免费文献传递   相关文献

壮药鲫鱼胆质量标准初步研究



全 文 :2015年 第 18卷 第 2期 广西中医药大学学报
壮药鲫鱼胆质量标准初步研究
周 倩,滕建北,唐玉荣,颜萍花,朱 华
(广西中医药大学,广西 南宁 530001)
摘 要:[目的]对木犀科植物鲫鱼胆质量标准进行初步研究。[方法]对鲫鱼胆进行化学成分预试验和薄层色谱鉴别研究,
并按 2010年版《中华人民共和国药典》附录方法对鲫鱼胆的水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物进行测定。[结果]初步
明确了鲫鱼胆化学成分类型,建立了其薄层色谱鉴别方法,并确定了鲫鱼胆药材水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物的
限量。[结论]所建立的方法可为鲫鱼胆药材质量标准的制定提供实验依据。
关键词:鲫鱼胆;化学成分;预试验;薄层色谱;质量标准
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:2095-4441(2015)02-0061-05
Preliminary Study on Quality Standards of Zhuang Folk Medicine Jasminum nervosum Lour.
ZHOU Qian, TENG Jian-bei, TANG Yu-rong, YAN Ping-hua, ZHU Hua
(Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning ,Guangxi, 530001)
Abstract:[Objective]To conduct preliminary study on quality standards of Jasminum nervosum Lour.(Oleaceae).[Methods]Pre-
liminary tests and TLC identification for the chemical constituents of Jasminum nervosum Lour. were performed.Determination of mois-
ture, total ash,acid insoluble ash and extractives in Jasminum nervosum Lour. was studied based on appendix of Chinese Pharmacopoeia,
published in 2010.[Results]Its chemical constituents were initially determined and TLC identification were established. Meanwhile, the
limit of moisture, total ash, acid insoluble ashand extractives in Jasminum nervosum Lour. were determined. [Conclusion]The estab-
lished methods can provide the experimental foundation to formulate the quality standards for Jasminum nervosum Lour. .
Key words:Jasminum nervosum Lour.; Chemical Constituents; Preliminary Tests; TLC; Quality Standards
收稿日期:2015-02-23
基金项目:广西自然科学基金(编号:2011GXNSFF018006)
通信作者:朱华
鲫鱼胆(Jasminum nervosum Lour.)为木犀科植物,是壮族
民间常用药材,又名青藤仔、侧鱼胆、蟹角胆藤,广西主产于河
池、都安、巴马、东兰、南丹、南宁、武鸣等地[1]。全株可入药,
味微苦,性凉。具有清湿热、解毒、敛疮的功效,主治痢疾、疟
疾、疮疡肿毒、溃烂不敛[2]。鲫鱼胆在广西分布广泛,自然资
源十分丰富,经文献检索,尚未见有关该药材质量标准的研
究报道。为制定其质量标准,保证其用药的安全性、有效性,
本课题组进行了鲫鱼胆药材的质量标准研究。
1 实验材料
1.1 药材 鲫鱼胆采集于广西各地,经广西中医药大学朱意
麟老师鉴别为木犀科素馨属植物鲫鱼胆 Jasminum nervosum
Lour.的干燥全草。药材来源详见表 1。
1.2 试剂 95%乙醇、无水乙醇、环己烷、丙酮(分析纯,国药
集团化学试剂有限公司);薄层层析硅胶 G(化学纯,青岛海洋
化工有限公司);其余试剂均为分析纯,水为纯净水。
1.3 仪器 上皿电子天平(FA1104型,上海精科天平);台式
电热恒温干燥箱(GZX-DH-26X30-TBS,上海跃进医疗器械
表 1 鲫鱼胆的采集时间及来源
序号 采集时间 采集地点
1 2014.3.21 南宁市老虎岭
2 2013.12.27 武鸣县三里镇山西村衡山庄
3 2014.4.6 桂平市
4 2014.4.17 南宁市小高峰
5 2014.4.27 来宾忻城县城关镇上才村休岭
6 2014.6.26 南宁市老虎岭
7 2014.7.4 河池大化县岩滩镇
8 2014.7.4 武鸣县锣圩镇三十六弄保护区
9 2014.7.9 上林县三里镇石塘村
10 2014.7.9 上林县塘红镇河光村
!!!!!!!!
!

!!!!!!!
!
!

