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马占相思苗木茎腐病的调查和病原鉴定



全 文 :2002-01-03收稿 , 2002-02-08修回。
* 广西高峰林业相思树短周期工业用材基地高产林试验与推广项目
资助。
* * 广西高峰林场 南宁  530001 ( Gaofeng Fores t ry Farm of
Guangxi , Nan ning, Guangxi , 530001, China)。
广西科学 Guangxi Sciences 2002, 9 ( 4): 316~ 319
马占相思苗木茎腐病的调查和病原鉴定*
Investigation and Pathogens Identif ication of
Seedling Stem Rot of Acacia mangium Willd
  熊 英   陈文军* *   陈进宁* *    叶志敏* *
Xiong Ying  Chen Wenjun  Chen Jinning  Ye Zhimin
(广西大学林学院 南宁市邕武路 16号  530001)
( Fo rest ry Co lleg e, Guangxi Univ. , 16 Yongwulu, Nanning , Guangxi , 530001, China )
摘要 于 2001年 4~ 7月 ,对广西高峰林场总场中心苗圃和银岭分场新造林地的马占相思 (Acacia mangium
Willd)苗木茎腐病进行调查和病原鉴定。结果发现 ,茎腐病对 1年生以内的马占相思扦插苗危害严重 , 3月份开
始发病 , 4~ 6月份为盛发期 ;新造林地、炼苗苗床、扦插苗床的平均发病率分别为 12. 1% 、 18. 3% 、 72. 6% ,平均
病死率分别为 10. 5% 、 16. 2% 、 53. 5% ;苗木幼嫩、有伤口、培养基质带菌、温暖潮湿等条件有利于该病的发生与
蔓延。病原菌为立枯丝核菌 (Rhizoctonia solani  Kuhn)和尖镰孢霉菌 ( Fusarium ox ysporum Schiecht ) , 2种菌
的致病力均很强。
关键词 马占相思 茎腐病 立枯丝核菌 尖镰孢霉菌
中图法分类号  S763. 150. 2
Abstract  The seedling stem rot disease of Acacia mangim Willd w as investig ated in the central
nursery and the new afforestation field of Yinling Fo rest ry Farm from April to July 2001. This
disease did a serious damage to the annual cut ting seedling s, and appea red in March and pre-
vai led f rom April to June, The average mo rbidi ties in the new afforestation field, seedbed fo r
t raining seedlings and cut ting seedbed w ere 12. 1% 、 18. 3%、 72. 6% , respectiv ely , wi th co rre-
sponding mo rtali ties av eraging 10. 5% 、 16. 2% 、 53. 5% . Th e tender and w ound seedling s, the
subst rata infected wi th pa thogens and the w arm and w et climate a re the fav or condi tions fo r the
diseases happening and spreading. The pathogens w ere identi fied to beRhizoctonia solani Kuhn
and Fusarium oxysporum Schiecht. The pathogenici ty test show ed that these pathogens had
strong pa thogenicity to the seedling s of A.mangium Willd.
