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得知，四斑广盾瓢虫成虫对桃蚜高龄若蚜或成蚜的最佳寻找
密度为 32． 31，即以四斑广盾瓢虫控制桃蚜高龄若蚜或成蚜
的益害比可设为 1 ∶ 32． 31，但是四斑广盾瓢虫对桃蚜的寻找
效应随着猎物密度的增加而下降，且室内的环境条件相对简
单，试验所用的小塑料杯也会缩短四斑广盾瓢虫对猎物的寻
找时间，而田间的环境条件相对比较复杂，势必会影响四斑广
盾瓢虫对桃蚜的捕食情况，拟定益害比为 1 ∶ 32． 31，也没有
考虑到若蚜的情况，这个结果可能与田间实际情况有偏差，因
此在实际应用时，应当结合实际的田间条件应用该天敌。但
是该试验结果对实际生产还是有一定的参考价值。
本试验所用的试虫为未分雌雄的混合种群，雌虫、雄虫及
若虫各自对桃蚜的捕食功能反应有待于深入研究。
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doi:10． 15889 / j． issn． 1002 － 1302． 2015． 01． 046
假臭草杀虫成分的微波辅助提取及生物活性
李水清，张琳琳
(长江大学化学与环境工程学院，湖北荆州 434023)
摘要:在微波加热条件下，以石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、乙醇为溶剂对假臭草叶干粉进行提取，研究了上
述溶剂提取物对蓼蓝齿胫叶甲幼虫的触杀、胃毒及拒食活性的影响。研究结果表明，各溶剂提取物对蓼蓝齿胫叶甲幼
虫均具有一定的触杀、胃毒和拒食活性，其中以乙醇提取物的触杀作用最强，处理后 48 h的校正死亡率达到 39． 22%;
丙酮提取物的胃毒活性和拒食活性最强，处理 48、72 h后分别达到 45． 27%、46． 67%。
关键词::假臭草;蓼蓝齿胫叶甲;触杀;胃毒;拒食
中图分类号:S482． 3 + 9 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2015)01 － 0136 － 03
收稿日期:2014 － 03 － 09
基金项目:湖北省教育厅科研项目(编号:Q200712003);长江大学博
士科研基金。
作者简介:李水清(1969—)，男，湖北仙桃人，博士，教授，从事化学生
态学和害虫综合治理研究。E － mail:shuiqing2000@ 163． com。
假臭草(Eupatorium catarium)是菊科泽兰属一年生草本
植物。在国内，假臭草于 20 世纪 80 年代在香港首次被发现，
但一直被误认为是熊耳草(Ageratum houstonianum Mill)，直到
1995 年才被鉴定。上世纪 90 年代假臭草开始在深圳出现，
现在已经占领了广东、福建、澳门、香港、台湾、海南等沿海地
区大部分荒坡、荒地、滩涂、林地、果园。由于假臭草对土壤肥
力的吸收力强，会极大地消耗土壤养分，因此对土壤可耕性的
破坏极为严重，严重影响林木的生长［1 － 2］。假臭草含有许多
具有生物活性的次生代谢产物，如邓世明等从假臭草的 70%
乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物中分离得到 5 种黄酮化合
物［3］。假臭草挥发油对许多植物种子萌发和生长具有抑制
作用，如邓世明等研究表明高浓度的假臭草超声提取液能显
著抑制小粒的种子萌发，抑制植物幼根的生长［4］;林成俊等
在假臭草中分离、鉴定出一种全顺 －环己烷 － 1，2，4 －三醇的
物质，该物质能抑制萝卜和小白菜种子的萌发［5］。假臭草的
挥发油还能对昆虫和真菌能产生忌避或抑制作用［4］，如假臭
草的甲醇与乙醇的提取物均对螺旋粉虱成虫、荔枝粗胫翠尺
蛾具有较强的杀虫活性和拒食活性［7 － 8］，岑伊静等发现假臭
草挥发油对柑橘木虱成虫也有显著的驱避作用［9］。本试验
在微波加热条件下，以石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、乙
醇为溶剂分别对假臭草中的生物活性物质进行提取，并研究
了各溶剂提取物对蓼蓝齿胫叶甲的触杀、胃毒及拒食活性的
