全 文 ：基金项目：国家自然科学基金新疆联合基金（Ｕ１３０３２２４）
作者简介：杨　璐（１９９１－），在读硕士，研究方向：药物新制剂与新剂型。
通信作者：顾政一，男，研究员，博士生导师，研究方向：药物新制剂与新剂型研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｅｎｇｙｉ０８７＠１２６．ｃｏｍ。
一枝蒿黄酮类提取物体内抗乙肝病毒活性
及化学成分研究
杨　璐１，２，张素挽１，刘中奇３，贺金华２，戎晓娟２，顾政一２
（１新疆医科大学药学院药剂物化教研室，乌鲁木齐　８３００１１；２新疆维吾尔自治区药物研究所，乌鲁木齐　８３０００４；
３解放军第四军医大学，西安　７１００００）
摘要：目的　研究一枝蒿黄酮类提取物抗鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）作用及化学成分。方法　一枝蒿药材经
５０％乙醇提取，采用聚酰胺柱进行分离纯化，得到一枝蒿３０％、５０％乙醇洗脱物。采用１日龄北京鸭，人工感染鸭
乙型肝炎病毒模型，将阳性鸭随机分为３０％乙醇洗脱物组、５０％乙醇洗脱物组、阿德福韦酯组、病毒对照组，各组分
别于给药前、给药期间不同时间（５ｄ和１０ｄ）和停药后３ｄ取血，分离血清；停药后第３天杀剖，取肝脏，以血清ＤＨ－
ＢＶ－抗原、血清ＤＨＢＶ－ＤＮＡ、肝脏 ＤＨＢＶ－ＤＮＡ作为药效评价指标，研究其体内抗乙肝病毒的作用。采用 ＬＣ－
ＨＲＭＳ／ＭＳ法对有效部位化学成分进行分析。结果　５０％乙醇洗脱物在２００ｍｇ／ｋｇ剂量下能显著抑制鸭乙肝病
毒血清和肝脏中ＤＮＡ复制，３０％乙醇洗脱物的抑制作用较弱。从５０％乙醇洗脱物中推测出５种主要化合物，分别
为６－去甲氧基－４′－Ｏ－甲基茵陈色原酮－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷、紫花牡荆素、异山奈甲黄素、洋艾素、山柰素－３，３′，４′－三甲
醚。结论　５０％乙醇洗脱物有抗 ＨＢＶ的作用，５０％乙醇洗脱物中推测出的５种主要化合物可能在抗 ＨＢＶ中起
到重要的作用。
关键词：一枝蒿；黄酮类；鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）；化学成分
中图分类号：Ｒ９６６　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９－５５５１（２０１６）０５－０５７８－０４
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００９－５５５１．２０１６．０５．０１３
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ａｎｔｉ－ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｖｉｒｕｓ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ
ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＡｒｔｅｍｉｓｉａ　ｒｕｐｅｓｔｒｉｓ　Ｌ．
ＹＡＮＧ　Ｌｕ１，２，ＺＨＡＮＧ　Ｓｕｗａｎ１，ＬＩＵ　Ｚｈｏｎｇｑｉ　３，ＨＥ　Ｊｉｎｈｕａ２，ＲＯＮＧ　Ｘｉａｏｊｕａｎ２，ＧＵ　Ｚｈｅｎｇｙｉ　２
（１　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｕｒｕｍｑｉ　８３００１１　Ｃｈｉｎａ；２　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｍａｔｅｒｉａｌ　Ｍｅｄｉｃａｌ，Ｕｒｕｍｑｉ　８３０００４，Ｃｈｉｎａ，
３ｔｈｅ　Ｆｏｕｒｔｈ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ’ａｎ　７１００００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ａｎｔｉ－ＤＨＢＶ　ｅｆｆｅｃｔ　ａｎｄ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ
Ａｒｔｅｍｉｓｉａ　ｒｕｐｅｓｔｒｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　５０％ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　Ａｒｔｅｍｉｓｉａ