药学研究
61· ·
2015,Vol.18 No.2Journal of Guangxi University of Chinese Medicine
厂);箱式电阻炉(SXZ-4-10,上海实验仪器厂有限公司);数
显恒温水浴锅(HH-S4,金坛市医疗仪器厂);三用紫外分析仪
(ZF-I,上海顾村电光仪器厂)。
2 方法与结果
2.1 化学成分预试验
2.1.1 水提取液的制备 取本品粗粉 10 g,置具塞锥形瓶中,
加入蒸馏水 100 ml,冷浸 24 h,过滤,即得冷水提取液。药渣
在 60 ℃水浴上加热 30 min,滤过,即得热水提取液。
2.1.2 乙醇提取液、酸水提取液的制备 取鲫鱼胆粗粉 10 g,
加入 10倍量的 95%乙醇,加热回流 1 h,放冷,滤过,即得。取
1/2为乙醇提取液,剩余 1/2乙醇提取液浓缩成膏状(至无醇
味),再加入 5%盐酸溶液使溶解,摇匀,滤过,即得酸水提取液。
2.1.3 石油醚提取液的制备 取鲫鱼胆粗粉 1 g,加入石油醚
(60~90 ℃)5 ml,浸泡 2~3 h,滤过,即得。
2.1.4 化学成分预试验 冷水提取液作氨基酸、多肽、蛋白质
检查;热水提取液作糖、多糖、苷类、皂苷、酚类、鞣质和有机酸
检查;乙醇提取液作黄酮、蒽醌、香豆素、内酯、强心苷、植物甾
醇、三萜等检查;酸水提取液作生物碱检查;石油醚提取液作
挥发油、油脂等检查。结果表明,鲫鱼胆中可能含有氨基酸、
多肽、蛋白质、糖类、有机酸、酚类、鞣质、黄酮、植物甾醇等化
学成分。实验结果见表 1、表 2、表 3。
表 1 鲫鱼胆水提取液预试验
成分
检测
试液或
反应名称
操 作 正反应现象
结 果
南宁
老虎岭
来宾
忻城
桂平
氨基
酸、多
肽、蛋
白质
沉淀反应
冷浸液 1 ml,加热至沸,加 5%Hcl或
H2SO4
产生沉淀或出现浑浊,可能有
可溶性蛋白质
+ + +
双缩脲
反应
冷浸液 1 ml,加入 10%NaOH 3~5 d,充
分摇匀,逐渐加入 1%CuSO4
呈紫色或紫红色,可能有多肽
或蛋白质
++ ++ ++
茚三酮
反应
冷浸液 1 ml,加入 0.2%茚三酮试液 2~
3 d,摇匀,在沸水浴中加热 5 min,冷却
呈蓝色、蓝紫色或紫色,可能含
氨基酸、多肽、蛋白质、胨类 + + +
糖、多
糖、苷

Fehling
反应
热水提取液 1 ml,加 Fehling试液在沸
水浴中加热数分钟。另取热水提取液
1ml,加 10%Hcl,在沸水浴中加热 10 min,
使其水解,放冷,调 pH 至中性,加
Fehling试液
水解前生成棕红色或砖红色沉
淀,可能含有还原糖或其他还
原性物质。水解后生成棕红色
或砖红色沉淀或沉淀比水解前
多,可能存在多糖或苷类
水解前+
水解后

