全 文 ：China Pharmacy 2013Vol.24No.7 中国药房 2013年第24卷第7期
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（收稿日期：2012-03-04修回日期：2012-08-09）
Δ 基金项目：国家高技术研究发展计划（863计划）课题资助
（No.2007AA021500）；海南省自然科学基金资助项目（No.309001）
＊硕士研究生。研究方向：天然药物提取分离技术。E-mail：
waner_ha@126.com
# 通信作者：教授，药学研究员，制药高级工程师，硕士。研究方
向：热带药用植物资源及代谢产物。电话：0898-66281892。E-mail：
twlph@163.com
琼榄不同部位化学成分预试验及总黄酮含量测定Δ
孙玉婉＊，汪春牛，韩 星，刘平怀 #（海南大学材料与化工学院热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实
验室，海口 570228）
中图分类号 R284.1；R917 文献标志码 A 文章编号 1001- 408（2013）07-0618-04
DOI 10.6039/j.issn.1001- 408.2013.07.16
摘 要 目的：研究南药琼榄根、茎、叶、果壳不同部位所含的化学成分，并测定琼榄各部位中总黄酮的含量。方法：采用系统预试
验法对琼榄各部位的水、95％乙醇、石油醚提取液进行化学成分研究；以芦丁为对照品，采用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH比色法测定
琼榄不同部位中总黄酮的含量。结果：琼榄根、茎、叶、果壳中均含有糖及多糖类、氨基酸、多肽及蛋白质、黄酮、甾体及三萜类、生
物碱、香豆素及内酯、挥发油等成分；均可能含有有机酸。此外，其根、叶中含有酚类、蒽醌、强心苷，茎、果壳中可能含有酚类、蒽
醌、强心苷；各部位均不含皂苷。琼榄根、茎、叶、果壳中总黄酮的质量分数分别为0.028％、0.017％、0.033％、0.012％，以叶中总黄
酮质量分数最高。结论：本试验初步确定了琼榄各部位的化学成分类型并测定了总黄酮的含量，可为进一步研究琼榄提供依据。
关键词 琼榄；化学成分；预试验；总黄酮含量；部位
Preliminary Test of Chemical Components and Content Determination of Total Flavonoids in Different
Parts of Gonocaryum lobbianum
SUN Yu-wan，WANG Chun-niu，HAN Xing，LIU Ping-huai（Key Laboratory of Protection and Development Utili-
zation of Tropical Crop Gerplasm Resources，Ministry of Education，College of Materials and Chemical Engi-
neering，Hainan University，Haikou 570228，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the chemical components of root，stem，leaves and nut shell of Gonocaryum lobbianum，
and to determine the content of total flavonoids in different parts of G. lobbianum. METHODS：The extraction of every part with
water，95％ ethanol and petrol ether was respectively experimented by comprehensive preliminary tests. Using rutin as substance
control，the contents of total flavonoids in different parts of G. lobbianum were measured by colorimetric method with sodium ni-
trite-aluminum nitrate-sodium hydroxide. RESULTS：The different parts of G. lobbianum contained sugar，polysaccharide，amino ac-
id，polypeptide，protein，flavonoids，sterides，triterpene，alkaloids，cumarin，latones，volatile oils，and may contain organic acids.
The root and leaves contained phenols，anthraquinone，cardiac glycosides，but stem and nut shell may contain phenols，anthraqui-
none，cardiac glycosides. All of them didn’t contain saponins. The content of total flavonoids of root，stem，leaves，nut shell were
0.028％，0.017％，0.033％，0.012％. The content of total flavonoids of leaves was the highest. CONCLUSION：The results of pre-
liminary tests determine the types of chemical components and the content of total flavonoids of G. lobbianum，which provide evi-
dence for further study.
