全 文 ：〔4〕Yamaguchi H，Paranawithana SＲ，Lee MW，et al. Epothilone B ana-
logue (BMS-247550)-mediated cytotoxicity through inductlon of bax
conformational change in human breast cancer cells〔J〕. Cancer Ｒes，
2002，62:466-471.
〔5〕罗立新，汪薇，潘力 . 粘细菌发酵生产新型微生物药物的初步研
究〔J〕. 食品与发酵工业，2005，31:10-12.
〔6〕韩莉莉，卢育新，王赫，等 . 培养基组成对纤维堆壤菌产埃博霉素
的影响〔J〕. 微生物学杂志，2008，28:103-106.
〔7〕Silke C，Wenze L，Ｒolf M. Myxobacteria-microbial factories for the pro-
duction of bioactive secondary metabolites〔J〕. Molecular BioSystems，
2009，5:567-574.
〔8〕吴斌辉，李越中，胡玮，等 . 纤维堆囊菌的多细胞形态发生过程
〔J〕. 微生物学报，2002，42(6) :657-661.
藤茶双氢杨梅树皮素对 SGC-7901 细胞端粒酶活性的影响
陈 俊，郑作文* ，曹思思(广西中医药大学 南宁 530001)
摘要:目的 研究双氢杨梅树皮素( DHM) 对人胃癌 SGC-7901 细胞端粒酶活性的影响。方法 应用酶联免疫分析法检测端粒酶活性。结果
双氢杨梅树皮素( 6. 7 ～ 10μg·mL －1，48h) 能抑制人胃癌 SGC-7901 细胞端粒酶活性。结论 双氢杨梅树皮素抑制 SGC-7901 细胞增殖的作
用机制可能与对端粒酶活性的抑制作用有关。
关键词:藤茶;双氢杨梅树皮素; SGC-7901 细胞;端粒酶
中图分类号:Ｒ735. 2;Ｒ979. 1 文献标识码:A 文章编号:1006-3765(2014)-07-03116-0168-02
作者简介:陈 俊，男(1983. 3 －)。毕业于广西医科大学耳鼻咽喉专
业。职 称:讲 师 /实 验 师。从 事 药 理 研 究 工 作。联 系 电 话:
13907860915，E-mail:JChen321@ 163. com
通讯作者:郑作文，男(1957 －)。教授。主要从事抗肿瘤中草药研
究。
基金项目:广西中医药大学校级课题(No. P2009025)
The effect of Dihydromyricetin (DHM)on telomerase activity of human
gastriccancer SGC-7901 cells
CHEN Jun，ZHENG Zuo-wen，CAO Si-si(Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530001，Chi-
na)
ABSTＲACT:OBJECTIVE To study the influence of Dihydromyricetin (DHM)on telomerase activity of human
gastriccancer SGC-7901 cells in vitro. METHODS The telomerase activity of human gastriccancer SGC-7901 cells
was determined by ELISA. ＲESULTS DHM (6. 7 ～ 10μg·mL －1，48 h)inhibited telomerase activity of human
gastriccancer SGC-7901 cells. CONCLUSION The action mechanism of DHM that inhibited the proliferation of
SGC-7901 cells may relate to down-regulation the activity of telomerase of human gastriccancer SGC-7901 cells.
KEY WOＲDS:Ampelopsis grossedentata (Hand. -Mazz.)W. T. Wang;Dihydromyricetin (DHM) ;SGC-7901 cells;Telomerase
藤茶系葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄的嫩茎叶加工而