Key words  Acacia mangium Willd, stem ro t , Rhizoctonia solani Kuh n, Fusarium ox ysporum
Schiecht
  马占相思 ( Acacia mangium Willd)原产澳大利
亚 , 1979年引进我国两广试种。马占相思在桂南地区
生长迅速 ,树干通直 ,材质优良 ,树冠遮荫良好 ,是很
好的绿化、纸浆材及用材树种 ,也是林业上理想的速
生丰产的树种 ,具有很高的经济价值和发展前途 [ 1]。
国内对马占相思已经有过溃疡病 [2 ]、枯萎病 [3 ]和根结
线虫病 [4 ]报道 ,其中詹小红等 [2 ]报道的枯萎病病原菌
与茎腐病病原菌之一 —— 尖镰孢霉菌是相同的种 ,
两者危害症状有相似之处 ,而枯萎病危害的是 2年生
的幼年龄树 (主伐年龄为 5~ 6年 ) ,危害部位首先是
根部。目前未见有立枯丝核菌危害马占相思的报道。
本文报道的马占相思苗木茎腐病 ,主要危害 1年生以
内扦插苗 ,症状首先在寄主的茎基部位和插穗切口处
出现 ,发病严重 ,蔓延迅速 ,给生产带来严重的损失 ,
因而对该病害进行研究并及早提出有效的防治措施 ,
对马占相思生产必定有重大的意义。
1 室外调查
  调查区位于广西高峰林场总场中心苗圃和银岭
316 Guangx i Sciences, Vo l. 9 No. 4, November 2002
DOI : 10. 13656 /j . cnki . gxkx . 2002. 04. 023
分场新造林地。 2001年 4~ 6月 ,调查区有相当部分
马占相思苗木出现茎腐萎蔫、枯死 ,新造林地、炼苗苗
床、扦插苗床的苗木均有发病 ,而且发病严重 ,并且有
迅速蔓延趋势 ,感病苗木短时间内整株死亡。
1. 1 调查区概况
  新造林地:坡度 25~ 30°,发病地多为阳坡 ,造林
前炼山全垦 ,造林用的苗木为半年龄扦插苗 ,上山造
林前炼苗 15 d。同一造林地段上混种有厚荚相思实生
苗 ,但未见厚荚相思实生苗有此病发生。
  炼苗苗床:地势平坦 ,但苗床稍低 ,部分排水沟有
积水现象。营养基质为黄心土加表土 ,营养袋表土易
板结 ,苗木密度较大 ,高生长不整齐。
  扦插苗苗床: 设置在全封塑料大棚内 ,有保温、全
遮荫及自动喷雾装置 ,但棚内空气对流较差 ,相对湿
度 90%~ 100% ,且温度比室外高 ,常达 25~ 35℃ ;营
养基质有 3种: 泥炭土即椰子壳粉 (从广东调入 )、细
砂加泥炭土、细砂 ;插穗大部分较幼嫩 ,苗床上及走道
附近有病株残体和用过的泥炭土堆积物。
1. 2 病害调查及统计
  参照吴金光等 [5 ]的病害调查方法 ,先踏查 ,然后
在造林地按大样本原理 [ 6] ,分上、中、下坡设样点调
查 , 50株为 1个重复 ,共设 3个重复。 在圃地根据各
龄级苗木发病的大致情况 ,选择具有代表性的发病
点 ,设置标准地 9块 ,每 0. 5 m2 ,调查苗木的发病情
况。
1. 3 调查结果与分析
  统计各龄级苗木的平均发病率及病死率见表 1。
表 1 各龄级苗木发病情况
Table 1 Morbidity of seedlings of all age-groups
龄级
Age g r oup
发病率
Morbidity
(% )
平均发病率
Average mo rbidity
(% )
病死率
Mor tality
(% )
1~ 4月龄
(扦插苗床 )
1 to 4 months
( Cutting
seedbed)
40~ 100 72. 6 53. 5
5~ 8月龄
(炼苗苗床 )
5 to 8 months
( Seedbed fo r
t raining
seedling s)
15~ 25 18. 3 16. 2
10~ 12月龄
(新造林地 )
10 to 12
month s ( New
