全 文 ：费菜不同部位原花色素含量分析①
① 国家基本药物所需中药原料资源调查和检测项目 ( [ 2011]76号 ) ;我国代表性区域特色中药资源保护利用 ( 201207002)
② 联系人 ,手机: ( 0) 15829077576; E-mail: gapsnnu@ foxmail. com
作者简介:王耀辉 ( 1987— ) ,男 ,郑州市人 ,在读硕士 ,主要从事植物生物技术工作。
康杰芳 ( 1972— ) ,女 ,山西省太原市人 ,副教授 ,博士 ,主要从事天然药物化学研究工作。
收稿日期: 2013-04-29;接受日期: 2013-05-07
王耀辉　强 毅　鲁秀兰　康杰芳②
(陕西师范大学生命科学院　西安市长安南路 199号　 710062)
摘　要　以儿茶素为标准对照品 ,使用香草醛 /硫酸比色法和超微量微孔板分光光度计在 500nm波长
下测定并比较费菜根、茎、叶和果 4个部位原花色素含量。 结果表明:费菜中原花色素含量较高 ,不同部位
差异较大 ,其中 ,根中含量为 1. 7% ,茎中含量为 0. 29% ,叶中含量为 1. 4% ,果实中含量为 1. 2% ,不同部位
原花色素含量根> 叶> 果> 茎 ;叶片作为费菜主要的食用部位 ,原花色素含量较高 ,具有较好的营养价值。
关键词　费菜 ;原花色素 ;香草醛 /硫酸比色法 ;超微量微孔板分光光度计
中图分类号: O657. 32　　　文献标识码: B　　　文章编号: 1004-8138( 2013) 05-2529-06
1　引言
原花色素 ( Proanthocyanidin)又称缩合单宁 ,是参与生命活动的重要构件分子 ,也是生物体内
不可缺少的营养成分 ,广泛存在于植物界的一大类具有黄烷-3-醇基本构架的多酚类物质 ,是在植
物中分布范围仅次于木质素的次生代谢物质 [ 1]。原花色素的构成单元复杂多变 ,根据不同的构成单
元组成 ,分别称为原花青素 ( Procyanidin)、原雀翠素 ( Prodelphinidin)、原菲瑟素 ( Profisetinidin)、原
刺槐素 ( Pro robinetinidin)等。原花色素具有优良的抗氧化性 ,对于心脑血管和神经细胞具有较好的
保护作用 [ 2, 3] ,并且对于某些癌细胞的增殖具有一定的抑制作用、还可以降低炎症反应 [4, 5 ] ,在食品
行业、医药及化妆品行业得到广泛应用。目前市场中原花色素提取物以葡萄籽、海岸松皮来源为主 ,
来源有限 ,探索与发现新的原花色素资源植物 ,对产业发展具有重要的价值。
费菜 ( Sedum aizoon L. )为景天科景天属多年生草本植物 ,又名六月淋、收丹皮、土三七等 ,广泛
分布于我国陕西、四川、江苏、湖北、山东、宁夏、甘肃等地 [6 ] ,其以根及全草入药称景天三七 ,是著名
的秦岭“太白七药”之一 ,具有散瘀止血 ,安神 ,解毒之功效 [7 ] ,同时 ,费菜可作为野生蔬菜食用 ,具有
心血管保健功效 ,被称为“养心草”。 费菜是一种极具发展前景的特色植物 ,年产量高达 2500—
3500kg /667m2 ,资源量较大 ,本研究采用丙酮、乙酸、水混合溶液提取费菜中的原花色素 [8 ] ,检测并
比较费菜根、茎、叶和果实中原花色素的含量 ,为费菜资源的活性研究和综合开发利用提供参考。
2　实验部分
2. 1　植物材料
费菜采自陕西省太白县 ,经陕西师范大学田先华教授鉴定为景天科景天属植物费菜 ( Sedum
aizoon L. )。费菜经 30℃烘干后 ,分离为根、茎、叶和果实 4个部位 ,分别粉碎后过 40目孔径筛 ,保存
备用。
2. 2　仪器和试剂
E-poch型超微量微孔板分光光度计 (美国伯腾仪器有限公司 ) ; ZHWY-100B型摇床 (北京创博
环球生物科有限公司 ) ; 5810R型离心机 (德国艾本德有限公司 ) ; RE-52AA型旋转蒸发仪 (上海亚
荣生化仪器厂 )。
儿茶素标准对照品 (美国 Sigma公司 ) ;香草醛、浓硫酸、乙酸 ,甲醇、丙酮 (上海国药集团化学试
