全 文 ：收稿日期:2015-01-26
基金项目:天津市科技计划项目(12TXGCCX03800)
作者简介:牛换云(1991-) ，女，在读硕士研究生，专业方向:中药化学;Tel:022-27423435，E-mail:nhyun900510@ 163. com。
* 通讯作者:宋新波，Tel:022-27494976，E-mail:songxinbo@ tjutcm. edu. cn。
湖北贝母与紫花鄂北贝母中 4 种生物碱的含量比较分析
牛换云1，金施施1，贾宇平1，张晓雪1，余河水1，宋新波1，2*
(1. 天津中医药大学，天津 300193;2. 天津中一制药有限公司，天津 300193)
摘要 目的:建立同时测定贝母素甲、贝母素乙、贝母辛和湖贝甲素含量的方法，并首次对湖北贝母和紫花鄂
北贝母中 4 种生物碱的含量进行比较分析。方法:色谱柱为 Unitary C18(250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ，以乙腈-水(含
0. 05%的二乙胺)为流动相进行梯度洗脱，柱温 35 ℃，流速 1. 0 mL /min。结果:湖北贝母中贝母素乙的含量较高，
贝母辛次之，贝母素甲和湖贝甲素的含量较低;紫花鄂北贝母中贝母素乙的含量也较高，贝母辛的含量与湖北贝母
相当，贝母素甲的含量最低，且不含湖贝甲素。结论:该方法简便、快速，分离度好、重现性好，结果可靠，可作为湖
北贝母与紫花鄂北贝母质量评价的依据。
关键词 湖北贝母;紫花鄂北贝母;生物碱;ELSD
中图分类号:Ｒ282. 74 /Ｒ284. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2015)10-2105-04
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2015. 10. 022
Comparative Analysis of Content of Four Alkaloids in Fritillaria hupehensis
and Fritillaria ebeiensis var. purpurea
NIU Huan-yun1，JIN Shi-shi1，JIA Yu-ping1，ZHANG Xiao-xue1，YU He-shui1，SONG Xin-bo1，2
(1. Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China;2. Tianjin Zhongyi Pharmaceutical Co.，Ltd.，Tianjin
300193，China)
Abstract Objective:To establish an assay method for simultaneous determination of peimine，peiminine，peimissine and hupehe-
nine，and to make a comparative analysis of the content of four alkaloids in Fritillaria hupehensis and Fritillaria ebeiensis var. purpurea
for the first time. Methods:A Unitary C18 column(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)was chosen with acetonitrile-water(containing 0. 05% di-
ethylamine)as mobile phase in a gradient program. The column temperature was 35 ℃ and the flow-rate was 1. 0 mL /min. Ｒesults:
There was high content of peiminine and the content of peimissine was inferior to peiminine in Fritillaria hupehensis. Ｒelatively speak-
ing，peimine and hupehenine were much lower than the other two ingredients. Fritillaria ebeiensis var. purpurea also contained high levels
of peiminine，the minimum content of peimine and equivalent content of peimissine comparing with Fritillaria hupehensis. In addition，it
didnt contain hupehenine in Fritillaria ebeiensis var. purpurea. Conclusion:This method is simple and fast，and it has good separation，
reproducibility and reliable results. Also，it can be used as basis for the quality evaluation of Fritillaria hupehensis and Fritillaria ebeien-
sis var. purpurea.
