全 文 ：第 7 卷 第 6 期
2 0 0 5 年 1 1 月
江 宁 中 压乏 学 欢 学 报
JO UR N A L O F L IA O N ING C O LL E G E O F T CM
V o l
。
7
N o v
。 ,
N o
.
6
2 00 5
薄层扫描法测定水红花子花旗松素的含量
何 静‘, 指导 : 翟延君 2
(1
. 辽宁中医学院药学院 20 04 届毕业生, 辽 宁 沈阳 110 03 2; 2 . 辽 宁中医学院药学院 , 辽 宁 沈阳 1 00 32)
摘 要 : 目的 : 建立水红花子 中花旗松素含量浏定方法 。 方 法 : 采用薄层扫描 法对 不 同商品 药材 的水红花子分
别进行含量测定 , 并进行方法学考察 。 结果 : 花旗松素在 1 . 0 一 10 . 0拌L 范围 内与其斑点峰面积有良好的线性 关系。
结论 : 方法重复性 、稳定性 、专属性 良好 , 可作为水红花子质量控制方法 。
关键词 :水红花子 ;花旗松素 ; 薄层扫描法
中图分类号 : R zs 4 . i 文献标识码 :B 文章编号 : 10 05 一 4 2 3 1《2 00 5 )0 6 一 062 2 一 0 2
水红花子为寥科 (P o ly g o n a e e a e )寥属 (p o l路o n -
u m )桃 叶寥组 (P e r s ie a r ia )植物红寥 P ol y g o n u m o r i一 表 1 精密度考察
e n ta ze L
. 的干燥成熟果实 。 (滇南本草》谓本 品能 峰面积 A 2 5 0 70 2 5 3 2 4 2 59 5 9 2 6 1 5 9 2 57 2 3
“破血 , 治小儿痞块 积聚 , 消年深坚积 , 疗 妇人石瘦 Rs D( %) 1 . 1瘤 。 “指出 了水红花子有活血消痪 、 软坚破积之功
用 [1] 。 现代临床研究表 明 , 本 品还具有治疗原发性
肝癌 、抗凝血 [2] 及子宫肌瘤的作用 [3] 。 水红花子主要含黄酮类化合物 , 根据我 们的前期工作研究发现
其主要黄酮为花旗松素 , 花旗松素系首次从红寥中分得 [4] , 因此本文 以花旗松素为指标性成分 。 为控
制其质量 , 采用双波长扫描测定水红花子 中花旗松素的含量 。
1 仪器与试剂
1
.
1 仪器 薄层 硅胶 板 (2 0 e m 义 2 0 e m , 1 0 e m X
20
c
m )自制 , C S 一93 0 薄层 扫描仪 (日本 岛津 ) , H H S型电热恒温水浴锅 (上海博迅实业有 限公司医疗设备厂 ) 、 U v 一2 65 自动紫外分光 光度计 ( 日本 岛津 ) 、
20 2
一
1 型电热恒温干燥 箱 (天津市泰斯特仪器有限公司 ) , 0 . 5 拜L 、 2 拼L 定量毛细管 。
1
.
2 试齐』 甲醇 , 三氯甲烷 , 甲酸 (均为分析纯 ) , 花旗松素对照品 (美国迪马公司 )
2 方法与结果
2
.
1 扫 描 条 件 薄 层 板 为硅 胶 G 几5 4 板 , 板 厚
0
.
3 m m
, 自然晾干 , 在 1 0 5 ℃下活化 3 0 m in 。 展开剂 :氯仿一甲醇 一甲 酸 ( 8 : 1 . 5 : 0 . 25 ) 。 入。 = 30 0~ , 从 =
37 0
n m
,
s x = 3
, 反射法双波长锯齿形扫描 , 灵敏度中度 , △Y = 0 · Z m m o
2
.
2 线 性 范 围考察 精密 称取水 红花子对照 品
0
.
95 m g
, 置 Z m L 容 量瓶 , 加 甲醇溶解 并定容 至刻度 , 精密吸取对照品 溶液 0 . 5 、 i 、 z 、 4 、 6 、 s 、 1 0 拜L , 分别点于硅胶 G 几54 薄层板 , 用氯仿 一 甲醇 一 甲酸 (8:
1
.
5 : 0
.