ｒｕｐｅｓｔｒｉｓ　Ｌ．ｗｅｒｅ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｗｉｔｈ　ｐｏｌｙａｍｉｄｅ　ｃｏｌｕｍｎ．３０％ａｎｄ　５０％ｅｔｈａｎｏｌ－ｅｌｕｔｅｄ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ．
１－ｄａｙ　ｏｌｄ　Ｂｅｉｊｉｎｇ　ｄｕｃｋｌｉｎｇｓ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｄｕｃｋ　Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　Ｖｉｒｕｓ．Ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｄｕｃｋｓ
ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　３０％ ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｇｒｏｕｐ，５０％ ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｇｒｏｕｐ，ａｄｅｆｏｖｉｒ　ｄｉｐｉｖｏｘｉｌ
ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｖｉｒｕｓ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ　ｂｌｏｏｄ　ｏｆ　ｄｕｃｋｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｅｒｕｍ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｂｅｆｏｒｅ　ｍｅｄｉ－
ｃａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ａｔ　ｔｈｅ　５ｔｈ，１０ｔｈ　ｄａｙ　ａｆｔｅｒ　ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｔｈｅ　３ｒｄ　ｄａｙ　ａｆｔｅｒ　ｓｔｏｐｐｉｎｇ　ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ；Ｔｈｅｓｅ　ｄｕｃｋｓ
ｗｅｒｅ　ｋｉｌｅｄ　ａｎｄ　ｌｉｖｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｒｅｍｏｖｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｔｈｉｒｄ　ｄａｙ　ａｆｔｅｒ　ｓｔｏｐｐｉｎｇ　ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ａｎｔｉ－
ＨＢＶ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　Ｓｅｒｕｍ　ＤＨＢＶ　ａｎｔｉｇｅｎ，Ｓｅｒｕｍ　ＤＨＢＶ－ＤＮＡ　ａｎｄ　Ｌｉｖｅｒ　ＤＨＢＶ－ＤＮＡ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ
　第３９卷　第５期 新 疆 医 科 大 学 学 报 Ｖｏｌ．３９　Ｎｏ．５
　２０１６年５月 Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍａｙ．２０１６
ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｔｈｅ　ｅｔｈａｎｏｌ－ｅｌｕｔｅｄ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ
ＬＣ－ＨＲＭＳ／ＭＳ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　５０％ｅｔｈａｎｏｌ－ｅｌｕｔｅｄ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ｃａｎ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ＤＨＢＶ－ＤＮＡ　ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ
ｓｅｒｕｍ　ａｎｄ　ｌｉｖｅｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　２００ｍｇ／ｋｇ　ｄｏｓｅ．３０％ｅｔｈａｎｏｌ－ｅｌｕｔｅｄ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ｈａｓ　ｗｅａｋ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ．Ｆｉｖｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ
