全 文 ：兔耳草药材薄层色谱鉴别与含量测定
黄志芳 1 , 陈 燕 1 , 边巴次仁 2 , 易进海 1*
(1.四川省中药研究所 四川成都 610041;2. 西藏自治区藏医院 拉萨 850000)
收稿日期:2006-07-12
作者简介:黄志芳(1974～ ),女 ,助理研究员 ,研究方向:中药新药研发工作 ,电话:028-85210843。
*通讯作者:易进海 , E-m ail:y ijinhai@ yah oo. com. cn。
关键词:兔耳草;薄层色谱鉴别;梓醇 HPLC;含量测定.
中图分类号:R284. 12 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2007)08-1243-02
兔耳草为玄参科植物短管兔耳草 Lagotis brevituba M ax-
im. 或全缘兔耳草 L. integraW. Sm ith. 的干燥全草 , 是藏族习
用药材之一 。具有清热解毒 , 行血调经之功效。治全身发
热 , 肾炎 ,肺病 , 高血压 , 动脉粥样硬化 ,月经不调 , 综合物毒
物中毒及 “心热”症 [ 1] 。本品含梓醇 (ca talpo l)、桃叶珊瑚苷
(aucubin)、木犀草素 7-O-β-D吡喃葡萄糖苷( Iu teo lin 7-O-β-
D-g lucopy rano side)、半乳糖醇 ( ga lac tito l)、α-和 β-葡萄糖
(g luco se)等 [ 2] ,其中梓醇具有降血糖 、利尿 、缓和泻下等多
种生物活性 [ 3] , 是兔耳草药材的有效成分之一。因此 ,本文
参照文献方法首次对兔耳草中梓醇进行薄层鉴定与含量测
定 , 为控制兔耳草药材的质量提供简便有效的方法。
1 仪器与试药
W ate rs高效液相色谱仪:包括W aters1525泵 , 2487双通
道紫外检测器 , W ate rs柱温箱 , B reeze液相色谱工作站。
Brasson超声清洗仪。塞多利斯十万分之一电子天平。
梓醇对照品(批号:0808-200104;供含量测定用 , 中国药
品生物制品检定所);兔耳草药材 5批 , 由西藏自治区藏医院
提供 , 经四川省中药研究所生药室舒光明研究员鉴定:01、 02
为全缘兔耳草 , 03、 04、 05为短管兔耳草;乙腈为美国 Tedia
色谱纯 , 水为超纯水 ,硅胶 G(青岛海洋化工厂),其它试剂均
为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 薄层鉴别 取本品粉末 0. 5 g, 加甲醇 10 mL, 加热回流
1 h, 放冷 ,滤过 , 滤液蒸干 ,残渣加甲醇 2 m L使溶解 ,作为供
试品溶液。另取梓醇对照品适量 , 加甲醇制成每 1 m L含 0. 5
m g的溶液 , 作为对照品溶液。照薄层色谱法 (中国药典
2005年版一部附录Ⅵ B)试验 , 吸取上述溶液各 5μL, 分别点
于同一硅胶 G 薄层板上 , 以三氯甲烷-甲醇-水 (13∶7∶2)
10 °C以下放置过夜的下层溶液为展开剂 , 二次展开 , 取出 ,
晾干 , 喷以茴香醛试液 , 加热至斑点显色清晰 , 供试品色谱
中 , 在与对照品色谱相应的位置上 , 显相同颜色的斑点。见
图 1。
2. 2 梓醇的含量测定
2. 2. 1 色谱条件 色谱柱:Phenom enex Luna C18(2), 4. 6
mm ×250 mm, 5μm;柱温:35°C;流动相:乙腈-0. 1 磷酸溶
液(1∶99);检测波长:210 nm;流速:lmL /m in。理论塔板数
按梓醇峰计算 ,应不低于 5 000。在此色谱条件下 , 梓醇对照
品 、兔耳草药材的 H PLC图谱见图 2。
图 1 兔耳草药材 TLC图谱
1 ～ 2、 4～ 6兔耳草药材 3梓醇对照品
A
B
图 2 兔耳草药材梓醇含量测定 HPLC图谱
A梓醇对照品 B兔耳草药材
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2007年 8月
第 29卷 第 8期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
August 2007
Vo .l 29 No. 8
2. 2. 2 线性关系 精密称取梓醇对照品 8. 02 mg, 置 25
mL量瓶中 ,加流动相溶解并稀释至刻度 , 摇匀。精密量取 5
mL置 10 mL量瓶中 ,加流动相至刻度 , 摇匀 ,即得。分别精
密吸取上述对照品溶液(0. 160 4 mg /mL) 2、4、6、8、10μL,注
入液相色谱仪中测定 。结果梓醇在 0. 320 8 ～ 1. 604 μg范围
内呈良好线性关系 , 以进样量(μg)为横坐标 , 峰面积为纵坐
标作回归曲线 , Y =296 009. 352X +796. 6, r=0. 999 8。
2. 2. 3 供试品溶液的制备 [ 4] 取本品粉末过 3号筛约 0. 2