2 5)
, 上行展开 12 c m , 取 出后 挥干溶剂 , 紫外灯下 定 位 , 扫 描测 定数 据 。 以 花 旗 松 素 点 样 量
(0
.
4 7 5
,
0
.
9 5
,
1
.
9
,
2
.
8 5
,
3
.
5
,
4
.
7 5 m g )为横坐标 , 花旗松素斑点峰面积为纵坐标作图 , 得 回归方程为 : Y
= 5 0 3 8 3
.
13 X 一 4 4 0 4 . l r = 0 . 9 9 8 6 , 结果 表 明 , 花旗松素在 1 . 0 一 10 . 0 拌L 范围 内与其斑点峰面积有良好的线性关系 。
2
.
3 供试 品 溶液 的配置 分别取不同产地水红花子 (生品 )粉碎 , 过 4 0 目筛 , 精称 5 9 加 甲醇 2 5 m L , 回流提取 Z h , 过滤 , 滤液置蒸发皿中蒸干 , 分次加入 甲
醇 , 至 s m L 容量瓶定容备用 。
2
.
4 精密度实验考察 精密吸取水红花子样 品溶液 1 拼L , 点于同一块硅胶 G 几54 薄层板上 , 共 5 点 , 以
前述色谱条件展开 , 取出 , 晾干 , 置薄层扫描仪上 , 扫描测定峰面积 。 见表 1 。
符合有关规定 。
2
.
5 稳 定性 实验考察 精密吸取水红花子供试品
溶液 1 拼L , 点于硅胶 G 几 5 4薄层板上 , 以前述色谱条
件展开 , 取 出 , 晾干 , 紫外灯下定位 , 置薄层扫描仪
上 , 每隔半 小 时扫 描 测 定 一次 峰面积 , R SD % =
1
.
7 % 结果表明 : 2 . 5 h 内供试品化学性质基本稳定 。
见表 2 。
表 2 稳定性考察
峰面积 A
R SD (% )
2 5 4 5 8 2 6 0 8 4 2 5 5 8 5 2 5 9 53 2 5 5 4 2
2
.
6 重复 性试验考察 取相 同产地 的五份样品各
5 9
, 精密称定 , 分别按供试 品 溶液配置项下方法操
作 , 测定 , 测定结果 , 见表 3 。
表 3 重复性考察
含量 0 4 92 1 0 . 4 8 14 0 . 4 8 3 2 0 . 5 0 14 0 . 4 9 8 7
R SD (% )
2
.
7 样 品 测定 分别精密吸取水红花子样品溶液 ,标准品溶液 1 拼L , 点于薄层板上 , 按标准曲线项下展开 , 用外标一点法计算水红花子 中花旗松素的含量 ,对不同收购地的 26 件水红花子样品 , 按上述方法进
行了花旗松素含量测定 。 结果 , 见表 4 。表 4 样品中花旗松素含量的结果
样品 花旗松素含量 花旗松素含量 祥品 花旗松素含量 花旗松素含量
0
.
18 9 3
1
.
6 7 3 9
0
.
9 6 2 3
0
.
7 9 0 1
0
.
7 6 4 8
0
.
5 5 1 0
0
.
4 6 8 7
0
.
1 2 4 4
1
.
9 8 3 0
0
.
8 5 8 0
1
.
6 5 3 7
0
.
87 7 6
0
.
0 18 9 3
0
.
1 67 3 9
0
.
0 96 2 3
0
.
0 7 9 0 1
0
.
0 7 6 4 8
0
.
0 5 5 1 0
0
.
0 4 6 8 7
0
.
0 12 4 4
0
.
1 9 8 3 0
0
.
0 8 5 8 0
0
.
1 6 5 3 7
0
.
0 8 77 6
2
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阳翻娜徽粥讹北律必办升洛安河毫0 . 2 0 5 0 0
0
.
0 8 8 3 5
0
.
0 4 9 2 1
0
.
0 6 9 0 8
0
,
0 4 5 1 4
0
.
0 3 4 1 7
0
.
0 4 0 1 4
0
.
0 77 3 1
0
.
0 4 4 3 2
0
.
0 3 7 14
0
.
0 9 1 92
0
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J“.月1241
日飞勺‘nU1J.L‘.以内j.二Q产、、n6八,Q护哎J4n47J.1气口0只4了0Jq内J马7O声,立20CUn00八目onU叮1
2
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阳连溪口峰北州湖津朝大本沈营赤天兰芜湖
2
.