Key words Fritillaria hupehensis Hsiao et K. C. Hsia;Fritillaria ebeiensis G. D. Yu et G. Q. Ji var. purpurea G. D. Yu et P. Li;Al-
kaloid;ELSD
湖北贝母为百合科贝母属植物湖北贝母 Fritil-
laria hupehensis Hsiao et K. C. Hsia的干燥鳞茎，具有
清热化痰、止咳、散结的功效〔1〕。紫花鄂北贝母
Fritillaria ebeiensis G. D. Yu et G. Q. Ji var. purpurea
G. D. Yu et P. Li 亦属于百合科贝母属植物，是鄂北
贝母 Fritillaria ebeiensis G. D. Yu et G. Q. Ji 的变
种〔2〕。现代研究表明，贝母中的甾体生物碱种类较
多，是贝母止咳化痰作用的主要有效成分〔3〕。贝母
素甲、贝母素乙和贝母辛属于甾体生物碱类，在传统
用药川贝母和浙贝母的活性研究中多见报道。川贝
母的野生资源少，价格高，因此对其他含同类生物碱
成分的贝母种类的资源的开发显得尤为重要。
湖北贝母中主要生物碱成分为贝母素甲、贝母
素乙、贝母辛、湖贝甲素苷、湖贝甲素、湖贝乙素、湖
贝嗪等，其中，贝母素乙、贝母素甲、贝母辛和湖贝甲
素的含量较高。紫花鄂北贝母中亦含有较高含量的
贝母素乙、贝母素甲和贝母辛〔4〕。湖贝甲素为湖北
贝母区别其他贝母的特有生物碱类成分。本研究建
立了贝母素甲、贝母素乙、贝母辛和湖贝甲素 4 种成
分的含量测定方法，并对 6 批湖北贝母和 6 批紫花
鄂北贝母进行了含量测定，以期为湖北贝母和紫花
鄂北贝母的质量控制与资源开发提供参考。
·5012·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 38 卷第 10 期 2015 年 10 月
1 仪器与材料
高效液相色谱仪(二元高压泵:LC-20AD;系统
控制器:CBM-20A;柱温箱:CTO-10A，日本岛津公
司) ;Alltech 6000 蒸发光散射检测器(CSChrome
Plus色谱工作站，美国奥泰科技(中国)有限公司) ;
Unitary C18色谱柱(250 mm × 4. 6 mm，5 μm，北京华
谱新创科技有限公司) ;XWK-Ⅲ无油空气泵(天津
市华生分析仪器厂) ;ES-1000E电子天平(长沙湘平
科技发展有限公司) ;AL-204 精密电子天平、AB135-
S电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司) ;
Milli-Q超纯水系统(美国 Millipore 公司) ;乙腈为色
谱纯(美国 Fisher 公司) ;液相用水为超纯水;二氯
甲烷、三氯甲烷、甲醇和二乙胺均为分析纯(天津江
天化工技术有限公司)。贝母素乙(质量分数≥
98%，批号:AW784B)、贝母素甲(质量分数≥98%，
批号:AW783P)、贝母辛(质量分数≥98%，批号:
AW785X)和湖贝甲素(质量分数≥ 98%，批号:
BY460H)对照品均购自天津一方科技有限公司。
实验用湖北贝母药材于 2013 年 7 月购自湖北
省恩施，编号分别为 HB130701 ～ HB130706;实验用
紫花鄂北贝母药材于 2014 年 6 月采自河南省信阳，
编号分别为 ZHEB140601 ～ ZHEB140606。经天津
中医药大学张丽娟教授鉴定为百合科贝母属植物湖
北贝母 Fritillaria hupehensis Hsiao et K. C. Hsia 的干
燥鳞茎和紫花鄂北贝母 Fritillaria ebeiensis G. D. Yu
et G. Q. Ji var. purpurea G. D. Yu et P. Li 的干燥鳞
茎。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:Unitary C18色谱柱(250
mm × 4. 6 mm，5 μm) ;流动相:0. 05%二乙胺溶液
(A)-乙腈(B) ，梯度洗脱(0 ～ 10 min，65% ～ 80%
B;10 ～ 17 min，80% ～ 90% B;17 ～ 27 min，90% B;
27 ～ 30 min，90% ～95% B;30 ～ 35 min，95% B) ;流
