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冬虫草子实体菌种提纯复壮技术研究
任汉章
(曲阜师范大学 山东曲阜 2 731 6 5)
摘要 :从野生冬虫草菌株中获取菌种 ,经人工驯化栽培 ,冬虫草 (子实匆在生产实践中普遍出现传种几代后菌种严重退北的现象通 过菌种提纯复壮
前后菌丝生长情况和子实体栽培情况的对比 ,结果证明不 断对菌种进行提纯复壮 ,使菌种保持原有品种的遗传物质 ,恢复原来的生活力和优良种性 ,对
防止菌种过早退化 、 保障子实体优质高产有一定的作 用 。
关键词 :冬虫草子实体 人工栽培 提纯复壮
中图分类号 : 5 5 6 7 . 3 5 文献标识码 : A 文章编号 : 1 6 7 4 一2 0 6 0 ( 2 0 1 3 ) 0 4 一0 0 4 0 一0 1
随着 “ 冬虫草(子实体 )人工栽培技术研究 ” 的研究成功 ,预期将 (3) 菌种的去污提纯 。无论采用上述哪种菌种分离法 ,培养初期
取得较好的经济效益和社会效益 ,但在生产过程中 ,遇到了一个普 必须判断菌丝是否已受杂菌污染 。分离培养后 ,若发现被有色的霉
遍性的难题 ,就是容易出现菌种老化或衰退 ,造成产量和质量不稳 菌小斑点污染 ,最好放弃 。如由同一材料分离得来的 ,每支试管都是
定 。 为了降低这种因菌种退化而带来的风险 , 笔者在菌种提纯复壮 如此 , 那就要重新分离 。若污染点远离接种点 , 多是无菌操作中感染
技术上进行了研究 , 现将结果总结如下 。 杂菌所致 , 可用前端菌丝切割法或基内菌丝挑取法转管提纯 。严格
1 材料与方法 地说 , 在斜面培养基上的非接种部位若见白色菌丝 ,则应认为是杂
:;一扮鬓…共饭抓旗{(2) 培养基配制 。培养基中土豆 2。。g (煮汁 ) 、蔗糖 2 0 9 、 磷酸二氢 2 结果与分析钾 1 9 、硫酸镁 1 9 、蛋白陈 1 9 、琼脂 20 9 , 加水定溶至 10 0 m L , 经高压灭 经提纯复壮后的菌种处理A 、 处理B 、处理 c 菌丝 日平均生长量菌 30 11 1讯 。在 24 一 2 , ℃环境下制成斜面培养基 。 分别为 , . 7 , 、 6 . 12 、 , . 1 , n l工11 , 与未经复壮处理 C K的菌种菌丝 日平均1 . 2 试验设计 生长量4 . 12~ 相比都有所提高 ,且子实体长势比较均匀 、个数多 ;试验设 4个处理 ,分别为 :抱子分离培养 ()A ;虫体回接法分离培 子实体栽培试验中复壮的菌种与未复壮处理的菌种子实体转色情
养 ()B ;组织分离法培养 ( )C ;未经复壮作为对照 (C K ) 。 况观察比较 :处理B转色最快 , 处理 C 、 处理A 次之 , 未经复壮处理的
1
.
3 试验实施 C K转色最慢 ;从出草所需天数来看经复壮的菌种处理A 、处理B 、 处
( l) 无菌处理 。 所选待复壮优 良菌株子实体 , 在无菌条件下经 理 C出草天数分别为 14 、 10 、 12 d , 而未经复壮处理的 C K出草天数为
7 , %酒精和 0 . 1%升汞溶液进行分离处理 ;分离所使用的工具要经过 1d8 ,所需出草天数也缩短了 ;从产量上看 ,所采子实体重量也明显
湿热灭菌 、酒精擦抹 、火焰灼烧等多种表面杀菌处理后 ,才可直接接 提高 , 从 1 4 . 8 9 / 瓶分别提升到2 1 . 3 、 2 3 . , 、 20 . 2 9 /瓶 。…万爪…沁派{无菌水内制成抱子悬浊液 ,再选取发育时期的健康蚕蛹作宿主 ,用 参考文献
7 ,%乙醇消毒 , 用接种针针尖蘸抱子悬浊液刺人蛹体 ,感染成功率可 [ 1j 李亚鹤等 .蛹虫草菌种复壮技术的研究[月 .食用菌, 2 0 1 0 , 2 8( 2 ) :
在9 ,%以上 ,将染菌后的蛹体平摊于蚕匾或竹席上 , 24 一 2 ,℃室温下 1 8一 1 9 .
保护至蛹体僵硬 。取长满菌丝的体 内组织粒到斜面培养基上 , 在 〔2」康业伟 . 虫草属真菌无性型的培养鉴定技术研究〔司 . 中国食用菌,
2 4 一 2 , ℃条件下继续培养到菌丝布满斜面 , 可得到优 良菌种 B 。 ③组 20 09 , 1 4( 6 )7 一 8 .
织分离法 。在优良菌株中选取无杂菌的长度2 一 4溯状态好的的子实 3[ 」赵森伦 , 刘畅庆 .冬虫草(子实体 )优质高产栽培技术研究〔司 . 江西
体 ,用无菌水冲洗 , 刮掉表层 ,取肉质大小为 lm m于斜面培养基上 , 农业学报 , 20 1 1 , 1 9 ( 8) : 1 1 3 一 1 1 4 .
培养基斜面上应无游离冷凝水 , 以防细菌感染扩散 , 致使分离失败 。
在 24 一 2 , ℃培养 1 , d ,菌丝布满斜面 ,得到菌种 c 。
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