—631— 江苏农业科学 2015 年第 43 卷第 1 期
影响，旨在为充分利用植物资源、开发与环境相适应的生物农
药提供参考。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 植物材料 野生假臭草采自长江大学周边，洗净，取
其叶，自然风干，然后在 60 ℃恒温干燥箱中干燥 8 h，粉碎，密
封保存备用。
1． 1． 2 供试昆虫 蓼蓝齿胫叶甲(Gastrolphysa atrocyanea)
幼虫，采集于荆州护城河畔皱叶酸模上，室内饲养后挑选整齐
一致的幼虫供试。室内饲养条件:温度(27 ± 1)℃，空气相对
湿度(80 ± 5)%，光 －暗周期 14 h － 10 h。
1． 1． 3 主要仪器 微电脑微波化学反应器 WBFY － 201(巩
义市予华仪器有限责任公司);DNP － 9052BS －Ⅲ电热恒温
培养箱、QHX －250BS －Ⅲ人工气候箱(上海新苗医疗器械制
造有限公司);ＲE －52A旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。
1． 1． 4 化学试剂 石油醚、乙酸乙酯(分析纯，天津市福晨
化学试剂厂)，三氯甲烷、丙酮(分析纯，武汉市中天化工有限
责任公司)，乙醇(分析纯，安徽安特生物化学有限公司);琼
脂粉(化学纯，北京奥博星生物技术有限责任公司);十二烷
基磺酸钠(分析纯，天津市光复精细化工研究所)。
1． 2 方法
1． 2． 1 微波辅助提取 准确称取 10 g假臭草叶干粉，分为 5
份，分别放入 100 mL圆底烧瓶中，往烧瓶中分别加入 40 mL
石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、乙醚。将烧瓶放入微电脑
微波化学反应器中，并安装好冷凝装置，提取 5 min。将提取
液减压抽滤，旋转蒸发器浓缩至稠膏状为止。将稠膏状提取
物用丙酮稀释后转入 50 mL 容量瓶中，加入 10 mL 0． 1% 十
二烷基磺酸钠，配制成 40 mg /mL的丙酮溶液，供试。
1． 2． 2 触杀活性的测定 采用点滴法［10］，即将各溶剂提取
物用微量点滴器点滴于试虫的前胸背板，每虫点滴 1 μL，以
用 0． 1%十二烷基磺酸钠水溶液稀释后的丙酮溶液为对照。
处理后的幼虫置于培养皿(内垫滤纸，加少许蒸馏水保湿)
中，每皿接入大小基本一致的蓼蓝齿胫叶甲幼虫 20 头，以保
鲜膜封口，膜上打孔以利通风透气，每个处理重复 3 次。于处
理后 12、24、36、48 h后分别检查并记录死亡情况。以毛笔尖碰
触幼虫腹部的末端，头部不能摆动，身体不能向前爬行判为死
亡的标记。计算死亡率、校正死亡率，用 DPS软件分析数据。
死亡率 =死虫数 /供试虫数 × 100%;
校正死亡率 =(处理组死亡率 －对照组死亡率)/(1 －对
照组死亡率)× 100%。
1． 2． 3 胃毒活性的测定 采用带毒夹片法［11］，即取皱叶酸模
叶片，洗净后，用直径 3． 0 cm的打孔器打成直径为 3． 0 cm的
叶碟，取 2片同样大小的皱叶酸模叶碟，在其中一片的背面用
医用脱脂棉均匀涂抹不同溶剂的假臭草提取液(40 mg /mL)，
在另一片的正面涂上琼脂(琼脂粉加水煮沸调配而成) ，迅速
将 2 片叶碟对合，制成带毒夹片。将带毒夹片置于培养皿
(内垫滤纸，加少许蒸馏水保湿)中，每皿放 8 个带毒夹片，接
入大小基本一致的蓼蓝齿胫叶甲幼虫 20 头。以保鲜膜封口，
膜上打孔以利通风透气。以用 0． 1%十二烷基磺酸钠水溶液
稀释后的丙酮溶液为溶剂对照，每个处理重复 3 次。于处理
24、48、60、72 h 后后分别检查并记录蓼蓝齿胫叶甲幼虫死亡
情况，计算死亡率、校正死亡率。
1． 2． 4 拒食活性的测定 采用小叶碟法［12］，即取皱叶酸模
叶片，洗净后用直径 1． 5 cm的打孔器打成直径为 1． 5 cm的叶
碟，分别浸渍于不同溶剂的假臭草提取液(40 mg /mL)中 3 s，
取出后用吸水纸吸取叶碟边缘的多余药液，放入培养皿(内垫
滤纸，加少许蒸馏水保湿)中，每皿放 50 片叶碟，接入 20 只试
虫。以保鲜膜封口，膜上打孔以利通风透气。以用 0． 1%十二