剂有限公司 ) ,试剂均为分析纯。 实验用水为二次蒸馏水。
2. 3　实验方法
2. 3. 1　儿茶素校准曲线的制备
配置 0. 1mg /mL儿茶素标准液 ,在 96孔板中分别加入儿茶素标准品溶液 0、 5、 10、 15、 20、 25、
30、 35、 40μL,依次分别加入甲醇 40、 35、 30、 25、 20、 15、 10、 5、 0μL; 3%香草醛甲醇溶液 100μL,最后
各加入 30%硫酸甲醇溶液 100μL,混合均匀后于 30℃水浴锅保温 15min, 500nm波长下检测吸光
值 ,绘制校准曲线。
2. 3. 2　精密度实验
将上述样品溶液在相同的条件下平行测定 3次吸光度 ,考察其精密度。
2. 3. 3　稳定性实验
将上述样品溶液每隔 1h测定 1次吸光度 ,连续测定 3次 ,考察 3h内的稳定性。
2. 3. 4　样品溶液的制备
准确称取费菜不同部位材料各 2. 0g,分别加入石油醚 (料液比 1∶ 3)静置 48h脱脂 ,离心机
4000r× 10min去除上清液 ,取出沉淀置于 40℃烘干 ;将烘干后的费菜不同部位脱脂干粉分别置于
锥形瓶中 ,以 1∶ 10的料液比加入丙酮、水和乙酸的混合提取液 ( 70∶ 29. 5∶ 0. 5,V /V ) , 200r /min
摇床震荡 ,避光提取 24h后抽滤 ,抽滤液 40℃浓缩蒸干 ,甲醇定容至 20mL。
2. 3. 5　重复性实验
对同一批样品按“样品溶液的制备”方法平行制备 3份 ,分别测定吸光度 ,考察其重复性。
2. 3. 6　加标回收率实验
准确吸取 24μL已知浓度的样品溶液各 3份 ,每组分别准确加入儿茶素标准品溶液 16μL,按照
上述方法测定吸光度 ,计算回收率。
2. 3. 7　样品溶液原花色素的测定
取样品溶液 40μL,按照 2. 3. 1节的方法 ,在 500nm波长处测定吸光度 ,计算样品中原花色素
的含量。
3　结果与分析
3. 1　儿茶素校准曲线
以儿茶素质量浓度 (μg /mL)为横坐标 ,对应吸光度值为纵坐标 ,绘制儿茶素的校准曲线 (见图
1)。结果表明 ,儿茶素标准品溶液浓度在 12. 5— 100μg /mL范围内线性关系良好。得回归方程: y=
0. 003x - 0. 005,相关系数 R2= 0. 9970。
2530 光谱实验室 第 30卷
图 1　儿茶素校准曲线
3. 2　方法学考察
3. 2. 1　精密度实验
精密度实验结果见表 1,精密度实验 RSD为 0. 24% ,表明仪器精密度良好。
表 1　精密度实验结果
样品数 吸光度 A RSD(% )
1 0. 354 0. 353 0. 353 0. 353 0. 352 0. 352
2 0. 356 0. 354 0. 355 0. 354 0. 354 0. 354 0. 24
3 0. 355 0. 353 0. 354 0. 354 0. 354 0. 354
3. 2. 2　稳定性实验
稳定性实验结果见表 2,稳定性实验 RSD为 0. 41% ,表明待测样品溶液在 4h内稳定。
表 2　稳定性实验结果
时间 ( h) 吸光度 A RSD(% )
0 0. 353 0. 352 0. 353
1 0. 352 0. 352 0. 351
2 0. 350 0. 351 0. 351 0. 41
3 0. 349 0. 351 0. 350
4 0. 351 0. 349 0. 347
3. 2. 3　重复性实验
重复性实验结果见表 3,重复性实验 RSD为 0. 33% ,表明方法重复性良好。
表 3　重复性实验结果
样品 吸光度 A RSD(% )
1 0. 353 0. 352 0. 353
2 0. 355 0. 354 0. 355 0. 33
3 0. 356 0. 354 0. 354
2531第 5期 王耀辉等:费菜不同部位原花色素含量分析
3. 2. 4　加标回收率实验
加标回收率实验结果见表 4,加标回收率实验 RSD是 3. 07% ,表明方法的准确率较高。
表 4　加标回收率实验结果 (n= 3)
