全 文 ：!#$
楼乔明，丛培旭，徐! 杰，薛长湖!
（中国海洋大学食品科学与工程学院，山东青岛 !##$）
摘% 要：用 &’()*法提取孔石莼总脂，经皂化后酸化制得脂肪酸，再对脂肪酸进行尿素包合，使其中饱和脂肪酸与不饱
和脂肪酸分离，从而提高不饱和脂肪酸的含量。在脂肪酸+尿素+无水乙醇比为 ,+!+!#，温度为 -.，包合 ,!*的条件下
进行尿素包合结晶，效果较好，不饱和脂肪酸含量由 /!0-$1增加到 202,1，其中十六碳四烯酸由 ,$0$1增加到
!!02!1，增加 30,1，十八碳四烯酸由 !#0221增加到 $303!1，增加 3-0241。
关键词：孔石莼，尿素包合，纯化，不饱和脂肪酸
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中图分类号：H;!4-0,% % % % 文献标识码：I% % % % 文 章 编 号：,##!5#$#（!#,#）,!5#,#5#!
收稿日期：!##25,!5!3% !通讯联系人
作者简介：楼乔明（,23,5），男，博士研究生，研究方向：海洋活性物质研究。
基金项目：国家科技支撑计划（!##3JIK2-J#-）。
% % 孔石莼（!#$ %&’()*$ +,&-）属于绿藻门石莼科
石莼属，是一种大型绿藻，俗称海菠菜、海白菜等，广
泛分布于西太平洋沿海，是我国野生经济藻类中资
源极为丰富的一种［,］。自古以来孔石莼在食用和药
用方面就有广泛的应用。明朝李时珍的《本草纲目》
中有“下水、利小便”之功效记载。孔石莼脂肪酸中
含有大量的十六碳四烯酸（6, +-）、十八碳三烯酸
（6,3 + $）、十八碳四烯酸（6,3 + -）等多不饱和脂肪
酸［!］，而这些多不饱和脂肪酸都可以作为二十碳五烯
酸（?LI）、二十二碳六烯酸（KMI）的合成前体［$5-］。
但是，当前对孔石莼的利用还相当有限，除了少量食
用和药用外，仅有一些作为饲料和肥料，对其药用等
价值也尚未得到充分开发［4］。本文通过尿素包合法
对孔石莼的不饱和脂肪酸，尤其是十六碳四烯酸和
十八碳四烯酸进行纯化，为孔石莼资源的综合利用
提供理论依据。
5! 材料与方法
565! 材料与仪器
甲醇、三氯甲烷、正己烷、石油醚、尿素（分析纯）
等% 由天津市科密欧化学试剂有限公司提供。
23#N 型气相色谱仪 % 美国 I8<(7=E 公司；
O>P’@’E> -### 799<)<7=E 旋转蒸发器% 德国海道尔夫公
司；IJ,$45;型精密电子分析天平% 瑞士梅特勒5托利
多公司；Q<((<5G ;F=E*7D公司。
567! 实验方法
孔石莼于 !##2 年 ,, 月采自青岛栈桥附近海域，
自来水清洗，除去泥沙和其他杂草；样品冷风吹干，
室温保存。
,0!0,% 总脂提取% 取一定量的孔石莼，粉碎，按 ,+!#
（S+C）的量加入氯仿5甲醇（! +,，C+ C）混合液，超声
$#S<=，然后浸提 !-*。过滤后，浸提液用 #021氯化
钠溶液洗涤，倒入分液漏斗中静置分层。下层（氯仿
层，墨绿色）用无水硫酸钠干燥后，蒸发浓缩，得到墨
绿色浸膏。
,0!0!% 混合脂肪酸的制备 % 所提浸膏用 ,S’( T O
UAM5乙醇溶液 ,##SO，于 /#.水浴加热回流，皂化
!*。皂化液冷却至室温后，加入适量水使皂化液完
全溶解，用 $#SO石油醚萃取 $ 次，弃去醚层，除去不
皂化物。水层用 ,#1盐酸酸化至 RM,V!，静置分层，
石油醚萃取有机相 $ 次，合并石油醚并用水洗至中
性，无水硫酸钠干燥，减压旋转蒸干，得混合脂肪酸。
,0!0$% 尿素包合 % 将上述所得的混合脂肪酸，按脂
尿比（,+!）［］、尿素乙醇比（,+,#）进行实验。将尿素
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2010.12.014
!!#
于 !#水浴中回流溶解，加入制备的混合脂肪酸，搅
拌冷却至室温，于 $#包合结晶 %&’。结晶后，加入活
性炭搅拌脱色 %()*，并进行抽滤，所得滤液加入等
体积水和两倍体积的氯仿进行萃取，氯仿层用无水
硫酸钠干燥，蒸干滤液，得脂肪酸。
%+&+$, 脂肪酸甲酯化 , 取一定量样品，加入 %(-
&(./ 0 - 12/3甲醇溶液，于 4#水浴中甲酯化 %5()*，
冷却后加入正己烷和饱和氯化钠溶液各 %(- 振荡，
静置分层，取上清液供气相分析。
%+&+5, 气相色谱分析, 1637889:;< 石英毛细管柱
（=( > +=&((），高纯氮气为载气，采用恒压模式，
压力为 !+?%@A)，分流比为 &5 B %。进样口温度为
