全 文 ：第３４卷第１期
２０１５年２月
中 国 海 洋 药 物
ＣＨＩＮＥＳＥ　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＭＡＲＩＮＥ　ＤＲＵＧＳ
Ｖｏｌ．３４　Ｎｏ．１
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２０１５
孔石莼（Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ　Ｋｊｅｌｍ）凝集素
提取工艺的研究△
潘俭，李丹彤＊，周礼清，杨荣梅，马文秀，郑圣珍
（大连海洋大学 农业部北方海水增养殖重点实验室 ，辽宁 大连１１６０２３）
摘　要：目的 研究孔石莼（Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ　Ｋｊｅｌｍ）凝集素的最佳提取条件。方法 通过研究各因素（缓冲液、料
液比、浸泡时间、烘干温度）对孔石莼（Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ　Ｋｊｅｌｍ）凝集素（ｌｅｃｔｉｎ）（ＵＰＬ）提取液血凝活性的影响，得
出每个因素的最佳提取效果。从各个单因素中选出提取的最适条件及与最适条件相临的２个水平（共３个水
平）进行４因素３水平的正交试验。结果 温度为５０℃、缓冲液为ｐＨ　７．２ＰＢＳ、料液比为１∶１５、浸泡时间为
１５ｈ。结论 相比较其它条件，这一组合对孔石莼提取效果最好。
关键词：孔石莼；凝集素；提取工艺
中图分类号：Ｑ９６５；Ｑ５１３＋．２　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００２－３４６１（２０１５）０１－０２７－０６
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｌｅｃｔｉｎ　ｆｒｏｍＵｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ　Ｋｊｅｌｍ
ＰＡＮ　Ｊｉａｎ，ＬＩ　Ｄａｎ－ｔｏｎｇ，ＺＨＯＵ　Ｌｉ－ｑｉｎｇ，ＹＡＮＧ　Ｒｏｎｇ－ｍｅｉ，ＭＡ　Ｗｅｎ－ｘｉｕ，ＺＨＥＮＧ　Ｓｈｅｎｇ－ｚｈｅｎ
（Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｍａｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　＆Ｓｔｏｃｋ　Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ　ｉｎ　Ｎｏｒｔｈ　Ｃｈｉｎａ＇ｓ　Ｓｅａ，
Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｄａｌｉａｎ　Ｏｃｅａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｌｉａｎ１１６０２３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｂｅｓｔ　ｔｈｅｏｒｙ　ｂａｓｉｓ　ｆｏｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｌｅｃｔｉｎ　ｆｒｏｍ　Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ
Ｋｊｅｌｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ　ａｉｍｅｄ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ａ　ｋｉｎｄ　ｏｆ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉ－
ｔｙ　ｏｆ　Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ　Ｋｊｅｌｍ　ｌｅｃｔｉｎ．Ｆｉｒｓｔ　ｏｆ　ａｌ，ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｂｕｆｆｅｒ
（ｃｏｎｔａｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐＨ），ｍａｔｅｒｉａｌ　ｒａｔｉｏ，ｓｏａｋｉｎｇ　ｔｉｍｅ，ｄｒｙｉｎｇ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗｅｒｅ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ
ｂｅｓｔ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ　Ｋｊｅｌｍ　ｌｅｃｔｉｎ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｆａｃｔｏｒｓ．Ｔｈｅｎ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｗｏ　ａｂｕｔｔｉｎｇ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｔｏ　ｃｏｎｄｕｃｔ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ．Ｅｖｅｒｙ　ｓｉｎｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒ
ｆｒｏｍ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｔｈａｔ　ｆａｃｅｄ　ｔｗｏ　ｌｅｖｅｌｓ（ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｌｅｖｅｌｓ）ｗｅｒｅ
ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ　ｔｈｅ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ
５０℃ａｎｄ　ｔｈｅ　ｂｕｆｆｅｒ　ｐＨ　ｗａｓ　７．２ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍａｔｅｒｉａｌ－ｗａｔｅｒ　ｒａｔｉｏ　ｗａｓ　１：１５ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｏａｋｉｎｇ　ｔｉｍｅ　ｗａｓ　１５ｈ．
Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｏｔｈｅｒ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｉｓ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｖｅｒｙ　ｇｏｏｄ　ｔｏ　ｅｘｔｒａｃｔ　Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ
Ｋｊｅｌｍ　ｌｅｃｔｉｎ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ　Ｋｊｅｌｍ；ｌｅｃｔｉｎ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ
　　
△基金项目：辽宁省教育厅团队项目（２００８Ｔ０２１）资助
　作者简介：潘俭（１９９０－），男，硕士研究生。
＊通讯作者：李丹彤（１９６５－），女，教授，硕士，从事海洋生物技术研究。Ｔｅｌ：０４１１－８４７６２８８７，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｄａｎｔｏｎｇ＠ｄｌｏｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
　　收稿日期：２０１４－０８－２４
DOI:10.13400/j.cnki.cjmd.2015.01.005
２８　 中　国　海　洋　药　物 ３４卷
　　凝集素（Ｌｅｃｔｉｎ）是一类具有糖专一性，可促使
细胞凝集的蛋白质或糖蛋白［１］。目前，在自然界
