全 文 ：短管兔耳草正丁醇提取物诱导胃癌 SGC-7901细胞凋亡的研究
王　燕 1, 2 , 　张应鹏 3 , 　马兴铭 1, *
(1.兰州大学基础医学院免疫研究所;2. 甘肃省人民医院;3.兰州理工大学 ,甘肃 兰州 730000)
收稿日期:2006-03-12
作者简介:王　燕(1977～ ),女 ,硕士 ,主要从事抗肿瘤免疫研究。电话:13893110862, E-m ail:w angyanimm unity@126. com。
基金项目:甘肃省中医药管理局基金支持(No:2003-GZK-17)。
*通讯作者:马兴铭 ,电话:0931-3438431;E-mai l:m axm@ lzu. edu. cn。
关键词:短管兔耳草;SGC-7901细胞;细胞凋亡
摘要:目的:探讨藏药短管兔耳草正丁醇提取物诱导胃癌 SGC-7901细胞凋亡的活性。方法:MTT比色法检测其对 SGC-
7901胃癌细胞株增殖的抑制作用;荧光显微镜及电镜观察细胞的形态学变化;琼脂糖电泳法检测细胞凋亡过程中 DNA
碎片的形成;流式细胞仪分析测定细胞的凋亡率。结果:藏药短管兔耳草正丁醇提取物在 0. 34 ～ 21. 60 m g /m L范围内 ,
对 SGC-7901胃癌细胞株的增殖有明显抑制作用;荧光显微镜及电镜下可观察到凋亡的形态学改变;流式细胞仪通过对
单个细胞的快速测定 ,可以观察到 “亚 G1峰”;DNA凝胶电泳呈现梯形条带。结论:藏药短兔耳草正丁醇提取物能够抑
制胃癌 SGC-7901细胞的增值并诱导凋亡。
中图分类号:R285. 6　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2007)05-0672-04
Human stomach cancer SGC-7901 cell apoptosis induced by n-butanol extract of
Lago tis BrevitabaM ax im
WANG Yan
1, 2 , 　ZHANG Ying-peng3 , 　MA X ing-m ing1, *
(1. Institu te of Imm unology, Lanzhou Un iversity , Lanzhou730000 , Ch ina;2. P eople’ sHosp ita l ofGan su Province, Lanzhou730000, China;3. Lanzhou
Po lytechn ic Un iversity, Lanzhou730000, Ch ina)
KEYWORDS:LagotisB revitubaMax im;SGC-7901 ce lls;apoptosis
ABSTRACT:AIM:To study inhibitive effect of Lagotis B revituba Max im ex tracted on hum an stomach cancer
SGC-7901 ce lls proliferation and /or induce apoptosis. METHODS:Hum an stomach cancer SGC-7901 cells w ere
treated w ith LagotisB revitubaMaxim ex tracted from n-bu tano l of 0. 34 ～ 21. 60mg /mL for 24 h ～ 72 h. C ell pro lif-
eration w as eva luated byMTT assay. M o rpholog ical changes of apoptosis w ere exam ined by fluorescence m icroscope
and e lectronm icroscope. DNA fragmen tation w as visua lized by agarose ge l electropho resis. The amount o f apop to sis
ce lls w asmeasured by flow cy tome try. RESULTS:G row th o f SGC-7901 ce lls w as obv iously inhibited by Lagotis
B revitubaMaxim extrac tw ith value from 21. 60 mg /mL to 0. 34 mg /mL. A fter incubation of SGC-7901 ce lls w ith
2. 7mg /mL LagotisB revitubaMaxim ex tract for 48 h, morpho log ica l changes o f apoptosisw ere observed. DNA lad-
derw as identified by agarose gel e lectrophoresis o fDNA ladder. CONCLUSION:The n-bu tano l extrac t ofLagotis
B revitubaMaxim can inhibit SGC-7901 ce ll g row th and induce apoptosis.
