全 文 ：文山学院学报 Vol. 27 No. 6
Dec. 2014
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第 27 卷 第 6 期
2014 年 12 月 JOURNAL OF WENSHAN UNIVERSITY
黄酮类化合物（flavonoids）是自然界中植物的
主要活性成分之一，其分布十分广泛，至今发现的
黄酮类化合物已超过 8000 个 [1]。黄酮类化合物具有
抗病毒、祛痰平喘、防治心脑血管、抗氧化和抗肿
瘤等功效，临床上用于治疗呼吸道疾病、心血管疾
病等的药物多来源于黄酮类物质，此外其在保健品、
食品和化妆品中都有广泛应用 [2-3]。近年来，对黄酮
化合物资源的开发与生物活性的相关研究越来越受
重视。目前黄酮提取物主要的来源有大豆、银杏、
荷叶等，对于雪莲果叶黄酮的研究尚未见报道。国
内对于雪莲果的研究主要以化学成分分析及产品加
工为主 [4-6]，对于雪莲果叶中黄酮类物质的研究尚未
见报道。将雪莲果种植过程中无用的茎叶进一步深
开发能提高雪莲果产业的附加值，本试验采用乙醇
回流提取法提取黄酮，通过正交试验对影响雪莲果
叶黄酮的主要参数进行优化，以期为雪莲果叶黄酮
的开发利用提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.1.1 原料与试剂
雪莲果叶 ：云南丽江，经低温烘干粉碎后待用。
芦丁标准品 ：北京生物制品检定所 ；NaNO2，
NaOH，Al（N03）3， 95% 乙醇，国产分析纯。
1.1.2 仪器
721 可见分光光度计（郑州南北仪器设备有限
公司），恒温水浴锅（常州诺基仪器有限公司），恒
温干燥箱（河南同兴仪器设备有限公司），旋转蒸发
仪（上海西域机电系统有限公司），分析天平（北京
赛多利斯仪器有限公司）。
1.2 试验方法
1.2.1 原料预处理
将新鲜雪莲果叶放入 60 ℃干燥箱内烘干，取出
后粉碎过筛，将不同粒度雪莲果叶粉储存于干燥棕
色瓶中备用。
1.2.2 标准曲线的绘制
称取0.0216 g芦丁用50％的乙醇溶解，用容量瓶
定容至 100 mL，得到 0.216 mg/mL 的芦丁标准液。精
确吸取 0.00 mL，0.90 mL，1.20 mL，1.50 mL，1.80 mL，
2.10 mL，2.40 mL芦丁标准液于10 mL容量瓶中，各加
入5％NaNO2 溶液0.50 mL，摇匀，静置6 min；加入10％
Al（NO3）3 溶液0.30 mL，摇匀，静置6 min；最后加入
4％的NaOH溶液4.00 mL，用50％的乙醇定容至刻度，
静置10 min，510 nm处测定吸光值，同时做空白对照，
根据芦丁标准品在各浓度下吸光值变化情况，绘制芦
丁标准曲线 [7]，得到芦丁浓度与吸光值的标准曲线方
程为 Y=1.3759X-0.0056，相关系数R2=0.9996。
1.2.3 雪莲果叶黄酮的测定
称取 1.00 g 雪莲果叶粉末于圆底烧瓶中，根据
实验条件，加入乙醇溶液回流提取，滤液抽滤后定
容至 100 mL，从中吸取 1 mL 滤液按测定芦丁标准
曲线步骤进行显色反应，测定吸光值，根据以上标
雪莲果叶中黄酮的提取工艺优化

陈红惠1，刘 芳1，沈清清2
（1.文山学院 化学与工程学院，云南 文山 663000；2. 文山学院 环境与资源学院，云南 文山 663000）
摘要：为优化雪莲果叶黄酮的提取工艺条件，采用正交实验法，研究溶剂浓度、料液比、浸提温度和浸
提时间 4个因素对雪莲果叶黄酮提取量的影响。确定了雪莲果叶黄酮提取的最优条件为用体积浓度 40%的乙
醇，在料液比为 1∶30(g/mL) 的溶剂条件下在 70 ℃提取 1.5 h，提取 2 次，在此条件下黄酮含量提取量达到
53.41 mg/g。通过工艺优化，雪莲果叶黄酮得率高，稳定性好。
关键词：雪莲果叶；黄酮；醇提法
中图分类号：R284.2 文献标志码： A 文章编号：1674-9200（2014）06-0006-04
收稿日期：2014 - 04 - 18
基金项目：云南省教育厅科学研究基金项目“雪莲果叶黄酮含量测定及抗氧化活性研究”（2013Y581）。
作者简介：陈红惠（1979-），女，云南罗平人，文山学院化学与工程学院副教授，硕士，主要从事食品新资源开发及安全检测研究。
7陈红惠，等：雪莲果叶中黄酮的提取工艺优化
准曲线方程计算提取物的浓度，雪莲果叶黄酮提取
量根据以下公式进行计算 [8-9] ：
提取量（mg/g）=（m1V1）/（V2 m2）