烷基硫酸钠水溶液稀释后的丙酮溶液为溶剂对照，每个处理重
复 3次。于处理 12、24、36、48 h后分别调查取食情况，计算取
食指数和拒食率。按下面的分级标准及公式统计计算。
零级:无取食痕迹;Ⅰ级:零星取食;Ⅱ级:有明显取食缺
刻;Ⅲ级:取食面积约占 1 /3;Ⅳ级:取食面积约占 1 /2;Ⅴ级:
取食面积约占 3 /4;Ⅵ级:仅留下少量残渣。
取食指数 = ∑(危害级别 ×各级叶碟数)
总叶碟数 ×最高级别 ×参试总虫数
× 100%;
拒食率 =对照取食指数 －处理取食指数
对照取食指数
×100%。
2 结果与分析
2． 1 假臭草各溶剂提取物对蓼蓝齿胫叶甲幼虫的触杀活性
微波加热条件下，假臭草各溶剂提取物对蓼蓝齿胫叶甲
幼虫的触杀活性见表 1。从表 1 可看出，在微波辅助加热条
件下，5 种溶剂的假臭草提取物在浓度为 40 mg /mL时，对蓼
表 1 假臭草各溶剂提取物对蓼蓝齿胫叶甲幼虫触杀活性的影响
处理后时间
(h) 处理
死亡率
(%)
校正死亡率
(%)
12 A 5． 00 ± 0． 00 5． 00 ± 0． 00c
B 10． 00 ± 0． 00 10． 00 ± 0． 00b
C 11． 67 ± 2． 89 11． 67 ± 2． 89b
D 13． 33 ± 2． 89 13． 33 ± 2． 89b
E 23． 33 ± 2． 89 23． 33 ± 2． 89a
F 0． 00 ± 0． 00
24 A 10． 00 ± 0． 00 5． 26 ± 0． 00c
B 15． 00 ± 0． 00 10． 53 ± 0． 00b
C 18． 33 ± 2． 89 14． 04 ± 3． 04b
D 18． 33 ± 2． 89 14． 04 ± 3． 04b
E 30． 00 ± 5． 00 26． 32 ± 5． 26a
F 5． 00 ± 0． 00
36 A 13． 33 ± 7． 64 7． 41 ± 3． 20ab
B 21． 67 ± 2． 89 12． 96 ± 3． 21b
C 30． 00 ± 5． 00 22． 22 ± 5． 56ab
D 25． 00 ± 5． 00 16． 67 ± 5． 56b
E 40． 00 ± 0． 00 33． 33 ± 0． 00a
F 10． 00 ± 0． 00
48 A 25． 00 ± 0． 00 11． 76 ± 0． 00d
B 30． 00 ± 0． 00 17． 65 ± 0． 00c
C 38． 33 ± 2． 89 27． 45 ± 3． 39b
D 30． 00 ± 5． 00 17． 65 ± 5． 88c
E 48． 33 ± 2． 89 39． 22 ± 3． 40a
F 15． 00 ± 0． 00
注:表中 A、B、C、D、E、F分别代表石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、
丙酮、乙醇、溶剂对照(0． 1% 十二烷基磺酸钠水溶液稀释后的丙酮
溶液);表中数据均为平均值 ±标准偏差，数据经反正弦变换后进行
方差分析。处理后相同时间校正死亡率数据后有相同字母者是经
Duncans 新复极差检验差异不显著(P ＞ 0． 05)，表 2、表 3 同。
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蓝齿胫叶甲幼虫均有一定的触杀活性。处理 12、24、36、48 h
后，均以乙醇提取物的触杀活性最强，与其他几种溶剂提取物
相比，触杀活性存在显著差异，而石油醚提取物的触杀活性最
弱。此外，随时间的增加，各溶剂提取物的触杀活性均有增强
趋势。
2． 2 假臭草各溶剂提取物对蓼蓝齿胫叶甲幼虫的胃毒活性
假臭草各溶剂提取物对蓼蓝齿胫叶甲幼虫的胃毒活性见
表 2。由表 2 可看出，5 种溶剂的假臭草提取物在浓度为
40 mg /mL，处理 24、48、60、72 h 后均对蓼蓝齿胫叶甲幼虫表
现一定的胃毒活性，以丙酮提取物的胃毒活性最强，处理后
72 h 校正死亡率为 46． 67%。
表 2 假臭草各溶剂提取物对蓼蓝齿胫叶甲幼虫胃毒活性的影响
处理后时间
(h) 处理
死亡率
(%)
校正死亡率
(%)
