全 文 ：第 37 卷 第 4 期
2013 年 7 月
南京林业大学学报(自然科学版)
Journal of Nanjing Forestry University (Natural Sciences Edition)
Vol． 37，No． 4
Jul．，2013
收稿日期:2012 － 06 － 04 修回日期:2012 － 11 － 05
基金项目:国家林业公益性行业科研专项项目(201104019) ;江苏高校优势学科建设工程项目(PAPD)
第一作者:张伦，博士生。* 通信作者:王飞，教授，博士。E-mail:hgwf@ njfu． edu． cn。
引文格式:张伦，刘功骏，何柏球，等． 毛杨梅树皮原花色素对小鼠急性毒性及抗氧化性的影响［J］． 南京林业大学学报:自然科学
版，2013，37(4) :85 － 89．
毛杨梅树皮原花色素对小鼠急性毒性及
抗氧化性的影响
张 伦，刘功骏，何柏球，王 飞
(南京林业大学化学工程学院，江苏省生物质绿色燃料与化学品重点实验室，江苏 南京 210037)
摘要:探讨了毛杨梅树皮原花色素提取物的安全性，分析了毛杨梅树皮原花色素对小鼠的急性毒性以及在小鼠
体内的抗氧化性能。结果表明:毛杨梅树皮原花色素提取物经口的 LD50为 5 g /kg。毛杨梅树皮原花色素给药
后，小鼠血清内的过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性显著性增加(p ＜ 0. 05)，丙二醛(MDA)含量减
少。小鼠肝内的 CAT活力显著增加，MDA含量也有所增加，但是并没有显著性差异(p ＞ 0. 05)。因此，毛杨梅树
皮原花色素属于实际无毒物质，毛杨梅树皮原花色素提取物对小鼠机体具有一定的抗氧化作用。
关键词:毛杨梅树皮;原花色素;急性毒性;抗氧化性
中图分类号:S718. 4;TQ91 文献标志码:A 文章编号:1000 － 2006(2013)04 － 0085 － 05
Acute toxicity of proanthocyanidins from Myrica esculenta Buch． Ham．
bark on mice and its antioxidative properties
ZHANG Lun，LIU Gongjun，HE Baiqiu，WANG Fei
(Jiangsu Key Lab of Biomass-based Green Fuels and Chemicals，College of Chemical Engineering，
Nanjing Forestry University，Nanjing 210037，China)
Abstract:The security of proanthocyanidins extractive from Myrica esculenta Buch． Ham． was investigated by analyzing
its acute toxicity and antioxidative properties in vivo to mice． The results showed that the LD50 of proanthocyanidins ex-
tractive from M． esculenta Buch． Ham． bark in mice was 5 g /kg，and the activities of catalase (CAT) ，superoxide dis-
mutase (SOD)significant increased (p ＜ 0． 05) ;the contents of malondialdehyde (MDA)decreased in mice serum． In
liver，the activities of CAT increased (p ＜ 0． 05) ，the content of MDA increased but was not significant difference with
control (p ＞ 0. 05)． Thus，during the acute oral toxicity，the extractive from M． esculenta Buch． Ham． bark did not re-