KEY WORDS Gonocaryum lobbianum；Chemical components；Preliminary tests；Content of total flavonoids；Parts
􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋􀤋
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中国药房 2013年第24卷第7期 China Pharmacy 2013Vol.24No.7
琼榄[Gonocaryum lobbianum（Merr.）Kurz.]，又称黄蒂、黄
柄木，是茶茱萸科（Icacinaceae）琼榄属（Gonocaryum Miq.）植
物，分布于热带、亚热带地区，我国常见于海南、云南、广东、台
湾等地[1-2]。有文献表明，琼榄属植物台湾琼榄[G. calleryanum
（Baill.）Becc.]叶的提取物可以用来治疗胃病[3]；而琼榄有清热
解毒、散郁结的功效，海南民间用其治疗黄疸型肝炎、胸肋闷
痛[4-7]。目前有关琼榄的报道仅见于徐蕾等人[8]及本课题组[9]对
琼榄油脂成分的研究，而关于琼榄化学成分的研究未见报
道。黄酮类化合物是一类天然的抗氧化剂，不仅具有很强的
清除自由基的能力，而且在抗衰老、抗血栓、降血压、降血脂、
降糖等方面表现出明显的药理活性[10]，因此有必要对琼榄中黄
酮含量进行测定。为明确其化学成分类型，本研究通过预
试验初步探索了南药琼榄根、茎、叶、果壳不同部位的化学
成分类型 [11-14]，并采用 NaNO2-Al（NO3）3-NaOH 比色法测定了
琼榄不同部位总黄酮的含量[15-17]，旨在为进一步研究其活性成
分的提取分离及探索其化学成分与药理活性之间的关系提供
试验基础。
1 材料
1.1 仪器
中药粉碎机（上海淀久中药机械制造有限公司）；
DHG-9071A电热恒温干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；
BT224S电子天平（德国 Sartorious公司）；HH6-数显恒温水浴
锅（金坛市亿通电子有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）循环水真空泵（巩
义市予华仪器有限责任公司）；DLSB-5/20℃低温冷却循环泵
（上海美强仪器设备有限公司）；RV10-数显旋转蒸发器（德国
iKA公司）；KH2200DE超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限
公司，功率：600W，频率：100kHz）；TU1810紫外-可见分光光
度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。
1.2 药材
琼榄根、茎、叶、果实均于2011年7月采自海南吊罗山自
然保护区，经海南大学生物工程系刘平怀教授鉴定为真品，标
本（凭证号：DLS20110703）保存于海南大学生物工程综合实验
室。
1.3 试剂
95％乙醇、石油醚、乙酸乙酯、氯仿、硫酸、醋酐、冰醋酸、
盐酸、氨水均为国产分析纯，其他试剂均为自配，水为蒸馏水；
芦丁对照品（加拿大Bio Basic公司，纯度＞95％）。
2 琼榄不同部位化学成分预试验
2.1 供试品溶液的制备
取琼榄根、茎、叶、果壳适量，分别置40℃烘箱烘干，粉碎，
备用。
2.1.1 水供试液 分别取根、茎、叶、果壳（取出种仁）不同部
位样品粗粉10g，加水100ml，冷浸24h，滤过，取滤液10ml做
氨基酸、多肽及蛋白质的检查。滤渣在60℃水浴下加热30
min，滤过，取滤液做糖及多糖、有机酸、皂苷、酚类及鞣质等的
检查。
2.1.2 乙醇供试液 分别取根、茎、叶、果壳（取出种仁）不同
