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兔尾草抗蛇毒有效部位(05)植化成分的研究



全 文 :登 南 理 医 学 报
一九八六年 第一期
兔尾草抗蛇毒有效部位 (0 5)植化成分的研究
生物学系 温晓凡
摘要 本文介绍蛇药兔尾草抗蛇毒有效部位 (。 5)植化成分的预试 、
提取 、 分离 、 鉴定方法和结果 。 通过聚酞胺柱层析和制备性硅胶薄层
析 , 分离得六结晶 , 并鉴定为黄酮类化合物 。
一 、 导言 · ` ’
兔尾草是豆科 ( L eg “ m ino sa 。 ) 兔尾草属 ( U 1 a1 l’ a) 植物 , 分布于热带亚热带地 区 , 产
于我国华南 、 西南和台湾等省 , 广西壮族人民广泛用于治疗蛇伤 、 蜂鳌 、小儿五府和洗痔疮 。
广西中医学院用兔尾草 U。 汀: L ag oP od i o ide : ( L ) D o s v 地上部分干燥全草水煎剂 , 对眼
镜蛇毒中毒的小白鼠作空 白组对比试验 , 证明兔尾草对蛇毒中毒的小白鼠确有明显的治疗作
用 。 广西中医学院附属医院等四十多个医疗单位 , 用兔尾草水煎膏制成片剂 , 经 3 39 例各种
毒蛇咬伤病人进行临床验证治疗 , 除一例死亡外 , 其余全部治愈 , 治愈率达 9 9 . 7% 。 经动物
药理试验筛选出若干有效部位 , 均为水溶 、 醇溶性部位 。 其中有效部位 ( 。 5) 对蛇毒中毒小
白鼠的治疗作用尤为显著 。 为了改善蛇药剂型 川提高疗效 , 我们对兔尾草抗蛇毒有效部位
( 0 5 ) 植化成分进行了研究 。
二 、 实验方法和结果
实验取用兔尾草U la l ia la g oP o d l’o id e : ( L ) D e s v 地上部干燥全草 , 采自广西天等县 , 为
广西中医学院所提供 。
(一 ) 有效部位 ( 0 5 ) 的$IJ 备 〔 ’ 〕 。
取兔尾草干燥全草 80 克 , 剪碎 , 加 5 倍量的水 , 煎煮两次 , 每次半小时 。 水煎液过滤
浓缩成水煎膏 , 加入 6 倍量 70 %乙醇溶液 , 沉淀去除树胶 , 滤液减压 回收乙醇 , 即得醇提
物 。 醇提物依次用乙醚 、 氯仿萃取 ,以除去脂溶性杂质 ,残余物用 95 %妈醇热回流提取两次 ,
过滤所得提取液即为有效部位 ( 0 5 ) 原液 。
(二 ) 有效部位 ( 。5 ) 植化成分的预试
( l ) 一般预试 : 取 10 m l有效部位 ( 0 5 ) 原液 , 加入 90 m l 的 75 %乙醇稀释后 作为预试
液 , 进行预试验 , 结果如表 (一 ) :
本文承蒙暨大理工学院副院长林剑副教授 、 生物系郑慈英副教授审阅 , 蔡建新同学参加部分实验 , 广
西中医学院采集并免费赠送实脸用兔尾草 , 特此一并致谢 .
8 6
表 (一 )
豆 甫理 医学报 0 16 6年
预试项目 反 应 试 剂 反应结果 考
生物碱类
碘化钻钾试剂
硅钨酸试剂
苦味酸试剂
(一 )
(一 )
(一 )
氨 基 酸

