全 文 ：DOI:10． 13463 / j． cnki． cczyy． 2016． 02． 016
千年健寒热药性的实验评价
王 征1，刘建利2，唐志书1* ，宋忠兴1
(1．陕西中医药大学 陕西省中药资源产业化协同创新中心，陕西省中药基础与新药研究重点实验室
陕西省风湿与肿瘤类中药制剂工程技术研究中心，陕西 咸阳 712083;
2．西北大学生命科学学院 西部资源与现代生物技术教育部重点实验室，西安 710069)
摘要:目的 通过前期建立的中药寒热药性的细胞评价方法评价中药千年健的寒热药性。方法 用噻唑
蓝(MTT)比色法考察千年健对 SGC-7901 细胞体外增殖的影响，倒置显微镜观察千年健对细胞形态特征的影
响，台盼蓝染色法分析千年健的细胞毒作用。结果 千年健在 5 μg /mL(含 5 μg /mL)以下对细胞生长有促进
作用。形态学观察表明千年健在 5 μg /mL(含 5 μg /mL)以下使细胞密度增加，细胞结构致密、生长旺盛。台盼蓝
染色表明千年健对这 2种细胞没有细胞毒作用。结论 千年健药性应为温热，且对所用细胞没有细胞毒作用。
关键词:千年健;寒热药性;MTT法;SGC-7901 细胞;台盼蓝染色
中图分类号:Ｒ285． 1 文献标志码:A 文章编号:2095 － 6258(2016)02 － 0266 － 03
基金项目:国家自然科学基金(20872118) ;教育部博士点基金(20070697012) ;陕西省重点科技创新团队(2012KCT-20)。
作者简介:王 征(1980 －) ，男，中药学博士，讲师，主要从事中药活性成分的仿生合成与结构修饰研究。
* 通信作者:唐志书，教授，电子信箱 － tzs6565@ 163． com
Evaluating cold and hot characteristic of Homalomena occulta (Lour．)
Schott by experimental method
WANG Zheng1，LIU，Jianli2，TANG Zhishu1* ，SONG Zhongxing1
(1． Shaanxi Collaborative Innovation Center of Chinese Medicinal Ｒesources Industrialization，Shaanxi province key
laboratory of new drugs and Chinese medicine foundation research，Shaanxi rheumatism and tumor center
of TCM engineering technology research，Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712083，China;
2． Key Laboratory of Ｒesource Biology and Biotechnology in Western China，Ministry of Education，College
of Life Science，Northwest University，Xi’an 710069，China)
Abstract:Objective Evaluate the cold and hot characteristic of Homalomena occulta (Lour．)Schott by cellu-
lar models．Methods MTT assay was used to investigate the effect of Homalomena occulta (Lour．)Schott on the
growth of SGC-7901 in vitro． Morphological changes of SGC-7901 treated with Homalomena occulta (Lour．)Schott
were observed through invert microscope． Trypan-blue staining was used to analyze the cytotoxicity of Homalomena oc-
culta (Lour．)Schott． Ｒesults Homalomena occulta (Lour．)Schott can promote the growth and proliferation of
SGC-7901 in the concentration range of 2-5 μg /mL． Morphological observation showed Homalomena occulta (Lour．)
Schott could increase the density of SGC-7901 in the same concentration range． Trypan-blue staining showed Homa-