成，主要分布于广西、云南、贵州、湖南、湖北、福建等省区，为
广西瑶族民间常用的草药之一。藤茶性凉味甘、淡，具有清热
解毒、消肿止痛、祛风湿等功效〔1〕。近年来对藤茶的化学成
分研究主要集中在水溶性部分，其中以黄酮类化合物为主。
双氢杨梅树皮素(DHM) ，又称蛇葡萄素，为藤茶中含量最高
的黄酮类单体化合物〔2〕，具有降血糖、保肝、抗肿瘤等作
用〔3 ～ 7〕，其中，其抗肿瘤作用是近年来研究的热点。本文研究
了 DHM体外对人胃癌 SGC-7901 细胞端粒酶活性的影响，以
探讨其抗癌作用的可能机制。
1 材料和方法
1. 1 材料
1. 1. 1 细胞株:人胃癌细胞 SGC-7901，由广西中医药大学药
理教研室冻存保藏。
1. 1. 2 药物及试剂:DHM来源于藤茶 Ampelosis grossedentata
(Hand-Mazz)W. T. Wang)的嫩茎叶，由广西中医药大学中药
化学教研室提供，纯度为 98%;ＲPMI-1640 培养基和新生牛血
清(hyclon公司) ，胰蛋白酶(GIBCO公司) ，PBS购自 Sigma公
司;人端粒酶酶联免疫检测试剂盒(Human TE Elisa Kit)购自
上海酶联试剂盒检测测定中心。
1. 1. 3 主要仪器:CKX41 型倒置显微镜(Olympus 公司) ;酶
标仪(美国 ＲT-2100 型) ，恒温水浴锅(北京市医疗设备厂) ;
电热鼓风干燥箱(上海市实验仪器总厂) ;－ 80℃超低温冰箱
(美国 Forma公司) ;Eppendorff 58108型高速冷冻离心机(德国
Eppendorff公司) ，2300型 CO2 培养箱(美国 Shellab公司)。
1. 2 方法
1. 2. 1 细胞培养:取处于对数生长期的 SGC-7901 细胞，以
0. 25%胰蛋白酶消化后，PBS 洗涤两次，计数，再用含体积分
·861·
海峡药学 2014 年 第 26 卷 第 7 期
数为 10%新生牛血清的 ＲPMI-1640 培养液将细胞浓度调为 2
× 105 个·mL －1。向培养瓶中分别加入上述细胞悬液 5mL，
置于 5% CO2、37℃，饱和湿度的孵箱中培养，24h后将培养瓶
随机分组，分别加入低、中、高剂量的 DHM，使其作用终浓度
为 4. 4、6. 7、10μg·mL －1，对照组加入等容积 ＲPMI-1640 培养
液，同等条件下继续培养 48h后取出收集细胞，调整细胞数为
1 × 106 个·mL －1，0. 01M 预冷 PBS 洗细胞 3 次，加入细胞裂
解液 300μL 冰上裂解细胞 30min;然后 4℃、12000 × g 离心
15min;取上清，每个浓度设 4 个复孔，按人端粒酶(TE)酶联
免疫分析法试剂盒说明测定细胞端粒酶的活性。另作端粒酶
活性的标准曲线:以端粒酶标准物的浓度为横坐标，测定的
OD值为纵坐标，绘制标准曲线，根据标准曲线计算出各组细
胞端粒酶的活性。
1. 2. 2 统计学方法:采用 SPSS 13. 0 软件进行统计分析，数
据以 x ± s表示，t检验显著性差异。
2 结果
DHM对 SGC-7901 细胞端粒酶活性的影响
DHM低、中、高剂量作用 SGC-7901 细胞 48h后均可抑制
SGC-7901 细胞的端粒酶活性，其各剂量组细胞内端粒酶的活
性分别为 9. 0 ± 0. 9、5. 2 ± 0. 5、1. 8 ± 0. 1U·L －1，均低于对照
组 10. 9 ± 0. 2U·L －1。其中，DHM(6. 7 ～ 10μg·mL －1) ，与对
照组比较，具有统计学差异(P ＜ 0. 05) (见表 1)。
表 1 DHM对 SGC-7901 细胞端粒酶活性的影响 (x ± s)
组别 剂量(μg·mL －1) 端粒酶活性(U·L －1)
对照组 － 10. 9 ± 0. 2
DHM 4. 4 9. 0 ± 0. 9
DHM 6. 7 5. 2 ± 0. 5*
DHM 10 1. 8 ± 0. 1*
注:各组与对照组比较，* P ＜ 0. 05
3 讨论
3. 1 藤茶是一种非常古老的中草药资源，我国壮族以及苗族
百姓将其茎叶用于感冒发热、风湿、中暑等疾病的治疗。藤茶
的主要有效成分是黄酮类化合物，该类化合物具有多种生物
活性，如抗肿瘤，抗突变，抗氧化，改善循环，提高免疫力等，其
中抗肿瘤作用较强，且毒性低、副作用小〔8〕。因此，研究黄酮
类化合物抗肿瘤作用有较广阔的开发利用前景，是目前抗肿
瘤药物研究中的热点领域。双氢杨梅树皮素是藤茶中含量最
高黄酮化合物，已有研究表明 DHM 体外对人肺癌 A549 细
