全 文 ：第 30 卷 第 11 期
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中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 30 No． 11
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高效液相色谱二极管阵列检测法同时测定
马尾松中花旗松素和芦丁的含量
董宇1，马相锋2，吴人杰1，杨明艳2，寿旦1，李洪玉1
(1．浙江省中医药研究院中药所，浙江 杭州 310007;2．浙江中医药大学药学院，浙江 杭州 310053)
摘 要:目的:采用高效液相色谱二极管阵列检测法，建立了同时测定马尾松针中花旗松素和芦丁含量的方
法。方法:采用 C18柱(250 mm ×4． 6 mm，5μm) ;以甲醇 － 1 %冰醋酸溶液为流动相进行梯度洗脱;检测波长:花
旗松素为 290nm，芦丁为 359nm;柱温为 30℃。结果:花旗松素和芦丁质量浓度分别为 0． 040 ～ 0． 320mg /L、0. 050
～ 0． 40mg /L时与其峰面积呈良好的线性关系(线性相关系数均为 0． 9999) ;花旗松素和芦丁平均回收率(n = 9)
分别为 100． 14%和 100． 37%，相对标准偏差(RSD)分别为 1． 01%和 1． 11%。结论:该方法是一种快速、灵敏、准
确的分析方法，可以为马尾松针及其制剂的质量控制提供科学依据。
关键词:高效液相色谱;马尾松;花旗松素;芦丁
中图分类号:R284． 1 文献标识码:A 文章编号:1673 － 7717(2012)11 － 2517 － 03
Simultaneous Determination of Taxifolin and Rutin in Pinus massoniana
Lamb． by High Performance Liquid Chromatography with Diode Array Detection
DONG Yu1，MA Xiang-feng2，WU Ren-jie1，YANG Ming-yan2，SHOU Dan1，LI Hong-yu1
(1． Zhejiang Academy of Traditional Chinese Medicine，Hangzhou 310007，Zhejiang，China;
2． Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310053，Zhejiang，China)
Abstract:Objective:A High Performance Liquid Chromatography with Diode Array Detection has been developed for
the simultaneous determination of taxifolin and rutin in Pinus massoniana Lamb． Methods:In this method，C18 column
(250mm ×4． 6mm，5μm)was used with the mobile phase containing methanol － Acetic acid － water for gradient elution
and the detection wavelength was set at 359nm for rutin and 290nm for taxifolin，column temperature was 30℃ ． Result:
Under the optimized separation conditions，two components were separated thoroughly，and the relationship between the
concentrations and the peak areas of two components were both linear． The recoveries were 100． 14% for taxifolin，and
100． 37% for rutin． The relative standard deviations(RSD)were 1． 01% and 1． 11%，respectively． Conclusion:The meth-
