全 文 ：第 30 卷　第 4期
2001 年　7月
卫　生　研　究
JOURNAL OF HYGIENE RESEARCH
Vol.30　No.4
July　2001　247
文章编号:1000-8020(2001)04-0247-02 ·实验技术·
HPLC方法检测水及水生动物中软骨藻酸
陈西平　王成斌　胡俊明　鲁　波　王　骏　李　霞　陈小东1　林　萍1
中国预防医学科学院环境卫生监测所 , 北京　100021
摘要:为了解水及水生动物体内软骨藻酸的污染状况 , 采用高效液相色谱(HPLC)方法检测了部分水及
水生动物中软骨藻酸的含量。结果表明 ,HPLC 方法是检测水及水生动物中软骨藻酸的简便有效方法。 部分
海洋贝壳动物体内检出软骨藻酸;海水及地面淡水中未检出软骨藻酸。为防止软骨藻酸中毒 ,应加强软骨藻
酸污染状况的监测。
关键词:软骨藻酸　高效液相色谱分析　水污染
中图分类号:X132　　　　　　文献标识码:B
Determination of domoic acid in water and aquatic animals
by high performance liquid chromatography
Chen Xiping , Wang Chengbin , Hu Junming , Lu Bo , et al.
Institute of Environmental Health Monitoring , Chinese Academy of Preventive Medicine , Beijing 100021 , China
Abstract:The content of domoic acid in water and in the body of some aquatic animals was detected by HPLC in order
to find out the pollutant condition.The result showed that HPLC analysis was a simple and effective method for determining
domoic acid in water and aquatic animals.Domoic acid has been found in some marine shellfish and not in seawater or
freshwater.It is necessary to strengthen monitoring the contamination of domoic acid to prevent the toxin poisoning.
Key words:domoic acid , high performance liquid chromatography
作者简介:陈西平 ,男 ,硕士 ,副研究员
1 江苏省卫生防疫站
　　软骨藻酸是由水中藻类产生的具有神经兴奋性作用的生
物毒素 ,经食物链富集后 , 使动物体内含有较高浓度的软骨藻
酸 ,最终引起人类中毒。 中毒症状包括胃肠道及神经系统症
状[ 1] 。我国的海洋资源和淡水资源都非常丰富 , 水产品亦越
来越广泛地进入广大人民群众的生活。但由于水污染不断加
剧 ,近年来赤潮频繁发生 , 有可能伴随软骨藻酸的污染。为了
解水中及水生生物中软骨藻酸的污染 ,保护人体健康 , 有必要
开展软骨藻酸污染状况及作用机理的研究。本文研究了软骨
藻酸的高效液相色谱检测方法并检测了部分水及水生动物样
品中软骨藻酸含量。
1　材料和方法
1.1　仪器和试剂
1.1.1　仪器　Waters600 液相色谱仪 , 离心机 , 匀浆器 , 过滤
器 ,Waters和 Supelco牌层析柱 。
1.1.2　试剂　甲醇(色谱纯), 乙腈(色谱纯),三氟乙酸(分析
纯)。
1.2　标准溶液
软骨藻酸标准品购自 Sigma 公司 , 分别配制成浓度 1 、5 、
10 、20 和 40μg ml 的标准液。
1.3　标准曲线的绘制
在色谱分析条件下取各浓度标准液 10μl 进样分析 , 以软
骨藻酸浓度为横坐标 , 以峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
1.4　色谱分析条件
1.4.1　色谱柱　Zorbax C18 , 4.6mm×250mm , 10μm。
1.4.2　流动相　甲醇:乙腈:三氟乙酸(80∶20∶0.1);流速:
1ml min。
1.4.3　检测器　Waters996二极管阵列检测器。
1.5　样品检测
1.5.1　样品采集及处理　为了解我国软骨藻酸污染的现状 ,
分别对渤海 、南方受藻类污染的湖 、河及市内等不同地点采
样。样品种类包括海水 、淡水 、水产品等。针对不同的样品 ,
