全 文 ：第 31卷第 1期
2007年 1月 　　　　　　　　　　
水　产　学　报
JOURNALOF FISHERIES OF CH INA
　　　　　　　　　　　　Vo.l 31, No. 1　
Jan. , 2007　
文章编号:1000 - 0615(2007)01 - 0105 - 07
收稿日期:2006-06-02
资助项目:国家自然科学基金(40676077);福建省科技重大专项资助项目(2004NZ03)
作者简介:谢潮添(1977 -),男 ,福建龙岩人 ,讲师,博士 ,主要从事海藻分子生物学研究。 E-mail:ctx ie@ 126. com
通讯作者:陈昌生 , E-mai l:cschen@ jmu. edu. cn
ISSR标记在坛紫菜不同色泽丝状体
种质鉴定中的应用
谢潮添 , 　纪德华 , 　陈昌生 , 　徐　燕 , 　张　元
(集美大学水产学院 ,福建 厦门　361021)
摘要:用 ISSR分子标记技术对 4个不同色泽坛紫菜(Porphyra haitanensis)丝状体品系 (分别为
桔黄色 ,褐绿色 ,棕红色和紫色)及 1个野生型对照丝状体品系 (褐红色 )进行了遗传分析 ,共
筛选出 11条引物 , PCR反应得到了 129个扩增位点 ,多态位点比率达 88. 4%,有效等位基因
数为 1. 6369,期望杂合度为 0. 3609, Shannon多样性指数为 0. 5265;根据 Nei方法计算了这 5
个坛紫菜丝状体品系间的遗传相似性系数和遗传距离 ,结果发现 4个不同色泽丝状体间的平
均遗传距离为 0. 5727,它们同野生型对照的平均遗传距离为 0. 6564,同时应用 UPMGA法对
它们进行了聚类分析。最后应用引物 812扩增的 4个多态性位点构建了这 5个不同坛紫菜丝
状体的 DNA指纹图谱 ,使每一品系都具有独特的 DNA指纹 ,并将其转化成了计算机可以识
别的数码指纹 ,可以方便地应用于坛紫菜丝状体的种质鉴定中 。结果表明 ISSR分子标记技
术可以作为坛紫菜丝状体种质鉴定的有效技术手段 ,提供快捷 、准确的鉴定结果 。
关键词:坛紫菜;ISSR标记;遗传分析;种质鉴定
中图分类号:S 917. 3　　　　　　　文献标识码:A
Application of ISSR markers in germplasm identification of
different color’ sPorphyra ha itanensis filam ent strains
XIE Chao-tian, JIDe-hua, CHEN Chang-sheng, XU Yan , ZHANG Yuan
(College of F isheries, J im ei University, X iam en　361021, China)
Abstract:Parphyra ha itanensis is the m ost econom ically im portant seaweeds in south China. ISSR ( inter-
simple sequence repeat)markers were applied to analyze the genetic variation am ong 4 d ifferen t color’ sP.
haitanensis filam en t lines (saffron , green, brown and purp le) and a w ild-type line (maroon). 11 ISSR
prim ers (selected from 35 primers) gave rise to 129 discernible DNA bands ofwhich 114 (88. 4%)were
polym orph ic;E ffective num ber of a lle les (Ne), expected heterozygosity (h) and Shannon’ s inform a tion
index (I)were 1. 6369, 0. 3609 and 0. 5265 respectively wh ich were also calculated from the ISSR results
by software popgene 1. 32;Genetic sim ilarity (GS) and gene tic distances (GD) were calculated by using
Ne i’ s m atching coefficien t, the averageGD am ong the 4 different color’ s filam en t lines is 0. 5727, and the
average GD between the 4 different color’ s filam en t lines and the w ild-type filam en t line is 0. 6564, all
these resu lts indicating a considerab le gene tic variation am ong the 5 filam en t lines. UPGMA c luster analysis
based on Ne i’ s genetic distances d ivided the 5 filam ent lines into three groups:the saffron and green in one
group , the brown and purp le in the other group and thew ild-type line (maroon) in ano ther group. Thenwe
used the 4 polymorphic bands amp lified from the primer 812 to construct the DNA fingerprints of the 5P.
haitanensis filam en t lines, in the constructed DNA fingerprints, each P. haitanensis filam ent line has its
unique fingerprinting pattern and can be easily distinguished from each other. A t last we transform ed the
DNA fingerprints in to digital fingerprints wh ich can be recognized by computer to predigest the varie ty
identified process. A ll the results of this paper show that the ISSR m arker is a useful technique in the varie ty
identification ofP. haitanensis, which can offer the correct resu lts quicker than otherm olecularm arkers.