水解前+
水解后

水解前+
水解后

Molish
反应
热水提取液 1 ml,加 5%α-萘酚乙醇液
3~4 d,摇匀,沿试管壁缓缓滴入浓
H2SO4数天
在浓 H2SO4接触面产生紫红色
环,可能含有糖、多糖或苷类 + + +
皂苷
泡沫试验
热水提取液 2 ml,剧烈振摇,放置
10 min,加乙醇
产生大量泡沫,放置后不消失,
加乙醇也不消失,表明含有皂苷
_ _ _
加酸加碱
沫试验
2支试管,各取热水提取液 1 ml,一支
加 0.1 mol/L Hcl, 另一支加 0.1 mol/L
NaOH,摇匀
两管泡沫高度相同或酸管高于
碱管的为三萜皂苷,碱管高于
酸管的为甾体皂苷
三萜
皂苷
三萜
皂苷
三萜
皂苷
酚类和
鞣质
FeCl3试验 热水提取液 1 ml,加入 1% FeCl3
呈现绿色、蓝色、暗紫色、蓝紫
色、污绿色等,可能含酚类或鞣
质(可水解鞣质显蓝-蓝黑色,
缩合鞣质显绿色-污绿色)
+++ +++ ++
FeCl3铁氰
化钾反应
热水提取液点于滤纸上,喷洒 FeCl3铁
氰化钾
呈蓝色或蓝紫色斑点,可能有
酚类
++ ++ ++
有机酸 pH试纸
检查
热水提取液,用 pH试纸检查
颜色在 pH 7以下,可能含游
离酸或酚性化合物
<7 <7 <7
溴甲酚绿
试验
热水提取液滴于滤纸上,再滴加 0.1%
溴甲酚绿试剂
蓝色背景上显黄色斑点,表明
可能含有有机酸
_ + _
注:“+”表示有此反应,“++”表示反应明显,“+++”表示反应非常明显,“-”表示无此反应;下同
62· ·
2015年 第 18卷 第 2期 广西中医药大学学报
表 2 鲫鱼胆乙醇提取液预试验
成分检测 试液或反应名称 操作 正反应现象 结果
酚类和
鞣质
FeCl3试验 醇提取液 1 ml,加入 1% FeCl3 1~2 d
呈现绿色、蓝色、暗紫色、蓝紫色、污绿色
等,可能含酚类或鞣质(可水解鞣质显
蓝-蓝黑色,缩合鞣质显绿色-污绿色)
+++ +++ +
FeCl3铁氰化钾
反应
醇提取液点于滤纸上,喷洒 FeCl3铁
氰化钾
呈蓝色或蓝紫色斑点,可能有酚类 + ++ +
有机酸 pH试纸检查 用 pH试纸检查醇提取液 颜色在 pH7以下,可能含游离酸或酚
性化合物
<7 <7 <7
溴甲酚绿试验
醇提取液滴于滤纸上,再滴加 0.1%溴
甲酚绿试剂
蓝色背景上显黄色斑点,表明可能含
有有机酸
+ + +
生物碱 碘化汞钾试剂
酸性醇提取液 1 ml,加入碘化汞钾试
剂 1~2 d 白色或浅黄色沉淀 _ _ _
碘化铋钾试剂
酸性醇提取液 1 ml,加入碘化铋钾试
剂 1~2 d 淡黄色或橘红色沉淀 _ _ _
硅钨酸试剂
酸性醇提取液 1 ml,加入硅钨酸试剂
1~2 d 淡黄色或橙黄色沉淀 _ _ _
苦味酸试剂
酸性醇提取液 1 ml,加入苦味酸试剂
1~2 d 黄色沉淀 _ _ _
黄酮 盐酸-镁粉反应
醇提取液 1 ml,加入少量镁粉(锌粉),
然后加浓 H2SO4 4~5 d,置沸水浴中加
热 3 min。同法不加镁粉做一对照
呈红色或紫红色,可能有黄酮或黄酮苷
存在。对照显红色,说明有花色素存在 _ _ _
AlCl3试验
醇提取液滴于滤纸上,观察荧光,喷
以 1%AlCl3试剂,于 UV下观察
呈黄、绿色、橙色荧光或荧光加强为黄
酮,呈天蓝色或黄绿色,为二氢黄酮
天蓝