胞、肝癌 H22细胞、白血病细胞 HL60、K562 以及肝癌 Bel 7402
细胞等多种肿瘤细胞均有抑制作用〔9 ～ 11〕。
肿瘤是一种细胞凋亡和增殖失衡后产生的疾病，细胞的
增殖与凋亡是在凋亡相关基因调控下进行的，肿瘤的发生是
癌基因的激活与抑癌基因的失活共同作用的结果。课题组前
期研究发现，DHM 体外对人胃癌 SGC-7901 细胞有明显的抑
制作用〔12〕。可使细胞周期阻滞在 G1 期，使得进入 S期、M期
的细胞比例降低，从而影响细胞周期进程起到抑制细胞增殖
的作用〔13〕。本研究从影响细胞端粒酶活性方面来进一步探
讨 DHM抑制人胃癌 SGC-7901 细胞增殖的作用机制。
3. 2 端粒是真核细胞染色体末端的 DNA重复序列和特异结
合蛋白的复合体。端粒酶位于细胞核内，是 ＲNA和蛋白质的
复合体，激活的端粒酶能以自身的 ＲNA 为模板合成端粒序
列，稳定端粒的长度，使细胞获得永生性。端粒酶与肿瘤的发
生和发展密切相关〔14〕。研究表明，80% ～ 90%的恶性肿瘤中
均有端粒酶的活性表达，而大多数体细胞无端粒酶的活性，由
此可见端粒酶的激活在细胞永生化及肿瘤的形成中具有十分
重要的作用。近年来端粒酶抑制剂的研究和开发为肿瘤治疗
提供了新的思路，并有可能成为肿瘤治疗的突破〔15〕。本研究
结果显示，对照组 SGC-7901 细胞端粒酶活性有较高表达，双
氢杨梅树皮素中、高剂量对端粒酶活性有较明显的抑制作用，
这对阻止恶性肿瘤细胞失控的增殖有着重要意义。已有研究
发现，p53 基因突变可导致端粒酶激活〔16〕。而本课题组同步
研究发现 DHM可明显上调 SGC-7901 细胞中野生型 p53 基因
的表达(还未发表)。由此推测，DHM可能是通过影响 p53 基
因的表达来抑制端粒酶活性，从而发挥其抑制癌细胞增殖等
抗肿瘤作用。有关 DHM抗肿瘤作用的其它机制尚在进一步
研究中。
参考文献
〔1〕覃骊兰 . 藤茶的化学成分及药理作用研究进展〔J〕. 上海中医药
杂志，2008，06:94-96.
〔2〕周天达，周雪仙 . 藤茶中双氢黄酮醇的分离、结构鉴定及其药理
活性〔J〕. 中国药学杂志，1996，08:10-13.
〔3〕郑作文，曾春晖，林英辉 . 广西藤茶中双氢杨梅树皮素对小鼠急
性肝损伤的保护作用〔J〕. 广西中医学院学报，2002，03:10-11.
〔4〕钟正贤，周桂芬，陈学芬，覃洁萍 . 广西藤茶中双氢杨梅树皮素保
肝作用的实验研究〔J〕. 中国中医药科技，2002，03:155-156，128.
〔5〕覃洁萍，钟正贤，周桂芬，陈学芬 . 双氢杨梅树皮素降血糖的实验
研究〔J〕. 中国现代应用药学，2001，05:351-353.
〔6〕莫可元，郑作文，阎莉，陈英 . 双氢杨梅树皮素抗肉瘤 S_(180)的
体外实验〔J〕. 中国医院药学杂志，2007，04:483-485.
〔7〕张玉萌，郑作文，郭成贤，伦玉宁 . 藤茶双氢杨梅树皮素诱导人肺
癌 A549 细胞凋亡及其机制研究〔J〕. 中国药物应用与监测，
2008，05:16-18.
〔8〕陈国有，齐鹤，徐东花 . 黄酮类化合物的生物活性研究进展〔J〕.
黑龙江医药，2008，21(3) :81-82.
〔9〕郑作文，阎莉 . 藤茶双氢杨梅树皮素抗肝癌 H_(22)的实验研究
〔J〕. 中医药学刊，2006，09:1627-1629.
〔10〕张玉萌，郑作文，郭成贤，伦玉宁 . 藤茶双氢杨梅树皮素诱导人
肺癌 A549 细胞凋亡及其机制研究〔J〕. 中国药物应用与监测，
2008，05:16-18.
〔11〕周宁宁，朱孝峰，谢冰芬，冯公侃，刘德育 . 无刺根中蛇葡萄素体
外抗肿瘤作用研究〔J〕. 广东药学，2000，04:7-8.
〔12〕郑作文，郭成贤，唐云丽，张玉萌 . 藤茶蛇葡萄素抗人胃癌细胞
作用的实验研究〔J〕. 中国药物应用与监测，2007，01:29-31.
〔13〕郑作文，吕林艳，王小琴，陶林 . 蛇葡萄素诱导人胃癌细胞凋亡
的研究〔J〕. 中国实验方剂学杂志，2012，24:292-294.
〔14〕应作霖，孙建方 . 端粒酶和肿瘤〔J〕. 国外医学 . 皮肤性病学分
册，2000，03:160-162.
〔15〕张景泽，杨智勇，丁鹏 . 端粒酶抑制剂用于肿瘤治疗的研究新进
展〔J〕. 中国老年学杂志，2009，07:903-905.
〔16〕张秀峰，唐文如，罗瑛 . 衰老或肿瘤:端粒酶和 p53 的相互作用
〔J〕. 遗传，2009，05:451-456.
·961·
Strait Pharmaceutical Journal Vol 26 No. 7 2014