veal any toxic effects in ICR mice (data not shown)and have some antioxidative properties in vivo．
Key words:Myrica esculenta Buch． Ham． bark;proanthocyanidins;acute toxicity;antioxidative properties
原花色素(proanthocyanidins，PAs)又称为浓缩
型单宁，由于其具有鞣革功能，故又称为缩合单
宁［1］。它是一类天然的黄烷类单体及其聚合体的
多酚类化合物，普遍存在于植物的根、茎、叶、花、果
实中，是一种很好的氧自由基清除剂和脂质过氧化
抑制剂［2］。杨梅系杨梅科杨梅属(Myrica)植物的
总称，至今已从杨梅树皮中分离得到黄酮类、单宁
类、三萜类、二芳基庚烷类等化合物。此外杨梅树
皮中还含有杨梅素［3］(myricetin)、杨梅醇(myri-
canol)、杨梅酮(myricanone)等活性成分。二芳基
庚烷类化合物具有抗氧化、消炎、抗肝毒、杀寄生线
虫、活血等生理活性［4］，杨梅素有活血化瘀抗血
栓、降血糖、抗氧化、保肝护肝、解轻乙醇中毒等作
用［5］，杨梅素、杨梅酮、杨梅醇还是治疗脱发的活
性物质［6］。从毛杨梅 (Myrica esculenta Buch．
Ham．)树皮中提取的精油含有 n －十六烷醇、桉叶
油醇、棕榈酸等挥发油，具有抗菌、局部抗炎的效
果［7］。树皮来源广泛，但是目前对毛杨梅树皮原
花色素提取物进行体内抗氧化的研究较少。而不
同树种原花色素的抗氧化性以及清除自由基能力
也有所不同［8 － 9］，为了对毛杨梅树皮原花色素的开
发利用，需要对它的安全性进行评价，以便为它的
南 京 林 业 大 学 学 报 (自 然 科 学 版 ) 第 37 卷
其他功能活性及其在食品方面的开发提供依据。
为此，笔者对毛杨梅树皮原花色素对小鼠的急性毒
性，以及各给药组小鼠的血清及肝脏的 CAT(过氧
化氢酶)活性、MDA(丙二醛)含量、SOD(超氧化物
歧化酶)活性进行了研究。
1 材料与方法
1． 1 毛杨梅树皮原花色素的提取
采用常规方法提取。将毛杨梅树皮晾干、粉
碎，过筛(0. 25 ～ 0. 6 mm)。70%乙醇为提取液;提
取温度 60 ℃;液料比 10∶ 1(mL /g) ;提取时间 6 h;
粗提液过滤、离心 30 min(4 000 r /min)。然后将上
层液真空旋转蒸发(0. 1 MPa、温度 60 ℃) ，所得的
浓缩液再用 3 倍体积的乙酸乙酯进行 3 次萃取。
将乙酸乙酯层合并在 40 ℃旋转浓缩，在 50 ℃干燥
12 h，得到棕红色毛杨梅树皮乙酸乙酯提取物。采
用香草醛 －硫酸法测得该提取物中原花色素质量
分数为 55. 8%。将提取物通过 HPLC － MS 方法检
测其中成分及结构。ESI 质谱显示其含量主要为
二、三聚体原花色素以及杨梅素。
1. 2 试验动物和仪器
供试 ICR小鼠由扬州大学比较医学中心提供
(许可证号:No. SCXK(苏)2007 － 0001) ，体质量
18 ～ 22 g，70 只，雌雄各半。全部动物引入观察 1
周后，投入试验。
试验仪器包括:RE52CS 型旋转蒸发器;FZ102
型微型植物粉碎机;玻璃匀浆器;UV －1700型分光
光度计;CAT、MDA、SOD及总蛋白测定试剂盒均购
自南京建成生物工程研究所。
1. 3 试验设计
将毛杨梅树皮原花色素粉末用蒸馏水配成水
溶液。试验动物按每 10 g 体质量用药 0. 2 mL 的
比例用灌胃法在 24 h 内给药，小鼠随机分成 7 组，
每组 10 只，雌雄各半。用药剂量分别为:0. 825、
1. 650、3. 300、6. 600、13. 200、26. 400 g /kg，空白组
用蒸馏水代替。观察给药后 10 d 内小鼠的摄食、
饮水、呼吸、活动情况及死亡情况，计算半致死量
LD50。给药后第 11 天断头处死存活小鼠并进行
解剖观察体内脏器情况。取小鼠肝组织在冷生
理盐水中漂洗，滤纸拭干，用匀浆器匀浆。加入