　　短管兔耳草 (Lagotis brevituba Maxim)其藏药名
为洪连 ,玄参科兔耳草属短管兔耳草种植物 ,分布于
中国西北部海拔 3000多米的高地 [ 1] 。在西藏 ,民间
将其用于治疗发热 、高血压以及急慢性肝炎 [ 2] 。中
国科学院兰州化学物理研究所史高峰等人对短管兔
耳草化学成分进行了研究 ,确定了如二苯胺 、邻苯二
甲酸丁等 41种成分 [ 3] 。有关其抑瘤的活性目前尚
未见文献报道 ,为充分开发其药用价值 ,我们对短管
兔耳草正丁醇提取物进行了抑瘤的初步研究 ,为短
管兔耳草的开发提供理论依据。
1　材料和方法
1. 1　试剂　短管兔耳草正丁醇提取物 ,甘肃理工大
学杨云裳博士提供 ,用生理盐水配制成 21. 6mg /mL
的储液 ,使用时稀释成所需的浓度;RPM I-1640购自
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Inv itrogen公司;MTT、DNA抽提试剂盒购自上海 。
1. 2　细胞培养　胃癌 SGC-7901细胞由兰州大学中
心实验室提供。细胞置于 RPM I-1640完全培养液
中 , 37 ℃、5 CO 2饱和湿度的培养箱中培养。
1. 3　MTT法测定提取物对肿瘤细胞增殖的抑制作
用 [ 4] 　MTT 5 g /L溶于 PBS中 , 4 ℃冰箱保存 。吸
取指数生长期细胞 (1. 5 ～ 2. 0 ×105 ce lls /mL) 100
μL,加入 96孔培养板中。设阴性对照组 、药物组
(0. 34 ～ 21. 6 mg /mL)和调零孔 ,每组分别设 4个复
孔 ,于 37 ℃、5 CO2饱和湿度的培养箱中培养 24
h、48 h、72 h ,实验终止前 4 h每孔加入 MTT 10 μL,
培养结束时 ,弃去上清 ,加入 DMSO150 μL,震荡器
震荡摇匀 ,用酶联免疫检测仪于 578 nm和 690 nm
波长处测定各孔的 OD值 。实验重复 3次 ,按照下
式求出抑制率:抑制率 ( ) =(对照组 OD均值 -
实验组 OD均值 ) /对照组 OD均值 ×100 。
1. 4　细胞凋亡的形态学观察　吸取指数生长期细
胞 (1. 5 ～ 2. 0 ×105 cells /mL)与 0. 34 ～ 0. 68 mg /mL
浓度的短管兔耳草正丁醇提取物共育 24 ～ 48 h,取
100μL细胞悬液涂于载玻片上 ,丫啶橙荧光染色 ,
荧光显微镜下观察细胞凋亡形态并照相[ 5] 。在电
镜下观察细胞凋亡的超微结构改变[ 6] 。
1. 5　流式细胞仪分析测定细胞凋亡率　SGC-7901
细胞与不同浓度的短管兔耳草正丁醇提取物共育
48 h,收集细胞悬液 ,用冰乙醇固定 ,置于 4 ℃的冰
箱中 24 h ,流式细胞仪测定并分析 。
1. 6　细胞群染色体 DNA断裂的测定 [ 7] 　SGC-
7901细胞(1. 5 ～ 2. 0×105 cells /mL)与不同浓度的
短管兔耳草正丁醇提取物 (1. 35 ～ 10. 8 mg /mL)共
育 48 h。收集细胞 ,用 DNA抽提试盒提取 DNA。
取 10 μL DNA溶液与 1 μL 0. 25 嗅酚蓝混匀 ,立
即加入含嗅化乙锭的1. 5 琼脂糖凝胶的样品孔中 ,
于 50 V、1×TBE缓冲液中电泳 。紫光灯下观察结
果并照相记录 。
1. 7　统计分析　所得数据用 SPSS软件 (10. 0)进
行 t-检验和 –x±s。
2　结果
2. 1　提取物对肿瘤细胞增殖的抑制作用　如表 1
所示 ,在 48 h和 72 h时 ,短管兔耳草正丁醇提取物
(21. 60 ～ 0. 34 mg /mL)对 SGC-7901细胞有明显的
抑制作用 ,且抑制作用随药物浓度的增加而增加(P
<0. 05或 P <0. 01)。
表 1　 短管兔耳草正丁醇提取物抑制人胃癌细胞 SGC-7901增值的结果 (n=6, x±s)
Con cen trat
m g /m L
24 h
OD568 - 690 nm
IR /
48 h