式中 ：m1 为测定时取样液中黄酮的含量，mg ；
V1 为样液的体积，mL ；
V2 为测定取样液的体积，mL ；
m2 为样品质量，g。
2 结果与分析
2.1 雪莲果叶中黄酮物质提取单因素试验
2.1.1 乙醇体积浓度对雪莲果叶黄酮提取量的影响
准确称取 1.00 g 雪莲果叶干粉，分别用不同体
积浓度的乙醇 20 mL，在 60 ℃条件下进行提取 1 h，
测定提取液中黄酮含量，结果如图 2 所示。
图 1 乙醇体积浓度对雪莲果叶总黄酮提取效果的影响
在不同乙醇体积浓度下，雪莲果叶总黄酮提取率
随着乙醇体积浓度变化有不同变化趋势。由图1可知，
当乙醇体积浓度较低时黄酮提取量随之增加，在40%
时黄酮提取率最高，但乙醇体积浓度再增高，黄酮提
取率增加趋势不明显，甚至出现浓度越高，提取率大
幅下降，故对于雪莲果叶黄酮的提取适宜于低浓度的
乙醇，乙醇浓度高也会使醇溶性杂质的溶出量也会增
加，选择乙醇体积浓度在 30%～50%范围内较合适。
2.1.2 料液比对黄酮提取量的影响
称取 1.00 g 雪莲果叶干粉，采用不同料液比加
入 40% 乙醇，在 60 ℃温度下提取 1 h，测定提取液
中黄酮含量，结果如图 2 所示。
图 2 料液比对雪莲果叶总黄酮提取效果的影响
一般来说，溶剂使用量增加能促进提取物质溶
出提取。由图 2 可知，料液比增大到一定值后，提
取率会趋于稳定，不再溶出。提取溶剂过多会造成
杂质溶出量增加，对提纯处理带来不便，同时也会
造成溶剂浪费，综合以上因素考虑，选取料液比在
1∶20 ～ 1∶40 范围进行提取。
2.1.3 提取温度对黄酮提取量的影响
称取 1.00 g 雪莲果叶干粉，用体积浓度为 40%
的乙醇 30 mL，在不同温度下提取 1 h，测定提取液
中黄酮含量，结果如图 3 所示。
图 3 温度对雪莲果叶总黄酮提取效果的影响
一般来说，加热有利于溶剂的渗透，加速有效
成分的扩散和提高溶出量。由图 3 可知，在一定温
度范围内，黄酮类物质的提取量随温度增加而提高，
但温度继续增加提取量却出现下降，说明温度升高
到一定值后，对黄酮类化合物的结构有较大破坏，
导致其提取量降低及其活性减少，故选择提取温度
范围为 50 ～ 70 ℃为宜。
2.1.4 提取时间对黄酮提取量的影响
准确称取 1.00 g 雪莲果叶粉，加入体积浓度为
40% 乙醇 30 mL，在 60 ℃下分别提取不同时间，测
定提取液黄酮提取量，结果见图 4 所示。
图 4 浸提时间对雪莲果叶总黄酮提取效果的影响
由图 4 可知，黄酮提取量随着提取时间的增加
而增加，在1 h时能达到最高的提取量，为33.11 mg/g，
提取时间继续增加之后提取量却急剧下降，当提取
时间为 3 h 时提取量最低，可能是黄酮类化合物在
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长时间加热条件下分解所致，故确定提取时间为
1 h。
2.1.5 提取次数对黄酮提取量的影响
准确称取 1.00 g 雪莲果叶粉，加入体积浓度为
40% 乙醇 30 mL，在 60 ℃下分别提取 1 次、2 次、3
次，4 次，每次 1 h，将每次提取的滤液合并，最后
定容至同样体积，测定提取液黄酮提取量，结果如
图 5 所示。
图 5 提取次数对雪莲果叶总黄酮提取效果的影响
增加提取次数能使黄酮充分溶出提取，提高黄
酮提取量，由图 5 可知，提取 3 次达到最高提取量，
提取次数增加越多，黄酮提取量却降低，可能是由
于提取时间过长有部分黄酮物质被分解所致。考虑
到提取 2 次和 3 次的提取量相差不大，且提取次数
越多效率也越低，杂质也随之增加，故确定提取 2
次较合适。
2.2 黄酮物质提取优化试验
称取 1.00 g 雪莲果叶粉 9 份，按照 L9（34）正
交试验设计表中不同提取条件对雪莲果叶进行黄酮
提取，提取 2 次，合并滤液后测定黄酮含量。因素
水平设计试验见表 1，正交试验结果见表 2，方差分
析见表 3。
表 1 正交试验因素水平表
水平 乙醇体积浓度A（%）
提取温度
B（℃）
提取时间
C（h）
料液比
D（m/v）
1 30 50 0.5 1∶20
2 40 60 1.0 1∶30
3 50 70 1.5 1∶40
表 2 正交试验结果
处
理
号
乙醇体积
浓度A
（%）
提取温度
B（℃）
提取时间
C（h）
料液比
D
含量
（mg/g）
1 1 1 1 1 35.22
2 1 2 2 2 42.71
3 1 3 3 3 49.61
