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朱砂七及其提取物的抗炎作用研究



全 文 :— 48 — 现代中药研究与实践2011年第25卷第5期Chin Med J Res Prac,2011 Sept.,Vol.25 No.5
分子量物质的容量因子以很大的斜率随流动相的组
成发生变化,这意味着保留时间对流动相的组成变化
十分敏感,用等度洗脱不能得到很好的重现性结果,
故采用梯度洗脱 ;同时梯度洗脱可以提高分离度,改
善峰形,减少拖尾,避免了使用甲酸等在低波长下的
吸收对检测结果的影响。
3.2 做血浆样品时,用甲醇或乙腈沉淀蛋白,一般
用血浆与沉淀剂的比例为 1:(3~5),沉淀剂量过多
药物稀释响应降低,沉淀剂量少蛋白沉淀不完全。
PDGF 属于内源性物质,甲醇比例过高,会将部分
PDGF 沉淀 ;甲醇比例过低,蛋白沉淀不完全,同时
产生的基质效应比较明显,不利于测定。本文采用血
浆血浆与甲醇的比例为 1:3。
3.3 目 前 测 定 PDGF 含 量 的 方 法 多 用 RIA 和
ELISA,其灵敏度和特异性均能满足研究要求。本
研究所建立的测定 PDGF 含量的 HPLC 测定方法,
方法学评价是合乎要求的,操作简单、快速、方
便,而限于仪器自身条件,虽其灵敏度不及 RIA 和
ELISA,但对于 ng 级含量的 PDGF 检测并不受影响。
参考文献
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朱砂七及其提取物的抗炎作用研究
王晓梅 1,袁菊莉 1,李 健 2,马叶涛 1,郭 舜 1,强文舟 1,贾继龙 1
(1. 宝鸡文理学院化学化工系,陕西省植物化学重点实验室,陕西 宝鸡 721013 ;
2. 宝鸡市人民医院,陕西 宝鸡 721000 )
摘要 :目的 观察朱砂七及其提取物的抗炎作用。方法 采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法、鸡蛋清致小
鼠足跖肿胀法和醋酸致小鼠毛细血管通透性增高法制成炎症模型,观察朱砂七及朱砂七蒽醌对动物急性炎
症的影响。结果 朱砂七及其蒽醌对急性炎症渗出及白细胞总数的升高均有一定的抑制作用。结论 朱砂
七及朱砂七蒽醌具有较好的抗炎作用。
关键词 :朱砂七 ;蒽醌 ;炎症 ;小鼠
中图分类号 :R285.5 文献标识码 :A 文章编号 :1673-6427(2011)05-0048-03
Study on Anti-infl ammatory Effects of Polygonum cillinerve (Nakai) Ohwi
and Its Extract
WANG Xiao-mei1 ,YUAN Ju-li1 ,LI Jian2 ,MA Ye-tao1 ,GUO Shun1 ,QIANG Wen-zhou1 ,JIA Ji-long1
(1.Department of Chemistry and Chemical Engineering, Baoji University of Arts and Sciences, Shanxi Key
Laboratory of Phytochemistry , Baoji 721013, China;2.Baoji People’s Hospital, Baoji 721000,China)
Abstract: Objective To observe anti-infl ammatory effects of Polygonum cillinerve(Nakai) Ohwi (PCO)
and extract of PCO.Methods Ear oedema of mice caused by xylene, hind paw edema induced by egg-white in
mice, capillary permeability increase induced by acetic acid in mice were used to be infl ammatory model. Then to
observe the effect of PCO and anthraquinone in PCO on acute infl ammation. Results PCO and anthraquinone in
PCO could not only inhibit the exudation of acute infl ammation, but also inhibit the elevating of white blood cell.
Conclusion PCO and anthraquinone in PCO have signifi cant anti-infl ammatory activity.