中几乎所有的物种中均已分离得到凝集素。凝集
素有具有细胞凝集、抗菌、抗肿瘤、激活淋巴细胞、
抑制血小板凝集等多种生理功能［２－４］。
孔石莼（Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ　Ｋｊｅｌｍ）是１种大型绿
藻，属绿藻门、石莼科、石莼属。孔石莼的化学组
分主要有多糖、脂类、蛋白质、维生素以及无机矿
物元素等。具有降血脂、降胆固醇、抗凝血、抗病
毒、抗肿瘤等活性［５］。
关于绿藻门石莼科、石莼属中的海藻，人们对
其中的石莼（Ｕｌｖａ　ｌｅｃｔｕｃａ）［６］及孔石莼（Ｕｌｖａ　ｐｅｒ－
ｔｕｓａ）凝集素进行了分离纯化及部分性质研究［７］。
另外人们对孔石莼和条斑紫菜凝集素对鲫鱼免疫
活性物的诱导作用进行了研究，发现孔石莼和条
斑紫菜凝集素对鲫鱼免疫活性物具有诱导作
用［８］。并得到海洋绿藻孔石莼凝集素基因序
列［９］。孔石莼凝集素的提取工艺是研究其分离纯
化及生物活性１个关键问题。目前在国内外对凝
集素的提取工艺研究日益增多，人们研究了槲寄
生凝集素粗品提取工艺［１０］，韭菜凝集素的提取工
艺与活性测定［１１］，白桦茸凝集素提取工艺的优
化［１２］，条斑紫菜凝集素的提取及其性质［１３］等等，
尚未见到有关孔石莼凝集素提取工艺的报道。本
研究组在孔石莼凝集素的提取工艺的研究中对缓
冲液、烘干温度、料液比、浸泡时间４个因素进行
了研究，旨在寻求在缓冲液、烘干温度、料液比、浸
泡时间４个因素综合条件下，筛选出血凝活性高
的提取条件，从而为孔石莼凝集素的分离纯化及
应用奠定基础。
１　材料
孔石莼采自黑石礁海岸，实验兔购于大连医
科大学实验动物中心。
１．２方法
１．２．１　凝集素提取
将新采集的海藻立即用过滤海水洗净，用纱
布及滤纸吸去水分，放入－２０℃冰箱冷冻，然后置
于电热鼓风干燥机中烘干。将烘干的孔石莼研磨
成粉末，放入自封袋内保存。将干粉用缓冲液浸
泡，间歇搅拌，将混合液放入离心管中，离心（４℃，
５　５００ｒ／ｍｉｎ　３０ｍｉｎ），取上清液即为粗提液。
１．２．２　血凝活性测定［１４］
在用含抗凝剂的生理盐水溶液润洗后的离心
管中，加入刚抽取的新鲜兔血，用生理盐水离心洗
涤４次（４　０００ｒ／ｍｉｎ，１０ｍｉｎ），然后用生理盐水将
离心后的红细胞配制成２％ 的红细胞悬液备用．
在９６孔Ｖ型血凝板上用４０μＬ凝集素溶液与等
量的生理盐水系列倍比稀释后，加入４０μＬ的２％
红细胞悬液，混匀，在室温下水平静置２ｈ，用肉眼
观察凝集结果，若红细胞沉积在Ｖ型孔底部呈大
红点状，则说明凝集素不具有血凝活性；若红细胞
呈悬浮网状不下沉，则说明凝集素具有血凝活性。
凝集素的血凝活力用产生凝集现象时的最小凝集
素的量或凝集素最大稀释倍数表示。
１．２．３　影响ＵＰＬ提取的单因素研究
用控制变量法分别对缓冲液（含不同ｐＨ）、料
液比、浸泡时间、烘干温度进行研究。每个因素重
复做３次。
（１）不同缓冲液（含不同ｐＨ）对 ＵＰＬ活性的
影响
控制料液比、浸泡时间、烘干温度分别为１∶
２０、１６ｈ、３０℃。变量为３种缓冲液，研究在每种
缓冲液中不同ｐＨ值对血凝活性的影响。
３种缓冲液为：ＰＢＳ　ｐＨ为５．８、６．２、７．２、８．０；
ＴＢＳ　ｐＨ为７．２、７．７、８．２、８．７；甘氨酸缓冲液ｐＨ
为２．６、３．６、８．６、９．６、１０．６。
取烘干温度为３０℃的孔石莼干粉０．６５ｇ，平
均分为１３份，分别加入的不同 ｐＨ 的缓冲液
１ｍＬ，浸泡１６ｈ，其他同１．２．１。
（２）烘干温度对ＵＰＬ活性的影响
控制缓冲液、料液比、浸泡时间不变，分别为
甘氨酸ｐＨ　８．６、１∶２０、１６ｈ。变量为９种烘干温
度，分别为３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０℃。
取３０～１１０℃烘干温度孔石莼干粉各０．０５ｇ，
分别加入甘氨酸缓冲液（ｐＨ＝８．６）缓冲液１ｍＬ，
浸泡１６ｈ，其他同１．２．１。
（３）料液比对ＵＰＬ活性的影响
控制缓冲液、浸泡时间、烘干温度不变，分别
为甘氨酸ｐＨ＝８．６、１６ｈ、４０℃。变量为６种料液
比，分别为１∶５、１∶１０、１∶１５、１∶２０、１∶２５、
１∶３０。
分别取不同质量的４０℃ 烘干的孔石莼干粉，
