全 文 ：收稿日期:2007-04-09;　修订日期:2007-07-25
作者简介:王玉华(1959-),女(蒙古族), 内蒙古昭蒙人 ,现任内蒙古医学
院药学院教授 ,博士学位 ,主要从事中蒙药方剂和药材药效物质基础与及
质量控制的研究工作.
薄层扫描法测定蒙成药乌达巴拉 -7中胆酸的含量
王玉华 1 , 赵国丁 1 , 钟乃庚 2 ,王　伟3
(1.内蒙古医学院药学院 , 内蒙古 呼和浩特　010059;
2.内蒙古自治区医院 ,内蒙古 呼和浩特　010020;　3.内蒙古药品检验所 ,内蒙古 呼和浩特　010020)
摘要:目的 建立乌达巴拉 -7中胆酸的定量分析方法。方法 双波长薄层扫描法 。结果 线性范围为 1.065 ～ 5.325 μg,
回归方程为 Y=10 073.664X-2, r=0.999 1。在线性范围内 , 实验结果的精密度和重复性良好。平均回收率为 99.1%,
RSD为 0.91%(n=5)。结论 该方法简便 、灵敏 、准确 , 可用于乌达巴拉 -7中胆酸的含量测定。
关键词:乌达巴拉 -7;　胆酸 ;　薄层扫描法
中图分类号:R291.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)01-0128-02
DeterminationofCholicAcidsinWudabala-7 withThinLayerScanningMethod
WANGYu-hua1 , ZHAOGuo-ding1 ,ZHONGNai-geng2 , WANGWei3
(1.PharmaceuticalSchool, InnerMongolianMedicalColege, Huhhot010059, China;2.InnerMongoliaAu-
tonomousRegionHospital, Huhhot010020, China;3.InnerMongoliaImstituteforDrugControl, Huhhot
010020, China)
Abstract:ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofcholicacidsinWudabala-7.MethodsDoublewavelengththin
layerscanningmethodwasemployed.ResultsThelinearrangewas:1.065 ～ 5.325μg;RegressionequationwasY=10 073.664
X-2, r=0.999 1.Themethodwasaccurateandreproduciblewithintheliearrange.Everagerecoverywas99.1%, RSDwas
0.91%(n=5).ConclusionThismethodissimple, sensitiveandaccurate, whichcanbeusedtodeterminethecontentofcholic
acidsinWudabala-7.
Keywords:Wudabala-7;　Cholicacids;　Thinlayerscanningmethod
　　乌达巴拉 -7是蒙医常用的凉血 、清 “协日”的药物 , 是由牛
黄 、五灵脂 、红花等 7味药组成的复方制剂 [ 1] 。 因为内蒙地区是
此类病的高发地 , 乌达巴拉 -7对这类病有较好的治疗作用 , 因
此该药在临床上被广泛应用。由于乌达巴拉 -7的质量标准中
没有定性和定量的内容 ,该药的质量不能得到有效的控制 , 直接
影响了临床用药的安全和有效。 本实验采用双波长薄层扫描法
对君药牛黄建立了含量测定的方法。
1　仪器与材料
岛津 CS-930型双波长薄层扫描仪(日本);PBQI型薄层自
动铺板器(重庆南岸新力实验电器厂)。胆酸对照品(批号:1523
-200001, 自中国药品生物制品检定所购入);硅胶 G(青岛海洋
化工厂);其它试剂均为分析纯。
乌达巴拉 -7(内蒙古通辽蒙药厂 , 批号 20041112 20041214
20041226);模拟处方(自制)。
2　方法
2.1　薄层展开及扫描条件的选择
2.1.1　薄层板制备 用 0.5%CMC-Na:硅胶 G(3∶1)湿法铺板 ,
厚度为 0.5 mm,晾干 , 于 110℃活化 1 h备用。
2.1.2　展开剂 异辛烷 -醋酸乙酯 -冰醋酸 -甲酸(8∶4∶2∶
1)。
2.1.3　显色剂 喷 10%的硫酸乙醇溶液 , 105℃加热显色。
2.1.4 　扫描方式 反射法锯齿扫描 , SX=3, 狭缝 1.2 mm×
1.2 mm。
2.1.5　测定波长与参比波长的选择 将显色后的斑点在 400 ～
700nm范围内作光谱扫描 ,见图 1。由图 1确定胆酸斑点的测定