Key words: Polygonum cillinerve(Nakai) Ohwi; anthraquinone; infl ammation; mice
收稿日期:2010-12-06
基金项目:陕西省教育厅重点实验室基金资助项目(08JZ08),宝鸡文理学院院级重点项目(ZK0844)。
作者简介:王晓梅(1962~),女,副教授,博士,从事药学教学与科研工作。
DOI:10.13728/j.1673-6427.2011.05.017
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朱砂七别名朱砂莲、猴血七、血三七,为蓼科
植物毛脉蓼 Polygonum cillinerve (Nakai) Ohwi 的干燥
块根。主产于陕西秦岭和大巴山区等地,是 “ 太白七
药 ” 之一,为我国民间传统常用草药。朱砂七性凉,
味苦、微涩,具有清热解毒、止血止痛、祛风湿、调
经之功效。民间主要用于治疗胃肠炎 [1,2]、扁桃体炎、
尿路感染等感染性疾病 ;外用治风湿腰痛,跌打损
伤、外伤出血等 [3]。其主要有效成分包括蒽醌类物质
[4],其中朱砂七总蒽醌是朱砂七清热解毒的主要活性
部位。本实验对朱砂七药材及朱砂七总蒽醌的抗炎活
性进行研究。
1 实验材料
1.1 药物及试剂 朱砂七(购自秦岭太白山区,经
陕西中医学院胡本祥教授鉴定)。地塞米松注射液(山
西晋新双鹤药业有限责任公司 , 批号 : 201007251)。
考马斯亮蓝 G250(国药集团化学试剂有限公司,批
号 20040402)。二甲苯、冰醋酸、柠檬酸钠均为分析
纯。实验用水为去离子水。
1.2 实 验 动 物 清 洁 级 昆 明 小 鼠( 由 第 四 军 医
大 学 实 验 动 物 中 心 提 供 , 合 格 证 号 : SCXK( 军 )
2007-007)。
1.3 设备 UV-2550 紫外 - 可见分光光度计(日本
岛津公司生产);BS-244-SS 电子天平(赛多利斯科
学仪器 ( 北京 ) 有限公司);DK-98-1 型电热恒温水
浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司); R-1002 旋转蒸
发仪(郑州长城工科股份有限公司)。
2 实验方法
2.1 朱砂七蒽醌的制备 [5]
取朱砂七粗粉 100 g,加 20% 硫酸溶液 300 mL
润湿,再加氯仿 500 mL,80℃回流提取 2 h,稍冷后
过滤,残渣弃去,提取液于分液漏斗中,分出氯仿层,
水解液用氯仿萃取至氯仿层色浅为止,合并氯仿液,
用水洗至中性,回收氯仿后蒸干,即得。
2.2 对急性炎症的影响 [6,7]
2.2.1 二甲苯所致小鼠耳廓肿胀实验 取小鼠50
只,体重18~22 g,雌雄兼用,随机分为5组,每组10
只:生理盐水(模型)组、地塞米松(1.8 mg•kg-1)
阳性对照组、朱砂七蒽醌高剂量组(60 mg•kg-1)、朱
砂七蒽醌低剂量组(30 mg•kg-1)及朱砂七原药材煎剂
组(40 mg•kg-1)。各组小鼠灌胃给药,每次1 mL,
每d 1次,盐水组用等容生理盐水,连续8 d,于末次
给药后1 h,在右耳两面同部位涂抹100%二甲苯各
0.03mL,左耳为对照,3 h后小鼠颈椎脱臼处死,沿
耳廓基线剪下两耳,用直径6 mm打孔器左右耳同位
打孔,制备成耳片,称重,计算左右耳片重量差(
即肿胀度),以肿胀度作为炎症指标,计算药物的
肿胀抑制率。
抑制率 =(盐水组肿胀度 - 实验组肿胀度)/ 盐水组肿胀度 ×100%
2.2.2 鸡蛋清诱导的小鼠足跖肿胀实验 取小鼠 50
只,分组、给药同上。各组小鼠在末次灌胃给药 0.5
h 后,于右后跖皮下注射 10%鸡蛋清 0.02 mL,于给
药后 6 h 小鼠颈椎脱臼处死,沿踝关节剪下足部,称
重,计算左右足重量差为肿胀度作为炎症指标,计算
药物的肿胀抑制率。
抑制率 =(盐水组肿胀度 - 实验组肿胀度)/ 盐水组肿胀度 ×100%
2.2.3 冰醋酸诱导的小鼠腹腔渗出性炎症模型 取小
鼠 50 只,分组、给药同上。各组在末次灌胃给药后
0.5 h,腹腔注射 2%冰醋酸 0.3 mL,8 h 后脱颈椎处
死,眼球后取血,用 5% 柠檬酸钠生理盐水 5 mL 做
腹腔灌洗,取 0.5 mL 灌洗液,加入考马斯亮蓝染色
液 5mL,用紫外分光光度计在波长 595 nm 处测定吸
光度(OD 值)。比较各用药组与盐水组的 OD 值,
计算药物的炎症抑制率。
炎症抑制率 =(OD 盐水 -OD 治疗)/ OD 盐水 ×100%
将 所 取 血 液 加 入 抗 凝 试 管 中 , 测 定 白 细 胞