Key words:Porphyra haitanensis;ISSR m arker;gene tic analysis;germp lasm identification
　　紫菜是目前世界上人工养殖经济价值最高
的一类海藻 , 2003年我国的紫菜产量已位居世界
首位[ 1] 。坛紫菜(Porphyra haitanensis)和条斑紫
菜 (Porphyra yezoensis)是我国紫菜人工养殖的两
个主要种类 ,其中坛紫菜原产于福建 ,上世纪 70
年代后推广到浙江沿海 ,目前已成为闽浙沿海的
支柱产业 ,其产量占全国紫菜产量的 80%左右 ,
是我国特有的暖温带性种类。
坛紫菜种质资源的收集 、鉴定 、评价和保存是
坛紫菜常规育种和基因工程育种的重要基础 ,近
年来 ,随着基础研究的加强和生物技术的采用 ,带
动了坛紫菜育种和栽培技术的快速发展 ,新的栽
培品系不断出现 。然而由于紫菜大多数形态性状
非常容易受到环境因素的影响 ,可描述的特征也
有限 ,以往主要依靠形态学特征的紫菜分类方法
已经很难满足现代紫菜分类 、种质鉴定 、新品种选
育和产权保护的要求 。分子标记技术的出现为这
一问题的解决带来了契机 ,在国外 ,分子标记技术
已经在紫菜遗传多样性分析[ 2 - 3] 、杂种优势性状
跟踪[ 4] 、种质鉴定 [ 5 -6] 、基因定位以及遗传图谱构
建 [ 7]等中得到了广泛应用 。国内也在这方面进
行了一定程度的尝试 ,采用 RAPD、AFLP、 ISSR
等分子标记技术分析了各种紫菜的遗传多样
性 [ 8 - 13] ,并对 RAPD技术在紫菜种质鉴定中的应
用进行了初步探索[ 14 - 16] ,但迄今为止 ,将 ISSR标
记应用于海藻研究的报道还很少 ,国内仅见用
ISSR标记对几个江蓠属海藻的遗传变异进行分
析的报导[ 17] 。
紫菜自由丝状体是紫菜生活史中的二倍体阶
段 ,是进行遗传和育种研究的主要材料 ,也是紫菜
种苗生产中的关键一环 ,但是自由丝状体无法从
外观 、形态进行鉴定 ,专门研究紫菜丝状体种质鉴
定的文章也很少 ,因此本研究的目的是采用 ISSR
分子标记技术对本实验室分离出来的不同色泽坛
紫菜自由丝状体进行遗传变异分析 ,建立各品系
丝状体的 DNA指纹图谱 ,旨在建立一套适合于
坛紫菜自由丝状体种质鉴定的分子标记技术 ,为
进一步的分子标记辅助坛紫菜育种奠定基础。
1　材料与方法
1. 1　材料
坛紫菜材料 4个不同色泽坛紫菜自由丝状
体样本均为本实验室通过诱变育种技术选育 、纯
化并保存于福建省坛紫菜种质资源库中的品系
(表 1),它们同野生型对照品系一起置于 20 ℃,
光照强度 1 000 ～ 1 500 lx,光周期为 12 h(光 )∶12
h (暗 )的条件下培养。
表 1　实验所用坛紫菜丝状体品系及其颜色
Tab. 1　The colors ofP. haitanensis
filam en t lin es in th is study
丝状体品系 filamen t lines 色泽 co lo r
1 桔黄色 saffron
2 褐绿色 breen
3 棕红色 brown
4 紫色 purp le
野生型 w ild-type 褐红色 maroon
试剂与引物　　DNA提取所用生化试剂均
购置于上海生工生物工程有限公司 ,而 PCR扩增
所需试剂均由大连宝生物工程有限公司提供。所
采用的引物依据加拿大哥伦比亚大学设计的
ISSR引物选取 35条由大连宝生物工程有限公司
合成。
1. 2　方法
DNA提取及检测　　收集培养液中培养的
各品系自由丝状体用滤纸吸干后 ,取 0. 5 g置于
微型匀浆机中进行高速匀浆 , 然后采用传统的
106 水　产　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　31卷
CTAB法 [ 18]稍作改良后进行 DNA的提取和纯
化 ,在 1. 0%的琼脂糖凝胶电泳中检查所提取
DNA的完整性 ,并在 Beckman DU - 600核酸蛋