样品 测定值
(μg)
加标量
(μg)
加标后测定值
(μg )
回收率
(% )
平均回收率
(% )
RSD
(% )
1 2. 041 1. 6 3. 791 109. 375
2 2. 112 1. 6 3. 884 110. 751 108. 19 3. 07
3 2. 076 1. 6 3. 747 104. 438
3. 3　费菜不同部位总花色素含量测定
根据儿茶素校准曲线的回归方程 ,计算得出费菜不同部位样品中总花色素的含量结果 (见表
5)。费菜根、茎、叶和果等不同部位的总花色素含量分别为 ( 17. 35± 0. 45、 2. 97± 0. 37、 14. 22± 3. 56
和 12. 33± 1. 44mg /g。其中 ,根部原花色素含量最高 ,叶部较之稍低 ,其次为果部 ,茎部含量最少。
表 5　费菜不同部位原花色素含量测定结果 (mg /g)
部位 组别 总原花色素含量 平均值± SD
1 17. 36
根部 2 16. 89 17. 35± 0. 45
3 17. 79
1 3. 01
茎部 2 2. 58 2. 97± 0. 37
3 3. 31
1 14. 87
叶部 2 10. 37 14. 22± 3. 56
3 17. 42
1 12. 18
果部 2 10. 98 12. 33± 1. 44
3 13. 84
4　结论
香草醛硫酸法测定原花色素 ,反应灵敏度高、专一性强 ,在石榴籽、葡萄籽、沙棘等提取物原花
色素含量测定时被广泛应用 [9 ] ,测定原理是黄烷醇结构单元的 A-环具有间苯二酚结构与香草醛产
生红色络合物 ,儿茶素具有黄烷醇的结构特征可以与香草醛发生反应 ,原花色素具有黄烷醇结构基
本单元也可以与香草醛发生反应 ,因此测定时常用儿茶素作为标准物质 [ 10]。超微量微孔板分光光
度计能在 96孔板上同时测定多个样品 ,在短时间内测出样品的吸光值 ,可以有效去除原花色素显
色不稳定和时间因素对测定准确性的影响。本实验选取儿茶素为标准物质 ,考察结果显示 ,仪器精
密度高、稳定性好 ,测定结果重复性好 ,准确度高。原花色素含量的测定受提取时间、提取温度、提取
溶剂、 pH值和料液比等提取因素影响很大 [11 ] ,对于费菜原花色素提取工艺的优化结果将在另文中
2532 光谱实验室 第 30卷
报道。
原花色素是由黄烷 -3-醇缩聚而成的一大类多聚物质 ,由于不同种类原花色素的单体组成和聚
合度不同 ,生物活性也有很大差异 ,聚合度低的原花色素如原花青素二聚体等具有较好的生物活
性 [12 ]。结构分析发现 ,莲房原花色素含有较高含量的 儿茶素单元和儿茶素单元 [13 ] ,杨梅叶原花色
素完全为原飞燕草素 [14 ]。不同植物材料中原花色素结构与组成的差异是造成不同植物原花色素含
量与其生物活性差异的重要因素 [11 ]。费菜作为景天三七的基源植物和一种具有心血管保护作用的
野生蔬菜 ,其生物活性与酚类物质密切相关 ;对费菜不同部位的测定结果表明 ,费菜的根、叶、果实
中原花色素含量较高 ,是潜在的原花色素资源植物 ,对其原花色素结构的进一步研究 ,不仅对揭示
其生物活性具有理论意义 ,同时对综合开发与利用具有广泛的应用价值。
参考文献
[1 ] Gu L W , Keml M , Hammerstone J F et al . Concent rat ions of Proanth ocyanidins in Common Foods and Estimations of Normal
Consumption [ J] . Journal o f Nutr it ion, 2004, 134( 3): 613— 617.
[2 ] Keen C L, Holt R, Oteiza P et al . Cocoa Antioxidants and Cardiovascular Heal th [ J] . American Journal of Clinical Nutrit ion , 2005,
81( 1): 298— 303.