affo resta tion
field)
10~ 15 12. 1 10. 5
  由表 1可见 ,茎腐病发病率及发病程度与苗龄及
环境条件密切相关。 苗木幼嫩密集易发病且受害严
重 ;温暖、潮湿天气有利于病害的发生与传播。从营养
基质来看 ,苗木发病率是泥炭土> 泥炭土加细砂> 黄
心土加地表土。以泥炭土为营养基质的苗床上常见到
有病原菌的菌丝滋长现象。以黄心土作表面土易板
结、上坡和阳坡造林地日照时间长且强度大 ,易使苗
木茎基部位皮层受灼伤 ,导致病原菌侵入危害。 圃地
苗床附近的病株残体及泥炭土是病原菌越夏、越冬的
场所 ,未及时清除 ,病害容易发生和蔓延。
2 病原菌鉴定
2. 1 材料与方法
2. 1. 1 病原菌的分离培养
  分别采集各龄级苗木的病株 ,一部分做保湿培
养 ,观察病原菌在病株上出现的情况及特点 ,徒手切
片观察其形态特征 ;另一部分做常规组织分离培养与
纯化 [7 ] ( PDA培养基 , 25℃培养 ) ,观察其培养性状。
经分离、纯化得 6个菌株 ,编号为: F、 R、 Co、 V、 M、
Cy。
2. 1. 2 病原菌致病性测定
  分 2次人工接种。第 1次接种 (室外 , 6月 21日 )
除 R用菌丝接种外 ,其它菌株用分生孢子悬浮液 (每
毫升约 1. 3× 106个孢子 )接种 ,接种用的苗木为 8~
10月龄健康马占相思营养袋扦插苗 ,接种部位为茎
基 (已基本木质化 ) ;分别用灼伤和无伤 2种方法 ,用
无菌脱脂棉蘸取分生孢子液或菌丝液敷于接种部位 ,
每个菌株接 5株 ;以无菌水接种作对照 ,对照接种 3
株 ;用无菌塑料带绑好做局部保湿。 第 2次接种 (室
内 , 7月 5日 )的供试菌种为 F、 R、 F+ R,改灼伤为刺
伤 ,其余方法与第 1次接种相同 ;用作接种的苗木先
除去营养袋及泥土 ,用清水洗净 ,再用无菌水清洗 2
~ 3次 ,用无菌珍珠岩做培养基质 ,无菌水调节适宜
的湿度 ;接种后置于瓶内加盖保湿培养 ,每天通气 1
次 ,并用无菌水喷雾植株 ,每个菌株各接 10株苗木 ,
以无菌水接种作对照 ,对照接种 5株苗木。
  接种后定期调查发病率、死亡率及病情指数 [5 ]。
  病情指数 = ∑ (各病级株数×该级代表数值 )调查总株数×最高一级代表数值
× 100
  发病严重程度分级标准 (以枝干为单位 ) , 0级:
接种点不发病 ,以 0为代表数值 ; 1级: 病斑占枝干周
长 1 /4以下 ,以 1为代表数值 ; 2级:病斑占枝干周长
1 /4~ 1 /2,以 2为代表数值 ; 3级:病斑占枝干周长 1 /
2~ 3 /4,以 3为代表数值 ; 4级:病斑占枝干周长 3 /4
以上 ,已围绕枝干一圈 ,形成明显的段斑 ,以 4为代表
数值 ; 5级: 病斑缢缩 ,并向上、向下扩展 ,叶状柄枯
黄 ,植株濒于死亡或死亡 ,以 5为代表数值。
317广西科学  2002年 11月 第 9卷第 4期
2. 2 鉴定结果与分析
2. 2. 1 病原菌致病力测定
  致病力测定结果见表 2。
表 2 致病力测定结果
Table 2  Pathogen icity examination
接种
次序
No. in-
oculation
菌株
St rain
发病率
Morbidi ty
(% )
死亡率
Mo rtalit y
(% )
病情
指数
Disease
index
  备注
   Remark
第 1次
No. 1
R    100   60   84 接种后第 14天
调查
Check ed at th e
14th day af ter in-
oculation
F 100 40 76
Co 40 0 16
V 20 0 4
M 0 0 0 对照不发病 Un-
found diseas e in
the cont rol
Cy 0 0 0
第 2次
No. 2
