全 文 ：2013 年 04 月(上)
收稿日期:2012-07-26;修回日期:2012-08-27
基金项目:陕西省科技攻关项目(2008K02 － 06)
作者简介:姬丽娜(1986 －)，女，硕士研究生，ji0607101033@
126． com．
通信作者:卿素珠(1969 －)，女，教授，博士，suzhuqing@ 163．
com．
朱砂七多糖的提取分离及体外抑菌试验
姬丽娜，张为民，卿素珠，白建龙，史秀明
(西北农林科技大学 动物医学院，陕西 杨凌 712100)
中图分类号:S853． 75 文献标识码:B 文章编号:1004-7034(2013)04 － 0117 － 03
关键词:朱砂七;多糖;水提醇沉法;苯酚 －硫酸法; 体外抑菌
摘 要:为了研究朱砂七多糖( PCP) 的提取及其对奶牛乳房炎分离菌的体外抑制作用，试验采用水提
醇沉法提取 PCP，苯酚 －硫酸法测定 PCP含量，琼脂扩散法和二倍稀释法测定 PCP 对从患乳房炎奶
牛乳汁中分离的 6 株致病菌的体外抑菌作用。结果表明: PCP提取率为 5． 372% ;提取的 PCP含量为
87． 65% ; PCP对金黄色葡萄球菌、沙门菌和绿脓杆菌均有不同程度的抑制作用，且抑菌作用随着 PCP
浓度的升高而增强，对大肠埃希菌、无乳链球菌和深红沙雷菌无抑制作用。说明朱砂七多糖具有一定
的体外抑菌作用。
朱砂七［Polygonum ciliinerve (Nakai)ohwl poly-
saccharide］别名朱砂莲、红药子，始载于《图经本草》，
为蓼科蓼属植物毛脉蓼的块根［1］，味苦、微涩，性凉，
具有清热解毒、活血凉血、止血止泻、去风湿、强腰膝
的功能［2］。朱砂七多糖(PCP)具有一定的体外抗氧
化能力和抗肿瘤活性［3 － 4］，能提高免疫抑制小鼠过氧
化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过
氧物酶(GSH － Px)的水平，在氧化损伤的预防中发
挥重要作用。张为民副教授课题组的前期研究结果
表明，朱砂七氯仿部位和乙酸乙酯部位及进一步分离
物对临床分离的沙门菌、链球菌、无乳链球菌、表皮葡
萄球菌和金黄色葡萄球菌均有一定的体外抑制作
用［5］。本研究在前期工作的基础上，对 PCP 的提取
分离及体外抑菌作用进行研究，以期进一步了解 PCP
的药理作用，为 PCP的开发和应用提供理论依据。
1 材料和方法
1． 1 朱砂七
由陕西省眉县金渠药材分公司太白山草药研究
所卫拉船中药师提供并鉴定，自然风干，粉碎，备用。
1． 2 主要仪器和试剂
紫外可见分光光度计(型号为 UV1102) ，上海天
美科学仪器有限公司生产;循环水多用真空泵(型号
为 SHB － B95) ，郑州长城工贸有限公司生产;旋转蒸
发仪(型号为 RE －52A) ，上海亚荣生化仪器厂生产;
电热恒温水浴锅(型号为 HH． SY21 － Ni － 6c) ，北京
市长风仪器仪表公司生产;超声波清洗器(型号为
KQ －250) ，昆山市超声仪器有限公司生产;生化培养
箱(型号为 HPS － 250) ，苏州安泰技术有限公司生
产;超净工作台(型号为 SW － CJ － IF) ，苏州安泰技
术有限公司生产。乙醇、葡萄糖、浓硫酸和苯酚等均
为国产分析纯;磷酸氢二钾、氯化钠、琼脂粉、牛肉膏、
蛋白胨，均购自北京奥博星生物技术责任有限公司。
1． 3 菌种
金黄色葡萄球菌(Sta． aureus)、大肠埃希菌
(E． coli)、沙门菌(S． almonella)、无乳链球菌(S． aga-
latiae)、绿脓杆菌(P． aeruginosa)、深红沙雷菌(Ser．
rubidaea) ，均由西北农林科技大学兽医微生物学实验
