全 文 ：C h i , , “ 、 , , 中国海洋药物杂志 年 月第 卷第 期
海萝多糖对肝癌 荷瘤小鼠的抑瘤作用研究 “
余杰 ,陈美珍 ,许肇成 ,崔仕超 ,唐武
汕头大学生物学系 ,广东 汕头 ,
摘 要 目的 研究海萝多糖 对 移植性肿瘤的抑瘤作用并探讨其抗种瘤机理 。方法 建立 , 实体
肝癌肿瘤模型 ,以海萝多糖连续灌胃治疗 ,观察海萝多糖的抑瘤作用 ,并测定脾脏 、胸腺和肝脏等器官的器官
系数 ,分析血清杭 。抗体水平和谷丙转氛酶 及肝组织谷丙转氛酶 、谷草转氛酶 、丙二醛
水平以及超氧化物歧化酶 活性等生理生化指标 。结果 海萝多糖 和 · 一 · 一`灌
胃 ,使给药组抑瘤率分别达到 尸 和 尸 。 其杭肿瘤的机理可能是通过增强
机体的特异性免疫 、增加血清杭肿瘤抗体水平和增强机体清除 自由基的能力来实现 同时还发现海萝 多糖具
有保护荷瘤小鼠肝脏的作用 。结论 海萝多糖具有一定的抗移植性小鼠 肝肿瘤作用 。
关键词 海萝 多糖 杭肿瘤
中图分类号 文献标识码 文章编号 一 一 一
, 一蚤 , 一 , 一 ,
, 少 , 夕 , ,
,
,
,
, , ,
· 一 · 一 · 一 · 一 ,
写 尸 ,
,
,
。
、 ,一〔二
海萝 。 、 、` , 属红藻 门
,真红 藻纲
隐丝藻 目 内枝藻科
海 萝 属 、
,俗名赤菜 ,为一年生红藻 」。中国沿海
分布较广 ,以东南沿海为多见 。中医认为海
萝味咸 ,性寒 。有软坚化痰 、清热消食 、祛风
除湿功能 。用于劳热 、瘦瘤 、痞积 、痔疾 、干咳
作者简介 余杰 ,男 ·副教授 一 竹 、
DOI :10.13400/j.cnki .cjmd.2009.05.010
中国海洋药物杂志 年 月第 卷第 期 八寸及 、 , 扩 , ,
痰结及关节酸痛等治疗阁 。在我国 ,海萝作
为食用和药用已有悠久的历史 ,是一种珍贵
的海洋藻类资源 。药理研究表明 海萝的水
提物在体外对 。肿瘤细胞具有直接抑制作
用田 海萝的甲醇提取物对人肺腺癌 一
细胞具有抑制作用 ,抑制率为 川 海
萝水提物明显提高艾氏腹水瘤 鼠的
存活率 及抑 制 体外 培 养 的艾 氏腹 水 瘤
细胞生长闹 。本 文对海 萝多糖 的体
内抗 移植性肿瘤的生物活性和相关机理
进行研究 ,为海萝在海洋药物和功能食品方
面的开发利用提供试验依据 。
对象与方法
对象
实验材料 海萝 ,由广东省汕头大学
南澳海洋生物实验站提供并鉴定 ,样品采集
于广东汕头南澳海区 。
实验 动物 周龄 清洁级 昆 明种 小
鼠 ,雄性 ,体重 士 ,由厦门大学实验动
物中心提供 ,生产许可证号 闽 。。
。
瘤种 瘤株购于厦门大学抗癌研
究 中心 。
主要试剂 谷丙转氨酶 、谷草转 氨酶
和丙二醛试剂盒购于南京建成生物工程研究
所 羊抗小 鼠 抗体 标 记 为美 国
公司产品 环磷酞胺 江苏恒瑞
医药股份有限公司 其余试剂均为国产分析
纯 。
方 法
药物制备 海萝干品除去杂物 ,粉碎
后烘干 ,加 倍体积双蒸水 , ℃水浴提取
, · 一离 心 ,取 上 清 于
℃浓缩为原体积的 ,边搅拌边缓慢加
人 倍体积的无水乙醇 , ℃过夜 , ·
一离 心 ,沉淀 ,依次用无水 乙醇 、
丙酮 、无水乙醚洗涤 , ℃烘干至无乙醚味得
海萝多糖 。临用前用双蒸水配成溶液 ,用硫
酸苯酚法测定多糖含量 。
。荷瘤小鼠模型的建立 瘤株
在小鼠体内腹水传代 次 ,每次 。在无菌