ｗｅｒｅ　ｇａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　５０％ｅｔｈａｎｏｌ－ｅｌｕｔｅｄ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ａｓ　６－ｄｅｍｅｔｈｏｘｙ－４′－Ｏ－ｍｅｔｈｙｌｃａｐｉｌａｒｉｓｉｎ－７－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒ－
ａｎｏｓｉｄｅ，Ｃａｔｉｃｉｎ，ｋａｅｍｐｆｅｒｉｄｅ，ａｒｔｅｍｅｔｉｎ，ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ　３，３′，４′－ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｅｔｈｅｒ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　５０％ｅｔｈａｎｏｌ－ｅ－
ｌｕｔｅｄ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ｃａｎ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ＤＨＢＶ－ＤＮＡ　ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｓｅｒｕｍ　ａｎｄ　ｌｉｖｅｒ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ　ｔｈａｔ　５０％ｅｔｈ－
ａｎｏｌ－ｅｌｕｔｅｄ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ｈａｓ　ａｎ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ａｎｔｉ－ＨＢＶ．
ＫｅｙＷｏｒｄｓ：Ａｒｔｅｍｉｓｉａ　ｒｕｐｅｓｔｒｉｓ　Ｌ．；ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ＤＨＢＶ；ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ
　 　 一 枝 蒿 （Ａｒｔｅｍｉｓｉａ　ｒｕｐｅｓｔｒｉｓ　Ｌ．）为 菊 科
（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）蒿属 （Ａｒｔｅｍｉｓｉａ　Ｌ．）植物岩蒿的地
上部分或全草，为新疆道地药材，也是维吾尔医常用
传统药材，其在我国主要分布于新疆北疆一带，具有
清热解毒、健胃消食、镇静止吐、抗过敏等功效［１］。
有研究报道一枝蒿中含有黄酮类、倍半萜类、氨基酸
类、苷类、多糖类、挥发油类、多肽和生物碱等化学成
分［２］。近年来，国内外研究发现中药中的黄酮类或
黄酮衍生物具有较好的针对流感病毒神经氨酸苷酶
靶点的抗病毒活性和抗肝炎病毒活性［３］。本课题组
前期研究表明一枝蒿提取物中可能存在抗病毒活性
强的黄酮类化学成分［４］。现有文献中大多采用一枝
蒿酮酸及其衍生物或一枝蒿总黄酮进行抗病毒研
究［５－７］，而对一枝蒿黄酮类成分经分离纯化后的部
位的抗病毒作用报道较少。本研究首次采用一枝蒿
５０％乙醇提取物经聚酰胺柱分离获得的各部位进行
抗乙肝病毒研究，并采用ＬＣ－ＨＲＭＳ／ＭＳ法对有效
部位化学成分进行初步分析，推测有效部位的主要
化学成分，揭示有效部位的物质组成，为后期实验研
究奠定基础。
１　仪器与试药
１．１　仪器　ＢＰ２１１Ｄ电子天平（德国赛多利斯），
ＤＭＩＲＢ显微镜（德国Ｌｅｉｃａ公司），Ｄｉｏｎｅｘ　ＵｌｔｉＭａｔｅ
３０００ＨＰＬＣ仪（美国戴安），Ｑ－Ｅｘａｃｔｉｖｅ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃ－
ｔｒｏｍｅｔｅｒ配备Ｘｃａｌｉｂｕｒ　２．３ｓｏｆｔｗａｒｅ（美国赛默飞世
尔），ＳＫ３３００Ｈ超声波清洗仪（上海科导超声仪器有
限公司）。
１．２　药材　一枝蒿（新疆西部加斯特药业有限公司
提供，批号：２０１３０８），北京鸭（１日龄，上海金连家禽
合作社有限公司提供，批号：２０１４０４２４），鸭乙肝病毒
（由复旦大学药学院提供），阿德福韦酯（浙江安科福
韦药业有限公司，批号：１４０４２０），聚酰胺（３０～６０
目，浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂，批号：