室从患乳房炎奶牛乳汁中分离得到。
1． 4 PCP的提取
将朱砂七粉碎，称取 90 g，用石油醚和 95%乙醇
各脱脂 2 h;加入 900 mL纯化水，超声处理 45 min;于
90 ～ 100 ℃水浴加热回流提取 3 次，时间分别为 3 h、
2 h和 1 h;纱布过滤除去药渣，合并滤液，减压浓缩
至 150 mL;5 000 r /min离心 15 min，向上清液中加入
无水乙醇，使乙醇终浓度为 80%，静置过夜;过滤，取
沉淀物，得到 PCP粗品。将粗品依次用 95%乙醇、丙
酮、乙醚反复洗涤数次，45 ℃烘干即得 PCP。
1． 5 PCP含量的检测
1． 5． 1 标准曲线的绘制 精确称取葡萄糖标准品
50 mg，用 500 mL 容量瓶定容，得 0． 1 mg /mL的标准
溶液。用移液枪移取标准溶液 0，0． 2，0． 4，0． 6，0． 8，
1． 0 mL，分别置于 10 mL 容量瓶中;各瓶再加入 5%
苯酚溶液 1． 0 mL，混匀;迅速加入 5 mL 浓硫酸，摇
匀;静置 10 min 后加纯化水至刻度，定容;再静置
20 min，于 30 ℃水浴中加热 20 min，取出冷却至室
711《黑龙江畜牧兽医》科技版
DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2013.07.025
温。另设纯化水同上平衡操作作为空白对照。用紫
外分光光度计在 300 ～ 600 nm 之间扫描葡萄糖的最
大吸收波长，在最大吸收波长处测定上述溶液的吸光
度值，以吸光度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘
制标准曲线，并计算得回归方程。
1． 5． 2 PCP 含量的测定 称取 PCP 10 mg，配成浓
度为 0． 1 mg /mL的供试液，同上述方法处理，测定吸
光度值，并代入回归方程计算得 PCP相对含量。
1． 6 PCP体外抑菌试验
1． 6． 1 琼脂扩散法抑菌试验 将 PCP 配成浓度为
100 mg /mL的溶液，并以纯化水作为空白对照。在无
菌条件下，用灭菌 L 型玻璃棒将细菌均匀涂抹在直
径为 90 mm的琼脂平板上，用直径为 4 mm的打孔器
打孔，分别在孔内加满纯化水和 PCP 溶液，于 37 ℃
培养 18 ～ 24 h 后观察抑菌环大小并测量抑菌环直
径，重复 3 次取平均值。
1． 6． 2 最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度
(MBC)的测定 将 PCP配成浓度为 200 mg /mL的药
液。采用二倍稀释法，在无菌条件下，取无菌试管 11
支(规格为 15 mm ×100 mm) ，每管加入肉汤 1 mL，在
第 1 管中加入药液 1 mL，然后连续倍比稀释至第 8
管，并从第 8 管弃去 1 mL。第 9，10，11 管分别为药
物对照组(不加细菌)、细菌生长对照组(不加药液)
和肉汤对照组(不加细菌和药物)。除第 9，11 管外，
其余每管均加入细菌悬液 25 μL。接种完毕后，于
37 ℃培养 18 ～ 24 h 。试验重复 3 次，肉眼观察，不
发生混浊变化的最高提取物稀释倍数即为该提取物
的 MIC。吸取已测定出 MIC 的试管培养液各
100 μL，用灭菌 L 型玻璃棒将细菌均匀涂抹到适宜
的琼脂板上，于 37 ℃恒温培养 18 ～ 24 h，以菌落数不
超过 5 个的最低提取物浓度为该提取物的 MBC［6］。
2 结果
2． 1 PCP的鉴别及含量测定结果
经紫外分光光度法测定，葡萄糖标准溶液和 PCP