部位样品粗粉50g，加95％乙醇500ml，水浴回流1h，滤过，滤
液浓缩至浸膏状（叶提取液加入蒸馏水使其含醇量为70％，放
冷后滤过，滤液用等量石油醚分别萃取2次，以除去叶绿素
等）。将浓缩好的样品分为2份：①1/3量加20ml乙醇溶解，制
成醇溶液，做酚类及鞣质、有机酸、黄酮、蒽醌、甾体及三萜类
等的检查。②剩下2/3量加盐酸30ml，充分搅拌，滤过，溶于
盐酸的部分做生物碱的检查；不溶于盐酸的部分用乙酸乙酯
30ml溶解，再加入5％NaOH振摇洗涤2次，分出碱水层，做有
机酸、酚类及鞣质的检查；乙酸乙酯层则用蒸馏水洗涤后，蒸
去乙酸乙酯，再用20ml乙醇溶解，做强心苷、香豆素及内酯等
的检查。
2.1.3 石油醚供试液 分别取根、茎、叶、果壳（取出种仁）不
同部位样品粗粉10g，加入100ml石油醚（沸程60～90℃），室
温密封放置2h后抽滤，滤液浓缩后供甾体及三萜、挥发油等
的检查。
2.2 不同部位预试验结果
琼榄根、茎、叶、果壳（取出种仁）不同部位的水供试液、
95％乙醇供试液与石油醚供试液的预试验结果分别见表1、
表2、表3（表中“+”表示正反应，“++”或“+++”表示正反应现象
剧烈，“- ”表示负反应）。
根据预试验结果，若检查某类成分的结果为正反应，则初
步判断琼榄该部位含有某类成分；若部分为正反应或成分干
扰导致结果难以判断，则判断可能含有某类成分；若均为负反
表1 水供试液化学成分预试验结果
Tab 1 Results of preliminary tests of chemical components from water extraction
待测成分类型
糖及多糖
氨基酸、多肽及蛋白质
有机酸
酚类及鞣质
皂苷
检测方法
碱性硫酸铜
氨性硝酸银
苯酚-硫酸
茚三酮
双缩脲
加热煮沸
溴酚蓝
溴甲酚绿
pH值
乙酸铅
氯化钠-明胶
三氯化铁
香草醛-盐酸
醋酐-浓硫酸
泡沫试验
正反应现象
红色氧化亚铜沉淀
银镜或黑色沉淀
显棕色
呈红棕色或蓝紫色
呈紫红色
混浊或沉淀
蓝色背景显黄色斑点
蓝色背景显黄色斑点
试纸颜色在pH7以下
沉淀或混浊
出现白色沉淀或混浊
绿、蓝或暗紫色
不同程度的红色
呈红紫色
振摇产生大量泡沫，放置10 min后不消失
检测结果
根
+
++
+
++
+
+
-
-
5.53
+
-
+
+
-
-
茎
+
++
+
+
+
+
-
-
4.46
+
-
+
-
-
-
叶
+++
+
++
+++
+
+
-
-
5.68
+
-
++
+
-
-
果壳
++
+
+
+++
+
+
-
-
4.57
+
-
+
-
-
-
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表2 95％乙醇供试液化学成分预试验结果
Tab 2 Results of preliminary tests of chemical components from 95％ ethanol extraction
待测成分类型
酚类及鞣质
有机酸
黄酮
蒽醌
甾体及三萜
生物碱
强心苷
香豆素及内酯
检测方法
1％ FeCl3
香草醛-盐酸
氯化钠-明胶
溴酚蓝
溴甲酚绿
CaCl2
乙酸铅
盐酸-镁粉
1％ AlCl3
氨熏
荧光试验
醋酸镁
1％ 硼酸
KOH ，HCl
醋酸镁
磷钼酸
醋酐-浓硫酸
氯仿-浓硫酸
间二硝基苯
碘化铋钾
碘-碘化钾
苦味酸
硅钨酸
亚硝基铁氰化钠
苦味酸
3，5-二硝基苯甲酸
异羟肟酸铁
间硝基苯
开、闭环反应
呈色反应
正反应现象
绿、蓝或暗紫色
不同程度的红色
出现白色沉淀或混浊
蓝色背景显黄色斑点
蓝色背景显黄色斑点
混浊或沉淀
混浊或沉淀
泡沫处呈桃红色
黄或黄绿色荧光
浅黄变黄色，有荧光
强烈荧光
天蓝色或黄、橙黄、褐色荧光
显橙色荧光
加碱变红色，加酸褪色
橙红色或紫色
显深蓝色斑点
颜色呈黄→红→紫青→肟绿色变化
氯仿层显红或青色，浓硫酸层显绿色荧光