波长和参比波长分别为:λs=470 nm, λR=650 nm。
λ/nm
图 1　胆酸斑点的光谱扫描图
2.2　提取条件的选择 胆酸易溶于甲醇中 , 故选择甲醇做为提
取溶剂。进一步将样品进行了如下的净化处理:将甲醇提取液过
滤 , 精密吸取续滤液一定体积 , 蒸干 , 用碱回流提取 , 将碱回流提
取液酸化 ,用醋酸乙酯提取 , 提取液蒸干 ,残渣加甲醇溶解定容。
2.3　溶液的制备
2.3.1　胆酸对照品溶液的制备 取胆酸对照品约 5 mg, 精密称
定置 5 ml量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 , 即得(每毫升
中含胆酸 1 mg)。
2.3.2　供试品溶液的制备 取本品细粉约 0.4 g, 精密称定 , 置
具塞锥形瓶中 , 精密加入甲醇 50 ml, 密塞 , 称重 , 超声处理 30
min,再称定重量 , 用甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 滤过 ,精密量取
续滤液 25ml, 蒸干 ,残渣加 20%NaOH溶液 10 ml,加热回流 2 h,
冷却 ,加稀盐酸 19 ml调节 PH至酸性 ,用醋酸乙酯提取 4次(25,
25, 20, 20 ml),每次醋酸乙酯液均通过同一铺有少量无水硫酸
钠的脱脂棉滤过 , 合并提取液 , 蒸干 , 残渣加甲醇溶解并转移至
10 ml量瓶中 , 加甲醇至刻度 ,摇匀 ,作为供试品溶液。
2.4 　线性关系考察 用定量毛细管吸取 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0
μl胆酸对照品溶液(浓度为 1 mg/ml)点于同一硅胶 G薄层板
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上 , 按上述条件展开 , 定位 , 扫描 , 以斑点面积积分值对点样量
(μg)之间做回归分析 , 用最小二乘法求得回归方程为 Y=
10 073.664X-2, r=0.999 1(Y为吸收度积分值 , X为标准品的
量:μg)。线性范围:1.065 ～ 5.325μg。标准曲线见表 1和图 2。
表 1　标准曲线测定的数据表
实验
序号
点样量
m/μg 积分值
回归
方程
相关
系数 r
1 1.065 8 723.48
2 2.130 19 763.46 Y=10 073.664X-2 0.999 1
3 3.195 28 762.33
4 4.260 40 529.18
5 5.325 51 932.88
图 2　胆酸测定的标准曲线
2.5　精密度实验
2.5.1　同板精密度实验 在硅胶 G薄层板上点供试品溶液 3
μl,点 5个点 , 按上述条件展开 ,显色 , 分别测定各斑点的积分值。
结果见表 2。
2.5.2　异板精密度实验 取 5张硅胶 G薄层板 ,分别点供试品
溶液 3 μl, 按上述条件展开 , 显色 , 分别测定各板上斑点的积分
值。实验结果见表 3。
表 2　同板精密度实验结果
实验序号 积分值 平均积分值 RSD(%)
1 22 818.46
2 22 100.99
3 22 089.73 22 255.12 1.418
4 22 126.23
5 22 140.21
表 3　异板精密度实验结果
实验序号 积分值 平均积分值 RSD(%)
1 23 115.41
2 22 305.64
3 23 556.11 22 735.16 4.53
4 21 134.22
5 23 564.42
结果表明 , 方法的精密度良好。
2.6 　稳定性实验 将以上精密度实验的斑点分别于 0, 2, 4, 6, 8
h进行扫描测定。结果见表 4。结果表明 ,在 6 h内的积分值基
本稳定。
表 4　稳定性实验结果
t/h 积分值 平均积分值 RSD(%)
0 19 485.70
2 19 481.55
4 19 306.15 19 341.83 0.96
6 19 093.93
8 16 450.89
2.7　重复性实验 取同一批号(20041112)乌达巴拉 -7供试品 5
份 , 每份取样量约 0.4 g,精密称定 , 分别按 “溶液的制备”项下方
法制备对照品溶液和供试品溶液。吸取供试品溶液 3μl,对照品
溶液 1 μl和 3μl, 分别交叉点于同一硅胶 G薄层板上 , 以异辛烷-
醋酸乙酯-冰醋酸-甲酸(8∶4∶2∶1)为展开剂 , 取出 , 晾干 , 喷
10%的硫酸乙醇溶液 , 105℃加热至斑点清晰。照薄层扫描法 [ 2]
进行扫描 ,波长为 λs=470 nm, λR=650 nm。测量供试品与标准
品的吸收度积分值 ,计算 , 即得。结果见表 5。
表 5　重复性实验结果
序号 样品重m/g 含量(%)
平均含量