R 伤口   100
Wound ed
非伤口  60
Unw ounded
  50
  20
  80
  50
接种后第 7天调
查 Check ed at
the 7th day af ter
inoculation
F 伤口   90
Wound ed非伤口  50
Unw ounded
40
20
76
40
对照不发病 Un-
found diseas e in
the cont rol
R+ F 伤口   100
Wound ed
非伤口  60
Unw ounded
60
20
88
48
  由表 2可见 ,供试的 6个菌株中 , R、 F和 Co具
有致病力 ,其它菌株基本无致病力 ,并且以 R和 F致
病率最高 ,其症状与自然发病症状一致 ,再次组织分
离 ,仍得到原来菌种 ,说明分离所得的菌种是茎腐病
的致病菌 ,它们导致的发病率 ,死亡率和病情指数明
显高于其它菌株 ,而 Co的致病力相对较弱。V、M、 Cy
菌株基本无致病力。
  第 1次接种 (室外接种 ): 第 7天开始死亡 ;对发
病严重及死亡的植株进行根部检查 ,发现 R危害的
病株有少量根部变褐色和黑色 ,而 F危害的病株根
部基本无变化 ;它们导致的茎腐症状都明显。Co接种
的植株第 9天才见显症状 ,病斑扩展极慢 ,其边缘已
产生愈伤组织 ,植株生长无明显障碍。
  第 2次接种 (室内接种 ): 用 R、 F和 F+ R做刺伤
接种的植株 48 h内均已发病。用 F接种的植株第 3
天已有个别病株的病斑绕茎基一圈 ,并且开始缢缩 ,
植株萎蔫死亡 ;用 R接种的植株第 4天开始死亡 ,肉
眼可见到菌丝体由接种点萌发向上下扩展危害的状
况 ,病株的叶状柄上有许多蜘蛛网状的菌丝体。用 R
+ F混合接种的植株其发病时间及致病症状与各自
单独接种症状一致 ,但病情指数较高 ,显症也较早 ,说
明这 2种病原菌混合接种的致病力较强。
2. 2. 2 病害的症状
  马占相思苗木茎腐病的症状首先在寄主的地茎
部位和插穗切口处出现。病斑初为淡褐色小点 ,逐渐
扩展 ,最后围绕茎基一圈 ,变成深褐色至黑色的段斑 ,
由皮层深入到木质部 ,并向上、向下扩展 ,向上扩展较
快。 4~ 5月份 ,气候温暖潮湿、苗木密集、苗床积水情
况下病害发展很快 ,病斑呈水渍状坏死 ,幼嫩枝叶 (叶
状柄 )呈绿色萎蔫死亡 ,这时根部未见异常。病害发展
到后期 ( 6~ 7月 ) ,常见到发病较早的茎基部位有白
色块状菌丝体和粉红色的分生孢子堆 ,相当部分病株
上出现粒状、块状的菌核 ,泥黄色和深褐 ;苗木茎叶
(叶状柄 )有发达的菌丝体 ,白色至褐色 ;遇高温、干燥
天气 ,茎基部干缩、皮层皱裂易剥落而露出本质部 ,髓
心和木质部坏死 ,灰黑色 ,这时少数根部变色坏死。大
部分死亡植株梢部保湿条件下长出淡肉色带粘液的
分生孢子堆 ,镜检及组织分离得到菌株 Co ,它产生的
孢子堆肉眼观察与菌株 F分生孢子堆有相似之处 ,
但本质上不同。另外 ,有时还镜检和分离到 M、V、 Cy
菌株。
2. 2. 3 病原菌的形态
  菌株 R:产生颗粒或块状菌核 ,长在病株皮层 ,用
PDA培养基培养也有菌核产生 ;菌核近圆形至不规
则形 ,直径约 0. 5~ 2 mm,内外颜色一致 ,褐色至深
褐色 ,表面粗糙 ,有褐色菌丝与基物相联 (菌核表面带
有菌丝 ) ;菌丝初为无色 ,后为褐色 ,近直角分枝 ,分隔
处缢缩 ,不产生无性孢子 ,只产生不孕菌丝和菌核 ,菌
丝直径 12~ 13. 5μm。 根据文献 [8]鉴定为半知菌亚
门 ,丝孢纲 , 无孢科 ,丝核菌 属的立枯丝核菌
( Rhizoctonia solani Kuhn)。
  菌株 F:菌丝无色 ,有隔 ;分生孢子梗集生于瘤状
假子座上 ,子座褐色 ;产生大、小型分生孢子 ,无色 ,大
型分生孢子镰刀形或纺锤形 , 1~ 5隔 ,小型分生孢子