g, 精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入甲醇 25 mL称定重
量 , 加热回流提取 1. 5 h,放冷 , 再称定重量 ,用甲醇补足减失
的重量 , 摇匀 ,滤过。精密量取续滤液 10 mL, 浓缩至近干 ,
残渣用流动相溶解 , 转移至 10 mL量瓶中 , 并用流动相稀释
至刻度 ,摇匀 , 滤过 ,取续滤液 , 即得。
2. 2. 4 精密度实验 取供试品溶液(批号:01), 重复测定 5
次;结果精密度好 , RSD为 0. 72 (n =5)。
2. 2. 5 重复性实验 取样品粉末(批号:01)照 2. 2. 3项下
方法分别制成供试品溶液 5份 ,依法测定 , 结果重复性好 ,梓
醇的含量为 1. 209 , RSD 为 1. 65 (n =5)。
2. 2. 6 稳定性实验 取供试品溶液(批号:01), 于室温放置
8 h后依法测定 ,结果稳定 , RSD为 1. 06 (n =5)。
2. 2. 7 加样回收率实验 分别取已知梓醇含量的样品 (批
号:01, 1. 209 )0. 1 g, 精密称定 , 分别准确加入 1. 6、 2. 0、
2. 4 mL的梓醇对照品溶液(0. 612 mg /mL),照 2. 2. 3项下方
法制成供试品溶液。依法测定 ,结果见表 1。
表 1 加样回收率测定结果(n=6)
样品称
量 /g
样品中梓醇
量 /mg
添加对照
品 /mL
相当于梓醇
量 /m g
测出梓醇
量 /mg
回收率
/
平均回
收率 /
RSD
/
0. 098 5 1. 190 87 1. 6 0. 979 2 2. 140 83 97. 01
0. 100 7 1. 217 46 1. 6 0. 979 2 2. 180 87 98. 39
0. 103 6 1. 252 52 2. 0 1. 224 2. 446 42 97. 54 97. 26 1. 4
0. 100 1 1. 210 21 2. 0 1. 224 2. 388 46 96. 26
0. 104 7 1. 265 82 2. 4 1. 468 8 2. 665 76 95. 31
0. 098 8 1. 194 49 2. 4 1. 468 8 2. 649 49 99. 06
2. 2. 8 样品含量测定 样品 5批 , 分别依 2. 2. 3项下方法
制成供试品溶液 , 依法测定 ,梓醇含量测定结果见表 2。
表 2 兔耳草药材中梓醇含量测定(n=3)
编号 含量 / RSD /
01 1. 21 1. 65
02 1. 11 1. 59
03 0. 58 1. 08
04 2. 08 1. 36
05 1. 53 1. 53
3 小结与讨论
3. 1 曾以 2005年版一部地黄药材的 TLC展开条件对样品
进行分离 , 但效果欠佳 ,样品中梓醇与邻近的斑点分离不开 ,
经比较研究 , 最终确定以三氯甲烷-甲醇 -水 (13∶7∶ 2)
10 °C以下放置过夜的下层溶液为展开剂 , 二次展开 , 分离效
果理想。
3. 2 含量测定提取溶剂量的确定:分别加甲醇 25 mL和 50
mL,进行样品的提取和测定 , 结果所测含量基本一致 , 故确定
提取溶剂量为 25 m L。
3. 3 首次测定了兔耳草药材中梓醇的含量 ,方法简便 、准
确 、重现性好 ,可作为兔耳草药材质量控制的有效方法。
参考文献:
[ 1] 中华人民共和国卫生部药典委员会编.中华人民共和国卫生部
药品标准藏药第一册 [ S] . 1995:63.
[ 2] 国家中医药管理局《中华本草》编委会. 《中华本草 藏药卷》
[M ] .上海:上海科学技术出版社 , 1996:218.
[ 3] 倪慕云.地黄化学成分的研究概况 [ J] .中国中药杂志 , 1999, 12
(7):41-42.
[ 4] 中国药典 2005年版一部 [ S] . 2005:82.
微波辅助提取元宝枫落叶中的黄酮类物质以及脂肪酸合酶抑制剂
黎金龙 1 , 王耀楠 1 , 赵文华1 , 张英侠 1* , 田维熙 2
(1.首都医科大学 化学生物学与药学院 ,北京 100069;2 ,中国科学院研究生院 生物系 北京 100049)
收稿日期:2006-07-18
作者简介:黎金龙(1984～ ),男 ,研究方向;天然产物成分分离和生物学效应 ,电话:010-63294095。
*通讯作者:张英侠 , E-m ail:zhangyue@ cpum s. edu. cn.
关键词:元宝枫;微波辅助提取;黄酮类化合物;脂肪酸合酶抑制剂;加权分析
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2007年 8月
第 29卷 第 8期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
August 2007
Vo .l 29 No. 8