全 文 ：地耳草及其混伪品的鉴定研究
宋建平 1 ,刘训红 2＊ ,朱育凤3 ,韩　乐 2 ,茆春利 2
(1.盐城卫生职业技术学院 ,江苏盐城 224006;2.南京中医药大学 ,江苏南京 210046;3.江苏省中医院 ,江
苏南京 210029)
　　摘要　目的:建立地耳草与混伪品细叶金丝桃的鉴定方法。方法:用传统鉴定方法及现代鉴定技术 , 对地耳草
与细叶金丝桃进行鉴定 。结果:地耳草与细叶金丝桃的药材性状 、显微特征 、薄层色谱 、紫外光谱及 HPLC指纹图
谱具有一定差异。结论:本研究结果可以作为地耳草药材品质鉴定依据。
关键词　地耳草;细叶金丝桃;性状鉴别;显微鉴别;理化鉴别;HPLC指纹图谱
中图分类号:R282.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)05-0663-03
IdentificationonHerbaHypericiJaponiciandItsAdulterant
SONGJian-ping1 , LIUXun-hong2 , ZHUYu-feng3 , HANLe2 , MAOChun-li2
(1.YanchengHealthVocational＆TechnicalColege, Yancheng224006, China;2.NanjingUniversityofTCM, Nanjing210046, Chi-
na;3.JiangsuHospitalofTCM, Nanjing210029, China)
Abstract　Objective:TostudytheidentificationofHerbaHypericiJaponicianditsadulterant.Methods:HerbaHypericiJaponici
andHerbaHypericigramineiwereidentifiedbytraditionalandmodernidentification.Results:Bothofthemshoweddiferenceinexte-
riorcharacter, microscopecharacteristic, TLC, UVandHPLCfingerprintgraphics.Conclusion:Thedistinctcharacteristicfeaturesre-
vealthisstudycanserveasevidencefortheidentificationofHerbaHypericiJaponici.
Keywords　HerbaHypericiJaponici;HerbaHypericigraminei;Macroscopicalidentification;Microscopicalidentification;Physi-
calandchemicalidentification;HPLCfingerprint
＊通讯作者:刘训红 , Tel:025-85811511, E-mail:liuxunh1959@sohu.com。
　　地耳草为较常用中药 , 系藤黄科植物地耳草
HypericumjaponicumThunb.的全草 ,具清热利湿 、解
毒消肿之功效 ,主治湿热黄疸 、泄泻 、痢疾 、疮疖痈
肿 、急性肾炎 、血吸虫病等症 ,其注射液已广泛用于
临床 ,治疗急 、慢性肝炎 ,效果均显著 〔1〕。现代药理
研究表明 , 地耳草具有增强免疫和抗肿瘤的作
用 〔2〕。地耳草药用广泛 ,商品药材中时常出现混伪
品 ,正确鉴定地耳草是确保临床用药安全 、有效的关
键 。本实验采用传统鉴定方法及现代鉴定技术对地
耳草及其混伪品细叶金丝桃进行了较系统的鉴别研
究 ,以期为地耳草药材鉴别和质量控制提供依据。
1 　材料与仪器
1.1 　药材　地耳草药材购自或取自南京中医药大
学药材标本馆(S-1)、南京中医药大学国医堂(S-2,
S-3)、南京中医药大学百草堂(S-4, S-5)、江苏省中
医院药房(S-6 , S-7)、江苏省中医学会门诊部(S-8,
S-9)和江苏省中医院中药库房(S-10),共 10份样
品 ,经笔者鉴定为藤黄科植物地耳草 Hypericumja-
ponicumThunb.的全草;地耳草混伪品由江苏省中
医院中药库房提供 ,经鉴定为同科植物细叶金丝桃
HypericumgramineumG.的全草。标本存放于南京
中医药大学中药鉴定实验室 。
1.2　仪器与试剂　OLYMPUS体视镜(日本);O-
LYMPUS生物显微镜及图象采集系统与形态学分析
系统(江苏捷达科技有限公司);日本岛津 UV-2401
型紫外分光光度计;Water510高效液相色谱仪 ,
DAD检测器 , Empower工作站;DHG-9023A型电热
恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司);
HH-S型水浴锅(巩义市英峪予华仪器厂);切片机;
ShimadzuAY220电子天平;KQ-500 B型超声波清洗
器(昆山市超声仪器有限公司)。
槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所提
供 ,批号 10081-200406);甲醇(色谱纯);0.4%磷酸
(实验室制备);水(重蒸去离子水);其余所用试剂
均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　性状鉴别　地耳草:全草长 10 ～ 40 cm。根须
状 ,黄褐色 。茎单一或基部分枝 ,具 4棱 ,光滑 ,表面
黄绿色或黄棕色;质脆 ,易折断 ,断面中空。叶对生 ,
无柄;叶片卵形或卵圆形 ,全缘 ,具细小透明腺点 ,聚
伞花序顶生 ,花小 ,黄色;种子淡黄色 ,两端锐尖 ,表
面有细蜂窝纹 。气无 ,味微苦 。
·663·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 5期 2008年 5月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.05.017
细叶金丝桃:与地耳草的主要区别点:主根圆柱
形;茎基部不生根;叶卵状披针形或线形;种子淡黄
褐色 ,具纵向棱条 ,其间有不明显的横条纹 。
2.2 　显微鉴别　地耳草:茎横切面:表皮细胞 1
列;下皮为 2 ～ 3细胞 ,大多充满棕色内含物 ,偶见小
的分泌腔;皮层窄 ,内皮层明显 。维管束环列 ,韧皮
部窄 ,细胞多皱缩 ,木质部宽 ,由导管 、木纤维组成;
射线 1列 ,中央髓部大多中空。
叶片表面观:上 、下表皮垂周壁均呈波状弯曲 ,
气孔不等式 ,少数不定式 ,下表面气孔常二个连接。
叶片横切面观:叶肉组织中栅栏组织 1列 ,栅栏
组织及海绵组织中均有分泌腔 。
细叶金丝桃:与地耳草茎 、叶的组织构造基本相
似 ,唯茎皮层较宽 ,髓部较大。但二者叶片显微定量
常数区别明显 ,测定结果见表 1。
　表 1 　叶显微定量常数测定结果(n=10)
显微定量常数 地耳草 细叶金丝桃
上表皮气孔数 19 48
下表皮气孔数 21 75
上 、下表皮气孔数比 0.9048 0.64
上表皮气孔指数 22.90 50.00
下表皮气孔指数 33.33 26.19
栅表比 6 11
分泌腔数(mm2) 10 18
2.3 　理化鉴别
2.3.1　薄层色谱:分别称取地耳草及细叶金丝桃
粉末 1 g(过 40目筛),加甲醇 50 ml回流提取 5 h,
滤过 ,浓缩甲醇提取液近干 ,加入聚酰胺粉(过 120
目筛)1g,拌匀后干燥 , 移置装有 1.5 g粗聚酰胺
(80 ～ 100目)小柱中 ,用适量氯仿洗脱除去杂质 ,用
甲醇洗脱 ,收集洗脱液并浓缩至 5ml,供点样。分别
吸取样品液适量 ,以槲皮素为对照品 ,点于同一聚酰
胺 G板上 ,以甲酸乙酯-丙酮-水-冰醋酸 (5∶4∶1∶
0.4)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷 5%三氯化铝乙
醇溶液 , 110℃加热 5 ～ 10 min,置紫外灯(365 nm)
下检视 ,斑点显橙红色荧光 。地耳草与细叶金丝桃
的斑点数目 、荧光强弱有所区别 。见图 1。
2.3.2　紫外光谱:取样品粗粉(20 ～ 40目)各 1 g,
分别加无水乙醇 20 ml,密塞 ,室温浸泡 1 ～ 2 h,振
摇 ,过滤 ,移取滤液 1 ml,置 50 ml容量瓶中定容 。
于岛津 UV-2401型紫外分光光度计上扫描 ,测定其
紫外光谱。结果地耳草 λEtOHmax为 203.2、283.8 nm,细
叶金丝桃 λEtOHmax为 345.8、283.6、267.0、220.2 nm。
图 1　地耳草与细叶金丝桃的薄层色谱图
1.槲皮素　2.地耳草　3.细叶金丝桃
2.4　HPLC指纹图谱鉴别
2.4.1 　色谱条件:色谱柱:汉邦 KromasilC18分析
柱(250 mm×4.6 mm, 5μm);流动相:A(甲醇), B
(0.4%磷酸);梯度洗脱条件:0※20 min, A(%)10
※30 , B(%)90※70;20※45 min, A(%)30※ 45, B
(%)70※55;45※70min, A(%)45※45, B(%)55※
55;流量:0.9 ml/min;柱温:30℃;检测波长:320
nm;参比波长:360 nm;分析时间:70 min;进样量:10
μl。
2.4.2 　供试品的制备:精密称取药材粗粉 1.0 g