天蓝

天蓝

氨熏试验 醇提取液滴于滤纸上,置氨气上熏
斑点变黄、绿或橙黄,离开氨气数分钟
颜色褪去,可能有黄酮类存在
+++ +++ _
蒽醌 碱性试验
醇提取液 1ml,加 1%NaOH溶液 2~3 d,
如产生红色,加入少量 30% H2O2
加热红色不褪,用酸酸化红色褪去,表
明含蒽醌及其苷
红色
褪去
红色
褪去
红色
褪去
乙酸镁试验 醇提取液 1 ml,加 1%乙酸镁甲醇液 呈红色为正反应 _ _ _
5%KOH溶液 醇提取液滴于滤纸上,喷以 5%KOH
水溶液
呈黄橙、红色或荧光,可能含蒽醌及其
苷类
+++ +++ +
香豆素、
内酯
重氮化
偶合反应
醇提取液 1ml,加 3%Na2CO3溶液1 ml,
于水浴中煮沸 3~5 min,冷却后加新鲜
配制的重氮化试剂
显红色或紫色,检酚羟基对位无取代
的化合物
_ _ _
荧光试验 醇提取液滴于滤纸上,吹干
日光下显蓝色荧光,于 UV下有蓝色
或绿色荧光,加碱后变成黄色荧光,表
明可能有香豆素及其苷类
_ _ _
开环-闭环
反应
醇提取液 1 ml,加 2 ml 1% NaOH水
溶液,置水浴上加热 3~4 min,溶液较
未加时澄清,再加 2%Hcl水溶液
pH约为 2时,溶液呈浑浊,表明有内
酯环
_ _ _
强心苷
3,5-二硝基苯
甲酸试剂
醇提取液 1 ml,加新鲜配制 3,5-二硝
基苯甲酸试剂 3~5 d 红色或紫色,可能有强心苷 _ _ _
碱性苦味酸
试剂
醇提取液 1 ml,加入碱性苦味酸试剂
1~2 d,放置 15 min 橙色或红色,可能有强心苷 + + +
植物甾
醇、三萜
醋酐-浓 H2SO4
试验
醇提取液 1 ml,水浴上蒸干,残渣加
1 ml冰醋酸溶解,再加醋酐-浓 H2SO4
(19∶1)试剂数天
颜色由黄-红-紫-蓝(青)-墨绿色(污
绿色),表明含有甾体皂苷、甾醇或三
萜类化合物
+ + +
氯仿-浓 H2SO4
试验
醇提取液 1 ml,水浴上蒸干,残渣加
1 ml氯仿溶解,加 1 ml H2SO4
氯仿层显红色或蓝色、青色,H2SO4层
有绿色荧光,表明有植物甾醇存在
_ _ _
63· ·
2015,Vol.18 No.2Journal of Guangxi University of Chinese Medicine
表 4 鲫鱼胆水分、总灰分、酸不溶性灰分和醇溶性浸出物测定结果 (n=3,RSD<3.0%)
1 8.35 5.71 0.38 28.83
2 11.68 3.75 0.09 24.13
3 12.41 3.88 0.66 24.52
4 8.45 4.53 0.31 19.73
5 13.44 6.46 2.03 22.71
6 8.52 4.62 0.19 21.77
7 9.51 4.17 0.33 18.59
8 8.02 3.80 0.07 24.76
9 7.71 3.90 0.15 25.04
10 5.82 5.75 0.09 18.48
编号 水分(%) 总灰分(%) 酸不溶性灰分(%) 醇溶性浸出物(%)
2.2 薄层色谱鉴别[3] 取本品粉末 1 g,加甲醇 20 ml,加热
回流 1 h,放冷,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇 2 ml使溶解,作
为供试品溶液。另取鲫鱼胆对照药材(以 2014年 3月 21日
于南宁市老虎岭采集的 1号药材作为对照药材)1 g,同法制
成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》
2010年版一部附录 VIB)试验,吸取供试品溶液和对照药材
溶液各 10 μl,点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 G
薄层板上,以环己烷-丙酮(12∶5)为展开剂,展开,取出,晾干,
喷以 10%磷钼酸溶液,在 105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品
色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显示相同颜色的斑
点。色谱图见图 1。
表 3 鲫鱼胆石油醚提取液预试验
成分检测 试液或反应名称 操作 正反应现象 结果
植物甾醇、三萜
醋酐-浓 H2SO4
试验
石油醚提取液 1 ml,水浴上蒸干,
残渣加 1 ml冰醋酸溶解,再加醋
酐-浓 H2SO4(19∶1)试剂数天
颜色呈黄-红-紫-蓝(青)-墨绿
色(污绿色)变化,表明含有甾体
皂苷、甾醇或三萜类化合物
_ _ _
氯仿-浓 H2SO4
试验
石油醚提取液 1 ml,水浴上蒸干,
残渣加 1 ml 氯仿溶解,加 1 ml
H2SO4
氯仿层显红色或蓝色、青色,
H2SO4层有绿色荧光,表明有植
物甾醇存在
+ + +
挥发油及油脂
滤纸检查 石油醚液滴于滤纸上,加热
有油斑,且油斑挥散为挥发油,
油斑不挥散为油脂
+ + _
磷钼酸反应 石油醚液 1 ml,加磷钼酸数滴 呈蓝色 + + +
2.3 检查[3] 按《中华人民共和国药典》2010年版一部附录
IX K、附录 XA(热浸法)对 10批鲫鱼胆水分、总灰分、酸不溶
性灰分和醇溶性浸出物进行测定,结果见表 2。结果显示 10
批鲫鱼胆水分测定结果为 5.82%~13.44%,总灰分测定结果为
3.75%~6.46%,酸不溶性灰分测定结果为 0.07%~2.03%,醇溶
性浸出物测定结果为 18.48%~28.83%。结果见表 4。
1,11对照药材 2~10分别为编号 2~10的供试药材
图 1 鲫鱼胆药材薄层色谱图
64· ·
2015年 第 18卷 第 2期 广西中医药大学学报
