全 文 ：第 25 卷 第 10 期
2 0 0 8 年 1 0 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol.25 　No.10　
Oct.2008 p.806　
收稿日期:2007-12-18
作者简介:熊丽(1983-),女(汉族), 江西南昌人 ,硕士研究生 , E-mail xionglibb@163.com;毕开顺(1956-),男(汉族),
河北丰南人 ,教授 , 博士 ,主要从事中药质量标准化 、中药药效物质基础研究 , Tel.024-23986296 , E-mail bikaishun@
yahoo.com。
文章编号:1006-2858(2008)10-0806-04
HPLC法测定田基黄中槲皮素-7-O-α-L-
鼠李糖苷的含量
熊　丽 , 陈晓辉 , 高　询 , 毛争艳 , 毕开顺
(沈阳药科大学 药学院 ,辽宁 沈阳 110016)
摘要:目的 建立田基黄中槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷的含量测定方法 , 为田基黄药材的质量控制
和综合开发利用提供一定的科学依据。方法 采用 HPLC 法。色谱柱为 Hypersil C18柱(250 mm×
4.6 mm , 5 μm),流动相为体积分数 0.04%的乙腈-磷酸水(体积比 77∶23), 流速为1.0 m L·min-1 ,
检测波长为 371 nm ,柱温为 35 ℃。结果 槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷质量浓度在 3.12～ 99.84 mg·
L-1(r = 0.999 8 , n =6)内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率为 99.1%(RSD=1.5%, n =
9)。结论 该方法简便 、快速 、精密度好 ,可用于田基黄的质量控制。
关键词:槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷;地耳草;高效液相色谱法
中图分类号:R 917　　　文献标志码:A
　　田基黄原名地耳草 ,始载于《生草药性备要》 ,
系藤黄科金丝桃属植物地耳草(Hypericum
japonicum Thumb.)的干燥全草 ,具有清热利湿 、
散瘀止痛 、消肿解毒的功效[ 1] 。现已从田基黄中
分离出黄酮类 、酚类等有效成分。田基黄具有抑
菌 、保肝 、抑制肿瘤细胞生长等多种药理学功效 ,
临床用于治疗急 、慢性肝炎 ,原发性肝癌 ,伤寒 ,副
伤寒等[ 2] 。初步药理研究表明 ,槲皮素-7-O-α-L-
鼠李糖苷具有保肝作用[ 3] ,并有较强的促凝血作
用[ 4] ,是田基黄中重要的药理活性物质 。本研究
中作者首次采用 HPLC 法建立了田基黄中槲皮
素-7-O-α-L-鼠李糖苷的含量测定方法 ,并测定了
广西南宁等 16个不同购买地的田基黄中槲皮素-
7-O-α-L-鼠李糖苷的含量 ,为田基黄药材的质量
控制和综合开发利用提供了一定的科学依据 。
1　仪器与材料
LC-10AD高效液相色谱仪 、SPD-10A 紫外检
测器(日本岛津公司),N2000色谱工作站(浙江大
学智达信息工程有限公司),AB135-S 天平(瑞士
Mett ler Toledo 仪器有限公司)。
槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷(对照品 ,自制 ,经
红外光谱 、核磁共振谱以及质谱等技术分析鉴定 ,
并参照文献[ 5]确定其为槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖
苷 ,峰面积归一化法计算其纯度质量分数大于
98.5%,符合定量要求),甲醇 、乙腈(色谱纯 ,山东
禹王实业有限公司),无水乙醇(分析纯 ,天津大茂
化学试剂厂),磷酸(色谱纯 ,天津科密欧化学试剂
开发中心),水(二次重蒸水 ,自制)。
16份不同购买地的田基黄药材经沈阳药科
大学孙启时教授鉴定为藤黄科金丝桃属植物地耳
草(Hypericum japonicum Thumb.)的干燥全草。供
试品经粉碎 ,过850 μm筛 ,置广口瓶中密闭保存。
2　方法与结果
2.1　色谱条件的选择
色谱柱:Hypersil C18柱(250 mm ×4.6 mm ,
5μm);流动相:体积分数为 0.04%的乙腈-磷酸
水溶液(体积比 77∶23);流速:1.0 mL·min-1;检
测波长:371 nm;柱温:35 ℃;进样量:10 μL。
2.2　系统适用性试验
取供试品溶液按“2.1”条色谱条件进样测定 ,
槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷色谱峰与相邻色谱峰
的分离度大于 1.5 ,对称因子在 0.95 ～ 1.05 之
间 ,理论塔板数以槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷计不
低于 4 000 。