(过 40目筛),准确加入 70%甲醇 50ml,称重 ,超声
40min(超声功率 250W,频率 50 kHz)。放冷 ,称重
后 ,用 70%甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,过滤 ,精密
移取 30 ml续滤液 ,加入 25%盐酸 15 ml水浴回流
水解 60 min, 快速冷却 ,定容至 50 ml,摇匀 ,离心
(10000r/min)10 min,取上清液用微孔滤膜(0.45
μm)滤过 ,滤液作为供试品液 。
2.4.3 　对照品的制备:精密称定槲皮素对照品适
量 ,加 70%甲醇制成 60μg/ml溶液 ,作为对照品液。
2.4.4 　方法学考察:以南京中医药大学药材标本
馆的地耳草为样品 ,对其稳定性 、仪器精密度 、实验
方法重现性作了相应考察。
稳定性试验:取同一份供试品溶液 ,分别在 0、
1、2、4、8、10、12、24、36、48 h进行检测 ,考察色谱峰
相对保留时间的一致性 ,各主要色谱峰相对保留时
间的 RSD为 0.8% ～ 4%。经证明样品在 10 h内较
为稳定。
精密度试验:取同一份供试品溶液 ,连续进样 5
次 ,考察色谱峰相对保留时间的一致性 ,各色谱峰相
对保留时间的 RSD均低于 3%。
重现性试验:取同一批号的供试品 5份 ,同法检
测 ,考察色谱峰相对保留时间的一致性 ,以保留时间
·664· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 5期 2008年 5月
为 58min的槲皮素峰为对照 ,各色谱峰相对保留时
间 RSD均低于 3%。
2.4.5　指纹图谱建立:精密吸取对照品与供试品
溶液各 10μl,注入高效液相色谱仪 ,按选定的色谱
条件 ,进行检测。同一实验条件下 ,测定所有供试品
HPLC色谱图 。根据不同批次供试品测定结果给出
的峰数 、峰值(积分值)和峰位(相对保留时间)等相
关参数 ,进行分析比较 ,制定优化的指纹图谱。见图
2。
图 2　地耳草与细叶金丝桃的 HPLC指纹图谱
A.地耳草　B.细叶金丝桃
2.4.6　指纹图谱分析:共有指纹峰的标定:经与
对照品对照以及比较所有测定和记录的色谱图 ,地
耳草标定 10个共有峰作为指纹图谱的特征峰 ,细叶
金丝桃标定 9个共有指纹特征峰 。与槲皮素对照峰
相比 ,地耳草其他 9个共有指纹峰相对保留时间依
次 为:0.0428、 0.2798、 0.3684、 0.3896、 0.5172、
0.5369、0.5983、0.7163、0.9013;细叶金丝桃其他 8
个共有指纹峰相对保留时间依次为:0.0442、
0.3388、 0.4043、 0.5286、 0.5396、 0.5947、 0.7346、
0.9101。
地耳草指纹图谱相似度评价:将上述 10个批
次的地耳草样品 HPLC测试数据导入国家药典委员
会 “中药指纹图谱相似度评价系统(2004A)”软件 ,
得出地耳草样品 HPLC指纹谱共有模式 R,见图 3。
与共有模式比较 , 10个批次地耳草指纹图谱相似
度:S-1:0.959, S-2:0.962, S-3:0.979 , S-4:0.994,
S-5:0.975, S-6 :0.953, S-7:0.986, S-8:0.989,
S-9:0.992, S-10:0.925。
图 3　地耳草 HPLC指纹谱共有模式图
　　地耳草与细叶金丝桃的指纹图谱比较:从各自
的指纹图谱中 ,可以直观看出 ,地耳草与细叶金丝桃
的指纹图谱有些不同 ,其特征峰数目 、相对保留时
间 、峰面积都有一定差异。通过中药指纹图谱相似
度计算软件分析 ,与地耳草 HPLC指纹谱共有模式
比较 ,细叶金丝桃相似度仅为 0.805。
3　讨论
3.1　地耳草与细叶金丝桃在性状 、显微 、理化鉴定
等方面均有一定区别。药材性状尤以根及种子区别
明显;显微鉴别尤以气孔数 、气孔指数 、栅表比等显
微定量常数区别明显;薄层色谱 、紫外光谱均有差
异。
3.2　指纹图谱分析结果表明 ,地耳草不同样品指
纹图谱相似度较好(92.5% ～ 99.2%),而地耳草与
细叶金丝桃的指纹图谱有一定差异 ,其相似度仅为
80.5%。可以看出 ,进行 HPLC指纹图谱相似度分
析是鉴别地耳草药材的一种行之有效的方法 。
参 考 文 献
[ 1] 国家中医药管理局 《中华本草》编委会 .中华本草 .上
海:上海科学技术出版社 , 1999:2208.
[ 2] 肖培根 .新编中药志 .第三卷 .北京:化学工业出版
社 , 2002:90.
(2007-10-19收稿)
·665·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 5期 2008年 5月