荔枝草(Salvia plebeia R.Br.)又名蛤蟆草、雪见草、皱皮草 等,为唇形科鼠尾草属植物,全草入药。广泛分布于除西北以
荔枝草提取物的体外抗菌活性研究
杨泽华 1,杨长水 2,韦建华 1,卢汝梅 1
(1.广西中医药大学,广西 南宁 530001;2. 扬州大学医学院,江苏 扬州 225009)
摘 要:[目的]研究荔枝草提取物的体外抗菌活性。[方法]采用试管稀释法,测定了荔枝草提取物对金黄色葡萄球菌、表皮
葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌的最低抑菌浓度(MIC)。采用纸片扩散法测定荔枝草中部分化学成分的抑菌圈直径。[结果]荔枝
草乙酸乙酯部位和正丁醇部位对受试菌株的 MIC可低至 3.1 mg/ml,具有明显抑菌作用;荔枝草中齐墩果酸和 2α,3β-二羟基-
12-烯-28-乌苏酸对革兰氏阳性菌有明显抑菌效果。[结论]荔枝草抗菌作用的活性部位是乙酸乙酯部位和正丁醇部位;齐墩果
酸和 2α,3β-二羟基-12-烯-28-乌苏酸是荔枝草抗菌作用的主要活性成分。
关键词:荔枝草;齐墩果酸;2α,3β-二羟基-12-烯-28-乌苏酸;抗菌活性
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:2095-4441(2015)02-0065-03
Study on Antibacterial Activity in vitro of Extract from Salvia plebeia
YANG Ze-hua1 , YANG Chang-shui2, WEI Jian-hua1, LU Ru-mei1
(1. Guangxi University of Chinese Medicine,Nanning, Guangxi, 530001;
2. College of Medicine,Yangzhou University, Yangzhou, Jiangsu, 225009)
Abstract:[Objective]To study on the antibacterial activity in vitro of extract of Salvia plebeia R.Br. [Methods]Tube dilution
method was used to determine the minimal inhibitory concentration (MIC)of extract from Salvia plebeian on staphylococcus aur-eus,
staphylococcus , Escherichia oli, pseudomonas aeruginosa. Disc diffusion method was used to determine antibacterial circle diameter of
partial chemical composition in Salvia plebeia R.Br. [Results]The MIC of Salvia ethyl acetate and n-butanol fraction on tested strains
could be as low as 3.1 mg/ml,which showed significant bacteria-inhibitory effect; oleanic acid and 2α,3β-dihydroxyurs -12-en -28-oic
acid in Salvia plebeia had significant bacteria-inhibitory effect on gram-positive bacterium. [Conclusion]The antibacterial active sites
of Salvia plebeia are ethyl acetate and n-butanol fraction. The main antibacterial active ingredients of Salvia plebeia are oleanic acid and
2α,3β-dihydroxyurs -12-en -28-oic acid.
Key words:Salvia plebeia R.Br.; oleanic acid; 2α,3β-dihydroxyurs -12-en -28-oic acid; antibacterial activity
收稿日期:2015-02-20
通信作者:卢汝梅,E-mail:lrm1969@163.com
3 讨 论
3.1 实验中曾比较了鲫鱼胆水溶性浸出物和醇溶性浸出物
的含量,结果鲫鱼胆醇溶性浸出物含量高于水溶性浸出物含
量,故采用 50%乙醇为提取溶剂。因醇溶性浸出物冷浸法与
热浸法含量相比,热浸出物含量高,故选用热浸法进行测定。
3.2 通过对石油醚-乙酸乙酯-甲酸(6.5∶3∶0.5),三氯甲烷-甲
醇(10∶0.5),环己烷-丙酮(12∶5)等展开系统的摸索,发现后者
展开效果较好,斑点集中清晰明显,Rf值适中,故采用以环己
烷-丙酮(12∶5)作为展开剂。
3.3 根据 10批药材的测定结果,初步拟定鲫鱼胆药材水分
不得超过 15.0%,总灰分不得超过 7.0%,酸不溶性灰分不得
超过 3.0%,醇溶性浸出物不得少于 17.0%。
参考文献
[1]广西中药资源普查办公室.广西中药资源名录[M].南宁:
广西民族出版社,1993:186-190.
[2]广西植物研究所.广西药用植物名录[M].南宁:广西民族
出版社,1974:82.
[3]国家药典委员会编.中华人民共和国药典:一部[S].北京:
中国医药科技出版社,2010:550;附录 26.
(编辑 陈明伟)
65· ·