白紫外分析仪上测定 DNA浓度。
ISSR分析　　按照本实验室建立的坛紫菜
ISSR标准反应体系进行 , 25 μL的反应体系中含
2. 5 μL 10 ×PCR Buffer, 5 ng模板 DNA , 2. 5
mmol L- 1M g2+ , 1. 5 U Taq酶 , 200 nmol L- 1
引物 , 200 μmol L- 1 dNTP。 PCR扩增在美国
M JRersearch PTC - 200型 PCR仪上进行 ,具体
程序为:94℃预变性 7m in;每个循环 94℃变性 1
m in , 48 ℃复性 45 s, 72 ℃延伸 2 m in,共进行 35
个循环;循环结束后 72 ℃再延伸 7m in。扩增结
束后 ,取 6 μL扩增产物在 1. 5%琼脂糖胶中电
泳 ,经 EB染色后观察结果并拍照 。
数据分析　　以电泳后扩增条带的清晰度 ,
可重复性为标准用于 ISSR的标记分析。将每一
样品电泳图谱中每一条带的迁移位置记为一个位
点 ,相同迁移位置扩增条带的有无分别记为 1和
0, 输入计算机形成 1、 0矩阵 , 然后应用软件
POPGENE 1. 32,假定这些 ISSR标记位点处于
Hardy-Weinberg平衡状态 ,分别统计以下参数:
(1)多态位点百分数(P);
(2)遗传相似性系数(GS)和遗传距离 (GD);
(3)平均每个位点的观察等位基因数 (Na);
(4)平均每个位点的有效等位基因数 (Ne);
(5)期望杂合度(h);
(6)Shannon多样性指数(I)
聚类分析　　根据遗传距离计算结果 ,采用
算数平均数的非加权成组配对法 (UPGMA法 )进
行聚类分析 。使用软件为 NTSYSpc 2. 10e。
指纹图谱构建　　构建图谱时依据用最少引
物 、最少条带 、又要把所有供试样品逐个区分开来
的原则 ,从扩增的大量条带中选取稳定性和重复
性良好 、多态性又高的条带 ,用于构建这 5个坛紫
菜自由丝状体品系的 DNA指纹图谱 ,使得在该
DNA指纹图谱中 , 每个材料都具有其特异的
DNA指纹。最后根据带的有 /无分别记为 1 /0的
方法 ,将 DNA指纹图谱转化为计算机可以识别
的数码指纹 。
2　结果与分析
2. 1　ISSR分析结果
在 ISSR扩增实验中 ,以提取的 5个自由丝状
体品系基因组 DNA为模板进行引物筛选 ,结果从
35条 ISSR引物中筛选出 11条引物 ,可以扩增出
清晰稳定 ,重复性好 ,多态性高的条带 (部分引物
的扩增结果见图 1)。这 11条引物共扩增出 129
个位点 ,其中 114个位点具有多态性 ,多态位点百
分率(P)为 88. 4%。每个引物扩增的位点数为 6 ～
15个 ,平均每个引物扩增的位点数为 11. 7个 ,扩
增的条带大小在 400 ～ 3 500 bp之间 。引物序列
及其扩增结果见表 2。
图 1　部分引物(A:807;B:812;C:825;D:826)的 ISSR扩增结果
F ig. 1　The ISSR amplification products of par tia l pr imers(A:807;B:812;C:825;D:826)
ob tained from the 5 P. haitanensis f ilaments
1 - 4:不同色泽丝状体品系 1、 2、 3、 4;5:野生型对照;M:分子量标记
1 - 4:The P. ha itanensis filam en ts of 4 d ifferent co lor lin es 1、2, 3, 4;
5:The P. ha itanensis filam en ts of w ild-type strain s;M:M arker
1071期　　　　　　　　　　谢潮添 , 等:ISSR标记在坛紫菜不同色泽丝状体种质鉴定中的应用
表 2　 ISSR引物 、序列及扩增后产生的不同带型数