8 回 收 率 测 定 取 已 知 准 确 含 量 的 样 品
2
.
4 8 3 5 9
, 精密加入对照品 液 ( 3 . 0 8 m g / m L ) 0 . sm L ,
然后按标准 曲线项下展开 , 按拟定方法测定 , 用外标
一点法计算 。 见表 5 。
收稿日期 : 2 0 0 5 一 0 9 一 0 6
作者简介 :何静 ( 19 80 一 ) , 女 , 山东恒台人 , 硕士研究生 , 研究方向 : 中药鉴定 。
戳黔
DOI：10.13194/j.jlunivtcm.2005.06.88.hej.073
第 7 卷 第 6 期
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j工 宁 中 医 学 院 学 报
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鹿鞭药材及伪品的 SD S 一 聚丙烯酞胺凝胶电泳鉴别研究
金跃明1 , 指导 : 李 峰2
(辽宁中医学院药学院 2 0 04 级本科毕业生 , 辽宁 沈阳 1 10 0 32 ; 2 . 辽 宁中医学院药学院 , 辽 宁 沈阳 n 00 32)
摘 要 : 目的 :探计不同品种 、产地鹿鞭药材及伪 品的定性鉴定方法 。 方法 : 用 电机缓 冲液提取样品 中的蛋 白
质 , 经样品水解液加热水解后 , 用连续 来统 S D S 一 PA G E 法 (凝胶 浓度 10 % 、厚度 1 . 5~
, 磷酸缓 冲系统及恒流 电
泳), 对 9 个不同品种 、产地鹿鞭 药材及伪 品牛鞭进行鉴 别。 结果 : 鹿鞭 与其伪品有 明显 区 别 , 不同品种 的鹿鞭 其
S D S 一 聚丙烯鱿胺凝胶电泳指纹图 , 也有较明显的 区别 。 结论 : SD S 一 聚丙烯耽胺凝 胶电泳法 , 可 用于鹿鞭药材与
伪品的鉴别 , 以及不同品种鹿鞭药材的鉴别 。
关键词 :鹿鞭 ; SDS 一 PA G E ; 鉴别
中图分类号 : R2 8 2 . 7 03 文献标识码 : B 文章编号 : 1 00 8 一 4 2 3 1《2 00 5 )0 6 一 62 3 一 0 2
鹿鞭 (ce rv i Pen is et T es tis )系鹿科动物梅花鹿 表 1 不同品种与产地鹿鞭药材及伪品牛鞭
样品
编号 来源 产地及规格
梅花鹿 c‘训 s , 滋户声℃ , T e例‘nk 吉林农科院鹿场(新鲜品)
马 鹿 C . ela Ph 。, Li ~
u : 陕西咸阳鹿场(干燥品)
梅花鹿 c . n 诬勿如 n Te ~ nk 黑龙江大兴安岭(干燥品)梅花鹿 c . n动加。 Te ~ nk 辽宁桓仁桦尖鹿场(新鲜品)梅花鹿 c . 川沙 , Te mln in k 四川省药材公司鹿场(干燥品)梅花鹿 C . 瓜勿和。 T e m m ink 辽宁西丰鹿场(新鲜品)
马 鹿 C . 亡勿户无“, Li n ae u s 内蒙赤峰马鹿场(干燥品)
梅花鹿 c . : 动加。 T e m m ink 广州市药材公司市售(马来西亚进
口干燥品)
梅花鹿 c . 爪勿如 : T e n l而油 陕西咸阳鹿场(干燥品)
牛鞭枷 Ta u 二 : d0 , 改介u , G m eli n 河北安国药材市场(干燥品)
,1一内jJ斗、‘67
苦
0
(袅。。s n 艺户和 n T e m 而n k ) 、 马鹿 ( C . e zo p 人。: L . )千燥带皋丸的 阴茎 [1 , 其味甘 、咸 , 性温 , 归肝 、 ’肾 、膀
胧经 , 具有补肾 , 壮 阳 , 益精 的功能 , 用于治疗劳损 、
腰膝酸痛 、肾虚 、耳鸣 、阳痞 、宫冷不孕等症图 。 因其
疗效好 , 来源紧缺 , 目前伪品较多 , 尤 以牛鞭不易鉴
别 。 为此本实验对收集到的不 同品种 、产地 的鹿鞭
药材及伪 品牛鞭 , 进行了凝胶 电泳鉴别研究 , 效果较
理想 , 该方法可作为鹿鞭药材定性质量控制的方法。
1 仪器与 ·试剂
1
.