溶液均在 490 nm有最大吸收波长，结果见图 1，2。
以葡萄糖为标准，得回归方程 A = 2． 946C +
0． 080 7，R = 0． 994 8，线性范围为 0 ～ 60 μg /mL，见
图 3。
采用超声波辅助水提醇沉法对 90 g 朱砂七进行
多糖的提取，得到 4． 835 g PCP，提取率为 5． 372%，
提取物中 PCP含量为 87． 65%。
2． 2 PCP的琼脂扩散法抑菌试验结果
100 mg /mL 的 PCP 对金黄色葡萄球菌、沙门菌
和绿脓杆菌的抑菌直径分别为 10． 30，10． 12，
9． 22 mm;对大肠埃希菌、无乳链球菌和深红沙雷菌
均无抑制作用。
2． 3 PCP的 MIC和 MBC测定结果
PCP对金黄色葡萄球菌、沙门菌的 MIC 分别为
图 1 朱砂七多糖的紫外扫描图谱
图 2 葡萄糖标准品的紫外扫描图谱
图 3 葡萄糖标准品绘制的标准曲线
3． 125，6． 25 mg /mL;对金黄色葡萄球菌、沙门菌的
MBC分别为 12． 5，25． 0 mg /mL;对绿脓杆菌未测出
MIC和 MBC。
3 讨论
植物多糖是一类分子结构复杂且庞大的糖类物
质。近年来，国内外学者已对多种中药多糖的提取、
含量测定及药理活性进行了研究。植物多糖的提取
有多种方法，如超声波提取法、碱液浸提法、酸液浸提
法、热提法等。本研究以超声波辅助水提醇沉法提取
PCP，提取率为 5． 372%，高于崔军见等［3］采用传统回
流的提取方法提取的 PCP(提取率为 5． 1%)。苯
酚 －硫酸法是测定多糖含量的常用方法，具有简便和
准确的优点［7 － 8］，因此用于本研究中 PCP 含量的测
定，但在试验中应注意操作的一致性，特别是加硫酸
时，迅速加入、慢慢加入、直接滴到液面和沿管壁流入
811
Heilongjiang Animal Science
and Veterinary Medicine № 04 2013
2013 年 04 月(上)
对最后结果都会造成差异，需要特别注意;另外，还要
注意反应时间的一致性，以及在加入浓硫酸之后、水
浴加热之前一定要摇匀［9］。
许多植物多糖具有抑菌活性。如甘草多糖对枯
草芽孢杆菌、大肠埃希菌、酿酒酵母菌均有较强的抑
制作用［10］;金樱子多糖具有一定的抑菌活性，特别是
对大肠埃希菌、副伤寒杆菌、白葡萄球菌的抑制作用
很强［11］;从决明子和凤凰木种子中提取的多糖制成
的多糖膜剂，对革兰阳性菌(枯草芽孢杆菌和金黄色
葡萄球菌)和革兰阴性菌(大肠埃希菌)均具有抗菌
活性，其通过破坏细菌细胞的形态发挥抑菌作用。由
于菌种所限，本试验仅选取了 6 种奶牛乳房炎常见致
病菌进行抑菌试验，而 PCP 对其他菌种的抑菌作用
还有待进一步研究，本试验结果初步表明 PCP 具有
一定的抑菌作用，其对革兰阴性菌和革兰阳性菌的抑
菌作用未见明显差异。从 MIC 和 MBC 的测定结果
可知，不同浓度 PCP的抑菌活性之间存在显著差异，
临床应用时应选择其最佳抑菌浓度。
参考文献:
［1］ 张文根，杨赛刚，李波，等． 中国蓼科植物化学成分研究进展
［J］．现代生物医学进展，2008，8(2) :393 － 396．
［2］ 胡步超，周云仙．太白山草药朱砂七化学、药理和临床研究［J］．
中国民族民间医药杂志，1999，36:42 － 43．
［3］ 崔军见，原江锋，张志琪，等． 朱砂七粗多糖的提取及生物活性
的研究［J］．天然产物研究与开发，2007，19(6) :960 － 964．
［4］ 王晓梅，李宗孝，任莉君，等． 朱砂七多糖的抗氧化作用研究
［J］．安徽农业科学，2010，38(34) :19346 － 19347．
［5］ 张为民，张彦明，郭抗抗，等． 朱砂七提取物体外抑菌和抗病毒