蛋白质类
苟三酮试剂 (一 )
(一 )
搪 类

醛 酮 类
蕙 酿 类

黄 酮 类
双缩服试剂
Fi l l i
n试剂
M Ol i s h试剂
2

4一 二硝基苯肪试剂
0 1 %氢氧化钠试剂
盐酸一镁粉试剂
氨熏 (在滤纸上反应 )
加2 % F eC 13乙醇溶液
(在滤纸上反应 〕
加 2 %A I C I :乙醇溶液
(在滤纸上反应 )
( +)
( +)
( +)
(一 )
( +)
( +)
( +)
( +)
表 (一 ) 预试结果表明 :在有效部位 (。5 ) 中 , 不含生物碱 、 氨基酸和蛋白质 , 而可
能含有糖类 、 黄酮类或其他酚性物质 。
( 2 ) 有效部位 ( 。 5 ) 纸层析和薄层析预试 : 由于有效部位 ( 0 5 ) 植化成分为水溶、 醇
溶性物质 , 其分子极性较大 , 故层析采用极性较大的展开剂 。
纸层析 : 采用杭州纸厂生产的中速层析滤纸 , ( 以稀释的预试液点样 , 用正丁醇— 醋酸— 水 ( B A W ) ( 4 : l : 5 ) 为展开剂 , 展开 36 小时 , 氨熏后置于波长为 3 65 n m的紫外光下观察 , 结果如图 ( 1 ) 。
黄暗亮黄乡
任一 -听 ,
淡竺
黄橡
橡黄
亮黄
暗黄
图()J 展开钊为3八脚以:卜引 的纸色谱 图卿勘从为己AW件卜劝的硅胶箔层色潜
第 1 期 兔尾草抗蛇毒有效部位 ( 05 ) 植化成分的研究 8 7
薄层析 : 采用硅胶 H一C M C 薄层 , 用稀释预试液点样 , 以 B A W ( 4 : 1 : 5 ) 为展开
剂 , 展开 1 . 5小时 , 用 2 % A I C 1 3 甲醇溶液喷雾显色 , 置于波长为 3 6 5 n m紫外光下观察 , 结
果如图 ( 2 ) 。
纸层色谱和薄层色谱进一步表明 : 有效部位 ( 05 ) 中 , 可能 含有多种黄酮类化合物 。
(三 ) 有效部位 ( 0 5 ) 植化成分的分离
( 1 ) 黄酮试 的分离 : 根据预试表 明有效部位 ( 05 ) 中含有多种黄酮类化合物和糖类 ,
故采用聚酞胺柱层析 , 进行分离 。 用湿法装柱 , 少许聚酸胺粉拌样上柱 , 依次用 10 % 、
30 %

