = 3 , 又士 s)
1 6 1
化合物 浓度
( 卜g / m l )
杀伤率 ( % )
H L
一 60 H e l a C e l l s
0
.
4
K一 56 2
10 0士 0
2
了O乙O即才8甲`0
_
2
0
_
1
1士 1 0
8士 1 2
0
.
4
0
_
2
0
_
1
0
_
4
0
_
2
0
_
1
0
_
4
0
.
2
0
_
1
1 0 0士 0
95
.
1士 2 . 8
8 0
.
6士 8 . 1
9 1
.
0士 4 . 9
80
。
0土 12 . 0
3 0
.
9士 6 . 4
8 3
.
3 士 1 2 . 2
7 0
.
7 士 1 1 . 0
64
.
2士 6 . 9
10 0 士 0
9 3
.
9士 7 . 1
6 3
.
6士 1 3 . 2
1 0 0士 0
9 8
.
8 士 2 . 5
9 6
.
6士 6 . 5
9 0
.
4 士 5 . 4
6 7
.
8土 1 0 . 0
2 6
.
4士 1 6 . 3
9 7
.
6士 1 . 0
9 6
.
6士 1 . 0
6 3
.
0士 16 . 0
9 0
.
9士 9 . 1
7 7
`
3士 1 2 . 2
6 3
.
6士 4 . 8
1 00士 6 . 0
9 0
.
9士 9 . 1
8 6
.
4士 9 . 9
7 9
.
1士 1 2 . 0
5 4
.
5士 2 2 . 2
1 3
.
6士 12 . 1
7 2
.
7 土 1 4 . 0
50
.
0士 2 0 . 2
5 9
.
1士 2 0 . 1
分解产物 N , 并确定其结构 。 低 , 有关其药效学及毒理学的研究有待进
3
。
3 体外药理实验结果显示 化 合物 I , 一步深入 。
亚, l , 和 W对不同的人癌细胞株有 较强 ( 收稿 日期 1 9 9 4一 0 5一 2 8)
的杀伤作用 , 且 l 的细胞毒活性 略 有 降
参 考 文 献
1
.
L i x i
a n , e t a l
.
A l k
a
l
o i d
s
f
r o m C y
n a n e h u m h
a n e o e
k i
a n u m
.
H
e t e r o e y e !
e s , 1 98 9 ; 29 : 1 79 7
2
.
L o u H
o n g x i a n g
, e t a l
.
S t e r o e h e ur i s t r y o f
n o v e
l t
r i t e r p e n e s f
r o m e v n a n e h u m h a n e o e k i a n u m
.
C h e m P h
a r m B
。
11
,
1 9 9 1 ; 3 9 ( 9 ) : 22 7 1
3
. 娄红祥 , 等 . 华北白前 中的 C 2 1幽体类化合物 . 药学学报 , 1 9 9 2 ; 27 ( 8 ) : 7 52
4
. 娄红祥 , 等 . 菲骄联吃类生物碱的结构与鉴定 . 沈阳药学院学报 , 1 9 9 1 ; 8 ( 3 ) : 2 2 3
5
.
G o v i n d a e h a r i T R
, e t a l
.
C h e m i e a l e x a m i n a t i o n o f t y l o p h o r a a s t g m a t i e : 、
.
J C 卜e n l S O C ,
19 54 : 2 80 1
A L K A L O ID S F R O M T H E R O O T S O F
C Y N A N C H U M H A N C O C K I A N U M A N D
T H E I R D E R I V A T I V E S P R E P A R A T I O N
L o u H o n g x i a n g L i X i a n C h u X i a o j u n
, e t a l
( D
e p t
. o f P h a r m a e y
, S h a n d o n g M e d i e a l U n i v e r s i t y )
A b s t r a e t F r o m t h e r o o t s o f C刀 n a , e h ,`。 , 丙a n c o c k i a n 、 川 ( M a x i m ) A I .