lomena occulta (Lour．)Schott had no cytotoxicity on SGC-7901． Conclusion The results reveal in this work that
Homalomena occulta (Lour．)Schott shows a hot or warm characteristic and have no cytotoxicity．
Keywords:Homalomena occulta (Lour．)Schott;cold and hot characteristic;MTT assay;SGC-7901;trypan-blue
staining
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第32卷第2期
2016 年 4 月
长 春 中 医 药 大 学 学 报
Journal of Changchun University of Chinese Medicine
Vol. 32 No． 2
Apr． 2016
千年健始载于《本草纲目拾遗卷五》，为天南星
科多年生草本植物千年健 Homalomena occulta
(Lour．)Schott的根茎［1］。《本草再新》言其味苦，性
寒。《中药学》认为其味苦，性温［2］。上述文献表明
对千年健寒热药性的认识存在分歧，为了对其寒热属
性有一个客观的认识，有必要进行实验研究。本实验
室在前期的工作中，基于细胞模型建立了评价中药寒
热药性的方法［3-5］。该方法基于温热药可以使生物体
的生理功能亢奋，而寒凉药则使得生物体生理功能表
现为抑制［6］。用动物模型也可得出同样的结论，即
用寒药造模可以使动物的体温降低，中枢兴奋抑制以
及代谢减慢，而热药的作用则相反［7-8］。由此可以推
测，寒热药对生物体最小的组成单位细胞也应该有一
定的影响，即寒药会抑制细胞的生长增殖，而热药则
会表现出促进作用。在前期的工作中已经验证了这
一想法，已用本法对野菊花、白头翁、丹参及白薇等寒
热药性文献记载不一的中药药性进行了实验评价。
本文用 MTT 法对寒热药性进行评价，MTT 进入活细
胞后被线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原为蓝紫色的甲
臜(Formazan)结晶并在细胞中沉积。结晶可以被二
甲基亚砜(DMSO)溶解，并在 490 nm 波长处具有最
大吸收，以此间接反映活细胞数量［9］。台盼蓝染色
(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的方法。
由于细胞死亡后细胞膜的完整性丧失，通透性增加，
因此细胞可以被台盼蓝染成蓝色，而活细胞由于细胞
膜的存在而使得台盼蓝难于进入细胞内。经染色后
的细胞可以通过显微镜观察，经细胞计数对细胞存活
率进行比较精确地分析。
1 材料
1． 1 细胞株 人胃癌细胞株 SGC-7901，由第四军医
大学提供。
1． 2 实验仪器 μQuant 酶标仪(美国 Bio-Tek)、CO2 培
养箱(Sanyo公司)、细胞 96 孔培养板、普通倒置光学显
微镜、超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司)。
1． 3 药品与试剂 千年健(购自西安藻露堂医药超
市，经西北大学生命科学学院房敏峰高级工程师鉴定
为正品药材)、HyClone改良型 ＲPMI-1640 培养液(赛
默飞世尔生物化学制品北京有限公司)、四季青无支
原体胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公
司)、MTT、二甲基亚砜(DMSO)、PBS(磷酸缓冲液)、
0． 25%胰蛋白酶(西安舟鼎国生物技术有限公司)、
台盼蓝染料(西安沃尔森生物技术有限公司)。
2 方法
2． 1 受试药品溶液的制备 称取千年健 20 g，煎煮
3 次，30 min /次，合并煎液，浓缩，定容至 20 mL，质量
浓度为 1 g /mL。药液 10 000 r /min，离心30 min，上
清液用 0． 22 μm 的微孔滤膜滤过，无菌水稀释至
10 mg /mL，备用。
2． 2 细胞培养 将 SGC-7901 细胞在含有 10% 胎牛
血清的 ＲPMI-1640 培养液(pH 7． 0 ～ 7． 4)、37 ℃恒
温培养箱中、5%CO2 及饱和湿度条件下进行传代培
养。
2． 3 MTT试验 取对数生长期、密度为 5 × 107 /L的
SGC-7901 细胞接种于含 200 μL ＲPMI-1640 培养基
的 96 孔板上，置于恒温培养箱中培养 24 h，待细胞贴
壁后更换新鲜培养液(200 μL /孔) ，实验组设 8 个浓
度梯度，分别为 2、5、10、20、50、100、200、400 μg /mL，