Tab. 2　Nam e of ISSR pr imers, sequence and bands a fter amp lificat ion
引物名称
prim ers
引物序列(5- 3)
sequen ce
总位点数
total bands
多态位点数
po lymorph ic bands
ISSR扩增位点
bands of ISSR amp lification
1 2 3 4
野生型
w ild type
807 (AG)8T 12 11 3 10 5 7 6
808 (AG)8C 9 9 3 5 3 2 4
810 (GA)8T 12 12 5 8 9 9 4
812 (GA)8A 15 13 6 7 11 7 8
816 (GA)8T 10 9 4 4 7 9 2
817 (CA)8A 15 14 7 7 6 6 8
820 (GT)8C 6 5 2 2 3 5 3
821 (CA)8T 14 10 6 9 13 11 8
825 (AC)8T 15 12 8 10 9 7 7
826 (GT)8C 13 13 2 4 8 10 5
830 (TG)8G 8 6 4 4 5 4 5
合计 total 129 114 50 70 79 77 60
2. 2　各品系坛紫菜丝状体间的遗传相似性
将扩增出的 DNA条带记录在 1 /0矩阵中 ,
通过 Nei的方法 ,分别计算得到的遗传相似性系
数 (GS)和遗传距离 (GD)见表 3。 4个不同色泽
自由丝状体的遗传距离在 0. 4410至 0. 7655之
间 ,平均为 0. 5727,而这 4个不同色泽丝状体与
野生型对照的遗传距离在 0. 5031至 0. 7655之
间 ,平均为 0. 6564。
　　5个坛紫菜丝状体品系的遗传变异分析结果
见表 4,从表中可以看出 , 4个不同色泽丝状体之
间的有效等位基因数为 1. 5736,期望杂合度为
0. 3246, Shannon多样性指数指数为 0. 4714。而
它们同野生型对照之间进行比较 ,则有效等位基
因数为 1. 6369,期望杂合度为 0. 3609, Shannon多
样性指数为 0. 5265。
2. 3　各品系坛紫菜丝状体的聚类分析
根据坛紫菜之间的 Ne i遗传距离进行
UPGMA聚类分析 ,结果见图 2。从图 2可以看
出 ,这 5个坛紫菜丝状体可以分为 3群 ,品系 1和
2聚合 , 3和 4聚合 , 1, 2聚合之后先与野生型对
照聚合 ,然后才同 3、4聚合 。
表 3　5个坛紫菜丝状体品系的遗传相似性系数 GS(对角线上方 )和遗传距离 GD(对角线下方)
Tab. 3　Genet ic sim ilarity(above d iagonal) and genetic d istances
(be low d iagona l)matrix be tween the 5 P. haitanensis f ilam ent strains
1 2 3 4
野生型
w ild type
1 0. 6434 0. 5814 0. 4651 0. 6047
2 0. 4410 0. 5659 0. 5271 0. 5271
3 0. 5423 0. 5694 0. 6202 0. 4651
4 0. 7655 0. 6403 0. 4778 0. 4884
野生型 w ild type 0. 5031 0. 6403 0. 7655 0. 7167
表 4　5个坛紫菜丝状体品系的遗传变异统计结果
Tab. 4　The genet ic var iation statist ics am ong the 5 P. haitanensis filam ent strains
参数
param eter
等位基因数(Na)
number of alleles
有效等位基因数(Ne)
effective n umber of al leles
期望杂合度(H)
exp ected heterozygosity
Shannon多样性指数(I)
Shannons in formation index