50 %

75 %

95 %乙醇溶液进行梯度洗脱 , 用自动部分收集器分段收集洗脱液 , 用薄
层检测 R f值 。 把 R f值相同的洗脱液 (第 34 至 48 管收集液 ) 合并为流分 A 。 流分 A 浓缩后析
出米黄色结晶 , 过滤分离得流分 A 结晶和母液 。
4 取少许流分 A 结晶 , 以乙醇溶解成稀溶液点样 , 用 B A W ( 4 , 1 ` 5 ) 为展开剂 , 进
行纸层层析 , 展开 4 小时 , 以 2 % A I C I: 甲醇溶液喷雾显色 , 在波长为 3 6 5 n m 的紫外光下
观察 , 显示两个色斑 〔编号为 ( 0 5一 1 ) ` ( 0 5一 2 ) 〕 , 如图 ( 3 ) 。
流分 A母液以同法进行纸层析 , 其色谱显示三个色斑 , 如图 ( 4 ) 。
黄色卜 。 、外 「、 : 三一 ,
弓5 心口, 一 二 )莎一口色黄
Q 一任一
虱幼 吴开剂为三二W (4 : ! : , 、
流万A结品的纸色墙
团…一〕复开气戈犷加补 : :三
挽井匕母夜岁吸色谱
为了进一步分离 (0 5一 1 ) 和 (0 5一 2 ) , 我们采用数块硅胶 G ) 加 。 . 2% C M C ) 制备
性薄层 l( 8 . 5 x 7 c m厚板 ) , 以流分 A 浓缩液点样 (点成线条状 ) , 用 B A W ( 4 : 1 :
5) 为展开剂 , 展开 1 . 5小时 , 在紫外光下划线确定谱带位置 , 分别刮取谱带于试管中 , 再
分别以甲醇提取三次 , 各自浓缩得 (0 5一 1 ) 和 (0 5一 2 ) 结晶 。
聚酞胺柱层析洗脱液 , 除上述流分 A外 , 其余洗脱液经纸层析检测 , 知其仍含几种成
分 , 故进行第二次聚酞胺柱层析 。 这些洗脱液经浓缩后 , 用少量固定相拌样上柱 , 采用小于
1 0 目的聚酞胺粉末作固定相 , 以 30 %乙醇溶液洗脱 , 分离得流分 B ( 第46 管收集液 ) 。
以流分 B点样于硅胶 H 一 C M C薄层 , 用 B A W ( 4 , l , 5 ) 为展开剂 , 2% A I C I : 甲
醇溶液喷雾显色 , 在波长为 3 65n m的紫外光下观察 , 显示四个斑点 〔 编号为 ( 05 一 3 ) 、
( 0 5一 4 ) 、 ( 0 5一 5 ) 、 ( 0 5一 6 ) 〕 如图 ( 5 ) 。
利用上述硅胶层析条件 , 采用制备性硅胶薄层析 , 分离得 (0 5一 3 ) 和 (0 5一 6 ) 结
晶 。
里 南理 医 学报 1 0 . 6年
介一李
睛黄色 R、二 。 · 6“ (。 5一 6)
(显色不清嘟脸刘
撑色 R子二 “ · 5 4 (口 5一 3 ,
图脚 流分日的硅胶箔层色谱 〔展开剂为BAW (今 J;引少
( 2 ) 黄酮贰元的分离: 将有效部位 ( 0 5 ) 原液蒸去乙醇后 , 加入适量蒸馏水 , 用 10 %
H C I溶液调至 P H = 2 , 于沸水浴中水解 1 。 5小时 , 出现混浊沉淀 , 以甲醇溶解 , 聚酸胺固定
相拌样上柱 ,用不 同浓度的乙醇溶液进行梯度洗脱 , 自动部分收集器分段收集洗脱液 。 在 50 %
乙醇溶液洗脱部分 , 把 R f值相同部分合并 ; 第 2 至 32 管收集液合并 、 浓缩得 ( 0 5 一 8 ) 结