每个浓度设 3 个重复孔。加药完毕后 96 孔板置于恒
温培养箱中培养 48 h后更换培养基(180 μL /孔) ，然
后加入新鲜配制的 MTT溶液(5 g /L)20 μL。继续培
养 4 h 后，吸弃上清液，每孔加入 150 μL DMSO，在
37 ℃恒温摇床上震荡 10 min(60 次 /min)后，测定
490 nm处吸光度(A)值。按下列公式计算细胞抑制
率［10］，实验重复 3 次。
2． 4 台盼蓝染色 参照 2． 3 中步骤将对数生长期细
胞用 0． 25%的胰蛋白酶消化后接种于 96 孔板培养
48 h后，更换新鲜培养基，每孔加入 20 μL、0． 4%的
台盼蓝染液，作用 5 min后在普通光镜下观察。
2． 5 统计学处理 数据以均数 ±标准差(珋x ± s)表
示，组间比较采用方差分析。
3 结果
3． 1 MTT 法检测 用 MTT 法分别检测千年健在
2 ～ 400 μg /mL浓度范围内 SGC-7901 细胞体外增殖
的影响 见表 1。
表 1 千年健对 SGC-7901 细胞体外增殖的影响(珋x ± s，n = 3)
浓度 /(μg /mL) 2 5 10 20 50 100 200 400 空白
A值 0． 986 ± 0． 011## 0． 842 ± 0． 008 0． 717 ± 0． 009# 0． 669 ± 0． 003# 0． 672 ± 0． 029# 0． 602 ± 0． 023## 0． 621 ± 0． 141# 0． 537 ± 0． 003## 0． 839 ± 0． 008
抑制率 /% -17． 52 -0． 36 14． 54 20． 26 19． 90 28． 25 25． 98 35． 99 —
注:与对照组比较，# P ＜ 0． 05，## P ＜ 0． 01
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从表 1 可以看出，千年健浓度为 2、5 μg /mL 时，
可以促进 SGC-7901 细胞的增殖。在 2 μg /mL 浓度
下促进作用显著，抑制率为 17． 52%，而随着浓度的
增大促进作用逐渐减弱，在 5 μg /mL 浓度下几乎对
细胞的生长增殖不起作用。而当浓度大于 5 μg /mL
时则对 SGC-7901 细胞的生长增殖表现出抑制作用。
为了能更加直观的看出千年健对 SGC-7901 细胞的
抑制率随浓度变化的趋势，以抑制率对浓度作图，所
得曲线见图 1。
图 1 千年健对 SGC-7901 细胞增殖抑制率变化
从图 1 中可以直观的看到千年健对 SGC-7901 细
胞增殖的作用随浓度从低到高而表现为先促进后抑
制，抑制作用与浓度的增大有关，并且随着浓度的进
一步增大，抑制作用还会加强。根据笔者以前所得实
验结果判断，千年健性温热。此与《中药学》所述一
致，并为《中药学》所述提供了有力的实验证据支撑。
3． 2 千年健对 SGC-7901 细胞形态的影响 观察对
照组与加药组在倒置显微镜下的观察拍照的照片。
选取 2、400 μg /mL浓度下的细胞照片与空白对
照组照片比较。可以清楚的看到与空白对照组相比
较，2 μg /mL 浓度下的细胞密度增加，而 400 μg /mL
浓度下细胞密度明显降低，细胞形态也发生变化。正
常的 SGC-7901 细胞呈不规则的多边形，细胞核膜、
核仁轮廓明显，细胞延展且扁平。在 2 μg /mL浓度下
细胞形态良好，结构致密，生长旺盛。而 400 μg /mL处
细胞密度明显下降，细胞变圆，细胞颗粒感增加。
3． 3 台盼蓝染色 SGC-7901 细胞经台盼蓝染色后
均未见有着色细胞，说明千年健在本实验所选浓度范
围内对 SGC-7901 细胞没有细胞毒作用。
4 结论
千年健作为一种传统的中药，历来对其寒热药性
说法不一。《本草再新》言其味苦，性寒，而《中药学》
认为其性温。寒热药性多是历代医家根据自己的用
药经验总结而来，长期以来缺少一个科学的评价寒热
药性的实验方法，因而无法形成统一的认识。依据所
建立的评价中药寒热药性的方法，通过 MTT 法检测
了千年健对 SGC-7901 细胞体外增殖的影响，在低浓
度下千年健对 SGC-7901 细胞的增殖表现为促进作
用，而当浓度大于 5 μg /mL 时则表现出抑制作用。
且经过台盼蓝染色观察到千年健对 SGC-7901 细胞
不产生细胞毒性。根据热药可能会促进细胞生长、增
殖，而寒药会表现为抑制，可以得出千年健性温热这
一科学的结论。这与《中药学》所载一致，并且为《中
药学》的观点提供了科学的实验证据支撑。
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(收稿日期:2015 － 09 － 25)
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