4个不同色泽丝状体间
among 4 filam en t s trains
1. 7752±0. 4191 1. 5736±0. 3530 0. 3246±0. 1832 0. 4714±0. 2608
5个间丝状体
(包括野生型对照)
among 5 filam en t s trains
( include the w ild-type)
1. 8837±0. 3218 1. 6369±0. 3144 0. 3609±0. 1514 0. 5265±0. 2081
108 水　产　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　31卷
图 2　5个坛紫菜丝状体品系基于 N e i的
遗传距离的 UPGMA聚类结果
F ig. 2　Dendrogram of UPGMA cluster ana lysis based
on N e is gene tic distances among the 5 P. haitanensis
f ilament stra ins
2. 4　指纹图谱构建
由于样本数比较少 ,而且坛紫菜丝状体 ISSR
扩增的多态性又比较高 , 11条引物中 , 除引物
808、820和 830外 ,其余引物都只用 1条引物就
能将供试的 5个坛紫菜品系完全分开 。但是根据
使用最少引物 ,最少条带 ,能将所有供试样品完全
分开的原则 ,以及选取的条带要求具有稳定性和
重复性良好 、多态性高的特点 ,从 812引物扩增出
来的 15条带中选取了 4个条带用于构建这 5个
坛紫菜自由丝状体品系的 DNA指纹图谱 (图 3),
并将其转化成计算机可以识别的数码指纹 (表
5),便于计算机的识别处理 。
图 3　5个坛紫菜自由丝状体品系的 DNA指纹图谱
F ig. 3　The ISSR f ingerprin ts of 5
P. haitanensis f ilam ent stra ins
3　讨论
3. 1　ISSR分子标记技术在坛紫菜种质鉴定中的
应用　　紫菜自由丝状体是紫菜生活史中的二倍
体阶段 ,是紫菜种质保存的重要形式 。由于坛紫
菜叶状体阶段大部分为雌雄异体 ,成熟后放散的
雌雄配子体很容易就发生杂交 ,这样就导致坛紫
菜不像条斑紫菜容易获得性状稳定的纯系丝状
体 ,因此对于坛紫菜自由丝状体种质鉴定的研究
表 5　5个坛紫菜自由丝状体品系的
计算机化 DNA指纹图谱
Tab. 5　The com puterized f ingerpr in ts
of 5 P. haitanensis filam en t strain s
坛紫菜丝状体品系
P. ha itanensis filam ent strains
计算机化 DNA指纹
compu terizedDNA fingerprints
1 1100
2 0101
3 0100
4 0010
野生型 w ild-type 1001
长期滞后[ 19] ,造成选育出来的良种经常同其它品
种混淆 ,无法得到确实有效的保存和延续。分子
标记的出现就为这一问题的解决带来契机 ,由
DNA标记技术所产生的 DNA指纹图谱分析 ,可
从 DNA水平上反映植物个体间的差异 ,最大程
度减少其他因素的干扰 ,使植物的分类和鉴定更
加准确和真实 ,因此在品种鉴定 ,新品种注册 ,种
质真实性和纯度检验等方面很有效 [ 20] 。近年来 ,
本实验室通过现代细胞工程育种 、单克隆育种以
及人工诱变育种等现代生物技术和传统育种技术
的结合 ,分离和培养出了多个不同色泽的坛紫菜
纯系丝状体 ,各个纯系丝状体间很容易从色泽上
加以区分 ,因此这些不同色泽的丝状体就为探讨
分子标记在坛紫菜种质鉴定中的作用提供了条
件 。
从实验结果中可以看出 ,坛紫菜不同品系丝
状体 ISSR扩增结果存在着较为丰富的多态位
点 , 129个位点中只有 15个单态位点 , 其余 114
个为多态性位点 ,多态性比率达 88. 4%,这一点