OD 568- 690 nm
IR /
72 h
OD 568 - 690 nm
IR
/
0. 00 1. 02±0. 11 0 1. 14±0. 01 0 0. 49±0. 02 0
0. 34 1. 27±0. 17a 2 1. 07±0. 06b 9 0. 41±0. 05b 17
0. 68 1. 00±0. 63a 11 1. 03±0. 02c 13 0. 29±0. 03c 44
1. 36 0. 91±0. 06a 13 1. 01±0. 01c 14 0. 26±0. 03c 50
2. 70 0. 79±0. 05b 23 0. 77±0. 04c 33 0. 20±0. 01c 58
5. 40 0. 64±0. 02c 37 0. 66±0. 05c 42 0. 17±0. 01c 65
10. 8 0. 64±0. 78c 38 0. 49±0. 01c 57 0. 13±0. 02c 75
21. 6 0. 49±0. 84c 52 0. 37±0. 03c 68 0. 12±0. 02c 76
　　 aP >0. 05, bP <0. 05, cP <0. 01 vs con trol IR:Inh ib itory rate( )
2. 2　细胞凋亡的形态学改变　荧光显微镜下可见
细胞体积变大 ,以及凋亡细胞的形态特征:如细胞皱
缩 、膜起泡 、核碎裂 、染色质聚集呈新月形。对照组
细胞体积如常 ,细胞呈均匀的亮点 (图 1)。透射电
镜下可见:染色质固缩并凝结成块 , 聚集在核膜周
边 ,细胞浆浓缩 、内质网变的疏松 ,细胞核裂解成碎
片 ,对照组细胞无此变化(图 2)。
2. 3　凋亡细胞百分率　流式细胞仪测定的结果显
示 , G1峰前出现亚二倍体峰 ,即凋亡细胞所形成的
凋亡峰 (AP峰 ),是凋亡细胞核固缩 、DNA裂解的特
征结果 ,可通过凋亡峰的面积测出凋亡细胞在整个
细胞群中所占的比例 。本实验凋亡细胞百分率为
4. 4 ～ 28. 8 ,而对照组细胞 G 1峰前无凋亡峰存
在(图 3)。
图 1　 SGC-7901细胞与短管兔耳草正丁醇提取物共育 48 h
的荧光显微镜形态
A对照 , ×400　B、C短管兔耳草正丁醇提取物 0. 34m g /m L
0. 68m g /m L
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图 2　SGC-7901细胞与短管兔耳草正丁醇提取物共育 48 h的投射电镜图
A对照 , ×400　B、C短管兔耳草正丁醇提取物 0. 34m g /mL, 0. 68m g /mL
图 3　流式细胞仪检测凋亡细胞百分率
A对照　B、C、D短管兔耳草正丁醇提取物分别为 0. 68 mg /mL, 1. 36 m g /m L, 2. 72m g /m L
2. 4　DNA电泳　在 1. 2 琼脂糖凝胶上进行电泳 ,
出现明显的具有生化特征的 “DNA Ladder”,而对照
组则无此特征出现(图 4)。
图 4　SGC-7901细胞培养 48 h后的琼脂糖电泳图
A对照　B、C、D、E短管兔耳草正丁醇提取物分别为 10. 8 m g /m L,
5. 4m g /m L, 2. 7 mg /mL, 1. 35 mg /mL
3　讨论
细胞凋亡属于生命过程中的一种生理现象 ,是
细胞保持功能稳定的一种方式 ,它是由基因调控的
一种主动死亡现象 ,诱导肿瘤细胞凋亡和进一步阐
明凋亡的基因调控机制是目前肿瘤治疗的研究热
点。本实验通过荧光显微镜 、透射电镜 、琼脂糖凝胶
电泳及流式细胞议多种方法的联合应用 ,首次证明
短管兔耳草正丁醇提取物在体外能够诱导胃癌
SGC-7901细胞凋亡 ,但究竟是通过何种机制诱导肿
瘤细胞凋亡有待进一步研究 。
以上表明 ,短管兔耳草正丁醇提取物很可能是
一种潜在的抗肿瘤有效部位 ,这为短管兔耳草的药
用价值开发提供了初步的实验依据。
参考文献:
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1324.