活性部位筛选［J］．中国兽医学报，2011，31(5) :710 － 714．
［6］ 石念进，王希春，吴金节，等． 中药复方多糖提取方法优化及对
家禽主要致病菌的体外抑菌作用［J］． 中国家禽，2011(23) :
28 － 32．
［7］ 陈艳，姚宏，李少光，等． 蒲葵子多糖含量测定及其抗氧化活性
研究［J］．福建医科大学学报，2011，45(3) :164 － 166．
［8］ 季宇彬，王帅帅，汲晨锋．龙葵多糖含量测定及组分分析［J］． 分
析化学，2006，34(16) :1665 － 1667．
［9］ 李辉，罗佳波． 苯酚 － 硫酸法测定围乐颗粒中总多糖的含量
［J］．中国药房，2008，19(9) :685 － 686．
［10］ 张百刚，钟旭美，刘晓风，等．甘草多糖的提取及其抑菌试验的研
究［J］．食品工程技术，2010(4) :137 － 140．
［11］ 张庭廷，潘继红，聂刘旺，等．金樱子多糖的抑菌和抗炎作用研究
［J］．生物学杂志，2005，22(2) :41 － 42． (011)
收稿日期:2012-07-09;修回日期:2012-10-08
基金项目:河南科技学院校选项目(0618)
作者简介:徐之勇(1980 －)，男，讲师，硕士，研究方向为动物
营养代谢疾病病理学，
檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼
檼
檼
檼
檼
檼
檼
檼
檼
檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼
檼
檼
檼
檼
檼
檼
檼
檼
殥
殥殥
殥
xuzhiyong_0_817@ 126． com．
中药复方制剂消胀粉对牛磺酸钠致小白鼠
胃黏膜损伤模型胃黏膜组织形态的影响
徐之勇，唐海蓉，余 燕
(河南科技学院 动物科学学院，河南 新乡 453003)
中图分类号:S853． 76 文献标识码:B 文章编号:1004-7034(2013)04 － 0119 － 02
关键词:消胀粉;小白鼠; 牛磺酸钠;胃黏膜; 组织形态
摘 要:为了研究中药复方制剂消胀粉对牛磺酸钠致小白鼠胃黏膜损伤模型胃黏膜组织形态的作用
效果，试验以 60 只小白鼠为试验对象，随机分为 5 组，Ⅰ组为对照组，Ⅱ组为模型组，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组为试
验组。Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组每天分别灌服高、中、低剂量消胀粉混悬液 1 次，Ⅰ、Ⅱ组灌服等体积的 0． 5%羧甲
基纤维素，灌服 20 min后，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组每天再分别灌服牛磺酸钠水溶液 1 次，此过程持续 5 d，于
第 6 天剖杀全部小白鼠，取胃组织制成病理切片，观察小白鼠胃黏膜的组织结构。结果表明:灌服牛
磺酸钠的小白鼠胃黏膜受损严重，而同时灌服牛磺酸钠和消胀粉的小白鼠胃黏膜受损轻微，中剂量组
( Ⅳ组) 小白鼠胃黏膜病变不明显。说明消胀粉可促进胃蠕动，缓解牛磺酸钠对小白鼠胃黏膜的
刺激。
消化不良(dyspepsia)是一种临床征候群，是由胃
动力障碍所引起的疾病，影响了机体对营养物质的摄
取。试验以中兽医药学理论为指导，结合现代研究成
果，精心选药组方进行纯中药复方制剂“消胀粉”的
开发研究，为验证该制剂对牛磺酸钠致小白鼠胃黏膜
损伤模型胃黏膜组织形态的作用效果，特进行了本次
试验，以期为健胃助消化药物的开发提供试验依据和
临床基础。
911《黑龙江畜牧兽医》科技版