同 Jia等 [ 14] 、王勇等[ 21]及陈骁等 [ 10] 采用 RAPD
技术在坛紫菜中的研究结果是一致的 ,说明 ISSR
技术同 RAPD技术一样 ,可以对坛紫菜的遗传背
景进行高效的分析 ,找出它们之间的差异。同时
在指纹图谱构建中 ,发现很多引物都可以在只使
用一条引物的情况下就将 5个供试品系完全分
开 ,每一品系都具有独特的 DNA指纹 ,由此表明
ISSR分子标记技术可以作为坛紫菜种质鉴定的
有效的技术手段 。而且基于 ISSR技术本身具有
的稳定性和重复性好 ,操作简单等优点 [ 22] ,其在
坛紫菜丝状体种质鉴定中的应用 ,可以提供了比
RAPD、AFLP等更为快捷 、稳定 、准确的鉴定结
果 。此外作者还根据贾建航等 [ 23]的方法 ,将坛紫
菜不同丝状体的 DNA指纹图谱转化成了计算机
1091期　　　　　　　　　　谢潮添 , 等:ISSR标记在坛紫菜不同色泽丝状体种质鉴定中的应用
可以识别的数码指纹 ,这就使得在实际进行种质
鉴定时 ,只需对每个待鉴定样品进行指定引物的
ISSR扩增 ,获得其 DNA数码指纹 ,然后将每个样
品的数码指纹输入电脑 ,电脑通过计算并可自动
给出该样品属于已建库品系中的哪一个 ,如果该
样品不属于已建库品系中的任何一个 ,则电脑会
显示这是一个新材料 ,并给出该样品与每个建库
品系的相似系数 ,这样就大大方便了坛紫菜的种
质鉴定工作 ,实现种质资源库的计算机化管理 。
3. 2　坛紫菜不同色泽丝状体间的遗传变异
4个不同色泽丝状体间的平均遗传距离
0. 5727, 它们同野生型对照的平均遗传距离
0. 6564,都要高于徐涤等[ 9] 、陈骁等 [ 10] 及杨锐
等 [ 11]在坛紫菜栽培品系间以及栽培品系同野生
品系间的遗传分析结果 。此外 , 4个不同色泽丝
状体间之间的有效等位基因数为 1. 5736,期望杂
合度为 0. 3246 , Shannon 多样性指数指数为
0. 4714。这些结果均表明 4个不同色泽丝状体之
间存在着较高的遗传多样性水平 ,可为后续的坛
紫菜遗传育种提供丰富的遗传变异位点。对 4个
不同色泽丝状体同野生型对照的比较分析 ,则有
效等位基因数为 1. 6369,期望杂合度为 0. 3609,
Shannon多样性指数为 0. 5265,表明 4个不同色
泽丝状体同野生型对照相比 ,发生了明显的遗传
变异。在自然条件下 ,一个物种的遗传变异取决
于物种的进化历史 、群体所经历的进化事件 、物种
的生殖模式以及环境的特点等 ,据 Soulé[ 24]估计 ,
杂合度增加百分之一需要一百万年的时间 。而笔
者采用诱变育种的方法 ,很容易就使坛紫菜发生
了较高的遗传变异 ,由此说明人工诱变育种技术
是坛紫菜育种的一个高效的技术手段 ,该技术可
以在短时间内带给坛紫菜带来丰富的遗传变异位
点 ,从而为坛紫菜良种的选育提供更为广泛的选
择范围 。
参考文献:
[ 1] 　尤抒忱. 国家级水产原良种场复查工作纪行:国
家级紫菜种质库工作与运行情况 [ J] . 中国水产 ,
2004, 9:66 - 67.
[ 2] 　M izukam i Y, Okauch i M , Kito, et al. D iscrim i-
nation of laver cultivars w ith RAPD m arkers[ J] .
F ish Sci, 1996, 62(2):173 -177.
[ 3] 　Rem i A W , A listria L D, Barbara A W , et a l.
cpDNA-RFLP in Ceram ium ( Rhodophyta ):
inteaspec ific polymorph ism and species-leve l
phylogeny[ J] . Am erican Journa l of Botany, 2001,
88(7):1209 - 1213.
[ 4] 　 K ito H , Kunimo to M , K amanish i Y , et a l.