晶 , 第 60 至 70 管收集液合并浓缩得 ( 05 一 7 ) 结晶 。
(四 )
( 1 )
( 0 5一 l ) 、 ( 0 5一 2 ) 、 ( 0 5一 3 ) 、 ( 0 5一 6 ) 、 ( 0 5一 7 ) 的鉴定分析
定性反应 : 反应结果如表 (二 ) 。
表 (二 )
称粼、…弃一乍等~…一少玉…兰…燮…一
i些二些…二…竺…~迎吧一…二…竺 {坐兰 -…竺{竺…一
i些二竺…二…竺…-`0 5一 7 , l 黄 色 4黄色 …
N H
: 熏 F i n i n H C I + M g 错 盐 反 应
日 光 试 剂 (盐酸镁粉 ) 2% Z r O C I :甲醇溶液 辈藻擎
黄 色 ( + ) ( + ) 黄 色 黄色不褐
黄 色 ( + ) ( + ) 黄 色 黄色不褐
黄 色 ( + ) ( + ) 黄 色 黄色不褐
黄 色 ( + ) ( + ) 黄 色 黄色不褐
黄 色 } ( + ) ( + ) 黄 色 黄色不褐
表 (二 ) 结果表 明 : 这些结晶物是黄酮类化合物 , 并提示可能含有 C 、 一 O H或 C 。 -
O H
( 2 ) 纸层析 : 以六种展开剂进行纸层析 , 结果如表 (三 ) 〔 ` ,
第 t 期 兔尾草抗蛇毒有妙部位 ( 5 0)植化成分的研究
表 ( 三 )

( 05一 l )( 5 0一 2 )( 05一 3) ( 05一 6 ) ( 5 0一 7 )
( I )
( I )
( 皿 )
( F )
( V )
( 矶 ) 0。 67 0。 43 0。 5 5 O 。 7 5 0。 2 4
展开剂 ( I ): 正丁醇一醋酸一水 ( 4
〔 !): 蒸馏水
( l )
: 醋酸一水 ( 6: 4)
( V )
: 水饱和的乙酸乙醋
( M )
: 正丁醇一 7 2%醋酸
( 3)与金属盐反应 (在滤纸上进行 )
5 )
反应结果如表 ( 四 )( 6〕 。
表 ( 四 )
\之…口尽朴介 {汤邺州二资一…丁一二 }三二履二…一几二芭’三 …迎砂勺 -竺企i { -竺 一 兰 芭二`1 一 `兰里 一… ~手 .遭 一 厂 -道二三i吐些 ` 一童一 `一生一 芭 一芭 一宜1 …一甩 迩 -兰 一透二
( 05一 7 )… 黄 { 黄 暗 黄 { 无 暗 黄 …无 暗 黄 { 无
. . ~ ~ ~ ~ ~. . ~ ~ ~ ~ ~ ~ -,
. . . . . . . . . . . . . . . .
表 (四 ) 金属盐反应结果进一步表明 、 这些成分是具有 c 。 一 O H或 c 。 一 o H或邻一二经
基的黄酮类化合物 。 它们与金屋离子形 成颜色不同的络合物 , 如式 ( V ) 、 (砚 ) 、 (姐 ) 、
(飞 ) 、 ( 双 ) 等 。
( 4) 光谱数据 : ( 05 一 l) 、 ( 0 5一 2 ) 、 ( 0 5 一 3 ) 紫外吸收光谱主要 吸 收 峰棺
同 , 均为`二i-xo H 2 7 o n m , 3 4 o n m , ( 0 5一 7 ) · 紫外吸收姗为 : `盖i-xo H 2 7 0 0 m , s 2 0 n ln ,
暨南 理 医 学报 98 e年
4
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3、丫.厂怕ù 、二空尸勺 /戈,. /曰户\,卜.