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2008.10.009
2.3　溶液的制备
2.3.1　对照品储备液
精密称取干燥至质量恒定的对照品槲皮素-7
-O-α-L-鼠李糖苷适量于 50 mL量瓶中 ,加甲醇溶
解并稀释至刻度 ,制成槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷
质量浓度为 0.312 g·L-1储备液 。
2.3.2　供试品溶液
取田基黄细粉约 2.0 g ,精密称定 ,精密加体
积分数为 60%的乙醇 40 mL于圆底烧瓶中 ,称质
量 ,回流提取 1 h ,放冷 ,再称质量 ,用体积分数为
60%的乙醇补足损失的质量 ,摇匀 ,经0.45 μm微
孔滤膜过滤 ,取续滤液 ,即得。
2.4　线性关系考察
分别精密量取对照品储备液 0.1 、0.2 、0.4 、
0.8 、1.6 、3.2 mL 置 10 mL 量瓶中 ,加甲醇至刻
度 ,摇匀 ,进样测定 ,以对照品峰面积(A)为纵坐
标 ,质量浓度(ρ,mg·L-1)为横坐标 ,绘制标准曲
线并进行回归计算。结果表明 ,槲皮素-7-O-α-L-
鼠李糖苷质量浓度在 3.12 ～ 99.84 mg·L-1内与
峰面积呈良好的线性关系 , 回归方程为 A =
9.663×103ρ-5.411×103 , r=0.999 8(n=6)。
2.5　精密度试验
精密吸取对照品溶液(24.96 mg ·L-1)
10μL ,在“2.1”条色谱条件下连续重复进样 6次 ,
测定 ,槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷峰面积 RSD 为
2.7%,表明仪器精密度良好。
2.6　重复性试验
精密称取同一批供试品(广西南宁供试品),
共 6份 ,按“2.3.2”条方法操作 ,在“2.1”条色谱条
件下进样测定 , 槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷含量
RSD为 1.1%,表明方法重复性良好。
2.7　稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液(广西南宁供试品)
各 10μL ,分别在 0 、2 、4 、8 、12 、24 h 进样测定 ,槲
皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷峰面积 RSD为 1.5%,表
明供试品在 24 h内稳定性良好 。
2.8　回收率试验
精密称取已知含量的田基黄药材(广西南宁
供试品)9份 ,每份 1.0 g ,每 3 份为一组 ,每组分
别精密加入槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷对照品溶
液(质量浓度为 0.312 g·L-1)0.7 、1.4 、2.1 mL
于圆底烧瓶中 ,常压下挥干溶剂 ,按“2.3.2”条操
作制成所需溶液 , 在“ 2.1”条色谱条件下进样测
定 ,结果见表 1。
Table 1　Recoveries of quercetin-7-O-α-L-rhamnoside(n=9)
Sample m original/mg m added/ mg m found/ mg Recovery/ % Average recovery/ % RSD/ %
1 0.445 0.218 0.655 97.7
2 0.441 0.218 0.658 99.1
3 0.444 0.218 0.661 100.4
4 0.446 0.437 0.869 97.7
5 0.439 0.437 0.867 97.3 99.1 1.5
6 0.443 0.437 0.888 102.1
7 0.446 0.655 1.088 98.6
8 0.447 0.655 1.093 99.4
9 0.444 0.655 1.095 99.7
2.9　供试品含量测定
取不同购买地的田基黄药材粉末各约2.0 g ,
精密称定 ,按“2.3.2”条方法操作 ,在“2.1”条色谱
条件下进行 HPLC 分析 , 代表性色谱图见图 1 ,
16个不同购买地的田基黄中槲皮素-7-O-α-L-鼠
李糖苷的含量测定结果见表 2。在所收集的16个
不同购买地的药材中 ,槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷
的含量存在较大的差异 ,这些差异可能是由气候 、
生长环境 、采收期和储藏方法等不同引起的。
3　讨论
a.色谱条件及流动相组成。对照品紫外吸
收光谱表明 ,在 371 nm 和 255 nm 处均有较强吸
收 ,在 371 nm 处干扰峰较少 ,故选择 371 nm 作
为检测波长。分别对甲醇-磷酸水 、乙睛-磷酸水
按不同的比例混合进行考察。结果表明 ,采用乙
睛-磷酸水流动相系统所得色谱峰峰形好 ,柱效
高 ,可达到理想的分离度 。
807第 10 期 熊　丽等:HPLC 法测定田基黄中槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷的含量　　　