[ 3 ] Gong Y S, Liu L G, Xie B Jet al. Ameliorative Ef fect s of Otus Seedpod Proan thocyanidins on Cogni tive Defici ts and Oxidativ e
Damage in Sen escence-accelerated Mice[ J] .Behavioural B rain Research , 2008, 194( 1): 100— 107.
[4 ] Baw adi H A, Bansod er R R, Trappey Aet al. Inhibi tion of Caco-2 Colon, M CF-7 and Hs578T Breas t, and DU 145 Prostatic Cancer
Cell Prolif eration by Water-soluble Black Bean Condensed Tannins [ J] .Cancer Letters , 2005, 218( 2): 153— 162.
[5 ] Ev ropi T, Janet K, Roseanne C et al. Dietary Flavonoids and th e Risk of Colorectal Cancer [ J] .Cancer E pidemiol Biomarkers Prev ,
2007, 16( 4): 684— 693.
[6 ]中国科学院植物志编委会 .中国植物志 [M ].北京:科学出版社 , 1984. 72— 74.
[7 ]中药大辞典编委会 .中药大辞典 [M ].上海:上海科学技术出版社 , 2006, 3316— 3317.
[ 8 ] Bri tt any L W , Luke R. How ard Impact of Dif ferent Stages of Juice Processing on the Anth ocyanin, Flavonol, and Procyanidin
Contents of Cranberries [ J] . Journal o f Ag ricul ture and Food Chemist ry , 2011, 59( 9): 4692— 4698.
[9 ]赵国建 .石榴籽原花色素提取纯化及其功能研究 [ D].西安:西北农林科技大学 , 2009.
[ 10 ] Sun B S, Jorge M , Ricardo D S et al . Cri tical Factors of Vani llin Assay for Catechins and Proan thocyanidins [ J ] . Journal of
Agr icul ture and Food Chemist ry , 1998, 46( 10): 4267— 4274.
[11 ]樊金玲 ,陶冠军 ,朱文学 .香草醛 /硫酸比色法测定两种原花色素含量的比较 [ J ].食品科学 , 2007, 28(9) : 467— 472.
[12 ] Guyot S, Marnet N, Drilleau J F et al . Thiolysi s-HPLC Characteri zation of Apple Procyanidins Covering a Larg e Rang e of
Polymeri zation States [ J]. Journal of A griculture and Food Chemistr y, 2001, 49( 1): 14— 20.
[13 ]肖俊松 ,谢笔钧 ,曹雁平等 .莲房原花色素的纯化分级和结构鉴定 [ J] .食品科学 , 2012, 33( 19): 172— 177.
[14 ]杨海花 .杨梅叶原花色素的研究 [D ].杭州:浙江大学 , 2012.
Analysis of Proanthocyanidin Contents in Different Parts
of Sedum aizoon L.
WANG Yao-Hui　 QIANG Yi　 LU Xiu-Lan　 KANG Jie-Fang
(College of Lif e Sciences , Shaanxi Normal University ,X i’ an 710062,P . R.Ch ina )
Abstract　 It is aimed to determine the content of proanthocyanidin in the root , stem , leaf and
2533第 5期 王耀辉等:费菜不同部位原花色素含量分析
seed of Sedum aizoon L by vanillin assay and detect the content of the 4 parts by high performance
microplate spectrophotometer, at 500 nm waveleng th and catethin fo r standard to quanti tate. The
results indicated that the contents of proanthocyanidin of Sedum aizoon L. were abundant. The
dif ferences of contents of proanthocyanidin among dif ferent pa rts of Sedum aizoon L. w ere larg e. The
percentag es on the dry w eight of proanthocyanidin in the root , stem, leaf and seed of Sedum aizoon L.
w ere 1. 7% , 0. 29% , 1. 4% , 1. 2% respectiv ely, and root> leaf> seed> stem. The analyzed results of
proanthocyanidin indicated that Sedum aizoon L. leaf had high nutri tional v alues.
Key words　 Sedum aizoon L. ; Proanthocyanidin; V anillin Assay; High Performance Microplate
Spect rophotometer
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52513126; 13716729706。
注:陆达 ,钢铁研究总院前院长 ; 卢嘉锡 ,中国科学院前院长 ;王鹤寿 ,原冶金工业部部长 ,第一届中共中央纪律检查委
员会副书记 ;章振乾 ,福建省民盟名誉主委、厦门大学原教务长。
《光谱实验室》编辑部
2534 光谱实验室 第 30卷