od is simple and convenience，and can be used for quality control of Pinus massoniana Lamb and its production．
Key words:High Performance Liquid Chromatography(HPLC) ;Pinus massoniana Lamb;taxifolin;rutin
收稿日期:2012 － 06 － 09
基金项目:浙江省科技厅资助项目(2008F1032)
作者简介:董宇(1985 －) ，男，浙江宁海人，研究实习员，硕士，研究
方向:中药化学、中药物质基础。
通讯作者:寿旦(1973 －) ，女，浙江诸暨人，副研究员，硕士，研究方
向:中药分析与质量评价。
马尾松(Pinus massoniana Lamb．)是我国亚热带南部
潮湿地区分布最广的树种。干燥的马尾松针叶作为一味常
用中药，始载于《名医别录》上。其性温，叶苦、涩，有祛风
止痛、杀虫止痒、活血消肿、安神、明目等功效，临床上用于
治疗风湿疼痛、牙痛、跌打损伤、脚气水肿、夜盲症、心脑血
管病、糖尿病、肥胖病、肝病、胃病、淋病、慢性支气管炎、肿
瘤等症，其价值日益受到重视。马尾松松针叶中含黄酮类
化合物、贝壳核酸 － 19 －甲醚、南洋核酸等，并且还含有挥
发油(主要成分为蒎烯及乙酸龙脑酯)和多种维生素
等［1 － 3］，但是除本文作者刊发的论文外［4 － 5］，目前国内外未
见有关马尾松针及其制剂的质量标准研究的文献报道。松
针中富含天然黄酮类化合物，研究表明松针中黄酮成分具
有抗肿瘤，抗氧化和降血脂等多种生理作用［6 － 8］。本文作
者前期已通过药效实验筛选出了松针镇静催眠有效部
位［9］，对该有效部位进行成分化学研究，分离鉴定了包括
芦丁与花旗松素在内的多种主要成分(另文报道) ，并进一
步进行松针制剂的开发研制。芦丁与花旗松素均为黄酮类
化合物，作为含量指标，建立其含量测定方法，能够为马尾
松针的质量控制提供方法。考虑到芦丁与花旗松素最大吸
收波长不同，本文采用高效液相色谱二极管阵列检测
法［10］，通过优化样品提取条件和色谱分离条件，用外标法
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DOI：10.13193/j.archtcm.2012.11.151.dongy.049
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定量，建立了同时测定马尾松针中芦丁与花旗松素含量的
测定方法，并应用于马尾松针及其滴丸制剂的测定，方法准
确、简单、重现性好，能够为马尾松针的药材治疗标准研究，
产地差异比较，以及制剂质量标准研究提供实验依据。
1 材料与方法
1． 1 仪器与材料
20A － VP高效液相色谱仪(日本岛津) ;SPD － M20A 二
极管阵列检测器(日本岛津) ;SIL －20A自动进样器(日本岛
津) ;KQ400超声提取器(江苏昆山) ;AE400 电子天平(瑞士
梅特勒) ;AB －8型大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂)。
花旗松对照品(由本实验室自制，批号:20101207) ，芦丁
对照品(购自中国药品生物制品检定所，批号:100080．
200707) ，水为超纯水，其余试剂均为色谱纯;马尾松样品采
自余杭瓶窑，经杭州市药检所鉴定为马尾松 Pinus massoni-
ana Lamb．的针叶，阴干密封保存。
1． 2 色谱条件
Agilent C18分析柱(4． 6mm × 250mm，5μm)。流动相体
系为甲醇(A)－ 1%冰醋酸溶液(B)。梯度洗脱程序:0→
13． 5min，23%A;13． 5→15min，23% A→36% A;15→25min，
36%A;25→33min，36%A→100% A;33→37． 5min，100% A;
37． 5→42． 5min，100% A→23% A;50min，23% A。检测波
长:花旗松素为 290nm，芦丁为 359nm，柱温:30℃，流速:
1. 000mL /min。进样量 20μL。
1． 3 对照品溶液的制备
分别精密称取花旗松素与芦丁对照品适量，置于 50
mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，配制得花旗松素与芦丁
浓度分别为 40． 0、50． 0 mg /L 的对照品储备溶液。分别精
密吸取花旗松素与芦丁对照品储备溶液各 5． 0 mL 与 2． 5
mL，置于同一 10 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得
花旗松素与芦丁质量浓度分别为 20． 0 和 25． 0 mg /L 的混
合对照品溶液。
1． 4 供试品溶液的制备
精密称取干燥松针 5． 0 g，加 70 %乙醇 100 mL，称重，
浸泡 1 h，超声提取 30 min，放冷，称重，加 70%乙醇补足减
失重量，过滤，精密吸取续滤液 20． 0 mL，水浴蒸干，残渣加
10 mL 80℃热水溶解，制备成生药含量为 0． 1 g /mL的马尾
松针上样液。
将上样液以 2． 0 mL /min的流速上样，通过经预处理的
AB － 8 大孔树脂柱(2cm × 10cm) ，以水 20mL 洗脱，弃去水
液;继用 95%乙醇 40 mL 洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，用
甲醇溶解并转移至 2 mL量筒中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，
作为药材供试品溶液。
取滴丸制剂 50 粒，研碎，取 2． 5g，精密称定，置 10 mL
容量瓶中，加甲醇 8 mL，超声 20 min，放冷，加甲醇至刻度，
摇匀，即得制剂供试品溶液。
2 结 果
2． 1 线性范围与定量限确定
将混合对照品溶液经梯度稀释，得到系列对照品混合
液，分别取 20μL进样，按照 1． 2 项下色谱条件测定，以各组
分峰面积 A对相应的质量浓度 C 回归制备标准曲线，分别
得到花旗松素的线性方程为:Y = 3710． 30X + 272． 44(r2 =
0. 9999) ;芦丁的线性方程为:Y = 4771． 70X － 398． 18(r2 =
0. 9999)。结果表明，进样浓度为 0． 040 ～ 0． 320mg /L时，花旗
松素的峰面积与进样浓度呈良好线性关系;进样浓度为 0． 050
～0． 50mg /L时，芦丁的峰面积与进样浓度呈良好线性关系。
2． 2 精密度试验
配制 2 种组分高、中、低 3 个浓度的对照品溶液，其中
花旗松素的质量浓度分别为 8． 0、20． 0、40． 0mg /L;芦丁的
质量浓度分别为 10． 0、25． 0、50． 0mg /L。上述各溶液重复
进样 5 次，进行含量测定及日内精密度(以相对标准偏差
(RSD )计)测定;每种溶液连续 3 天配制测定，计算日间精
密度。结果表明，各组分高中低 3 种浓度溶液的日内精密
度均小于 1． 5%，日间精密度均小于 2． 0%。
2． 3 溶液的稳定性试验
取样品溶液，室温放置，分别于放置 0、2、4、6、8、12、
24h取样 20μL，按“2”项所述色谱条件进行测定。结果表
明，室温下花旗松素与芦丁峰面积的 RSD分别为 2． 34 %，
1． 20 %，表明 2 种组分在 24 h内有较好的稳定性。
2． 4 重复性实验
称取松针 5g，共 6 份，按 1． 4 项方法制备样品溶液，按
1． 2 项所述色谱条件进样测定，计算含量，花旗松素与芦丁
的平均含量为 0． 00156 mg /g，0． 021 mg /g;RSD分别为 1． 82
%，0． 53%。表明本方法重复性良好。
2． 5 回收率试验
取已知花旗松素和芦丁含量的样品 9 份，按照高、中、
低比例，分别精密加入一定量的花旗松素和芦丁对照品溶
液，按照供试液的制备方法制备样品溶液，精密吸取 20μL，
按 1． 2 项下色谱条件测定。结果花旗松素平均回收率为
100． 14%，RSD 为 1． 01%;芦丁平均回收率为 100． 37%，
RSD为 1． 11%。
2． 6 样品测定
3批松针样品，每批取样 5 份，按 1． 4 项方法制备样品
溶液，按 1． 2 项所述色谱条件进样测定，色谱图见图 1、图
2，计算含量，结果见表 1。
图 1 两种检测波长下混合对照品溶液的色谱图
图 2 两种检测波长下供试品溶液的色谱图