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、凡J、胜工、甲ù当ǎ尸,í 卫l
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比。 分
交班 -
又称定 , 加粉檬酸不褪色夕
(咖 )
(不称之 , 力。扮像酸褪色)
仁笋一 。 : 。 3
C日
O厂 G
、 狱 、 拼 -
3 6 7 n m
。 红外吸收光谱只作了 ( 05 一 7 ) 定性扫描 , 其主要吸收峰有 : 3 4 0。 。 m 一 ` ( 5 . 宽 ) ,
3 o 3 o e tn
一 ` , 2 9 6 o e m 一 ` (复峰 ) , i 6 5 o e m 一 ` ( S ) , 1 6 1 5 e m 一 ` ( S ) , 1 5 7 5 e m 一 ’ ( S ) ,
1 5 i o e m
一 1 ( S )
, i 3 9 5 e m
一 `
( S )
, l s 6 o e 皿一 1 (爪 ) , 1 2 5 1 e 以一 工 , 12 4 o e m 一 ’ , 1 2 0 o e tn 一 i ,
1 1 s o e tn
一 ’ ( S )
, 1 1 0 0 e tn
一 `
( S )
,
l o s o e m
一 `
( m )
, 8 5 o c m
一 `
( S )
,
8 3 5 e m
一 `
( S )
,
.
_ ~
7 5 0 e m
一 1 , 6 7 0 e m
一 1 。
( 5 〕 (0 5一 7 ) 质谱主要数据 : 质谱实验所用 离子源类型 E l , 离化电流 3 0 0协A ,
加速电压 3 . OK V , 汽化温度2 60 ℃ , 离化电位 7 o e . V , 离子倍增电压 1 . 14 K V , 主要质谱峰
有 :
M
+
3 14
,
m / e 2 9 9
,
m /
e 2 8 4
,
m / e 1 6 6
,
m /
e 1 6 7
,
m /
e 1 4 8 , m /
e 1 3 8
-
m / e 1 3 5
,
m / e 1 3 1
, 二 / e 1 2 3 , m / e 1 1 6 , m / e 1 0 9 , 爪 / e 1 0 7 、 m / e 9 2 。
三 、 分析及讨论 [ 6 1 [ 5 ] [ 2 1
( 1 ) 兔尾草抗蛇毒有效部位 ( 0 5 ) 含有多种黄酮试 , 它们的贰元具有 ( I ) 式基本结
第 1 期 兔尾草抗蛇毒有妙部位 ( 5 0)植化成分的研究
构 ;这可从盐酸一镁粉反应显示阳性 , 错盐等金属盐呈阳性反应 , 以及紫外吸收光谱两个主
要谱带 〔带 ( I )入二 。 、 3 0 0一 4 0 0 n m , 带 ( l ) 入m a 二 2 4 0一 Z s s n 了n 〕 的出现 , 可 以得到证实 。 同
时 , 根据金属盐反应 , Z r O C 1 2显色反应及加柠檬酸后褪色情 况得知 : 这些黄酮化合物含有
C : 一 O H (如 ( I ) 式 ) 或 C 。 一 O H (如 ( l ) 式或兼有 C 3 一 O H 、 C 。 一 O H 基团 (如 ( W )
式 ) 。
( 2 ) 根据紫外光谱 、 红外光谱参数分析 , ( 05 一 7 ) 贰元可能具有 ( X ) 式结构 。
( 0 5一 7 ) 紫外光谱的分析 : 入nr a x 2 7 0 n m , 3 2 0 n m , 3 6 7 n m , 其 中入m a 、 3 6 7 n m 是 B一环
桂皮酞共扼系统 二一电子跃迁所引起的谱带 (I ) ; 入m a 、 2 7 0n m 是 A 一环苯 甲酞共辘系统二一
电子跃迁所引起的谱带 ( I ) 。 桂皮酞系统与苯甲酞系统构成黄酮的交叉共扼体系 (即 ( I )
式 ) 。
根据 ( X ) 式的结构 , 用 F i e s e r 一 W 。 。 d w ar d和 s o ot t紫外光谱 K 一带波长计算规则计
算带 (I ) 和带 ( ! ) 波长 , 理论值和实测值基本近似 :
谱带 ( I ) 基值 : a 、 卜不饱和酮 (〕 一 )2` 5一
l
O
增加值 : a 一 O H + 3 5 , 日一 O R + 3 0 , 邑一 O C H : + 3 1 ,
苯环暂作同环共扼二烯计算 + 39
(实际是同环共扼三烯 )
总值 : 2 1 5 + 3 5 + 3 0 + 3 1 + 3 9 = 3 5 0 n m
沪。 c 日`O交B一 环挂皮酚系 统 )
谱 ” 川 基值 : 苯甲酞O( \少 ` 6mn占
增加值 : 邻 一 O H + 7 , 邻 一 O R + 7 , 对 一 O C H 3 + 2 5
总值 : 2 4 6 + 7 + 7 + 2 5 = 2 8 5 n m 叭
一 环笨 甲酞系统 )
谱带 ( I ) 与谱带 ( l ) 理论计算值和实测值虽略有出入 , 但仍基本近似 , 这说 明 (0 5
一 7 ) 的 ( X )式结构是符合实际的 。 带 ( )I 带 ( I ) 理论计算值和实测值的差异 , 可能是
交叉共扼体系所致 , 因为W o d w ar d和 S c ot t计算规则一般用于线性共扼体系 , 而用于交叉
共轨体系时误差较大 。
(0 5一 7 ) 红外光谱数据的分析 : 3 4 0 o c m 一 ’ (宽 · )S 是缔合 一 O H 基伸缩振动峰 (因
C : 一 O H , C 。 一 O H 与 4 一 > C一 o 形成分子内氢键 , 发生鳌环缔合 ) , 1 3 6 0 e m 一 ` ( m ) 是酚
一 O H基面内弯曲振动峰 , 3 o 3 Oc m 一 `为芳氢吸收峰 , 1 65 o c m 一 几 ( )S 是分子内氢键缔合簇基
(`气 l一、吸收峰 ; 1 6 1 5 e m 一 ` ( s ) 、 z 5 7 5 e m 一 , ( s ) 、 1 5 6 5 e m 一 ` ( s ) 、 1 5 1o e m 一 ` ( s ) 均
O 大
, O
\ /
N
