全 文 ：第 27卷 ,第 1期 光　谱　实　验　室 Vol . 2 7 , No . 1
2 0 1 0年 1月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory January , 2 0 1 0
槐枝中总黄酮的含量测定①
① 贵州省中小企业局平台建设项目黔中小发 [2008 ]76号 ;贵州省发展和改革委员会黔科合带帽字 [2008] 5005号
② 联系人 ,手机: ( 0) 13984806004; ( 0) 13984301492; E-mail: chaozh ao@ 126. com; chenhuaguo1980@ 163. com
作者简介:赵超 ( 1976— ) ,男 ,贵阳市人 ,硕士 ,讲师 ,主要研究方向为天然产物化学。
周欣 ( 1962— ) ,女 ,贵阳市人 ,博士 ,教授 ,主要研究方向为中药、民族药质量控制 ,中药指纹图谱以及中药新药。
收稿日期: 2009-07-02;接受日期: 2009-08-18
赵 超a ,b　陈华国a,b　靳凤云 c　周 欣② a,b　龚小见a ,b
a (贵州师范大学天然药物质量控制研究中心　贵阳市宝山北路 116号　 550001)
b(贵州省山地环境信息系统与生态环境保护重点实验室　贵阳市　 550001)
c(贵阳中医学院　贵阳市　 550002)
摘　要　采用索氏提取法提取槐枝中的总黄酮 ,芦丁为对照 ,分光光度法测定其含量。 样品浓度在
16. 104— 96. 624μg· mL- 1范围内线性关系良好 ,相关系数 r= 0. 9996。该方法简便、准确 ,可用于槐枝中总
黄酮的含量测定。
关键词　槐枝 ;黄酮 ;芦丁 ;分光光度法
中图分类号: O657. 32　　　文献标识码: B　　　文章编号: 1004-8138( 2010) 01-0188-04
1　前言
槐 (Sophora aponica L. )为豆科 (Leguminosae )植物 ,槐枝为槐的嫩枝 ,其作为药用历史悠久 ,用
于治崩漏带下 ,心痛 ,目赤 ,痔疮 ,疥疮等具有较好的疗效 [1 ]。 槐枝中的主要化学成分为黄酮类化合
物 ,黄酮类化合物具有多种生物活性 ,有抗溃疡、抗过敏、抗菌、抗炎、抗氧化、抗衰老、降血脂、治疗
心脑血管疾病等功能。 随着研究方法的不断更新和提高 ,新的黄酮类化合物不断被发现 ,出现了许
多新的应用 ,尤其在抗自由基和抗癌、防癌方面的应用意义重大 [2 ]。
本实验就槐枝中总黄酮的含量测定方法作了初步研究探讨 ,为槐枝的进一步利用提供了科学
依据。
2　实验部分
2. 1　仪器与设备
DU-70型可见紫外分光光度计 (美国贝克曼公司 ) ; AL204型十万分之一天平 (瑞士梅特勒 -托
利多公司 ) ; HU102660B超声波清洗机 (天津市恒奥科技有限公司 ) ; HX-200中药粉碎机 (江苏省
永康市溪岸五金药具厂 ) ; R210型旋转蒸发仪 (瑞士步琪公司 )。
2. 2　试剂与溶液
95%乙醇 ,石油醚 ,硝酸铝 ,亚硝酸钠 ,氢氧化钠 ,三氯化铝 ,乙酸乙酯等 ,均为分析纯 ;实验用
水为重蒸水 ;芦丁对照品由中国药品生物制品检定所提供 (批号: 110832-200508)。
2. 3　样品处理
称取槐枝粉末 1. 0006g ,加入 80mL 95%乙醇 ,用索式提取法提取至提取液无色 ,过滤 ,用 95%
乙醇定容于 100mL容量瓶中 ,备用。
2. 4　样品测定
取上述溶液 2mL置于 25mL容量瓶中 ,加入 5% NaNO2溶液 1mL,摇匀后放置 6min,加 10%
Al( NO3 ) 3溶液 1mL,摇匀 ,再放置 6min,加 20% NaOH试液 10mL,再加水定容至刻度 ,摇匀 ,放置
15min,在波长 500nm处测定吸光度。
3　结果与讨论
3. 1　测定波长的选择 [3 ]
取芦丁对照品 0. 02013g,用 95%乙醇溶解 ,并定容至 50mL,移取该对照品液 4mL置于 25mL
容量瓶中 ,加 5% NaNO2溶液 1mL,摇匀后放置 6min,加 10% Al( NO3 ) 3溶液 1mL,摇匀 ,再放置
6min,加 20% NaOH试液 10mL,再加水定容至刻度 ,摇匀 ,放置 15min,以 95%乙醇为空白参比 ,用
分光光度计在 400— 700nm范围内扫描 ,最大吸收波长为 500nm (见图 1)。
图 1　测定波长选择图
3. 2　校准曲线的绘制
吸取 0. 4026mg· mL- 1的芦丁对照品溶液 1. 0、 2. 0、 3. 0、 4. 0、 5. 0、 6. 0mL,分别置于 25mL容
量瓶中 ,加入 5% NaNO2溶液 1mL,摇匀后放置 6min,加入 10% Al( NO3 ) 3溶液 1mL,摇匀 ,再放
置 6min,加 20% NaOH试液 10mL,再加水定容至刻度 ,摇匀 ,放置 15min,以 95%乙醇为空白参
比 ,在 500nm波长处测定吸光度 ,以吸光度为纵坐标 ,浓度为横坐标 ,绘制校准曲线。所得回归方程
为 y= 0. 0218x+ 0. 0159, r= 0. 9996,表明样品浓度在 16. 104— 96. 624μg· mL- 1范围内线性关系
良好。
3. 3　精密度实验
准确吸取 0. 4026mg· mL- 1的芦丁对照品溶液 4mL,置于 25mL容量瓶中 ,共 6份 ,按“ 3. 2”项
下操作 ,分别测定吸光度。 结果: RSD= 0. 88% ,表明本法精密度良好。
189第 1期 赵超等:槐枝中总黄酮的含量测定
3. 4　稳定性试验
按“ 3. 2”项下操作制备供试品溶液 ,在波长 500nm处测定吸光度 ,每隔 30min测定 1次。结果