速:1. 0 mL /min;ELSD检测器参数:载气流速为 2. 8
L /min;漂移管温度为 105 ℃;进样量:10 μL;柱温:
35 ℃。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取贝母素甲、贝
母素乙、贝母辛和湖贝甲素对照品适量，加甲醇配制
成浓度分别为 0. 292、0. 224、0. 140 和 0. 261 mg /mL
的混合对照品溶液，备用。
2. 3 供试品溶液的制备 取干燥后的贝母药材粉
末(过 80 目筛)约 2 g，精密称定，置于 100 mL 具塞
锥形瓶中，加浓氨试液 4 mL浸润 1 h，精密加入二氯
甲烷-甲醇(4∶ 1)的混合溶液 40 mL，混匀后称重，置
80 ℃水浴中加热回流 2 h，冷却至室温，补足损失的
重量，过滤。精密量取滤液 20 mL 置蒸发皿中，水
浴蒸干，残渣加甲醇溶液少量多次转移至 2 mL 量
瓶中，定容，摇匀后过 0. 45 μm微孔滤膜，即得。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 线性关系考察:取上述混合对照品溶液，采
用逐级稀释法稀释制备 5 个浓度梯度的混合对照品
溶液。按照“2. 1”项下色谱条件将初始浓度混合对
照品溶液分别进样 20、10 μL，其他 4 个浓度各进样
10 μL，以各对照品峰面积值的常用对数值 Y为纵坐
标，以其相对应的进样量 X(μg)的常用对数值为横
坐标绘制标准曲线，得到的回归方程分别为:贝母素
甲，Y1 = 1. 1687X1 + 6. 3158，r1 = 0. 9976;贝母素乙，
Y2 = 1. 1601X2 + 6. 5173，r2 = 0. 9980;贝母辛，Y3 =
1. 0725X3 + 6. 4853，r3 = 0. 9973;湖贝甲素，Y4 =
1. 0661X4 + 6. 6064，r4 = 0. 9975。表明贝母素甲、贝
母素乙、贝母辛、湖贝甲素进样量在 0. 183 ～ 5. 84
μg、0. 070 ～ 4. 48 μg、0. 0875 ～ 2. 80 μg、0. 0816 ～
5. 22 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。
2. 4. 2 精密度试验:取“2. 2”项下混合对照品溶
液，重复进样测定 5 次，计算各对照品峰面积的 ＲSD
分别为 1. 75%、1. 39%、2. 06%、1. 21%，表明仪器
的精密度良好。
2. 4. 3 稳定性试验:取“2. 3”项下供试品溶液，分
别在 0、2、4、8、12、24 h进行测定，记录各峰面积，贝
母素甲、贝母素乙、贝母辛和湖贝甲素的峰面积
ＲSD 值分别为 2. 32%、2. 44%、2. 68%、2. 65%，表
明供试品溶液在 24 h内稳定性良好。
2. 4. 4 重复性试验:取同一批湖北贝母样品 5 份，
按“2. 3”项下方法制备供试品溶液并测定，同批样
品中贝母素甲、贝母素乙、贝母辛和湖贝甲素的峰面
积 ＲSD 值分别为 2. 61%、2. 35%、1. 94%、2. 85%，
表明该方法重复性良好。
2. 4. 5 加样回收率试验:取已知含量的湖北贝母
样品 6 份，各 1 g，精密称定。分别精密加入一定量
的贝母素甲、贝母素乙、贝母辛和湖贝甲素对照品，
按“2. 3”项下方法制备供试品溶液并测定。贝母素
甲、贝母素乙、贝母辛和湖贝甲素的平均加样回收率
分别为 98. 16%、98. 09%、101. 24%、101. 77%，ＲSD
值分别为 1. 75%、1. 74%、1. 80%、1. 50%。
2. 5 含量测定 将 12 批湖北贝母和紫花鄂北贝
母样品分别按照“2. 3”项下方法制备样品溶液，按
“2. 1”项下色谱条件进行测定，进样 5 μL，平行操作
3 次，通过标准曲线计算两种贝母样品中 3 种成分
的含量。含量测定结果见表 1，色谱图见图 1。
3 讨论
·6012· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 38 卷第 10 期 2015 年 10 月
表 1 不同批次湖北贝母与紫花鄂北贝母中 4 种成分的含量测定结果(mg/g)
品种 样品编号 贝母素甲 贝母素乙 贝母辛 湖贝甲素
湖北贝母 HB130701 0. 2642 1. 680 0. 5431 0. 1705