1 仪器 D Y Y一 12 型 , 电脑三恒多用电泳仪 (北
京市六一仪器厂 ) 、 D Y C Z一24 D 型 , 蛋白 电泳槽 (北
京市六一仪器厂 ) ; W D一94 05 B 型 , 水平摇床 (北京
市六一仪器厂 ) ;W D一 94 06 型 , 凝胶观察灯 (北京市
六一仪器厂 ) ; T G L一 16 G 离心机 (上海安亨科学仪
器厂 ) ; K Q 3 2 0 0 超声波清洗器 ( 昆山市超声仪 器有
限公司 ) 。
1
.
2 试剂 所有试剂除丙烯酸胺为 日本进 口外 , 均
为 国产生化和分析试剂 。
1
.
3 实验材料 不同 品种与产地鹿鞭药材及 伪品
牛鞭 , 于 2C1 01 年 5 月一8 月收集 , 经康廷国 教授鉴
定 , 来源及规格 , 见表 1 。
2 方法与结果
2
.
1 凝胶与溶液配 制 所有电泳用的试剂及凝胶
均按 文献 [3j 方法制 备 , 凝胶 浓 度为 10 % , 厚 度为
1
.
s m m
。 澳酚蓝指示剂按药典[’] 方法配制 。
2
.
2 供试品 溶 液 的 制备 [5] 取各样 品粉末 (过 40
目 ) 0 . 5 9 置于研钵 中 , 加入 sm L 缓冲提取液研磨 ,
匀浆 , 离心 1 0 m i n ( 3 0 0 0 r / m i n ) , 取上清液 , 残渣重复
以上操作 , 合并上清液。 电泳前 , 将样品提取液与样
品缓冲液以 1 : 1 的 比例混和均匀 , 10 0℃ 水浴加热
Zm in
, 即得 。
表 5 回收率考察
样品来源
安徽 2
加入对照品量 (; g ) 实测花旗松素量 (, g ) 加样回收( % )
0
.
6 5 2 7 9 1
.
0 6
3 结 论
花旗松素为水红花子 中活血消癖 、软坚破积有
效成分之一 , 通过查阅文献仅有极少数药材含有花
旗松素 , 故专属性极强 , 因此可以作为水红花子的标
准物质对其 :进行质量控制 , 测 定花旗松素的含量有
其实际意义 . 。 采用薄层扫描法测定水红花子中花旗
松素的含量可达到控制本品质量的 目的 。 通过本实
验发现 , 花旗松素等黄酮类化合物对 1 % AI C1 3 乙醇
显色剂 , 无颜色变化 。 得出最佳薄层条件为氯仿 一
甲醇 一 甲 酸 ( 8 : 1 . 5 : 0 . 2 5 ) , 硅胶 G 凡5 4 板 , 紫 外灯
2 5 4 n m 下观察 。
实验 中我们对提取方法进行 了 比较 , 结果发现
水浴回流提取 Z h 比超声提取 30 m in 效果好 , 前者提
取的样品液显现的 荧光斑点明显多于后者 , 说 明本
实验回流方法提取出的成分 比较完全 。 .
参考文献 :
〔1] 雷载权 , 张廷模 . 中华临床中药学 [M ] , 下卷 . 北京 : 人 民卫生出
版社 , 19 9 8 . 1 1 7 5
【2〕 郑占虎 . 中药现代研究与应用【M ] . 北京 : 学苑出版社 , 1 9 9 .
5 5 7 4
【3] 沈仲理 . 治疗子宫肌瘤选药经验录【J] . 中医文献杂志 , 1 9 97 , 52
(4 )
:
3 2
【4 〕 张继振 . 红寥果实黄酮化合物的研究〔J] . 中草药 , 1 9 90 , 2 1( 8) : 7
收稿日期 : 2 0 0 5 一 1 1 一 0 1
金基项目 :辽宁省教育厅科研课题
作者简介 :金跃明( 1 9 80 一 ) , 男 , 辽宁阜新人 , 2 0 04 级本科毕业生 , 学士 , 从事中药学研究 。
嚷鬃爵