(WBC)总数。按以下公式计算白细胞增高抑制率:
抑制率 =(WBC 盐水 -WBC 治疗)/ WBC 盐水 ×100%
2.3 统计方法 实验数据用 x±s 表示,组间比较采用 t
检验及方差分析法。使用 SPSS13.0 软件进行分析。
3 结果与分析
3.1 朱砂七及其蒽醌对小鼠耳廓肿胀的影响
朱砂七药材组及朱砂七蒽醌高、低剂量组对小
鼠耳廓肿胀度均有抑制作用,与模型组比较,各治疗
组疗效均有统计学意义(p<0.05),结果见表 1。表
明朱砂七药材及朱砂七蒽醌对二甲苯所致的耳廓炎
症具有一定的抑制作用。
3.2 朱砂七及其蒽醌对小鼠足跖肿胀的影响
表1 朱砂七及朱砂七蒽醌对小鼠耳廓及足跖肿胀的影响
Tab.1 Effects of PCO and anthraquinone in PCO on ear oedema and hind
paw edema of mice
组别 耳廓肿胀度(x±s) 抑制率% 足跖肿胀度(±s) 抑制率%
盐水组 2.24±0.12 - 11.24±4.41 -
对照组 1.22±0.09# 46.2 5.81±2.02# 48.31
蒽醌高剂量组 1.67±0.12△ 26.3 5.33±3.79# 52.58
蒽醌低剂量组 1.83±0.11△ 18.3 8.09±5.13 28.02
朱砂七组 1.92±0.13△ 14.3 4.67±1.59# 58.45
注:与盐水组比较,#表示P<0. 01,△表示P<0. 05。
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表 1 中,与模型组比较,蒽醌高剂量组及朱砂
七原药材组具有显著性差异。表明朱砂七药材及朱
砂七蒽醌对蛋清所致的足跖炎症具有一定的抑制作
用。
3.3 朱砂七及其蒽醌对小鼠腹腔毛细血管通透性的
影响
考马斯亮蓝 G-250 在酸性溶液中为棕红色,当
它与蛋白质结合后,变成蓝色,最大吸收波长从 465
nm 转移到 595 nm 处,在一定的范围内,蛋白质含
量与 595 nm 的吸光度成正比。试验中通过测定吸光
度值判断小鼠腹腔渗出物的多少。朱砂七药材组及
朱砂七蒽醌高、低剂量组腹腔洗出液的吸光度值均降
低,结果见表 2,与生理盐水组比较,蒽醌高剂量组
对腹腔毛细血管通透性的抑制率为 34.38%。

3.4 朱砂七及其蒽醌对炎症小鼠白细胞总数的影响
由表 2 可知,朱砂七原药材组及朱砂七蒽醌高、
低剂量组对血中白细胞的升高均有一定程度的抑制
作用。其中朱砂七蒽醌高剂量组抑制率达 40.51%,
与地塞米松组接近。
4 讨论
炎症是指具有血管系统的活体组织对各种损伤
因子的刺激所发生的一种以防御反应为主的基本病
理过程。局部的血管反应是炎症过程的主要特征和防
御反应的中心环节。炎症的局部表现为红、肿、热、
痛和功能障碍,也伴有发热、末梢血白细胞计数改变
等全身反应。朱砂七具有清热解毒之功效,用于多种
炎症性疾病,如胃肠炎 [1,2],扁桃体炎,风湿性关节
炎及尿路感染等疾病。本实验就朱砂七总蒽醌及朱砂
七原药材对急性炎症的影响进行了探讨,发现朱砂七
总蒽醌及朱砂七原药材对急性炎症均有一定的抑制
作用,均可降低毛细血管通透性,减少炎症渗出物的
产生,并可抑制血中白细胞总数的升高。试验中朱砂
七药材组用量远小于与蒽醌高、低剂量组相当的药材
量,但抗炎效果与蒽醌组相当,朱砂七中抗炎成分除
总蒽醌外,可能还有其他成分,或是蒽醌与其他成分
相互作用的结果。朱砂七及其组分的抗炎作用还有待
于进一步探讨。
参考文献
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表2 朱砂七及朱砂七蒽醌对小鼠腹膜炎及白细胞的影响
Tab.2 Effects of PCO and anthraquinone in PCO on infl ammation and
white blood cell of mice
组别 吸光度均值(x±s) 抑制率% 白细胞均值(x±s) 抑制率%
盐水组 0.32±0.029 - 3.53±0.26 -
对照组 0.18±0.024# 43.75 1.62±0.13# 54.11
蒽醌高剂量组 0.21±0.025△ 34.38 2.1±0.34△ 40.51
蒽醌低剂量组 0.23±0.023△ 28.13 2.8±0.71△ 20.68
朱砂七组 0.21±0.02# 28.13 2.54±0.19△ 28.05
注:与盐水组比较,#表示P<0. 01,△表示P<0. 05。
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