肝组织 9 倍的生理盐水制备成 10%的组织匀浆，
匀浆3 000 r /min下离心 10 min，取上清再按 1 ∶ 9
稀释成 1%组织匀浆。按照过氧化氢酶(CAT)活
力、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)活力
测定试剂盒提供的方法测定肝脏和血清的 CAT、
MDA和 SOD活性。
1. 4 数据处理
用改良寇氏法［10］计算 LD50(D50)及 95%平均
可信限。D50 = log
－ 1［Xm － i(∑P － 0. 5) ］，式中:
Xm 为最大死亡组剂量的对数;i为相邻剂量组剂量
比值的对数;∑P为各组死亡率总和。LD50的 95%
平均可信限 = log －1(logD50 ± 1. 98Sx50) ，其中 Sx50为
logD50的标准误差。
Sx50 = i × (∑P －∑P2)/(n － 1槡 ) ，
式中，n为每组动物数。
用 SPSS18. 0 分析软件进行数据统计、分析、处
理和显著性 t检验，结果用平均数 ±标准差(珋x ± s)
表示［11］。
2 结果与分析
2. 1 原花色素对小鼠急性毒性的影响
急性毒性试验是药物毒理学安全性评价的基
础，具有了解受试物急性毒性强弱的作用。试验旨
在研究毛杨梅树皮原花色素提取物急性毒性，确定
LD50值，了解其对动物的毒性强弱、中毒症状、中毒
死亡小鼠的病理剖检变化，为毛杨梅树皮的后续开
发利用提供理论依据。有资料显示葡萄籽原花青
素小鼠口服 LD50为 5. 624 7g /kg (95%可信限为
5. 065 6 ～ 6. 245 6 g /kg)［12］。小鼠灌胃给药 95%
的原花青素 LD50为 2. 75g /kg
［13］。
毛杨梅树皮原花色素提取物灌胃后 26. 400
g /kg给药组小鼠精神萎靡，出现腹式呼吸，12 h 后
全部死亡，将死亡小鼠尸体进行剖检，脏器未见任
何异常，胃中有未消化药物呈块状，在胃中呈灰色。
13. 200 g /kg给药组小鼠给药后 24 h 后死亡 9 只
剩 1 只，精神萎靡，腹式呼吸，大便呈淡红色。尸体
经剖检，脏器未见任何异常，有药物消化的迹象，药
物在胃中为灰色呈泥状。6. 600 g /kg 剂量组小鼠
在灌注 24 h后有部分小鼠有厌食症状出现，精神
欠佳，未出现厌食症状的小鼠存活。48 h 后有进
食的小鼠精神恢复，但是与对照组相比仍活动较
少。0. 825 g /kg给药组全部存活，精神状况良好，
毛色光滑，与对照组相当。观察 10 d，试验动物死
亡数统计如表 1 所示。采用改良寇氏法计算出
LD50为 5 g /kg，可信限为 3. 607 ～ 6. 937 g /kg。按
照我国食品安全性毒理学评价的标准［10］，毛杨梅
树皮原花色素属于实际无毒物质，这说明毛杨梅
树皮原花色素提取物的口服毒性很低，安全性很
好，安全范围很大。
68
第 4 期 张 伦，等:毛杨梅树皮原花色素对小鼠急性毒性及抗氧化性的影响
表 1 毛杨梅树皮提取物对小鼠急性毒性的影响
Table 1 Effects of extract from M. esculenta Buch.
Ham． bark on acute toxicity study of mice
提取物剂量 /
(g·kg －1)
dosage
小鼠数量 /
只
numbers of mice
死亡数 /
只
death
校正死亡
率 /%
mortality rate
0. 000 10 0 0
0. 825 10 0 0
1. 650 10 0 0
3. 300 10 3 30
6. 600 10 7 70
13. 200 10 9 90
26. 400 10 10 100
2. 2 原花色素对小鼠体质量的影响
虽然时间较短，但是与对照组相比在灌胃10 d
后，存活小鼠的生长情况有所不同。灌胃后的体质
量与对照组体质量相比差异显著减轻(p ＜ 0. 01)。
随着剂量的递增，体质量减轻量增大(表 2) ，说明
毛杨梅树皮原花色素一次大剂量的灌注对小鼠的
体质量仍具有一定的影响。
表 2 毛杨梅树皮提取物对小鼠生长情况的影响
Table 2 Effects of extract from M. esculenta Buch.