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表 1 样品含量测定结果(n = 5)
样品批号
花旗松素测
定值(mg /g)
RSD
(%)
芦丁测定值
(mg /g)
RSD
(%)
110421 0． 002101 1． 21 0． 01562 0． 68
110304 0． 002518 1． 36 0． 01681 0． 91
110325 0． 002812 0． 99 0． 01542 1． 03
滴丸 1 0． 05216 1． 15 0． 1995 0． 94
3 讨 论
3． 1 样品溶液制备方法的优化
花旗松素作为一种具有多种生理活性的二氢黄酮醇类
化合物［11］，除了电化学方法外［12］，文献报道采用高效液相
色谱法，以甲醇 －醋酸 －水等度洗脱进行含量测定［13］。芦
丁作为总黄酮测定的指标成分，在传统的比色法基础上，建
立了高效液相含量测定方法［14］。根据两种成分的溶解性，
曾试验采用水、甲醇及不同比例的甲醇溶液进行提取，70%
甲醇溶液能够有效提取成分，但直接进样基线不平整，杂质
较多，同时由于两种成分在样品中的含量不占显著优势，导
致杂质成分干扰，试验结果表明有必要增加纯化程序对检
查指标进行纯化和富集。根据文献报道［15］，本文选择用
70 %甲醇溶液作为溶剂，采用超声提取，提取液浓缩，残渣
加热水溶解作为样品提取方法。在此基础上，采用大孔树
脂纯化方法，对提取液进行分离纯化。首先对大孔树脂类
型进行选择，确定以 AB － 8 型大孔树脂为载体;进而对上
样液浓度，上样速度，药材 －树脂比与树脂柱径 －高比，以
及洗脱液浓度与体积的比较，进行全面考察，优化提取纯化
工艺，最终确定 1． 4 项下的方法为优化的样品溶液制备方
法。
3． 2 检测波长的选择
以甲醇为空白，取花旗松素及芦丁对照品储备溶液，在
200 ～ 400 nm范围内扫描，结果见图 1。花旗松素最大吸收
波长为 290 nm，芦丁的最大吸收波长分别为 257 和 359
nm，由于两种成分的最大吸收波长相差较大，经试验，在 3
种检测波长下均无法得到灵敏度高、分离良好且无干扰的
色谱图，检测波长越短，基线漂移及干扰越严重，故采用双
波长检测模式进行检测。以 290 nm为检测波长，花旗松素
检测灵敏度、分离度满足定量分析要求;以 359 nm 为检测
波长，芦丁成分能够完全分离，灵敏度高。
3． 3 流动相的选择
以花旗松素及芦丁为单一指标的含量测定方法均为等
度洗脱方式，经过试验，分别以乙腈 －磷酸 －水、甲醇 －磷
酸 －水等为流动相进行分析，甲醇 － 1 %冰醋酸作为流动
相，分离效果及稳定性较好，最终确定其为流动相并建立了
梯度洗脱程序。在本文确定的色谱条件下，2 组分之间以
及与其他未知组分之间得到了很好的分离，以花旗松素计，
柱效不低于 3000。
本文应用 HPLC － DAD法建立了同时测定马尾松针中
指标成分:花旗松素与芦丁 2 种组分含量的方法，并进行了
方法学验证。采用 70%甲醇提取，通过 AB － 8 大孔树脂分
离纯化的方法制备样品溶液。本文方法简便、快速、灵敏度
高、重现性好，可用于马尾松针药材及其制剂的质量控制。
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檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿
－ 164．
年轻时智商低中年时腰围大
瑞典最新研究表明，体重增加与智商低相关联。
调查发现，在 18 岁左右智商低的人，到 40 岁左右时，
比当年在智商测试人得分高的人要有较大的腰围。众所周
知，如果是“苹果型”(两头小中间大)的体型，要比“梨型”
(匀称)的体型，体重一定更重，从而有更高的心脏病的风
险。
这项研究结果在最新举行的美国心脏协会年度会议上
公布。瑞典乌普萨拉大学的临床研究中心的耶莱珀特教授，
他也是这项研究的作者，他说:“信息是明确的，目前的战略，
就应该阻止肥胖，这对那些低智商的人来讲尤其重要。”
33400 人参加了健康调查，在他们 40 岁或者 50 岁生日
时，测量腰臀尺寸，约有 5400 人在 18 岁左右时也进行了智
商测试。青少年时智商较低者到 40 岁时腰臀比例也较高，
相反，智商测试时得分高的人 40 岁时腰围也较低。
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