采用不同的样品前处理的方法。 液体样品的前处理包括沉
淀 、滤纸过滤 、微孔滤膜过滤 , 过层析柱浓缩 、纯化后洗脱;微
孔滤膜孔径为 0.45μm , 5 ～ 8L水样经过滤后 , 再用 Waters 和
Supelco层析柱浓缩 , 经冲洗液冲洗后用洗脱液洗脱。收集洗
脱液进行测定。冲洗液为含 10%甲醇的 0.1mol L 氯化钠溶
液 , 洗脱液为含 10%甲醇的 0.5mol L 氯化钠溶液。水产品样
品的前处理包括匀浆 、离心 、微孔滤膜过滤 , 层析柱浓缩 、纯
化 , 洗脱。处理过程同水样处理。
1.5.2　测定　采用与标准曲线制备相同的色谱条件 ,取 10μl
洗脱液进样分析。以保留时间定性 ,峰面积定量。
2　结果与讨论
2.1　高效液相色谱检测方法的建立
2.1.1波长选择　经扫描 , 波长为 242nm 时 ,有较大的吸收峰。
选择 242nm 波长进行分析测定。
2.1.2　流动相选择　对流动相进行了改进 ,提高了乙腈的含
量 ,流动相为甲醇:乙腈:三氟乙酸 , 80∶20∶0.1;在不影响分离
度的前提下 ,提高了测定速度 , 更适合实际工作的需要。
2.1.3　标准曲线绘制　软骨藻酸浓度在 1～ 40μg ml 的范围
内 ,线性关系良好 , r=0.996 , Y=2.42×10 -4X-0.8。
2.2　样品检测
2.2.1　样品处理　对样品进行纯化和分离时 , 选用国内市场
上常用的Waters和 Supelco牌层析柱 , 经比较发现后者在纯化
和浓缩样品方面效果比较好。两品牌层析柱加标平均回收率
分别为 35%和 84%,所以在实验中选用了 Supleco层析柱。
2.2.2　不同水体及水生生物体中软骨藻酸的检测　加标回
收实验软骨藻酸浓度为 5μg g 时 , 重复测定 6 次 , 回收率为
72%～ 91%;软骨藻酸浓度为 20μg g 时 , 重复测定 6 次 , 回收
率为 70%～ 93%。本方法的检出限为 10ng。
海产品样品中软骨藻酸检测结果见附表。
附表　海产品中软骨藻酸检测结果
水产品名称 样品量(g)
软骨藻酸浓度
(μg g)
虾 10.5 0.50
毛蚶 1 9.0 未检出
毛蚶 2 8.0 未检出
毛蚶 3 10.0 0.57
海螺 1 11.5 0.80
海螺 2 9.5 未检出
毛蚶 16.0 未检出
象牙蚌 11.6 8.14
珍珠贝 14.2 4.04
芒果贝 9.7 未检出
文蛤 14.4 4.16
花蛤 12.6 0.43
青蛤 9.7 未检出
海螺 10.3 未检出
　　目前 ,有关海产品中软骨藻酸的含量尚无统一的卫生标
准 ,仅加拿大规定贝类中软骨藻酸的含量不得大于 20μg g。
当蛤中 软骨藻酸不超过 20 mg kg时 , 在相关人群及消费蟹类
和蛤类较少的人群中 , 未见到与软骨藻酸毒性有关的健康影
响[ 2] 。此次检测结果表明部分海产品中检出软骨藻酸 , 虽然
浓度较低 , 但水中的蛤蜊 、蚌类及鱼均可富集水中藻类产生的
软骨藻酸 , 并对软骨藻酸有较强的耐受力 , 软骨藻酸经食物链
富集后 , 将对所在地区的生态环境造成影响 , 并引起动物发病
和死亡[3 ,4] ,人食用被污染的水产品即可引起中毒。 因此 , 应
加强水产品中软骨藻酸的检测。
此次采集了 10 份海水及淡水水样中未检出软骨藻酸。
水中软骨藻酸的检出与样品量及藻类的含量和种类等因素有
关 , 产生软骨藻酸的藻类主要为硅藻类。此次采样检测未能
检出软骨藻酸 , 可能与采样量少(每份水样仅为 5 ～ 8L)及所
采水域的藻类污染数量和种类有关。对T 湖采集水样进行了
藻类检测 , 所含藻类总数虽然较高 , 但硅藻所占比例很低。所
采样品中硅藻所占比例仅为 1.6%～ 2.5%。随着海洋及地面
水污染加剧 , 藻类大量繁殖 ,赤潮和水华现象不断出现 ,水中
及水产品中软骨藻酸污染会进一步增加。Walz 等检测了水
中 Pseudonitzschia ? australis 藻含量及软骨藻酸的浓度 ,当该
藻类在水中的含量仅为 4.0 ×103 个 L 时 , 即可检出软骨藻
酸[ 3] 。因此应在赤潮和水华发生的前后 , 加强藻类及软骨藻
酸污染的检测 , 并开展软骨藻酸对中枢神经系统损害机理的
研究 , 对预防和治疗软骨藻酸中毒是十分必要的。
3　参考文献
1　Chau Perl TM , Bedard L , Kosatsky T , et al.An outbreak of encephalopa-
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(2000-12-09 收稿)
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