按上述比例，分别加入１ｍＬ甘氨酸缓冲液 （ｐＨ
１期 潘俭，等：孔石莼（Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ　Ｋｊｅｌｍ）凝集素提取工艺的研究 ２９　
８．６）。浸泡１６ｈ，其他同１．２．１。
（４）浸泡时间对ＵＰＬ活性的影响
取４０℃ 烘干的孔石莼干粉６ｇ，平均分为６份，
分别加入甘氨酸缓冲液（ｐＨ＝８．６）缓冲液１５ｍＬ。
分别浸泡５、１０、１５、２０、２５、３０ｈ，其他同１．２．１。
１．２．４　正交试验法对各种组合进行对比研究
通过单因素研究，从各单因素中选出提取的
最适条件及与最适条件相临的２个水平（共３个
水平）进行四因素三水平的正交试验，根据正交试
验极差分析法对正交试验数据进行分析选出最优
组合［１５－１６］。
２　结果
２．１　单因素对ＵＰＬ血凝活性的影响
２．１．１　不同缓冲液对ＵＰＬ血凝活性的影响
（１）不同ｐＨ 的ＰＢＳ缓冲液对孔石莼凝集素
血凝活性的影响
ｐＨ为５．８、６．２、７．２、８．０ＰＢＳ缓冲液，浸泡
孔石莼干粉，提取上清液，测定血凝活性。结果显
示：ｐＨ　６．２　７．２血凝活性最高（见图１）。
图１　不同ｐＨ的ＰＢＳ缓冲液对孔石莼凝集素血凝
活性的影响
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐＨ　ｏｆ　ＰＢＳ　ｏｎ　ｔｈｅ
ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＵＰＬ
（２）不同ＰＨ的ＴＢＳ缓冲液对孔石莼凝集素
血凝活性的影响
ｐＨ为７．２、７．７、８．２、８．７ＴＢＳ缓冲液 ，浸
泡孔石莼干粉，提取上清液，测定血凝活性。结果
显示：ｐＨ　７．７、８．２血凝活性最高（见图２）。
（３）不同ｐＨ 的甘氨酸缓冲液对孔石莼凝集
素血凝活性的影响
ｐＨ为２．６、３．６、８．６、９．６、１０．６甘氨酸缓冲液 ，
浸泡孔石莼干粉，提取上清液，测定血凝活性。结
果显示：ｐＨ　９．６和１０．６时血凝活性最高（见图３）。
图２　不同ｐＨ的ＴＢＳ缓冲液对孔石莼凝集素血凝
活性的影响
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐＨ　ｏｆ　ＴＢＳ　ｏｎ　ｔｈｅ
ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＵＰＬ
图３　不同ｐＨ的甘氨酸缓冲液对孔石莼凝集素血凝
活性的影响
Ｆｉｇ．３　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐＨ　ｏｆ　Ｇｌｙｃｉｎｅ　ｏｎ　ｔｈｅ
ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＵＰＬ
２．１．２　烘干温度对孔石莼凝集素血凝活性影响
取３０～１１０℃烘干温度孔石莼干粉，分别加
入甘氨酸缓冲液（ｐＨ＝８．６）缓冲液 ，浸泡、提取上
清液，测定血凝活性。结果显示：５０、６０、８０℃时血
凝活性最高（见图４）。
图４　烘干温度对孔石莼凝集素血凝
活性的影响
Ｆｉｇ．４　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｎ　ｔｈｅ
ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＵＰＬ
３０　 中　国　海　洋　药　物 ３４卷
２．１．３　料液比对孔石莼凝集素血凝活性的影响
取４０℃烘干的孔石莼干粉，分别按不同料液
比加入甘氨酸缓冲液（ｐＨ＝８．６）缓冲液，浸泡、提
取上清液。结果显示：料液比为１∶５、１∶１０时，
血凝活性最高（见图５）。
图５　料液比对孔石莼凝集素血凝
活性的影响
Ｆｉｇ．５　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ
ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＵＰＬ
２．１．４　浸泡时间对孔石莼凝集素血凝活性的影
响
取４０℃ 烘干的孔石莼干粉，按１∶１５料液比