&=#，检测器温度为 &5#，柱温以 =# 0 A由 %!#升
到 &%#，然后在 &%#下保持 %()*，最后对各组分峰
用面积归一法进行积分，得出各组分的百分含量。
! 结果与讨论
!#$ 尿素包合条件
尿素包合法是纯化不饱和脂肪酸的一种有效方
法。尿素分子在结晶过程中能够与饱和脂肪酸或单
不饱和脂肪酸形成稳定的晶体包合物析出，而多不
饱和脂肪酸由于双键较多，碳链弯曲，具有一定的空
间构型，不易被尿素包合［!］。在尿素包合过程中，对
不饱和脂肪酸富集效果影响最大的因素是尿素用
量，如果尿素量过少，对饱和脂肪酸或单不饱和脂肪
酸的包合程度就会下降，达不到理想效果；同时尿素量
过多时，尿素物理携带的不饱和脂肪酸越多，导致富集
得率降低。而溶剂乙醇的用量、尿素包合温度和时间
对不饱和脂肪酸富集效果影响不大［4，?］；但增加乙醇用
量有利于后续活性炭脱色。因此本实验在脂尿比
（%B&）、尿素乙醇比（%B%），$#包合 %&’下进行操作。
通过皂化后酸化所得的混合脂肪酸含有大量的
色素。在尿素包合结晶后，加入活性炭进行脱色。
过滤除去结晶的尿素和活性炭。加入等体积水和两
倍体积的氯仿，以萃取不饱和脂肪酸和除去乙醇中
未结晶的尿素。氯仿层用无水硫酸钠干燥后，减压
浓缩，最后得到淡黄色脂肪酸液体。
!#! 尿素包合前后脂肪酸分析
图 %, 尿素包合前孔石莼脂肪酸气相色谱图
尿素包合前后脂肪酸的气相色谱图见图 %、图 &，
脂肪酸分析结果见表 %。结果表明：尿素包合前，孔
石莼中饱和脂肪酸含量为 &!+5!C，主要为棕榈酸
（&$+?$C）和月桂酸（&+!=C）；不饱和脂肪酸含量为
!&+$=C，主要为十八碳四烯酸（&+DDC）、十六碳四
烯酸（%=+4=C）、十八碳三烯酸（%=+54C）等多不饱和
脂肪酸。尿素包合后，不饱和脂肪酸含量增加到
D4+D%C，多不饱和脂肪酸含量由 5&+%5C 增加到
?5+$$C，增加 4=+?$C，其中十六碳四烯酸由 %=+4=C
增加到 &&+D&C，增加 4?+%4C；十八碳四烯酸由
&+DDC增加到 =?+?&C，增加 ?$+D5C。综合分析结果，
按脂尿比（%B&）、尿素乙醇比（%B%），$#包合 %&’ 条件
进行尿素包合结晶，对饱和脂肪酸具有较好的包合作
用，达到孔石莼不饱和脂肪酸的富集纯化效果。
图 &, 尿素包合后孔石莼脂肪酸气相色谱图
表 %, 尿素包合前后孔石莼脂肪酸相对含量
脂肪酸
相对含量（C）
尿素包合前 尿素包合后
2%&B &+!=
2%4B &$+?$ =+D
2%4B% 4+5& &+!
2%4B= %+%& %+!
2%4B$ %=+4= &&+D&
2%?B% %=+!4 D+$
2%?B& %+4= &+%%
2%?B= %=+54 %!+%!
2%?B$ &+DD =?+?&
2&B5 %+&= =+=4
% 结论
%#$, 尿素包合法是富集纯化孔石莼不饱和脂肪酸的
一种有效方法，具有简便、经济、高效等特点，所用试
剂简单易得，且均可回收，适合于工业化生产。
%#! , 通过尿素包合后，不饱和脂肪酸的含量由
!&+$=C增加到 D4+D%C，达到了对孔石莼不饱和脂肪
酸富集纯化的目的。
参考文献
［%］王艳梅，李志恩，徐祖洪 +孔石莼化学组分和药用活性研
究进展［E］+海洋科学，&，&$（=）：%3&+
［&］吴志军，熊慧萍，李智恩，等 +孔石莼脂溶性化学成分的分
析［E］+海洋科学，&，&$（5）：=3$+
［=］张乐，蒲新明，梁彦娟，等 +必需脂肪酸在海洋食物链中的
作用［E］+海洋科学，&D，==（$）：443!%+
［$］1;FF;GH I J，K/L@@L/ M I+ JNN @G.HOPQ).* .R Q’L P.@L@.H
;P;GQ); Q.*A; )* S/.G)H; T;U：G./L .R R;QQU ;P)HA )* Q’L *OQG)Q).*;/
P.(@.A)Q).* .R Q’L R..H L*V)G.*(L*Q［E］+W;G JP./ 6G.N ILG，&=，
&5&：%DD3&4+
［5］康凯，王长云，王斌贵，等 +大型海藻孔石莼化学组分和生
物活性研究新进展［E］+海洋湖沼通报，&!（=）：%553%5D+
［4］阮奇城，祁建民，黄李冉，等 +红麻籽油脂肪酸成分分析及其
亚油酸富集工艺的研究［E］+中国粮油学报，&D，&$（D）：!%3!5+
［!］蒋艳忠 +尿素包合法分离蚕蛹油中多不饱和脂肪酸［E］+化
学研究与应用，&?，&（=）：=4=3=44+
［?］靳革，申书昌 +尿素包合法纯化山核桃油中的不饱和脂肪
酸［E］+化工时刊，&D，&=（4）：=53=!+