全 文 ：肿瘤药学 2011 年 12 月第 1 卷第 6 期 Anti-tumor Pharmacy, December 2011, Vol.1, No.6 - 505 -
★基金项目：湖南省教育厅高等学校科学研究项目（08C146）
作者简介：曾琛，女，硕士研究生，讲师，主要研究方向：中药治疗白血病机制研究；电话：0731-88498008，Email:
zeng0051chen@126.com
乌骨藤提取物抑制慢性髓性白血病（K562）
细胞增殖★
曾琛 1，陈燕 2，单连华 2，刘佳 1，陈丹娜 1，朱力宇 1，周鹏 1
（1 长沙医学院，湖南长沙，410219；2 湖南大学，湖南长沙，410012）
摘要：目的　提取乌骨藤中抗肿瘤成分，探讨其对慢性髓性白血病 K562 细胞增殖的抑制作用及机制。方
法　设计乌骨藤提取物浓度梯度、时间梯度干扰 K562 细胞增殖，通过显微镜观察细胞形态、MTT 法检测增殖
抑制率。结果　随着浓度和时间梯度的递增，K562 细胞增殖速度及细胞形态受到了明显的影响。 结论　乌骨
藤提取物对慢性髓性白血病（K562）细胞增殖有明显的抑制作用。
关键词：乌骨藤；白血病；K562；MTT
中国分类号：R285.5　文献标识码：A　文章编号：2095-1264(2011)06-0505-03
Inhibition Effect of Marsdenia Tenacissima on K562 Cells Proliferation
Zeng Chen1, Chen Yan2, Shan Lianhua2, Liu Jia1, Chen Danna1, Zhu Liyu1, Zhou Peng1
(1 Changsha Medical University, Changsha Hunan, China, 410219; 2 Hunan University,
Changsha Hunan, China, 410012)
Abstract: Objective To determine the inhibitory effect of the extraction from the stem of Marsdenia tenacis-
sima on K562 cells (Chronic myeloid leukemia cell line). Method The inhibiting effects of Marsdenia tenacissma
extraction of different concentration and different interfering time were investigated by MTT assay and cell mor-
phology assay. Results The effect of Marsdenia tenacissima extraction on the cell proliferation of K562 is con-
spicuous along with the increase of concentration and interfering time. Conclusions The Marsdenia tenacissima
extraction had a conspicuous inhibition effect on cell proliferation of chronic myeloid leukemia cell line(K562).
Key words: Marsdenia tenacissima; Leukemia; K562; MTT
· 基础研究 ·
前言
　 　 乌 骨 藤 又 名 通 关 藤 、通 光 散 ，是 萝 藦 科
（Asclepiadaceae）牛奶菜属（Marsdenia R.Br.）植物通
光藤［Marsdenia tenacissima （Roxb.） Wight et Arn.］的
藤茎，始载于《滇南本草》[1]。分布于贵州与云南等
地，性味苦，微寒，具清热解毒、消炎镇痛与止咳平
喘等功效，可治疗肺炎、慢性支气管炎、咳喘等疾
病，曾经收载于《云南省药品标准》（1974 版）和《中
国药典》（1977 版）。现代药理研究表明，乌骨藤含
有多种甾体酯苷、生物碱、有机酸、多糖、树脂及色
素等多种化学成分，其独特化学成分具有明显的抗
肿瘤活性，是一种很有前途的抗癌中药，目前已经
报道的抗癌作用主要集中于临床治疗肝癌、肺癌和
胃癌 [2-6]。本实验通过细胞形态学分析和 MTT 法，
探讨乌骨藤提取物是否对人慢性髓性白血病细胞
K562 存在抑制作用，为临床应用乌骨藤治疗人慢
性髓性白血病提供参考，拓展其应用领域。
1　材料和方法
1.1　材料　乌骨藤购自湖南省药材公司，经中医
药大学采用基原鉴定法认定；人类慢性髓性白血病