分别加入甘氨酸缓冲液 （ｐＨ＝８．６）缓冲液，浸
泡、提取上清液，测定血凝活性。结果显示：浸泡
时间为１０和１５ｈ，血凝活性最高（见图６）。
图６　浸泡时间对孔石莼凝集素血凝
活性的影响
Ｆｉｇ．６　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｈｅ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　ｓｏａｋ　ｏｎ　ｔｈｅ
ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＵＰＬ
２．２　正交试验
根据单因素实验结果，各个因素选出３个水
平，进行４因素３水平正交试验（见表１）。根据正
交表可以看出，对于温度 Ｋ２为１０８，此时最大，因
而对于温度因素而言５０℃为优水平；对于料液比
Ｋ３为９１最大，即对于料液比而言１∶１５为优水
平；对于缓冲液 Ｋ１为１２８最大，即缓冲液为ＰＢＳ
ｐＨ　７．２时最优；对于浸泡时间 Ｋ２为１３３，此时最
大，即浸泡１５ｈ最优。综上所述 温度５０℃料液
比１∶１５缓冲液ＰＢＳ　ｐＨ７．２浸泡时间１５ｈ这一
组合最优（见表２、图７）。
表１　正交试验水平因素
Ｔａｂｌｅ　１　Ｆａｃｔｏｒ　ａｎｄ　ｌｅｖｅｌ　ｔａｂｌｅ　ｏｆ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ
水平
Ｌｅｖｅｌ
温度
／℃
料液比
Ｍａｔｅｒｉａｌ－ｗａｔｅｒ　ｒａｔｉｏ
缓冲液
ｐＨ
时间
／ｈ
１　 ４０　 １∶５ ＰＢＳ　７．２　 １０
２　 ５０　 １∶１０ ＴＢＳ　７．７　 １５
３　 ６０　 １∶１５ 甘氨酸９．６　 ２０
３　讨论
经不同缓冲液、不同ｐＨ 浸提下，孔石莼凝集
素血凝活性大小为：甘氨酸缓冲液（ｐＨ　９．６、１０．６）
甘氨酸缓冲液（ｐＨ　８．６）＝ＰＢＳ（ｐＨ　６．２、７．２）＝
ＴＢＳ（ｐＨ　７．７、８．２），盘赛昆［１３］研究Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲
体系，对条斑紫菜凝集素的提取比磷酸盐缓冲体
系效果好，本实验单因素研究甘氨酸缓冲液效果
最好，但正交试验是ＰＢＳ效果好。浸泡时间过短
时，凝集素未全部浸出；浸泡时间到一定程度，凝
集素全部浸出，达到峰值，过了这个时间，所提取
量不再提高，本实验所得的结果为１５ｈ。单因素
研究发现：甘氨酸缓冲液碱性条件及烘干温度为
８０℃，血凝活性都很高，说明碱性条件及高温对凝
集素的影响，没有降低其血凝活性，推测孔石莼凝
集素的与其分子中的糖链有关。
１期 潘俭，等：孔石莼（Ｕｌｖａ　ｐｅｒｔｕｓａ　Ｋｊｅｌｍ）凝集素提取工艺的研究 ３１　
表２　正交试验结果
Ｔａｂｌｅ　２　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ
实验号
温度
／℃
料液比
Ｍａｔｅｒｉａｌ－ｗａｔｅｒ　ｒａｔｉｏ
缓冲液
／ｐＨ
时间
／ｈ
效果
１　 ４０　 １∶５ ＰＢＳ　７．２　 １０　 ２６
２　 ４０　 １∶１０ ＴＢＳ　７．７　 １５　 ２４
３　 ４０　 １∶１５ 甘氨酸９．６　 ２０　 ２０
４　 ５０　 １∶５ ＴＢＳ　７．７　 ２０　 ２６
５　 ５０　 １∶１０ 甘氨酸９．６　 １０　 ２２
６　 ５０　 １∶１５ ＰＢＳ　７．２　 １５　 ２８
７　 ６０　 １∶５ 甘氨酸９．６　 １５　 ２７
８　 ６０　 １∶１０ ＰＢＳ　７．２　 ２０　 ２６
９　 ６０　 １∶１５ ＴＢＳ　７．７　 １０　 ２４
Ｉ　 ８１　 ２５６　 ３８４　 ８４
ＩＩ　 ３２４　 ８４　 ９６　 ４００
ＩＩＩ　 ２０８　 ２７３　 １３３　 １２９
Ｋ１　 ２７　 ８５　 １２８　 ２８
Ｋ２　 １０８　 ２８　 ３２　 １３３
Ｋ３　 ６９　 ９１　 ４４　 ４３
Ｒ　 ８１　 ６３　 ９６　 １０５
图７　正交试验中ＵＰＬ血凝活性
Ｆｉｇ．７　Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＵＰＬ
（注：图中１－９与表２实验号１－９相对应。Ｔｈｉｓ　ｐｉｃｔｕｒｅ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ａｎｄ　ｗａｓ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ｔｏ　Ｔａｂｌｅ　２，
Ｎｏ．１－９．）
　　采用正交试验对孔石莼凝集素提取工艺进行
优化，可以得到温度５０℃料液比１∶１５缓冲液
ＰＢＳ　ｐＨ　７．２浸泡时间１５ｈ这一组合最优，其血凝
活性最高。刘鹏举等［１２］研究的白桦茸凝集素结果
为料液比为１∶５０，提取时间为２０ｈ，提取缓冲液
ｐＨ 值为８．０。与之相比，有一定的差异，这与它
们是不同的物种有关。孔石莼凝集素分离纯化及
部分性质研究［７］中孔石莼凝集素提取采用冻干、
料液比为１∶２０，提取时间为１６ｈ，提取缓冲液为
ＰＢＳ　ｐＨ值为７．２，本研究中未设冻干及提取时间
１６ｈ，但提取时间、料液比与其基本相似，提取缓
冲液与ｐＨ 完全一致。经过单因素研究，可以得
３２　 中　国　海　洋　药　物 ３４卷
到各因素的最佳取值，但并非把这些最佳取值组
合到一起就能得到最优组合。而是要考虑到各因
素的相互影响。所以通过正交试验，来研究哪种
组合最优。
参考文献
［１］　李丹彤，周晓茹，钟莉，等．从绿藻礁膜分离半乳糖专一的凝
集素［Ｊ］．中国生物化学与分子生物学报，２００９，２４（３）：２５７－
２６３．
［２］　胡新平，李智恩，徐祖洪，等．海藻凝集素研究进展［Ｊ］．海洋
科学，２０００，２４（８）：３４－３７．
［３］　赵寅生．凝集素生物学功能及应用［Ｊ］．安徽农业大学学报，
２００１，２８（４）：４４５－４４７．
［４］　朱月．凝集素的作用与应用［Ｊ］．水产科学，２００５，２４（１２）：４８－
４９．
［５］　王艳梅，李智恩，徐祖洪．孔石莼化学组分和药用活性研究进
展［Ｊ］．海洋科学，２０００，２４（３）：２５－２８．
［６］　Ｓａｍｐａｌｏ　Ａ　Ｈ，Ｒｏｇｅｒｓ　Ｄ　Ｊ，Ｂａｒｗｅｌ　Ｃ　Ｊ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃ－
ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｌｅｃｔｉｎ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｇｒｅｅｎ　ｍａｒｉｎｅ　ａｌｇａ　Ｕｌｖａ　ｌａｃｔｕ－
ｃａ　Ｌ［Ｊ］．Ｂｏｔａｎ　Ｍａｒｉｎａ，１９９８，４１：４２７－４３３．
［７］　李丹彤，崔铁军，吕欧，等．孔石莼凝集素的分离纯化及性质
的研究［Ｊ］．中国生物化学与分子生物学报，２０００，１６（６）：
７７４－７７８．
［８］　李丹彤，吕景才，邢殿楼，等．孔石莼和条斑紫菜凝集素对鲫
鱼免疫活性物的诱导作用［Ｊ］．信阳师范学院学报（自然科学
版），２００７，２０（３）：３０９－３１２．
［９］　王盛，钟伏弟，吴祖建，等．抗病虫基因新资源：海洋绿藻孔石
莼凝集素基因［Ｊ］．分子植物育种，２００４，２（１）：１５３－１５５．
［１０］　周彬，杨文革，缪建，等．槲寄生凝集素粗品提取工艺研究
［Ｊ］．中成药，２００７，２９（５）：７６２－７６４．
［１１］　欧敏锐，邵宇飞，邓燚杰，等．韭菜凝集素的提取工艺与活性
测定［Ｊ］．福建轻纺，２００４，１７６：１６－２１．
［１２］　刘鹏举，曹松屹，唐咏，等．白桦茸凝集素提取工艺的优化
［Ｊ］．微生物学通报，２００９，３６（１１）：１６８８－１６９２．
［１３］　盘赛昆，张林维，胡赛泉，等．条斑紫菜凝集素的提取及其性
质研究［Ｊ］．安徽农业科学，２０１０，３８（３５）：１９８９－１９９０．
［１４］　李丹彤，林春江，侯小杭，等．红藻条斑紫菜凝集素的纯化及
其色氨酸化学修饰对其活性的抑制作用［Ｊ］．中国生物化学
与分子生物学报，２０１２，２８（９）：８５０－８５７０．
［１５］　崔宝臣，张国欣，侯博，等．正交试验优选光合细菌混合菌群
产氢的最佳条件［Ｊ］．微生物学通报，２００９，３６（１２）：１８７１－
１８７５．
［１６］　朱玉强．基于易语言的正交试验极差分析［Ｊ］．饮料工业，
２０１１，１４（２）：２７－３０．