HB130702 0. 3816 2. 419 0. 5594 0. 2493
HB130703 0. 3662 2. 397 0. 6791 0. 2467
HB130704 0. 3059 2. 031 0. 6393 0. 2052
HB130705 0. 4163 2. 769 0. 7591 0. 2805
HB130706 0. 1895 1. 209 0. 4620 0. 1235
紫花鄂北贝母 ZHEB140601 0. 0683 1. 454 0. 7494 －
ZHEB140602 0. 0609 1. 341 0. 6684 －
ZHEB140603 0. 0751 1. 554 0. 8243 －
ZHEB140604 0. 0550 1. 110 0. 5931 －
ZHEB140605 0. 0531 1. 121 0. 5762 －
ZHEB140606 0. 0451 0. 992 0. 4946 －
图 1 混合对照品(A)、湖北贝母样品(B)和
紫花鄂北贝母样品(C)HPLC图谱
1. 贝母辛 2. 贝母素甲 3. 贝母素乙 4. 湖贝甲素
3. 1 提取方法的选择 本研究选取了回流提取和
超声提取两种常用的提取方法并与药典方法作对
比，试验结果表明，药典方法对贝母辛的提取率远低
于回流提取法和超声提取法，其他 3 种生物碱的提
取率也相对偏低;而回流提取法和超声提取法提取
该 4 种生物碱的提取率相当，且方法简单、快速、易
于操作。故选用回流提取法进行供试品的提取。
3. 2 湖贝甲素保留时间的确定 湖贝甲素作为湖
北贝母特有的生物碱类成分，对湖北贝母的质量评
价具有非常重要的意义。本研究在考察流动相洗脱
梯度条件时，参照 2010 年版中国药典设置的以乙
腈-0. 02%二乙胺溶液(75∶ 25)为流动相进行样品的
洗脱，结果发现在该条件下湖贝甲素未被洗脱下来。
通过对流动相的梯度优化，实验最终确定“2. 1”项
下的色谱条件，既使各个成分的分离度达到了要求，
又显著提高了分离效率。
3. 3 含量测定结果的比较分析 从贝母的产区归
属来讲，湖北贝母属于鄂贝母类，紫花鄂北贝母属于
皖贝母类，两者均生长在长江中下游地区，外观形态
比较接近。由表 1 和图 1 可知，不同批次的湖北贝
母和紫花鄂北贝母中所含的主要生物碱类的成分相
近，含量上则有明显的差异。其中，湖北贝母中贝母
素乙的含量最高，在 0. 12% ～ 0. 28%之间，贝母辛
的含量在 0. 046% ～ 0. 076%之间，贝母素甲和湖贝
甲素的含量较低，前者的含量在 0. 019% ～ 0. 042%
之间，后者的含量在 0. 012% ～ 0. 028%之间;紫花
鄂北贝母中亦含有较高含量的贝母素乙，含量范围
为 0. 099% ～ 0. 16%，贝母辛的含量与湖北贝母相
当，范围为 0. 049% ～ 0. 082%，贝母素甲的含量最
低，范围为 0. 0045% ～ 0. 0075%，紫花鄂北贝母中
不含湖贝甲素。该含量测定的结果与肖培根等〔5〕
在关于中药贝母基原植物及药用亲缘学的研究结果
相符。
由表 1 结果还可以看出，不同批次间同种贝母
的含量测定结果不尽相同。湖北贝母和紫花鄂北贝
母中前 5 批药材即编号为 HB130701 ～ HB130705 和
ZHEB140601 ～ ZHEB140605 的样品含量明显高于
编号为 HB130706 和 ZHEB140606 的第 6 批药材。
两种贝母的第 6 批药材从外观上看与前 5 批药材相
比均有明显的发黑迹象，究其原因可能是因为在晒
干药材的过程中，由于天气潮湿导致晒干的周期变
长，从而导致药材中生物碱类成分的含量降低。另
·7012·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 38 卷第 10 期 2015 年 10 月
外，因湖北贝母和紫花鄂北贝母鳞茎的鳞片多易于
繁殖〔2〕，且产量高，有利于解决贝母野生资源濒危
问题，因此有必要对其进行深入的化学成分和药理
活性研究，为贝母类药材的资源开发和药材质量评
价提供参考依据。
本试验建立了同时测定贝母素甲、贝母素乙、贝
母辛和湖贝甲素含量的分析方法。该方法简单快
速、重现性好，对湖北贝母和紫花鄂北贝母的质量控
制提供了依据。
参 考 文 献
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