七味前列宁片对大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型的影响及抗炎镇痛
作用
雷　莹 , 　窦建卫
(西安交通大学医学院 ,陕西 西安 710061)
收稿日期:2006-02-14
作者简介:雷　莹(1982～ )女 ,硕士生 ,研究方向:中药新药的药理。联系方式:leiy ing2022@ s tu. xjtu. edu. cn
*通讯作者:窦建卫(1968～ )男 ,博士 ,副教授 ,硕士生导师 ,研究方向:中药新药的药理与临床。联系方式:d jw@m ai.l x jtu. edu. cn
关键词:七味前列宁片;慢性非细菌性前列腺炎;抗炎;镇痛
摘要:目的:观察七味前列宁片 (赤芍 、王不留行 、橘核等)对大鼠慢性非细菌性前列腺炎症模型的前列腺脏器系数和病
理组织学的影响及其对一般炎症与疼痛模型的作用。 方法:暴露大鼠膀胱背侧前列腺 , 注入 25 消痔灵注射液制备前
列腺炎模型 , 连续给药后取前列腺组织测定指标及病理检查。采用大鼠棉球肉芽肿的炎症模型和热板法的疼痛模型观
察其抗炎和镇痛作用。结果:七味前列宁片对大鼠灌胃给药 , 可减少消痔灵注射液所致前列腺炎模型大鼠的前列腺脏器
系数 、改善模型大鼠前列腺的病理变化;减轻大鼠棉球肉芽肿重量;提高热板法小鼠痛阈值。结论:七味前列宁片对大鼠
实验性慢性非细菌性前列腺炎具有治疗作用。
中图分类号:R285. 6　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2007)05-0675-04
Effects of Q iwe iQ ianliening Tablets on nonbacter ial chron ic prostatitis and its
anti-inflammatory and analgesia activ ity
LEI Y ing, 　DOU Jian-wei
(Med ica lCollege, X ian Jiaotong Un iversity , X ian 710061 , China)
KEYWORDS:Q iwe iQ ian liening Tab lets;nonbacterial chronic p rostatitls;anti-inflamma tion;analgesia
ABSTRACT:AIM:To investigate the effects ofQ iw eiQ ian liening Table ts(QLN)(Radix paeoniae rubra, Semen
V acca riae, Semen C itri re ticulatae, e tc) on nonbacterial chron ic p rostatitis and its anti-inflamma tory and analgesia
activ ity. METHODS:Nonbacteria l ch ronic prostatitismodelw as induced by injecting 25 X iao Zh iling In jection
in to the prostate o f rat and then coefficent of pro state and patho logic changes w e re observed. Anti-in flammatory
effects w ere tested by cotton pe lle-induced granuloma in ra.t Ana lgesia ac tiv ity w as tested by ho t-pla te me thod.
RESULTS:QLN inhibited the increase of pro state tissuew e ight and the histopa thology show ed reso lv ing prostatitis
in QLN-trea ted g roups compared w ith the controls. Anti-in flammatory activityw as confirmed in co tton pelle-induced
grano lum a in rat andQLN-treated g roups extended the licking-paw latency in ho t-p late me thod compared w ith the
contro ls. CONCLUSION:Q iw eiQ ianliening Tablets has prevention and treatment effect on experimental nonbac-
terial chronic prosta titis.
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