(%) RSD(%)
1 0.384 0 3.01
2 0.401 0 2.96
3 0.389 1 2.91 2.938 1.622
4 0.392 6 2.92
5 0.410 4 2.89
2.8 　加样回收实验 取已知胆酸含量的乌达巴拉 -7(批号为
20041112)6份 , 每份约 0.2g, 精密称定 , 分别精密加入胆酸对照
品适量 ,按质量标准 “ 2.7”项下方法操作并测定每份的含量 , 计
算回收率 , 结果平均回收率为 99.08%, RSD为 0.909%。结果见
表 6。
表 6　加样回收实验结果
序
号
样品重
m/g
样品含
量 m/mg
对照品
加入量 m/mg
测得
总量m/mg
回收率
(%)
平均回
收率(%)
RSD
(%)
1 0.2101 6.11 6.01 12.10 99.6
2 0.200 6 5.83 5.96 11.72 98.9
3 0.190 8 5.54 5.87 11.42 100.1 99.08 0.909
4 0.196 6 5.71 6.12 11.69 97.7
5 0.205 1 5.96 5.90 11.81 99.1
2.9　阴性对照实验 取按处方量并以相同工艺制备的阴性对照
品(缺牛黄), 按质量标准 “ 2.7”项下方法操作 , 对胆酸相对应的
位置进行光谱扫描。结果表明 ,阴性对照对测定无干扰。薄层扫
描图见图 3。
图 3　阴性对照实验
2.10　样品含量测定 取本品按质量标准 “ 2.7”项下的方法操作
并测定 。结果见表 7。
表 7　样品中胆酸的含量测定结果
批号 称样量m/g
百分含量
(%)
每粒中
含量 m/mg
每粒中平均
含量 m/mg
20041112 0.401 2 2.98 14.90 14.75
0.396 1 2.92 14.60
20041214 0.411 3 2.83 14.15 14.25
0.409 1 2.87 14.35
20041226 0.401 5 2.93 14.65 14.58
0.397 2 2.90 14.50
自制 0.410 2 2.97 14.85 14.60
0.403 1 2.87 14.35
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.1 时珍国医国药 2008年第 19卷第 1期
3　讨论
3.1　展开条件的选择 本品为复方制剂 , 共存成分对测定有干
扰 , 因此 ,对薄层展开剂作了筛选。 文献记载 , 在测定胆酸的过
程中 , 采用的展开系统有异辛烷 -醋酸乙酯 -冰醋酸(15∶7∶
5)、异辛烷 -醋酸乙酯 -冰醋酸 -甲酸(8∶4∶2∶1)[ 3] 、氯仿 -
醋酸乙酯 -甲醇 -水(4∶3∶2∶1)[ 4] , 正己烷 -醋酸乙酯 -乙
酸 -甲醇(20:25:2:3)上层 [ 4] ,异辛烷 -醋酸丁酯 -冰醋酸 -甲
酸(8∶4∶2:1)[ 6] 。经筛选认为 ,异辛烷 -醋酸乙酯 -冰醋酸 -
甲酸(8∶4∶2∶1)为展开剂时展开效果最佳 , 且阴性对照对测
定无干扰。
3.2　显色条件的选择 在试验过程中 , 采用不同浓度的硫酸乙醇
液(50%, 30%, 10%硫酸乙醇液)作为显色剂 , 并对结果进行比
较研究。结果表明 , 当硫酸浓度高时 , 斑点最初显色的色泽较好
(粉红),但显色点不易掌握 ,薄层板及其胆酸斑点均易炭化;当
硫酸浓度低时 , 斑点显色的色泽为紫红色 , 但显色重复性好 ,故确
定以 10%硫酸乙醇液作为显色剂。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准· 蒙药分册
[ S] .199:160.
[ 2 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:附录 Ⅵ B.
[ 3 ] 　傅　军 , 周　漩, 高晓霞 ,等.薄层扫描法测定珍黄液中胆酸的含
量 [ J] .中国实验方剂学杂志 , 2006, 12(3):25.
[ 4 ] 　荀雅书 ,陶苏和 ,王梦德.薄层扫描测定法测定蒙成药中胆酸的含
量 [ J] .中国民族医药杂志 , 1999, 5(3):40.
[ 5 ] 　顾艳丽 ,周雪梅 , 韩瑞兰.薄层扫描法测定图喜木勒 -3中人工牛
黄胆酸及猪去氧胆酸的含量 [ J] .中国民族医药杂志 , 2006, 13
(3):53.
[ 6 ] 　王青虎 , 梁健存, 武晓兰 ,等.薄层扫描法测定西红花十六味丸的
质量标准研究 [ J] .中成药 , 2006, 28(11):1694.
收稿日期:2007-03-28;　修订日期:2007-05-22
作者简介:谢　斌 (1975-),男(汉族),江西上饶人 ,现任江西中医学院基
础医学院讲师 ,博士学位 ,主要从事中西医结合基础研究工作.