4h内测得吸光度的 RSD= 1. 4% ,表明样品溶液在 4h内基本稳定。
3. 5　重现性试验
取粉末样品 ,按“ 3. 2”项下方法制备成样品溶液 6份 ,在 500nm处测定吸光度。 结果 , RSD=
1. 8% ,表明本法重现性良好。
3. 6　回收率试验
采用加样回收法 ,取已知含量的样品 ,准确称定 ,分别加入一定量的芦丁对照品 ,按“ 3. 2”项下
方法制备成样品溶液 ,测定吸光度 ,计算回收率 ,结果见表 1。
表 1　芦丁回收率试验 (n= 9)
序号 样品称量
( g)
理论含量
( mg)
加入量
(mg )
实测值
( mg)
回收率
(% )
平均回收率
(% )
RSD
(% )
1 0. 5013 14. 04 11. 20 25. 74 104. 5
2 0. 4989 13. 97 11. 20 25. 27 100. 9
3 0. 5055 14. 15 11. 20 25. 25 99. 1
4 0. 5012 14. 03 14. 00 28. 13 100. 7
5 0. 4929 13. 80 14. 00 27. 67 99. 1 100. 4 1. 9
6 0. 5007 14. 02 14. 00 28. 14 100. 9
7 0. 5046 14. 13 16. 80 31. 10 101. 0
8 0. 4976 13. 93 16. 80 30. 43 98. 2
9 0. 5022 14. 06 16. 80 30. 68 98. 9
试验结果表明:该方法回收率良好 ,稳定可靠。
3. 7　槐枝提取液中黄酮类化合物的定性分析
取芦丁对照品加 95%乙醇溶解 ,配成 6mg· mL- 1的对照品溶液 ,将对照品溶液和上述样品溶
液分别点于同一以 0. 5%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶板上 ,以正丁醇∶冰醋酸∶水 ( 4∶ 1∶ 5)
为展开剂展开 ,取出 ,挥去溶剂 ,喷以 1%三氯化铝乙醇溶液显色后 ,置于紫外灯下观察 ,得在同一
位置有黄色荧光斑点。 以上表明 ,制备的样品溶液中含黄酮类化合物。
3. 8　样品含量测定
本试验共测定了不同产地的槐枝样品 10份 ,其中总黄酮的平均含量为 2. 82% ,最高为
3. 61% ,最低为 2. 26% ,说明不同产地的槐枝中总黄酮的含量具有明显差异。
4　结论
建立的方法能准确测定提取液中总黄酮的含量 ,该方法简便、准确 ,可用于槐枝中总黄酮的含
量测定。
参考文献
[1 ]贵州省药品监督管理局 .贵州省中药材、民族药材质量标准 [ S ]. DB521YC382-2003.贵阳:贵州科技出版社 , 2003. 390.
[2 ]李志平 ,李辉 ,石爱华等 .茵陈总黄酮的提取及初步纯化 [ J ].湖南城市学院学报 , 2005, 14( 3): 60— 61.
[3 ]魏福华 ,张永忠 ,井乐刚等 .紫外分光光度法测定大豆中大豆异黄酮 [ J] .理化检验 (化学分册 ) , 2006, ( 6): 33— 35.
190 光谱实验室 第 27卷
Determination of Total Flavonoids from the Branch
of Sophora aponica L.
ZHAO Chao
a,b　 CHEN Hua-Guoa ,b　 JIN Feng-Yunc　 ZHOU Xina,b　 GONG Xiao-Jiana,b
a ( The Research Center for Quality Control o f Natural Medicine, Guizhou Normal University, Guiyang 550001, P. R. China )
b( Key Laboratory for In format ion System of Mountainous Areas and Protect ion of Ecological Environment ,
Guiyang 550001, P. R .China)
c( Guiyang College of TCM, Guiyang 550002, P. R. China )
Abstract　 The total f lav onoids of the branch of Sophora aponica L. w ere determined by
spectropho tometry with the Soxhlet s ex t raction method and rutin as the quality cont rol standard. The
relationship between the absorbance and the concentration of sample w as linear in the range of
16. 104— 96. 624μg· mL- 1 , and the co rrelation coef ficient was 0. 9996. This method is simple,
accurate and can be applied to determine the content of total flavonoids f rom the branch of Sophora
aponica L.
Key words　 The Branch of Sophora aponica L. ; Flavonoids; Rutin; Spect rophotometry
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191第 1期 赵超等:槐枝中总黄酮的含量测定