P rotop last fusion be tw een Monostrom a nitidum and
Porphyra yezoensis and subsequebt grow th of hybrid
p lants[ J] . J App l Phycol, 1998, 10(1):15 - 21.
[ 5] 　 K yosuke N , N or io K, M itusunobu I, et a l.
Morpholog ica l and AFLP var ia tion of Porphy ra
yezoensis Ueda form. Narawaensis M iura
( Bangiales, Rhodophyta) [ J ] . Phycolog ica l
Research, 2004, 52:180 - 190.
[ 6] 　K yosuke N , N orio K, Y usho A. M orpholog ica l
and mo lecular ana lysis of the endangered spec ies
Porphyra tenera (Bangiales, Rhodophyta) [ J] . J
Phycol, 2005, 41:294 -304.
[ 7] 　 I itsuka O , N akam ura K, O zak i A , et a l. Genetic
inform ation of three pure lines of Porphyra yezoensis
( Bangiales, Rhodophyta) obta ined by AFLP
analys is[ J] . F ish Sci, 2002, 68:1113 - 1117.
[ 8] 　梅俊学 , 金德敏 , 贾建航 , 等. 条斑紫菜不同栽培
品系的 RAPD研究 [ J] . 山东大学学报(自然科学
版), 2000, 35(2):230 -234.
[ 9] 　徐　涤 , 宋林生 , 秦　松 , 等. 五个紫菜品系间遗
传差异的 RA PD分析 [ J] . 高技术通讯 , 2001, 12:
1 -4.
[ 10] 　陈　骁 , 左正宏 , 姚继承 , 等. 几种紫菜种质资源
遗传多样性的 RAPD 分析 [ J] . 海洋科学 , 2005,
29(4):76 - 80.
[ 11] 　杨　锐 , 刘必谦 , 骆其君 , 等. 利用扩增片段长度
多态性(AFLP)研究坛紫菜的遗传变异 [ J] . 高技
术通讯 , 2002, 12(1):83 - 86.
[ 12] 　杨　锐 ,刘必谦 , 骆其君 ,等. 利用 AFLP技术研究
条斑紫菜的遗传变异 [ J] . 海洋学报 , 2005, 27
(3):159 - 162.
[ 13] 　胡则辉 , 周志刚 , 严兴洪. 坛紫菜微卫星 DNA序
列的筛选 [ J] . 海洋科学 , 2006, 30(1):17 -22.
[ 14] 　 Jia J H , W ang P, Jin D M , et al. The app lication
of RAPD Marke rs in d ive rs ity detection and variety
identification of Porphy ra [ J] . A cta Botan ica
S in ica, 2000, 42(4):403 - 407.
[ 15] 　石金锋 , 贾建航 , 王　萍 , 等. 紫菜无性系特异分
子标记的获得 [ J] . 高技术通讯 , 2001, 10:1 - 3.
[ 16] 　石金锋 , 贾建航 , 金德敏 , 等. 紫菜无性系特异
SCAR标记的获得 [ J] . 海洋学报 , 2003, 25(1):
128 -130.
[ 17] 　孙　雪 , 张学成 , 茅云翔 , 等. 几种江蓠属海藻的
ISSR标记分析 [ J] . 高技术通讯 , 2003, 9:89 - 93.
110 水　产　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　31卷
[ 18] 　顾红雅(译). 植物分子生物学实验手册 [M ] . 北
京:高等教育出版社 , 1997.
[ 19] 　王　斌 ,金德敏 , 柳　波 , 等. 紫菜 DNA指纹图谱
的特异分子标记 [ C] . 2003年全国作物遗传育种
学术研讨会论文集 , 2003:416 - 422.
[ 20] 　梁明山 , 曾　宇 , 周　翔 , 等. 遗传标记及其在作
物品种鉴定中的应用 [ J] . 植物学通报 , 2001, 18
(8):257 - 265.
[ 21] 　王　勇 ,刘必谦 , 骆其君. 坛紫菜品系间遗传差异
的 RAPD分析 [ J] . 青岛海洋大学学报 , 2000, 30
(2):225.