呈黄褐色或紫色斑点
淡黄色或棕黄色沉淀
红色沉淀
黄色沉淀
淡黄色或白色沉淀
红色或紫色
橙色或橙红色
显紫红色
淡红色
紫红色
加NaOH煮沸，液体较之前清晰，再加盐酸变混浊
加NaCO3混浊，加FeCl3呈酚性反应
检测结果
根
+
+
+
-
-
+
++
+
++
+
+
+
+
+
+
++
++
+
+
++
+
+
+
+
+
+
++
+
+
+
茎
+
-
+
-
-
+
+
+
+
+
+
+
-
+
+
++
++
+
+
+
+
+
+
+
-
+
+
+
+
++
叶
+
+
+
-
-
+
++
+
+
+
+
+
+
+
+
+
++
+
+
+
+
+
+
+
+
+
++
++
+
+
果壳
+
-
+
-
-
+
++
+
+
+
+
+
-
+
+
+
+
+
+
++
+
+
+
+
-
+
+
++
+
++
应，则判断不含某类成分。综合表1～表3结果，琼榄根、茎、
叶、果壳各部位所含有的成分大致相同，根与叶所含化学成分
类型极为相似，茎与果壳所含化学成分类型也极为相似，试管
反应和色谱反应根与叶较茎与果壳剧烈。琼榄各部位确含有
糖及多糖、氨基酸、多肽及蛋白质、生物碱、甾体及三萜类、挥
发油、香豆素及内酯、黄酮；可能含有有机酸、蒽醌、酚类及鞣
质（鞣质在各部位的水提液中没有发现，存在于95％乙醇提取
液中）；不含有皂苷。此外，根和叶中还含有强心苷，而茎和果
壳可能含有强心苷。
3 琼榄不同部位总黄酮含量的测定
3.1 供试品溶液的制备
精密称取琼榄根、茎、叶、果壳（取出种仁）不同部位样品
粗粉5g，置锥形瓶中，加入35ml70％乙醇，超声提取30min，
滤过，滤渣再次加入35ml70％乙醇超声提取30min，滤过，合
并2次滤液，浓缩至小于20ml，再用70％乙醇定容至25ml，即
得。
3.2 对照品溶液的制备
精密称取芦丁对照品0.0204g，置于100ml 量瓶中，加
70％乙醇溶解并定容，摇匀，即得204μg/ml的对照品溶液。
3.3 标准曲线的制备
精密量取对照品溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0ml，置
于10ml量瓶中，各加入0.5ml5％ NaNO2摇匀，放置6min，再
加入0.5ml10％ Al（NO3）3摇匀，放置6min，最后加入4ml4％
NaOH，用70％乙醇定容至10ml，放置15min 后于500nm 波
长处测定吸光度，并以相应试剂作空白对照。以芦丁对照品
溶液的质量浓度（c）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制标准
曲线，得回归方程为A＝11.35854c－0.0329（r＝0.9984，n＝
7）。结果表明，经显色后的芦丁对照品溶液的质量浓度在
0.0204～0.0816mg/ml范围内与吸光度呈良好的线性关系。
3.4 方法学考察
3.4.1 精密度试验 准确量取对照品溶液1.0ml，按“3.3”项下
方法测定吸光度，重复测定5次，计算RSD值。结果，RSD＝
0.35％（n＝5），表明仪器精密度良好。
3.4.2 稳定性试验 准确量取琼榄根、茎、叶、果壳不同部位
的供试品溶液各0.5ml，按“3.3”项下方法，分别于0、30、60、
表3 石油醚供试液化学成分预试验结果
Tab 3 Results of preliminary tests of chemical components
from petroleum ether extraction
待测成分类型
甾体及三萜
挥发油
检测方法
磷钼酸
醋酐-浓硫酸
氯仿-浓硫酸
间二硝基苯
油斑检查
正反应现象
深蓝色
颜色呈黄→红→紫青→肟绿色变化
氯仿层显红或青色，浓硫酸层显绿色荧光
显褐色或紫色
有油斑，立即挥发
检测结果
根
++
+
+
+
+
茎
+
+
+
+
+
叶
++