为芳环骨架振动吸收峰 , 其 中 1 5 7 5 c m 一 `是苯环与双键或具有 n 一 电子基团共辘时的吸收峰 ,
2 9 6 o e m
一 `
(复峰 ) 、 1 3 g s e m 一 ` ( S ) 均为 一 C H 3基吸收峰 , z z s o e m 一 ’ ( S ) 为 A r一 O伸缩振
暨 南理 医 学报 9 8 6 年
, 「动 峰 , 8 5。一 “ S , 提示有 ( H二0
1
l
)
1
,
2
,
3
, 5 一四取代苯的单 H面夕卜弯曲振动峰
H H
( 聪 一 环单 H耐卜弯曲振动峰 ) , 8 c35 m 一 ( s) 提 示有 (一O 一 ) 对位二取 代 苯的
H H
二邻 H面外弯曲振动峰 (即 B 一 环二邻 H面外弯曲振动峰 ) 。
( 3 ) (0 5一 7 ) 质谱峰的分析 : 黄酮类化合物的质谱离子 , 基本上按两种裂解途径产
生 :
途径 泛〕(逆 〕 创。 一八{试钾 裂解卜
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因为裂解过程中保留着 A 一 环和 B 一 环的基本骨架 , 且 A t碎片离子与相应的 B t碎片离
子的质荷比 ( m / e ) 之和又恰好等于分子离子 ( M + ) 的质荷比 , 故对复核 、 确定黄酮类化
合物分子结构有特殊意义 。 (0 5一 7 ) 主要质谱峰可按上述两种基本裂解途径 , 解析如下 :
显然 A 一 环的取代图式可通过 A 十的 m / e 值而予以确定 , 同理 , 根据 B 一 环碎片离子
;
B才和 B笠的 m / e 值 , 也可精确确定 B 一 环的取代图式 。 很据黄酮类质谱裂解规律 , 用我们
前面预测的结构式 ( X ) , 能如图 ( 6) 裂解途径合理地解释 (0 5一 7 ) 的主要质谱峰 。 因此 ,
(0 5一 7 ) 的分子结构 ( X ) 就进一步得到印证 。
〔 4 ) (0 5一 4 ) 、 ( 05 一 5 ) 未分 离得纯品 , 尚待进一步研究 。 此外 , 贰元 ( 05 一
8 〕 结晶因量少未作功能基定性试验和 I R 、 u v 分析 , 只作了M S实验 。 M S初步表明其分子
量略大于 ( 05 一 7 ) , 碎片离子虽提示有黄酮类的裂解迹象 , 但还未能确定其具体结构 .
第 1 期 兔尾草抗蛇毒有效部位 (0 5)植化成分的研究
(0 5一 l ) 、 (0 5一 2 ) 、 (0 5一 3 ) 、 (0 5一 6 ) 均可肯定是黄酮贰 , 而 ( 0 5一 7 ) 、
(0 5一 8 ) 是这几种贰类的试元 。 但是这些来 自有效部位 ( 0 5 ) 的植化成分 ,哪些是有效成分
需再作药理试验才能决定 , 也许这些黄酮贰都具有不同程度的药效 。 一般说来 , 贰元的药理
活性常较相应的试为弱 ; 而且几种结构类似的试类 , 药理活性往往有协同作用 , 药效常比单
一成分好 。 因此 , 建议将上述几种黄酮俄作成注射液 , 作进一步的药理试验 , 为改进兔尾草
蛇药剂型 、 提高疗效提供依据 。
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如乡劝 质谱离子的两种基本裂解途径 ·
参 考 文 献
〔 l 〕 广西中医学院中草药研究小组 林启云等 , 广西中医学院 l 号蛇药资料汇编
1 9 7 8
一 1 2 , l 一 3 8 ;
〔 2 〕 肖崇厚 , 中草药提取鉴定原理 , 上海科学技术出版%k , 1 9 83 , 12 , 21 9一 2 52
版社 ,
〔 3 〕 中国医学科学院药物研究所编著 , 薄层层离及其在 中草药分析中的应用 ,
北京 , 1 9 8 2 , 6 , 2 1 7一 2 5 7 ,
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科学出
北京 ,
1 9 8 3扩 2 , 1 7 1一 2 3 6 ,
4 9宜 南 理医学报 1 986 年
〔 5 〕 温晓凡 , 药用植物化学 , 暨南大学教材科 , 1 9 8 4,
3 8 0一 5 3 5 ;
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4 5 5 1一 1 3 4 ;
A S T U D Y O N P H Y T O C H E M IC A L C O N S T IT U E N T S
O F A N T I 一 SN A K E B IT E E F F E C T IV E P A R T IT IO N
` 0 5 · E X T R A C T E D F R O M u 。 , 、。 , a 。 。 , 。 J 。` , J。 : L ) D E SV
.
研己” X万a o 一 F a ”
D e P t二 o f B f o l O l g g , J认 a 作 U ” i口 .
A B S T R A C T U勿 了i a l a g o Po d i o id e : ( L . ) D e s v 。 e x D C 。 15 e x t e n s i v e l y
u s e d a s o n e o f t h e a n t i 一 s n a k e b i t e m e d i e i n a l h e r b s a m o n g t h e P e o P l e
i n C h i n a
.
T h
e a n t i 一 s n a k e b i t e e f f e e t i v i t y 1 5 i d e n t i f i e d b y z o o p h a r m -
a e o l o g i e a l e x P e r i m e n t s a n d s h o w s t h a t t h e e u r e 一 r a t e o f s n a k e b i t e
e a s e 1 5 9 9

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