1 1j 1n s k i , a f o l k m e d i e i n e p o s s e s s i n g a n t i t u m o r e f f e c t s
, t w o a l k a l o id s
1 6 2山 东 医 科 大 学 学 报 3 3卷 2期
we re ob t ai n ed an d i d en ti fi ed s a an t oi fn ei
, 践 h d 6 一 0 一 D e m e t h y l a n t o f i n e
亚 o n o p e e t r a l e 、 · i d e n e e . B i o l o g i e a l e x p e r im e n t : : h o w e d t h a t t h e a l k a l o id s
a r e t h e m a i n a n t i t u m o r e o n s t i t u e n t s o f C
.
ha n e o c k f` 7 21` m . B u t f o r t h e
5 t r o n g t o x i e i t y i n e l i n i e a l u s e s
, 。 e v e r a l d e r i v a t i v e s w e r e s y n t h e s i z e d i n
a t t e m p t t o d e e r e a s e t h o s e u n w a n t e d s i d e e f f e e t s
.
B y d e g r a d a t i o n o f l
, a
n o v e l e o m p o u n d l ( i s o a n t o f i n e m e t h i n e ) w
a s o b t a i n e d a n d t h e r e a e t i o n
P r o e e d u r e w a , f o u n d t o b e a n a b n o r m a l H o f f m a n n D e g r a d a t i o n
。
T h e
p o s s i b l e r e a e t i o n m e e h a n i : m w a s P u t f o r w a r d
.
n e h y d r o a n t o f
i n e w
, a d e -
e o m p o s i t i o n p r o d u e t o f a n t o f i n e w a s p r e p a r e d b y d e h y d r o g e n a t i o n o f l
。
T h e k i l l i n g a e t i v i t i e s o f l
, 五, l a n d W t o , t u m o r e e l l s K 一 5 6 2 , H L 一 6 0
a n d H e l a e e l l s w e r e t e s t e d i n v i t r o a n d f o u n d t h a t t h e y h a d s t r o n g e y t o
-
x i e e f f e e t s ( t h e k i l l i n g r a t i o > 6 0% a t 0
.
1件g / m l ) w h i l e l w a s l e s s o t r o n g e r
i n e o m p a r i s o n w i t h 1 a n d 五 .
K e y W
o r d s C夕n a 刀 c h u m h a n e o c k i a n u ,刀 ; A z k a l o i d : , D e g r a d a t i o n r e a e t i o n ;
A n t i t u m o r e f f e e t s
鼻畸形 、 唇裂一次完成的单侧唇裂功能性修复术
山东省千佛山医院 孙 亚夫 王稚 娴
19 89 年以来 , 我们对 23 例单侧完全性唇裂应用旋转推进 法在修复 口轮匝肌功 能的 同时对畸形的鼻
翼进行矫正 , 取得了较为满意的临床效果 。
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. 手术设计 唇裂按旋转推进法定点 。 鼻畸形矫正设计为从鼻小柱患侧根部 6 点处 , 矛乃鼻小往内
侧往上在鼻翼边缘 内 1 . s m m 环绕鼻翼 达鼻翼外侧脚的切 口 , 并与唇裂 7 点相连 。
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. 手术要点 ( 1) 松弛切 口上端要切 至鼻前庭内鼻甲的前方 , 鼻翼及鼻小柱下方基底部做广泛的游
离使之彻底松解 , 并采用错位缝合的方法减小侧唇的张力 。 (2 )唇裂的切开 : 先切开 3 ~ 5 点切线呈孤
形 , 使 3 点降至与健侧唇峰相同的高度 。 红唇粘膜 向内翻转作为 口腔粘膜衬里 , 肌层分离采用 两侧厚
薄宽窄一致的方法。 肌层 、 粘膜用 1一 0丝线问断缝合 , 皮肤层用 3一 0丝线间断缝合 。 ( 3) 鼻畸形矫正 : 鼻
翼环形切开后 , 用 眼科小剪刀在鼻翼软骨的上下方分离 , 并将健侧鼻翼软骨夸隆顶部上下方分离 。 向
内旋转患侧鼻翼软骨并观察鼻孔形态 , 将鼻翼软骨内侧脚固定在鼻小柱根部鼻前蜻处 。 将患侧鼻翼软
骨上部悬吊上提与健侧鼻翼弯隆顶端对位缝合 , 鼻翼外侧角定位参照 健侧鼻底宽度固定 。 环形切 口用
1一 0丝线间断缝合 , 鼻孔 内放小橡皮 管支撑塑形 。
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. 术后处理 上唇每日洁 洁 , 缝线 5 天 折除 , 鼻翼缝线 8 ~ 9 天 折除 , 支撑放置 2 个月 。
( !1交稿 日期 ] 9 9 4一 ] 2一 2 0 )