[ 22] 　 Reddy M P, Sar la N, S iddiq E A. In ter simp le
sequence repeat ( ISSR) polymorph ixm and its
application in p lant breed ing[ J] . Euphytica, 2002,
128:9 - 17.
[ 23] 　贾建航 , 陈一华 , 石金锋 , 等. 用于紫菜无性系种
质鉴定的计算机化 DNA 指纹的建立 [ J] . 海洋学
报 , 2001, 23(1):79 -84.
[ 24] 　Soulé M. M olecu la r evolution[ M ] . Sunder land:
S inaurA ssoc, 1976:60 - 77.
最常见的 100个别字 (括号中为正字)
1.按 (安 )装 27.既 (即 )使 53.名 (明)信片 79.渲 (宣 )泄
2.甘败(拜)下风 28.一如继 (既)往 54.默 (墨)守成规 80. 寒 喧 (暄)
3.自抱(暴)自弃 29.草管(菅)人命 55.大姆(拇 )指 81.弦 (旋 )律
4.针贬(砭) 30.娇 (矫 )揉造作 56.沤 (呕)心沥血 82.膺 (赝 )品
5.泊 (舶 )来品 31.挖墙角 (脚) 57.凭 (平)添 83.不能 自己(已)
6.脉博(搏) 32.一诺千斤(金 ) 58.出奇(其 )不意 84. 尤 (犹 )如猛虎下山
7.松驰(弛) 33.峻 (竣 )工 59.修茸(葺 ) 85.竭泽而鱼 (渔 )
8.一愁(筹)莫展 34.不落巢 (窠)臼 60.亲 (青)睐 86.滥芋 (竽)充数
9.穿 (川 )流不息 35.不径(胫)而走 61.磬 (罄)竹难书 87.世外 桃园(源)
10. 精萃 (粹) 36.烩 (脍 )炙人口 62.声名雀 (鹊)起 88.脏 (赃 )款
11. 重迭 (叠) 37.打腊(蜡) 63.发韧(轫 ) 89.醮 (蘸 )水
12. 渡(度 )假村 38.死皮癞 (赖)脸 64.搔 (瘙)痒病 90.蜇 (蛰 )伏
13. 防(妨 )碍 39.兰 (蓝 )天白云 65.入场卷 (券) 91.装祯 (帧)
14. 幅(辐 )射 40.鼎立(力)相助 66.欣尝(赏 ) 92.饮鸠 (鸩)止渴
15. 一幅 (副)对联 41.再接再励(厉 ) 67.谈笑风声(生 ) 93.坐阵 (镇)
16. 天翻地复(覆) 42.老俩(两)口 68.人情事 (世)故 94.旁证 (征)博引
17. 言简意骇(赅) 43.黄梁(粱)美梦 69.有持(恃 )无恐 95.灸 (炙 )手可热
18. 气慨 (概) 44.了 (瞭 )望 70.额首(手 )称庆 96.九洲 (州)
19. 一股 (鼓)作气 45.水笼(龙)头 71.追朔(溯 ) 97.床第 (笫)之私
20. 悬梁刺骨(股) 46.杀戳(戮) 72.鬼鬼崇崇(祟祟) 98.姿 (恣 )意妄为
21. 粗旷 (犷) 47.痉孪(挛) 73.金榜提 (题)名 99.编篡 (纂)
22. 食不裹(果 )腹 48.美仑(轮)美奂 74.走头(投 )无路 100.做 (坐 )月
23. 震憾 (撼) 49.罗 (啰 )嗦 75.趋之若骛(鹜 )
24. 凑和 (合) 50.蛛丝蚂 (马)迹 76. 迁徒 (徙 )
25. 侯(候 )车室 51.萎糜(靡)不振 77.洁白无暇(瑕 )
26. 迫不急(及 )待 52.沉缅(湎) 78.九宵 (霄)
(摘自《咬文嚼字》2005年第 6期 )
1111期　　　　　　　　　　谢潮添 , 等:ISSR标记在坛紫菜不同色泽丝状体种质鉴定中的应用