1—Quercetin-7-O-α-L-rhamnoside
Fig.1　HPLC chromatograms of reference subtance(a)and sample(b)
Table 2　Contents(c)of quercetin-7-O-α-L-rhamnoside in Hypericum japonicum from different origins
No. Origins c/(mg·g-1)
1 Hang zhou , Zhejiang 0.507
2 Chongqing 0.158
3 Kaifeng , Henan 0.239
4 Nanchang , Jiangxi 0.409
5 Fuzhou , Fujian 0.182
6 Xiaogan ,Hubei 0.296
7 Yulin , Guangxi 0.492
8 N ingbo , Zhejiang 0.339
9 Yueyang ,Hunan 0.396
10 Nanning , Guangxi 0.444
11 Nantong , Jiangsu 0.364
12 Q inxi , Guangx i 0.197
13 Chengdu , Sichuan 0.424
14 Jiujiang , Jiangxi 0.257
15 Luoan , Jiangxi 0.249
16 Wuhu , Anhui 0.502
　　b.提取条件 。分别考察了体积分数为 40%、
60%、80%、95%的乙醇和 40%、60%、80%、95%
的甲醇为提取溶剂时槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷
的提取效率 。结果证明 ,以体积分数为 60%的乙
醇为提取溶剂时提取效率较高 ,且提取物中干扰
峰较少 ,色谱分离效果较好 ,故采用体积分数为
60%的乙醇为提取溶剂。
c.提取方法 。分别考察了超声法与加热回
流法 ,比较其含量。结果证明 ,加热回流法对槲皮
素-7-O-α-L-鼠李糖苷的提取效率较高 ,故选择加
热回流法提取。
4　结论
首次建立了田基黄中槲皮素-7-O-α-L-鼠李
糖苷含量测定的HPLC法 ,并测定了 16个不同购
买地的田基黄中槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷的含
量 ,平均回收率为 99.1%;该方法简便 、快速 、精
密度好;本实验为田基黄药材质量控制和综合开
发利用提供了科学依据。
参考文献:
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Content determination of quercetin-7-O-α-L-rham-
noside in Hypericum japonicum by HPLC
XIONG Li , CHEN Xiao-hui , GAO Xun , MAO Zheng-yan , BI Kai-shun
(School of Pharmacy , Shenyang Pharmaceut ical Universi ty , Shenyang 110016 , China)
Abstract:Objective To establish an HPLC method for the determination of quercetin-7-O-α-L-rhamnoside
in Hypericum japonicum .Methods The separation was performed on an Hypersil C18 column (250 mm×
4.6 mm ,5 μm)w ith the mobile phase consisting of 0.04% acetonit rile-aqueous phospho ric acid (V∶V =
77∶23)at the f low rate of 1.0 mL·min-1.The detect ion w avelength w as set at 371 nm and the column
temperature w as set at 35 ℃.Results The calibrat ion curve w as linear over the range of 3.12-99.84 mg·
L
-1
for linarin(r =0.999 8).The average recovey w as 99.1%(RSD=1.5%, n =9).Conclusions The
method is simple , accurate and reproducible ,which is suitable fo r the quality cont rol of Hypericum japon-
icum .
Key words:quercetin-7-O-α-L-rhamnoside;Hypericum japonicum ;HPLC
809第 10 期 熊　丽等:HPLC 法测定田基黄中槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷的含量