Ham． bark on body weights of mice
组分
groups
剂量 /
(g·kg － 1)
dosage
初始质量 /g
original weight
末期质量 /g
final weight
质量变化
weight change
1 0. 000 20. 11 ± 0. 86 25. 43 ± 1. 52 4. 32 ± 1. 86
2 0. 825 20. 75 ± 0. 65 20. 62 ± 0. 67* － 3. 12 ± 1. 06
3 1. 650 21. 06 ± 0. 94 18. 72 ± 1. 14＊＊ －3. 54 ± 0. 16
4 3. 300 21. 12 ± 0. 21 17. 17 ± 0. 62＊＊ －3. 95 ± 0. 41
5 6. 600 21. 13 ± 0. 82 16. 52 ± 1. 43＊＊ －4. 59 ± 1. 65
注:与对照组比* p ＜0. 05，＊＊p ＜0. 01。下同
2. 3 原花色素对小鼠血清和肝脏中 CAT 活力的
影响
H2 O2是细胞正常代谢的产物。过氧化氢酶
(CAT)是在生物演化过程中建立起来的生物防御
系统的关键酶之一，其生物学功能是催化细胞内过
氧化氢分解，防止过氧化［14］。CAT清除 H2O2的重
要作用可以体现在冠心病、动脉粥样硬化等疾病的
发生上［15］。毛杨梅树皮原花色素给药组的小鼠血
清和肝脏中的 CAT 活力有一定变化(图 1)。在
CAT测试中，小鼠血清、肝 CAT 活力随剂量的增加
而逐渐增大，说明毛杨梅树皮原花色素使机体发生
了一系列的变化，促进了机体过氧化氢酶的产生。
肝组织的 CAT活力增长速度却缓于血清，这是由于
内脏器官吸收能力还需一段时间。但是由于时间较
短，总体增长的幅度都较于平缓。毛杨梅树皮原花
色素能明显清除自由基，对体外抗氧化 1，1 －二苯
基 －2 －苦基肼(DPPH)自由基的清除率为 92%［3］，
而小鼠体内试验也证实了不同组分的毛杨梅树皮原
花色素对小鼠机体具有抗氧化能力。
图 1 毛杨梅树皮提取物对小鼠血清和肝脏过氧化
氢酶活性的影响
Fig． 1 Effects of extract of M. esculenta Buch. Ham．
bark on activities of catalase (CAT)in mice
serum and liver
图 2 毛杨梅树皮提取物对小鼠血清和肝脏超氧化
物歧化酶活性的影响
Fig． 2 Effects of extract of M. esculenta Buch. Ham．
bark on activities of superoxide dismutase
(SOD)in mice serum and liver
2. 4 原花色素对小鼠血清和肝脏中 SOD 活性的
影响
SOD(超氧化物歧化酶)是生物体内重要的
酶，具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基
的首要物质［16］。SOD能消除生物体在新陈代谢过
程中产生的有害物质，在生物体内的水平高低意味
着衰老与死亡的直观指标。它可对抗与阻断因氧
自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，
复原因自由基造成的对细胞伤害，它催化如下的反
应:2O2 + 2H
+→H2O2 + O2。在毛杨梅树皮原花色
素的作用下，各剂量组的小鼠血清 SOD 活性随剂
量显著性增加(p ＜ 0. 05) (图 2) ，说明小鼠血液内
78
南 京 林 业 大 学 学 报 (自 然 科 学 版 ) 第 37 卷
细胞清除氧自由基的能力有所增强。肝的 SOD 活
性在一次性灌注剂量较低时对肝的抗氧化性具有
积极的作用，但是随着灌注剂量的增加，肝的 SOD
活性逐渐降低，说明一次性较大剂量的灌注并不能
增强机体清除自由基的能力。
图 3 毛杨梅树皮提取物对小鼠血清和肝脏中丙
二醛含量的影响
Fig． 3 Effects of extract of M. esculenta Buch. Ham．
bark on contents of malondialdehyde (MDA)
in mice serum and liver
2. 5 原花色素对小鼠血清和肝脏中 MDA 含量的
影响
生物体内，自由基作用于脂质发生过氧化反
应，氧化终产物为丙二醛，会引起蛋白质、核酸等生