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细胞株 K562，由湘雅医学院陈汉春教授惠赠；胎牛
血清购自杭州四季青公司，噻唑蓝（MTT）粉末购自
北京鼎国生物公司，RPMI1640 培养基、台盼蓝、二
甲基亚砜（DMSO）等细胞培养及分子生物学试剂为
Gibco，Sigma，Amresco 等公司的产品。主要仪器为
Bio-Tek 公司的酶标仪。
1.2　方法
1.2.1　制备乌骨藤提取物　已有研究证明乌骨藤
的水层提取物中含有葡聚糖和杂多糖，它们是抑制
肿瘤的有效成分，按照刘玉芬 [7] 等的方法将乌骨藤
干燥藤茎经粉碎水煎，依次用石油醚、氯仿、正丁醇
提取，最终浓缩获得水层提取物 2.5 ml。将水层提
取物用 RPMI1640 配置成不同浓度组（0，10，30，50
μL/ml），并用 0.22 μm 微孔滤器过滤除菌。
1.2.2　显微镜下拍照观察细胞形态　将慢性髓性
白血病细胞株 K562 调整至 2.5×105 ml，接种于 12
孔培养板中，在含 10 % 胎牛血清，100 U/ml 青霉素
的 RPMI1640 培养液中，于 37℃，5% CO2 下充湿培
养。取对数生长期细胞进行实验，接种 6 h 后，根
据实验分组加入预先配置的药物，使各组药物终浓
度分别达到 0，0.2，0.6，1.0μL/ml，同时设立不加乌
骨藤提取物的空白对照孔，每组均置两个平行孔，
分别于培养 24，48，72 h 后对细胞进行形态观察并
拍照，实验重复三次。
1.2.3　MTT 实验　取对数生长期的 K562 细胞，调
整至浓度 1.5×106 /ml，将 100 μL 待检测细胞悬液
加入 96 孔培养板中，按照药物终浓度梯度（0，0.2，
0.6，1.0 μL/ml）和时间梯度（24，48，72 h）设 12 组实
验组，各实验组设加入等体积 DMSO 的孔为阴性对
照，并设未加乌骨藤提取物的孔为空白对照，每组
设 6 平行孔。加入 5 mg/ml MTT 溶液 10 μL 继续孵
育 4 h。离心，去上清，加入二甲基亚砜 100 μL，振
荡溶解 10 min。用酶联免疫检测仪测定 570 nm 波
长下的吸光度（A）值，计算细胞增殖抑制率。
2　结果
2.1　形态学比较分析　如图 1 所示：在药物处理
24 h 的实验组中，随着药物浓度的提高，存活细胞
的数量逐渐减少，而且细胞的通透性逐步降低，细
胞的形态也逐渐不规则，说明细胞增殖能力和细胞
的活性随着药物浓度的递增在不断下降。在各药
物浓度的实验组中，随着药物处理时间的增长，细
胞通透性逐渐变差且明显发生崩解。实验表明随
着药物浓度和处理时间的递增，K562 细胞增殖速
度及细胞形态受到了明显的影响。
图 1　乌骨藤提取物对人类慢性髓性白血病 K562 细胞形
态的影响
Fig 1　The effect of marsdenia tenacissima extraction on cell
morphology of chronic myeloid leukemia cell line(K562)
2.2　MTT 实验结果　如图 2 所示，将乌骨藤提取
物浓度分别为 10、30、50 μL/ml 的培养基加入对数
生长期的 K562 细胞中，继续培养 24 小时，药物对
K562 的抑制率分别达到了 45%，73%，84%，求得
IC50 为 11 μL/ml。
图 2　不同浓度乌骨藤提取物对人类慢性髓性白血病
K562 细胞增殖抑制作用
Fig 2　The inhibition effect of marsdenia tenacissima ex-
traction in different concentration on cell proliferation of chronic
myeloid leukemia cell line(K562)
3　讨论
　　乌骨藤化学成分复杂，具有广泛的药理活性，
大量实验和临床观察表明 [8-12] 其抗肿瘤活性较为
明显，不但可以明显抑制人肺、胃、肝、大肠来源的
癌细胞，本文实验结果显示其对人类慢性髓性白血
病 K562 细胞增殖也有明显的抑制作用，且毒副作
用轻微，是一种非常有前途的抗癌中药。虽然目前
乌骨藤的抗肿瘤作用机制仍未完全阐明 [13,14]，其质
量控制指标也有待于商榷，但随着现代生物医学科
学技术的高度发展和日益完善，国家经济实力的日
益富强，我们有理由相信乌骨藤有效成分的分离与
鉴定会更加明确，其药理作用及机制会更加清楚，
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质量控制也会更加准确合理。乌骨藤很可能成为
或被改造成为一种高效低毒的天然药物，在临床上
得到更为广泛的应用。
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