4 2 1 2 3 40.82
5 2 2 3 1 44.16
6 2 3 1 2 46.27
7 3 1 3 2 38.20
8 3 2 1 3 35.37
9 3 3 2 1 40.89
K1 127.54 114.24 116.86 120.27
K2 131.25 122.24 124.42 127.18
K3 114.46 136.77 131.97 125.80
R 16.79 22.53 15.11 6.91
表 3 方差分析
方差
来源
自由
度
离均差
平方和 均方和 F比 P值 显著性
A 2 66.08 33.04 6.42 0.0079 **
B 2 311.09 155.55 30.21 0.0000017 **
C 2 68.08 34.04 6.61 0.007 **
D 2 38.75 19.38 3.76 0.043 *
注：*表示水平显著，**表示水平极显著。
由表2可知，从极差R大小来看， RB﹥RA﹥RC﹥
RD，说明影响雪莲果叶黄酮提取效果的各因素的主
次关系分别为提取温度、乙醇体积浓度、提取时
间、料液比。确定雪莲果叶黄酮的最佳提取条件为
A2B3C3D2，即乙醇体积浓度 40%，提取温度 70 ℃，
提取时间1.5 h，料液比1∶30。表3中的方差分析表明，
因素 A、因素 B、因素 C 即乙醇体积浓度、提取温度
和提取时间达到极显著，其中提取温度的显著性最大，
料液比因素对提取的影响达到显著水平。
2.3 验证试验
在以上确定的最佳提取工艺条件进行 3 次平行
提取试验，提取量分别是 52.37 mg/g、54.99 mg/g、
9陈红惠，等：雪莲果叶中黄酮的提取工艺优化
52.86 mg/g，平均提取量为 53.41 mg/g。
3 结论
在雪莲果叶黄酮提取工艺条件实验中，提取温
度是影响雪莲果叶黄酮的最主要因素，通过正交优
化实验，确定了乙醇浸提法提取雪莲果叶黄酮的最
佳工艺条件为 ：用体积浓度 40% 的乙醇，在料液比
为 1∶30（g/mL）的溶剂条件下在 70 ℃提取 1.5 h，
提取 2 次，在此条件下黄酮含量最高提取量为 53.41
mg/g。结果表明，雪莲果叶中黄酮含量较高，具有
较高的开发价值。
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Optimal Extracting Conditons of Flavonoids from Yacon Leaves
CHEN Hong-hui1, LIU Fang1, SHEN Qing-qing2
(1. Institute of Chemical Engineering, WenShan University, WenShan, 663000, China;
2. Institute of Environment and Resource, WenShan University, WenShan, 663000, China)
Abstract: In order to determine the best extract craft of flavonoids from Yacon leaves, the orthogonal
experiment is used to optimize the condition, the effects of ethanol volume concentration, material- liquid ratio,
extraction temperature, extraction time are researched. The optimal operational conditions of the extraction are:
ethanol volume concentration 40%, solid to liquid ratio 1∶30 (g/mL) , extraction temperature 70℃, extraction time
1.5h, and extration twice. Under these conditions, the extracting yield is 53.41 mg/g. The optimized extract craft is
stable with high extracting ratio.
Key words: Yacon leaves; fl avonoids; ethanol extraction
（责任编辑 张 铁）