命大分子的交联聚合，且具有细胞毒性［17］。有机
体在逆境下遭受伤害(或衰老)与活性氧积累诱发
的膜脂过氧化作用，膜脂过氧化的产物有二烯轭合
物、脂类过氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛
(MDA)是膜脂过氧化最重要的产物之一，氧化性
损伤能引起线粒体运输的渗透性［18］。因此可通过
测定 MDA了解膜脂过氧化的程度，从而间接测定
膜系统受损程度以及有机体的抗逆性。毛杨梅树
皮提取物对小鼠血清和肝脏中 MDA 含量的影响
见图 3。由图 3 可见，随毛杨梅树皮提取物剂量的
增加，小鼠血清中的 MDA 含量逐渐减少，说明毛
杨梅树皮原花色素能缓解血液中的 MDA，能够提
高机体的抗氧化能力水平。但是变化较为平缓，这
可能是由于试验时间较短，小鼠的整个脏器机能还
没完全适应试验就已结束，毛杨梅树皮原花色素对
机体的作用还没能完全体现出来。文献［19 － 20］
表明低聚原花色素具有提高受试小鼠肝脏中
CAT、SOD 活性、降低小鼠肝脏中 MDA 含量的作
用。此次试验也进一步证实了毛杨梅树皮原花色
素提取物具有一定的抗氧化性。小鼠肝脏的 MDA
值有所上升，估计大剂量的灌注将可能对肝脏有一
定的损伤，但是幅度不是很明显，也不存在任何剂
量的依赖关系。
3 结 论
(1)毛杨梅树皮原花色素提取物的小鼠经口
LD50为 5 g /kg，可信限为 3. 607 ～ 6. 937 g /kg。按
照毒理学分级为实际无毒级。
(2)经毛杨梅树皮原花色素给药后，小鼠血清
内的过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活
性显著性增加(p ＜ 0. 05) ，丙二醛(MDA)含量逐渐
减少。毛杨梅树皮原花色素提取物对机体具有一
定的抗氧化作用。毛杨梅树皮原花色素对小鼠脏
器较长时间的抗氧化性影响还有待进一步的研究。
(3)给药后小鼠肝脏中的 CAT 活力显著性增
加(p ＜ 0. 05) ，肝脏的 SOD活性在一次性灌注原花
色素剂量较低时对肝脏的抗氧化性具有积极的作
用，但是随着灌注剂量的增加，肝脏的 SOD活性逐
渐降低，说明一次性较大剂量地服用毛杨梅树皮原
花色素提取物会引起 SOD 的增加。肝脏的 MDA
值有所上升，估计大剂量的灌注将可能对小鼠机体
有一定的损伤。
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( 责任编辑 李燕文
檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿
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殭
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)
简 讯
“南方现代林业协同创新中心”获首批江苏高校
协同创新中心立项建设
日前，江苏省公布首批江苏高校协同创新中心名单，由南京林业大学申报的“南方现代林业协同创
新中心”获立项资助建设。此次江苏高校协同创新中心共立项建设 29 个、培育建设 11 个。
“南方现代林业协同创新中心”由南京林业大学王明庥院士、曹福亮教授负责牵头，联合江苏省林业
局、中国林科院、南京大学、江苏吴江苗圃集团有限公司、江苏扬子江林业科技有限公司等协同单位组建
而成。中心立足江苏，面向南方，围绕国家生态文明建设与林业“双增”目标的重大需求，集聚了包括 4
名院士、2 名国家“千人计划”、2 名长江学者、3 名杰出青年基金获得者在内的 18 名国家级人才，汇聚了
5 个国家级、1 个教育部和 18 个省部级平台优质资源。中心下设“林木种质创新与良种选育”、“林木种
苗与森林培育”、“森林保护与生物入侵防控”、“林业生态与环境保护”等 4 个创新平台。
“南方现代林业协同创新中心”建设以实现满足南方现代林业发展重大科技需求为导向，以体制机
制改革与创新为突破口，引领创新资源和要素的有效集聚，创新科研组织与管理模式，推进资源合理配
置与成果共享，实现跨学科、跨单位的联合协同攻关。通过中心组建和协同创新，集聚和培养一批拔尖
创新人才，攻克一批重大科技难题，推进南方现代林业的跨越式发展，为实现江苏“两个率先”和国家生
态文明建设提供科技支撑。
( 科学技术处)
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