条件下抽取最后一次荷瘤小鼠的腹水 ,用预
冷的无菌生理盐水调整细胞浓度至 只
,个 · 一 ,在小鼠右肢皮下注射
肿瘤细胞悬液仁」。
小鼠分组及给药 按照体重将荷瘤小
鼠随机分为 组 ,每组 只 。正常对照组和
模型组小鼠灌胃等量的生理盐水 阳性药物
对照组 · 一环磷酞胺 海萝多糖
组 ,灌胃 , 。。 · 的`海萝多糖 。接
种 后开始给药 ,其中阳性药物组每 注
射 次 ,共 次 ,其他组连续给药 。
小鼠的处理 小鼠末次给药 后称
重 ,摘眼球取血样 ,脱颈椎处死 ,取瘤块及脾
脏 、胸腺 、肝脏等器官称重 。血经 ·
一离心 取上层血清 ,立即置于一 `冷藏备用 。肝匀浆的制备 按照 肝脏 湿
重 一生理盐水的比例 ,根据肝脏的重
量加入适量 ℃预冷的生理盐水 ,高速匀浆
次 ,每次 ,匀浆液 · 一离心
,取 上清液 ,该上清液 留样做
分析 。从 上清液 中取 出 ,
· 一离心 ,取上清用于检测 、
和 活力 。
抑瘤率及器官指数的计算 根据各小
鼠的体重 、脾重 、胸腺重和肝重计算各器官指
数 。根据瘤重计算抑瘤率 。
器官指数 一各器官重量 体
重
抑瘤率 一 模型组平均瘤重一给药组平
均瘤重 模型组平均组瘤重 〕 。
肝匀浆 和 的测定
含量的检测采用硫代巴比妥比色法 ,参考试
剂盒使用说明书操作 。 活性的检测采
用改良的邻苯三酚法 。蛋白含量的测定采用
考马斯亮蓝染色法 。
血清抗 抗体水平的测定 采用间
接 法卜 。
, 小鼠血清谷丙转氨酶活性 ,肝匀浆谷
丙转氨酶活性 、谷草转氨酶活性的测定采用
赖氏标准曲线法 ,参考试剂盒使用说明书操
作 。蛋白含量的测定采用考马斯亮蓝染色
法 。
Ch in J M d r D rug s , , 中国海洋药物杂志 年 月第 卷第 期
统计方法 数据采用 王士 、表示 ,用
软件进行 检验 。
结果
海萝 多糖对 荷瘤 小鼠的抑瘤率 的
影响
从表 可知 ,与模型组相 比 ,灌 胃海萝多
糖能显著地抑制 实体瘤的生长 ,低 、高剂
量组抑瘤率分别达到 肠和 ,其
作用与注射 · 一的` 相当 。
表 海萝多糖对 荷瘤小鼠抑瘤率的
影响 士 ,
《牙士 、
组 别 瘤重 抑制率
正常对照组 一 一
模型组 士 一
阳性药物组 士 , ,
低剂量组 士 二
高剂量组 士 ` ,
注 与模型组相比 `尸 , “ 尸
书 , “ ,
海萝多糖对 荷瘤小鼠器官的影响
从表 可知 ,与模型组相比 ,灌胃海萝多
糖低剂量组可以提高脾指数 ,但高剂量组对
脾指数影响不明显 低 、高剂量组的海萝多糖
对荷瘤小鼠的胸腺指数和肝指数也没有明显
的影响 表明灌胃海萝多糖能够部分地提高
荷瘤小鼠机体的特异性免疫功能 。而注射
对免疫器官有明显的抑制作用 ,其对免疫
器官的抑制作用与文献报道一致 。
表 海萝多糖对 荷瘤小鼠器官指数的
影响 二士 , ,
从表 可知 ,与模型组相比 ,灌胃海萝多
糖能有效地降低小鼠肝脏 的含量 ,其
中低 、高 剂 量 组 分 别 降 低 和
。灌胃海萝多糖也可以显著地提高肝
脏 的活性 ,其中低 、高剂量组 的活
性分别提高 和 。另外由于
是通过代谢后的产物直接杀伤肿瘤细胞 ,
所以它对肝组织 中的 含量和 活
性的影 响不 明显 ,见表 。
表 海萝多糖对 荷瘤小鼠的肝脏 含
和 活性的影响 《王土 、 ,
《 士 ,
组 别
正常对照组
模型组
阳性药物组
低剂量组
高剂量组
一
士 件
士
士
士 件