２０１４０３０５），ＤＩＧ－Ｈｉｇｈ　Ｐｒｉｍｅ　ＤＮＡ　Ｌａｂｅｌｉｎｇ　ａｎｄ
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ｓｔａｒｔｅｒ　Ｋｉｔ　Ｉ（罗氏公司，１１７４５８３２９１０），
甲醇为色谱纯（美国Ｆｉｓｈｅｒ公司，批号：１４１０６２），其
余试剂均为分析纯。
２　方法与结果
２．１　一枝蒿样品的制备　将一枝蒿药材粉碎，加入
１０倍量５０％乙醇，加热回流，提取３次，提取时间分
别为２、２、１ｈ，合并提取液，滤过，减压浓缩，真空干
燥，得浸膏。将浸膏粉末用水混悬，上样于聚酰胺
柱，依次用水和不同浓度的乙醇水溶液进行洗脱，分
别收集３０％、５０％乙醇洗脱液，分别减压浓缩、干
燥，得３０％乙醇洗脱物和５０％乙醇洗脱物。
２．２　３０％、５０％乙醇洗脱物体内抗乙肝病毒实验
２．２．１　鸭乙型肝炎病毒感染１日龄北京鸭，静脉注
射ＤＨＢＶ阳性鸭血清，０．２ｍＬ／只，在感染病毒后８
ｄ取血，分离血清，－７０℃保存待检。
２．２．２　药物治疗实验　将阳性鸭随机分为３０％乙
醇洗脱物组（５只）、５０％乙醇洗脱物组（５只）、阿德
福韦酯组（６只）、病毒对照组（６只）。３０％、５０％乙
醇洗脱物组按２００ｍｇ／ｋｇ体质量灌胃给药，阿德福
韦酯组按１７ｍｇ／ｋｇ体质量灌胃给药，病毒对照组
给予０．５％ＣＭＣ，每天１次，给药１０ｄ，停药３ｄ。各
组分别在给药前、给药期间不同时间（５ｄ和１０ｄ）
和停药后３ｄ取血，分离血清，－７０℃保存待检；停
药后第３天杀剖，取肝脏。采用Ｄｏｔ　ｂｌｏｔ方法［８］检
测血清ＤＨＢＶ－抗原，分别取各组在不同时间分离得
到的血清２μＬ点样于硝酸纤维素膜，干燥，封闭，斑
点杂交，洗膜并进行免疫检测；采用地高辛试剂盒
Ｄｏｔ　ｂｌｏｔ方法［８］检测血清ＤＨＢＶ－ＤＮＡ，分别取各组
在不同时间分离得到的血清１μｇ进行ＤＮＡ探针标
记，将ＤＮＡ固定，杂交，进行免疫检测；采用地高辛
试剂盒 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　ｂｌｏｔ方法［９］检测肝脏 ＤＨＢＶ－
ＤＮＡ，将各组鸭肝脏加少量灭菌生理盐水匀浆后，
反复冻融３次，低速离心后取１μｇ，进行ＤＮＡ探针
标记，将ＤＮＡ固定，利用琼脂糖凝胶电泳将插入载
体的模板ＤＮＡ从载体上分离出来并杂交，进行免
疫检测。
９７５　第５期 杨　璐，等：一枝蒿黄酮类提取物体内抗乙肝病毒活性及化学成分研究
２．２．３　３０％、５０％乙醇洗脱物体内抗乙肝病毒实验
结果
２．２．３．１　３０％、５０％乙醇洗脱物对血清中ＤＨＢＶ－抗
原复制的影响　用药期间，血清ＤＨＢＶ－抗原受到轻
微抑制，５０％乙醇洗脱物用药和停药３ｄ能持续保
持对血清ＤＨＢＶ抗原的抑制，抑制率为１３．０％～
１６．１％；３０％乙醇洗脱物给药５ｄ抑制率为１２．７％，
但是抑制率随时间下降，停药后反跳；阿德福韦酯也
轻微抑制血清抗原水平，抑制率为１０％；病毒对照
组抑制率为５．７％～７．３％，见图１。
图１　３０％、５０％乙醇洗脱物对血清中ＤＨＢＶ－抗原复制的影响
２．２．３．２　３０％、５０％乙醇洗脱物对血清中 ＤＨＢＶ－
ＤＮＡ复制的影响　用药期间，血清ＤＨＢＶ－ＤＮＡ受
到显著抑制，５０％乙醇洗脱物用药和停药３ｄ能持
续保持对血清 ＤＨＢＶ－ＤＮＡ 的抑制，抑制率为
７２．２％～９４．６％；３０％乙醇洗脱物给药５ｄ抑制率为
３７．４％，但是抑制率随时间下降，１０ｄ无效；阿德福
韦酯用药期间显著抑制血清ＤＮＡ水平，抑制率为
８９．０％～９２．７％，停药３ｄ后反跳３９．７％；病毒对照
组抑制率为９．１％～３２％，见图２。
２．２．３．３　３０％、５０％乙醇洗脱物对肝组织 ＤＨＢＶ－
ＤＮＡ水平的抑制作用　用药１０ｄ停药３ｄ，与病毒
对照组比较，３０％乙醇洗脱物对肝脏ＤＨＢＶ－ＤＮＡ
的抑制率为７．１％，而５０％乙醇洗脱物的抑制率为
３８．６％，阿德福韦酯的抑制率２９．１％。该结果与血
清ＤＨＢＶ－ＤＮＡ的抑制效果相吻。
图２　３０％、５０％乙醇洗脱物对血清中ＤＨＢＶ－ＤＮＡ复制的影响
２．３　５０％乙醇洗脱物化学成分分析
２．３．１　样品配制　称取５０％乙醇洗脱物粉末约１０
ｍｇ，置５ｍＬ量瓶中，加入５０％甲醇水适量，超声至
完全溶解，冷却至室温，定容，制成约２ｍｇ／ｍＬ的
溶液，过微孔滤膜（０．２μｍ），取续滤液。
２．３．２　色谱条件　色谱柱 Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｃ１８　２５０ｍｍ×
４．６ｍｍ；流动相为水（Ａ）－甲醇（Ｂ），梯度洗脱（０～
４０ｍｉｎ，２０％Ｂ→８５％Ｂ；４０～４５ｍｉｎ，８５％Ｂ；４５～５５
ｍｉｎ，２０％Ｂ），在２００～４００ｎｍ 波长范围内进行扫