加味小柴胡汤对醋氨酚所致肝损伤的保护作用
谢　斌 , 俞大军 , 程绍民
(江西中医学院 ,江西 南昌　330006)
摘要:目的 研究加味小柴胡汤对醋氨酚所致肝损伤的保护作用。方法 以醋氨酚致肝损伤动物为模型 , 观察小鼠脂质
过氧化物(LPO)、谷胱甘肽(GSH)、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)及肝组织的病理学检查 ,探讨加味小柴胡汤保护肝损
伤的作用和机理。结果 加味小柴胡汤能降低小鼠 LPO, IL-6, 升高 GSH, IL-2水平 ,改善肝组织病变。结论 加味小柴胡
汤对醋氨酚所致肝损伤有明显的保护作用 ,其机制可能与抗氧化及免疫调节有关。
关键词:加味小柴胡汤;　醋氨酚;　肝损伤;　机制
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)01-0130-02
ProtectiveEfectofModifiedMinorRadixBupleumDecoctiononHepaticInjuryInduced
byParacetamol
XIEBin, YUDa-jun,CHENGShao-min
(JiangxiInstituteofTraditionalChineseMedicine, Nanchang330006, China)
Abstract:ObjectiveTostudytheprotectiveeffectofModifiedminorRadixBupleuriDecoctiononhepaticinjuryinducedby
Paracetamol.MethodsWithhepaticinjuryanimalmodel, weobservedLPO, GSH, IL-2, IL-6, liverhistopathologyofmicetoin-
vestigatetheeffectandmechanismofmodofiedminorRadixBupleuriDecoctiononhepaticinjurycausedbyparacetamol.Results
ModifiedMinorRadixBupleuriDecoctioncoulddepresslevelsofLPOandIL-6, andincreasethelevelsofGSHandIL-2, amel-
ioratepathologicalchangesofhepatictissue.ConclusionModifiedMinorRadixBupleuriDecoctionhasobviousprotectiveeffect
onhepaticinjurycausedbyparacetamol.Itsmechanismmaybeconcernedwithantioxidationandimmunomodulation.
Keywords:ModifiedMinorRadixBupleuriDecoction;　Paracetamol;　Hepaticinjury;　Mechanism
　　小柴胡汤广泛用于临床治疗肝胆 、消化 、免疫等系统疾病 ,具
有显著的降酶 、退黄 、增进食欲 、恢复肝功能疗效。鉴于肝病中脾
虚 、阴虚及淤血是常见的病理改变 [ 1 ～ 3] , 故在原方基础上加入茯
苓 、白术 、白芍 、当归 、丹参等健脾 、养阴及活血中药构成加味小柴
胡汤 , 将其用于醋氨酚所致小鼠肝损伤模型 , 观察加味小柴胡汤
对小鼠肝损伤的保护作用 ,并探讨其作用机制。现报道如下。
1　材料与方法
1.1　动物 NIH小鼠 60只 ,雌雄各半 ,体重 20 ～ 22 g,购自广东
省实验动物中心 , 合格证号:SCXK(粤)2003 -0002 粤监证
字 2005A011。
1.2　药物的准备 加味小柴胡汤由柴胡 15g, 人参 6g, 炙甘草 6
g, 黄芩 10g,半夏 10 g, 生姜 9 g, 大枣 9 g, 茯苓 15g,白术 10 g,白
芍 10g,当归 10 g,丹参 10 g组成 ,药材均购自广州中医药大学第
一附属医院药房 , 先加蒸馏水浸泡 40 min, 一煎加药材量的 8倍
水 , 沸腾后煎 40 min, 二煎加药材量的 6倍水 ,沸腾后煎 30 min,
过滤 , 两煎所得滤液混合后干燥浓缩至 30ml, -20℃保存备用。
1.3 　试剂 醋氨酚 , 北京第二制药厂提供;联苯双酯滴丸:为广
州星群药业股份有限公司提供 ,批号 AF40046;LPO检测试剂盒 ,
广州威佳科技有限公司提供 , 批号 20050711;GSH检测试剂盒 ,
南京建成生物工程研究所提供 , 批号 20050630;小鼠 IL-2, 6
ELISA试剂盒均由武汉博士德生物工程有限公司提供 , 批号分别
为 EK0398, EK0411。
1.4　分组 、造模 [ 4]与给药 小鼠 60只随机分 6组 ,每组 10只动
物 , 分别为正常对照组 、模型对照组 、加味小柴胡汤高剂量组 、加
味小柴胡汤中剂量组 、加味小柴胡汤低剂量组 、联苯双酯组。 治
疗组按 40, 20, 10 g/(kg· d)剂量 , 阳性对照组联苯双酯按 0.15
g/(kg· d)分别给小鼠连续灌胃 10 d,正常对照组及模型组给予
生理盐水 ,每次 0.2ml/只。正常对照组在最后 1次灌胃 6 h后
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 1期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.1