卵圆形或近圆形 ,单胞 ;分生孢子梗产生分生孢子时
具有瓶状小梗 ;常见到厚垣孢子产生 ,顶生、间生或串
生 ,球形或近球形 ,壁厚而光滑。该菌在 PDA培养基
上培养不产生子座 ,但可见到分生孢子梗上的产孢细
胞 (瓶状小梗 ) ; 25℃恒温培养 4 d后菌落直径大于
2. 5 cm,菌丝分泌色素使培养基呈泥黄色至褐色。各
种分生孢子大小为:厚垣孢子 5~ 11. 5μm,小型分生
孢子大为 5~ 14. 4μm× 2. 0~ 3. 5μm;大型分生孢子
大小为: 1隔 6. 25~ 19. 0μm× 2. 25~ 3. 0μm, 2隔
7. 5~ 28. 75μm× 2. 25~ 3. 5μm, 3隔 19. 0~ 33. 0
318 Guangx i Sciences, Vo l. 9 No. 4, November 2002
μm× 2. 5~ 3. 75μm, 4隔 22. 5~ 35. 5μm× 2. 75~
4. 5μm, 5隔 30. 0~ 45. 0μm× 3. 5~ 4. 5μm。根据文
献 [8, 9]鉴定为半知菌亚门 ,丝孢纲 ,瘤座孢目 ,瘤座
孢科 ,镰孢霉属的尖镰孢霉菌 ( Fusarium oxysporum
Schiecht )。
  同样 ,根据其它 4个菌株的病原菌形态特征和培
养 性状 , 按文献 [ 8 ]鉴定病菌株 Co 为炭疽菌
( Colletotrichum sp. )、 M 为丛 梗 孢 菌 ( Monil ia
sp. )、V为轮枝孢菌 ( Vert icil l ium sp. )、 Cy为帚梗柱
孢菌 ( Cyl indrocladium sp. )。这 4个菌株对马占相
思苗木的致病力较弱或无 ,它们不是马占相思苗木茎
腐病的病原菌。
3 结束语
  立枯丝核菌和尖镰霉孢菌均为土壤习居菌 (土传
病菌 ) ,可单独和混合侵染 ,混合侵染比单独侵染致病
性强 (表 1)。 2种病原菌均以伤口侵入为主 ,因此 ,在
调查区内扦插苗有伤口 ,加之较幼嫩 ,受害严重 ,而实
生苗无伤口 ,尚未见有此病发生。 2种病原菌侵入危
害苗木后 ,苗木抗病性差 ,易诱发炭疽菌侵入危害。有
关炭疽菌的侵染与为害有待进一步探讨。
  马占相思苗木茎腐病的发生和蔓延与营养基质、
寄主苗龄、苗木密度、插穗受伤程度、造林地坡向和坡
位、环境的温湿度条件等各因素密切相关 ,在塑料大
棚内发病最严重 ,且全年可发病。
  目前马占相思苗木茎腐病发病仍有一定地理局
限性 ,防治上首先要注意杜绝病原菌的传播 ,阻止带
病的苗木上山造林。对已发病的圃地及造林地 ,及时
清除病株残体 ,集中烧毁 ,用石灰处理种植穴 ,清除苗
床带有病原菌的基质 ,集中消毒处理 ,防止病害蔓延。
对已经发病的苗木 ,用敌克松、多菌灵等药剂交替防
治。在生产管理上 ,注意合理密度育苗 ,加强通风透
气 ,适当作高床并控制苗床的湿度 ,选择透气性好的
沙壤土加黄心土做营养基质 ,防止病原菌兹生和侵
染 ;合理施肥 ,提高苗木的木质化程度 ,用已木质化的
壮苗上山造林 ,减少灼伤 ,最低限度地降低生产上的
损失。另外 ,在采集插穗时注意切口的完整性 ,减少操
作损伤 ,扦插前进行伤口消毒处理 ,防止病原菌从切
口处侵入危害。
  尖镰孢霉菌除与马占相思枯萎病的病原菌属相
同的种外 ,还与松杉苗木猝倒病及油桐枯萎病 [5 ]的病
原菌属同一种 ,但它们是否属于同一小种或各为专化
型 ,有待进一步研究。
  致谢
  本研究得到高峰林场营林科和中心苗圃大力支
持 ,广西大学林学院梁红艳讲师参加部分外业调查工
作 ,病原的鉴定工作得到广西大学林学院韦继光副教
授的大力帮助 ,在此一并致谢!
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(责任编辑:邓大玉 )  
319广西科学  2002年 11月 第 9卷第 4期