士 价书
活性
一
士 , 甘
士
士
士 赞
土
组 别
《二士 、,
胸腺指 数 肝脏指数
· 一 · 一
一常对照组
模型组
阳性药物组
低剂 墩组
高剂觉组
脾脏指数
·
士 】
士
上 士
士
■
士 件 士 沐 皿 士
士
土 士 准 士
海萝多糖对 荷瘤小鼠的肝脏
含量和 活性的影响
海萝多糖对血清杭肿瘤杭体水平的影
响
从表 可知 ,与模型组相比 , 对血清
的抗肿瘤抗体抑制率为 。而海萝多
糖能够提高血清的抗 抗体水平 ,分别为
和 。这提示海萝 多糖 可能
通过促进机体的体液免疫来抑制 肿瘤生
长 。
表 海萝多糖对 荷瘤小鼠血清抗肿瘤
抗体水平的影晌 《王士 , 一
士 、
组 别 。 抗体增长率
正常对照组 士 一
模型组 士 一
阳性药物组 士 “ 一
低剂量组 士
高剂量组 士
海萝 多糖 荷瘤小鼠转氛酶活性的
影响
从表 可看出 , 对肝脏细胞有一定
中国海洋药物杂志 年 月第 卷第 期 乙 , ,
的损伤作用 ,该结果与文献报道一致刚 。而
灌胃海萝多糖能使血清转氨酶活性降低 。此
外 ,海萝多糖灌胃对肝组织的 和
活性略有提高但无显著性差异 ,说明海萝多
糖对肝的正常机能可能有轻微的恢复作用 。
表 海萝多据对 荷瘤小鼠转氨酶活性
的影响 《历土、 , 二
《 士 , ,
组 别 血清 活性, 一
肝脏 活性
吨 一
正常对照组
模 型组
阳性药物组
低剂量组
高剂量组
士 士 母
肝脏 活性
`魄 一
士 梦
士 士 士
士 士 , 士
士 士 士
密切的肿瘤生长受到抑制 。
由于 是鼠源性的肝癌肿瘤 ,其分泌
物可能对肝组织有一定的损伤作用 ,从而导
致实验中荷瘤组小鼠肝指数下降 。同时肿瘤
发病时伴随着肝功能的异常 ,使血液中的转
氨酶活性升高 〕。给予海萝多糖后 ,血清转
氨酶下降 ,说明给予海萝多糖对肝的损伤有
恢复作用 同时给予海萝多糖后 ,小鼠肝组织
中的转氨酶活性有所上升 ,也表明海萝多糖
能恢复受损伤肝组织的部分机能 。
综上所述 ,海萝多糖通过多种途径来抑
制小鼠 肿瘤的生长 ,其作用机理 尚待进
一步深人研究 。海萝作为一种传统海洋药用资源 ,其价值有待进一步开发 。
土 士 士
讨论
天然多糖可以通过增强机体的免疫力来
发挥其抗肿瘤作用 ,作为部分代替或辅助化
疗药物的新药资源备受关注 。本实验结果表
明 ,海萝多糖灌胃给药 ,可促进荷瘤小鼠免疫
器官增殖 ,增加血清抗肿瘤抗体水平 ,并能够
抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长 。表明海萝多糖能
够通过增强机体免疫系统的活性抑制肿瘤生
长 。
大量证据表明 ,肿瘤发生有活性氧自由
基介人 ,而且一般认为其主要通过脂质过氧
化作用以及对 的氧化损伤 。不仅脂质
过氧化所涉及的自由基与肿瘤的启动和增殖
有关 ,而且其脂质过氧化产物亦与肿瘤的发
生发展有密切关系 。对许多实验动物和人类
恶性肿瘤组织细胞及宿主体液进行的由自由
基引发的脂质过氧化水平的测定表明 ,过氧
化脂质 或丙二醛 含量显著高
于对照组 ,间接指示肿瘤宿主细胞 自由基水
平的升高 〕。海萝多糖不仅本身是较强的
自由基清除剂 〔川 ,而且还能显著提高机体的
活性 ,从而减少机体受到的氧化损伤 ,
使 水平大幅下降 ,可使与自由基关系
参考文献
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