++
+
+
+
果壳
+
++
+
+
+
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90、120、150min时测定吸光度，计算RSD值。结果，琼榄根、
茎、叶、果壳供试品溶液的RSD分别为1.11％、0.97％、1.82％、
1.36％（n 均为6），表明各供试品溶液在150min 内稳定性良
好。
3.4.3 重复性试验 准确称取琼榄根、茎、叶、果壳不同部位
样品各5g，分别照“3.1”项下方法制备供试品溶液，按“3.3”项
下方法测定吸光度，计算RSD值。结果，琼榄根、茎、叶、果壳
供试品溶液的RSD分别为1.35％、1.57％、1.28％、1.90％（n均
为6），表明本方法重复性良好。
3.4.4 加样回收率试验 分别准确量取琼榄根、茎、叶、果壳
不同部位的供试品溶液0.2、0.3、0.4ml，各2份，每份各加对照
品溶液1.0ml，按“3.3”项下方法测定吸光度，计算加样回收率
及RSD值。结果，琼榄根、茎、叶、果壳供试品溶液的平均加样
回收率分别为97.43％、100.20％、101.50％、99.43％，RSD分别
为1.91％、1.47％、1.32％、1.65％（n均为6）。琼榄根的加样回
收率试验结果见表4（因方法相同，为节省版面，茎、叶、果壳的
试验数据省略）。
表4 琼榄根的加样回收率试验结果（n＝6）
Tab 4 Results of average recovery of roots from G. lobbia-
num（n＝6）
编号
1
2
3
4
5
6
样品含量，μg
11.10
11.10
16.65
16.65
22.20
22.20
加入量，μg
20.40
20.40
20.40
20.40
20.40
20.40
测得量，μg
30.46
30.49
36.75
36.83
42.32
42.31
回收率，％
94.90
95.05
98.52
98.92
98.62
98.58
x，％
97.43
RSD ，％
1.91
3.5 总黄酮含量测定
准确量取琼榄根、茎、叶、果壳不同部位的供试品溶液0.5
ml，各3份，分别按“3.3”项下方法测定吸光度，取平均值，根据
回归方程计算总黄酮的质量分数。结果，琼榄根、茎、叶、果壳
中总黄酮含量的质量分数分别为0.028％、0.017％、0.033％、
0.012％（n均为3）。
4 讨论
本研究通过对南药琼榄根、茎、叶、果壳4个部位进行系统
的化学成分类型考察，初步确定了琼榄各部位中含有糖及多
糖、氨基酸、多肽及蛋白质、黄酮、甾体及三萜类、生物碱、香豆
素及内酯、挥发油等；均可能含有有机酸；此外根、叶中含有酚
类、强心苷、蒽醌等，茎、果壳中则可能含有酚类、强心苷、蒽
醌；各部位均不含皂苷。根、叶所含的化学成分类型基本相
同，由正反应现象的明显程度判断其含量也可能相差不大；
茎、果壳中的化学成分基本类似。本研究结果表明，琼榄各部
位的化学成分类型丰富，根、叶部位的化学成分类型较茎、果
壳多。
由本研究结果可知，琼榄不同部位总黄酮的质量分数不
同，以叶中最高（0.033％），根其次（0.028％），茎（0.017％）、果
壳（0.012％）相对较低。由精密度、稳定性、重复性、加样回收
率试验结果可知，采用Al（NO3）3-NaNO2-NaOH比色法测定琼
榄不同部位总黄酮含量，方法操作简单，结果稳定、可靠。
琼榄叶这一部位既在化学成分类型上较其他部位丰富，
又在总黄酮含量上高于其他部位，因此下一步试验将对琼榄
叶进行系统的化学成分分离及活性筛选。
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（收稿日期：2012-03-05修回日期：2012-04-15）
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