描；流速：１ｍＬ／ｍｉｎ；进样量：１０μＬ；柱温：３０℃。柱
后１∶２分流（１／３进入质谱仪）。
２．３．３　质谱条件　在一个质谱数据采集周期内同
时进行高、低不同碰撞能量的２个ＥＭＳ扫描。采
集方式为Ｆｕｌ　ＭＳ＋ｄｄＭＳ２。扫描范围：７０～１　０００
ｍ／ｚ；色谱峰宽（ＦＷＨ）：１５ｓ；分辨率：７０　０００；最大
离子补集时间：１００ｍｓ；鞘气：４０ｐｓｉ；喷雾电压：３．５
ｋＶ；毛细管温度：３５０℃；共轴气温度：２２０℃；隔离窗
宽度：１．０ｍ／ｚ。
２．３．４　５０％乙醇洗脱物化学成分分析结果　取
５０％乙醇洗脱物溶液按“２．３．２”项下色谱条件和
“２．３．３”项下质谱条件进行ＬＣ－ＨＲＭＳ／ＭＳ分析，并
根据样品分子量推测化合物，结果推测出５种化合
物：６－去甲氧基－４′－Ｏ－甲基茵陈色原酮－７－Ｏ－β－Ｄ－葡
萄糖苷、紫花牡荆素、异山奈甲黄素、洋艾素、山柰
素－３，３′，４′－三甲醚，见图３～５、表１。
图３　５０％乙醇洗脱物ＨＰＬＣ图
　
图４　５０％乙醇洗脱物ＨＰＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ
总离子流色谱图－正离子检测模式
图５　５０％乙醇洗脱物ＨＰＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ
总离子流色谱图－负离子检测模式
０８５ 新 疆 医 科 大 学 学 报 第３９卷　
表１　５０％乙醇洗脱物中主要化合物推测结果
峰序号 ｔＲ（ＨＰＬＣ） ［Ｍ－Ｈ］－ ［Ｍ＋Ｈ］＋／［Ｍ＋Ｎａ］＋ Ｍ．Ｗ． 化合物名称
１　 ２６．９６　 ４６１　 ４６３／４８５　 ４６２　 ６－去甲氧基－４′－Ｏ－甲基茵陈色原酮－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷
２　 ３３．５６　 ３７３　 ３９７　 ３７４ 紫花牡荆素
３　 ３４．６６　 ２９９　 ３２３　 ３００ 异山奈甲黄素
４　 ３５．９１　 ３８７　 ３８９　 ３８８ 洋艾素
５　 ３８．３３　 ３４２　 ３４４　 ３４３ 山柰素－３，３′，４′－三甲醚
３　讨论
目前鸭乙型肝炎病毒模型是卫生部规定的新药
抗乙型肝炎病毒药效学评价的唯一动物模型，国内
外研究目前普遍采用的乙肝动物模型为ＤＨＢＶ感
染１～３日龄雏鸭，其病毒血症持续时间较长且较稳
定，且无明显的自然转阴现象，是研究人类乙型肝炎
发病机制、病毒复制过程及筛选有效治疗药物的理
想动物模型［１０］。动物给药剂量与人给药剂量的换
算：本实验根据公式［１１］ｌｇ　Ｓ＝０．８７６±０．６９８ｌｏｇ　Ｐ
（其中Ｓ为体表面积，Ｐ为体质量）计算后，Ｄｏｓｅ（鸭，
ｇ／ｋｇ体质量）＝６．１×Ｄｏｓｅ（人，ｇ／ｋｇ体质量），即鸭
用剂量约为人用剂量的６倍，或者说鸭剂量为６ｇ／ｋｇ
体质量，相当于人用１ｇ／ｋｇ体质量（人体质量假设
为６０ｋｇ，鸭体质量假设为１５０ｇ。如体质量有差
异，则倍数有一定差异，但误差不会很大）。
本实验中使用的阿德福韦酯是治疗 ＨＢＶ的常
见药物，实验结果表明５０％乙醇洗脱物对 ＤＨＢＶ
的抑制作用高于阿德福韦酯，且在停药后依然存在
抑制作用，提示５０％乙醇洗脱物的治疗作用可能优
于阿德福韦酯。
在本研究体内抗乙肝病毒实验中，５０％乙醇洗
脱物样品在２００ｍｇ／ｋｇ剂量下能显著抑制鸭乙肝
病毒血清和肝脏中ＤＨＢＶ－ＤＮＡ复制，３０％乙醇洗
脱物有抑制 ＤＨＢＶ－抗原作用，但对血清和肝脏中
ＤＨＢＶ－ＤＮＡ复制的抑制作用相对较弱，且有反跳
现象。提示５０％乙醇洗脱物中可能含有抗ＤＨＢＶ
作用很强的单体化合物。通过对５０％乙醇洗脱物
的化学成分分析［１２－１４］，鉴别出５０％乙醇洗脱物中
的５种化合物，分别为６－去甲氧基－４′－Ｏ－甲基茵陈
色原酮－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷、紫花牡荆素、异山奈甲
黄素、洋艾素、山柰素－３，３′，４′－三甲醚。林珊等［１５］
通过急性抗炎模型观察紫花牡荆素的抗炎作用，结
果表明紫花牡荆素具有明显的体内抗炎作用。灵丹
草具有抗感染、抗病原微生物等作用［１６］，《中国药
典》记载臭灵丹中的特征性成分为洋艾素，提示洋艾
素可能有抗感染和抗病原微生物等作用。这２种成
分都具有抗炎作用，提示一枝蒿中的紫花牡荆素和
洋艾素可能起到抗ＤＨＢＶ作用。此结果对进一步
研究一枝蒿中单体化合物抗ＤＨＢＶ作用奠定了物
质基础。
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收稿日期：２０１５－１１－１６］
（本文编辑　施洋）
１８５　第５期 杨　璐，等：一枝蒿黄酮类提取物体内抗乙肝病毒活性及化学成分研究