24 A 10． 00 ± 0． 00 10． 00 ± 0． 00c
B 5． 00 ± 0． 00 5． 00 ± 0． 00d
C 16． 67 ± 2． 89 16． 67 ± 2． 89b
D 23． 33 ± 2． 89 23． 33 ± 2． 89a
E 15． 00 ± 0． 00 15． 00 ± 0． 00b
F 0． 00 ± 0． 00
48 A 15． 00 ± 0． 00 10． 53 ± 0． 00c
B 10． 00 ± 0． 00 5． 26 ± 0． 00d
C 23． 33 ± 2． 89 19． 30 ± 3． 04b
D 31． 67 ± 2． 89 28． 66 ± 4． 05a
E 21． 67 ± 2． 89 17． 54 ± 3． 04b
F 5． 00 ± 0． 00
60 A 23． 33 ± 2． 89 11． 76 ± 0． 00b
B 20． 00 ± 0． 00 5． 88 ± 0． 00b
C 36． 67 ± 2． 89 25． 49 ± 3． 39a
D 40． 00 ± 5． 00 29． 41 ± 5． 88a
E 31． 67 ± 2． 89 22． 50 ± 4． 43a
F 15． 00 ± 0． 00
72 A 36． 67 ± 2． 89 15． 55 ± 3． 85d
B 30． 00 ± 0． 00 6． 67 ± 0． 00e
C 50． 00 ± 0． 00 33． 33 ± 0． 00b
D 60． 00 ± 0． 00 46． 67 ± 0． 00a
E 45． 00 ± 0． 00 26． 67 ± 0． 00c
F 25． 00 ± 0． 00
2． 3 假臭草各溶剂提取物对蓼蓝齿胫叶甲幼虫的拒食活性
假臭草各溶剂提取物对蓼蓝齿胫叶甲幼虫的拒食活性见
表 3。从表 3 可看出，假臭草的丙酮提取物对蓼蓝齿胫叶甲
幼虫的拒食活性最强。
3 结论与讨论
本研究结果表明，在微波辅助加热条件下，石油醚、三氯
甲烷、乙酸乙酯、丙酮、乙醇的假臭草叶提取物对蓼蓝齿胫叶
甲幼虫均表现出一定的触杀、胃毒和拒食活性。其中，以乙醇
提取物的触杀作用最强，而丙酮提取物的胃毒活性和拒食活
性最强。今后将对假自草乙醇和丙酮提取物进行分离、提纯，
鉴定出具有杀虫活性的物质，开发与环境相适应的植物源
农药。
表 3 假臭草各溶剂提取物对蓼蓝齿胫叶甲幼虫拒食活性的影响
处理后时间
(h) 处理
取食指数
(%)
拒食率
(%)
12 A 2． 07 ± 0． 01 13． 16 ± 0． 88c
B 2． 34 ± 0． 02 1． 68 ± 0． 01d
C 1． 70 ± 0． 02 28． 57 ± 0． 24b
D 1． 70 ± 0． 02 28． 56 ± 1． 44b
E 1． 64 ± 0． 02 31． 08 ± 1． 42a
F 2． 38 ± 0． 02
24 A 3． 13 ± 0． 01 2． 49 ± 0． 01d
B 2． 88 ± 0． 02 10． 19 ± 0． 91c
C 2． 72 ± 0． 02 15． 18 ± 0． 90b
D 2． 44 ± 0． 02 23． 91 ± 0． 41a
E 2． 76 ± 0． 02 13． 93 ± 0． 39b
F 3． 21 ± 0． 01
36 A 3． 18 ± 0． 02 21． 87 ± 0． 88c
B 3． 42 ± 0． 02 15． 97 ± 0． 08d
C 3． 53 ± 0． 01 13． 35 ± 0． 23e
D 2． 46 ± 0． 01 39． 47 ± 0． 41a
E 2． 85 ± 0． 01 29． 81 ± 0． 04b
F 4． 07 ± 0． 02
48 A 3． 25 ± 0． 02 28． 57 ± 0． 12b
B 3． 73 ± 0． 01 17． 95 ± 0． 44d
C 3． 89 ± 0． 01 14． 43 ± 0． 20e
D 2． 49 ± 0． 02 45． 27 ± 0． 23a
E 3． 30 ± 0． 02 27． 47 ± 0． 12c
F 4． 55 ± 0． 02
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