全 文 ：文章编号:　1001-4675(2004)01-0090-03
巴旦杏仁对小白鼠 PCE抗诱变活性的探讨
多力坤·买买提玉素甫1 , 　阿不都拉.阿巴斯1 , 　门　进1 ,
赵晓琴1 , 　孜比布拉2 , 　库尔班·马木提2
(1 新疆大学生命科学与技术学院 ,乌鲁木齐　830046;2 新疆大学环境资源信息科学学院 ,乌鲁木齐　830046)
摘　要:应用小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核检测试验 ,以探讨巴旦杏仁抗突变作用 。结果表明 , 巴旦杏仁对两
种阳性对照组分别诱发的较高微核率有明显降低作用 , 差异均为非常显著(P<0.001)。说明 , 巴旦杏仁抗突变 , 保
护染色体损伤 ,有促进 DNA修复作用 。此项研究在抗突变性食物的开发和医疗保健中具有重要实际意义。
关键词:巴旦杏仁;抗诱变活性;小鼠;微核
中图分类号:Q41　　文献标识码:A
　　目前 ,在临床使用的大量药物中 ,有些虽然治疗
(癌症)效果不错 ,但其潜在的遗传危害亦大 ,如环磷
酰胺有较强诱变活性 ,因此 ,人们把该药作为检测工
作的阳性对照组 。
巴旦杏(Amygdalus communis)又称扁桃 , 蔷
薇科桃属植物 ,我国仅在新疆喀什 、和田等地有载
培〔1 ～ 4〕。巴旦木的果实称巴旦杏 ,是驰名世界的干
果 ,味道香美 ,营养丰富。新疆维吾尔民族普遍将巴
旦杏做为营养滋补品 ,也是一种维吾尔药物 ,具有补
脑安神 ,益肾生精 ,润肠通便 ,明目 、健胃的药用功
能〔5〕 。维吾尔医常将巴旦杏与其他药材配伍 ,用于
高血压 、神经衰弱 、咳喘及消化不良等多种疾病的治
疗。国外有将巴旦杏作病餐 ,配合治疗糖尿病 、胃病
等〔3〕 。近年来研究表明 ,巴旦杏对小鼠体液免疫有
显著影响 ,具有促进 T 细胞成熟作用 ,并能对抗免
疫抑制剂环磷酰胺(cyclophosphamide)即 CP 引起的
免疫功能下降起作用 。根据初步研究 ,巴旦杏仁还
有促进 DNA 损伤修复作用〔6〕 ,而且有抵抗其它物
质的诱变活性(如各种自由基:羟自由基 OH 、超氧
阴离子自由基 O2 、三氯甲烷自由基 CCI2 等)。但
是 ,国内外未见此方面的研究 ,亦无法作比较试验 。
1979年以来 ,在一些癌症治疗以及控制病情恶
化上 CP 和丝裂霉素(CM)两种药物的试用收到一
定效果 ,但这两种药物在破坏癌细胞的同时 ,也损伤
正常细胞分裂。为了促进前者抑制后者的发生或减
少损伤 ,有必要研究用自然食物来防治不必要的毒
性作用 。本文拟以巴旦杏仁为抑制剂 ,以微核为指
标 ,研究巴旦杏仁对 CP 和 CM 毒性的抑制作用。
微核试验是 Matter和 Schmid在 20 世纪 70年
代初首创的检测遗传损伤的方法 ,染色体经诱变物
诱发后的无着丝点片断 ,在分裂后期停滞而落后下
来 。当有着丝点染色体在分裂末期有规律地进入小
细胞形成主核时 ,落后的片断便游离于小细胞的细
胞浆内 ,形成一个或几个圆形或椭圆形的结构 ———
即微核 。这些相当于细胞直径的 1/20 ～ 1/5大小的
微核 ,在哺乳动物骨髓有核细胞和嗜多染红细胞中
出现的频率 ,以千分率(‰)表示 。如:正常小鼠骨髓
细胞微核率(MN)在 5‰以下 ,微核与主核成分均
为 DNA ,Giemsa 染色时 ,微核与主核呈兰紫色〔6〕。
微核测定法是近年来发展起来的研究遗传毒理学方
法之一 ,该方法简便 ,鉴别客观 ,易于掌握 ,不需要特
殊的仪器和药品 ,因此被广泛应用。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　动物　成年昆明种小白鼠 ,体重为 18 ～ 22
g 。新疆流行病防治研究所提供 ,同批体重差异不超
过 2 g ,雌雄数各一半。
1.1.2　主要药品与试剂　环磷酰胺(CP)和丝裂霉
素(CM)是新疆结核病医院药房供给 ,由上海生物制
品厂生产 ,两者均为医用针剂。
小牛血清:将灭菌后的小牛血清 ,放入 56 ℃恒
温小浴中灭活 30 min ,然后冰箱保存。分装的小牛
血清购自新疆畜牧研究所。其它试剂均为分析纯市
售品。
第 21卷　第 1期
2004年 3月 　　　　　　　　　　　　　　　　
干 旱 区 研 究
ARID　ZONE　RESEARCH　　　　　　　　　　　　　　　　
Vol.21　No.1
Mar.　2004
收稿日期:2003-06-03;　修订日期:2003-09-03
作者简介:多里坤·买买提玉素甫(1960-),男,副教授 ,研究方向:遗传毒理学.E-mail:abdulla@mail.xj.cninfo.net
DOI :10.13866/j.azr.2004.01.020
1.2　方法
1.2.1　实验分组 　把昆明系小白鼠 ,随机分成 6
组 ,每组 4只。第 1组为正常对照组 。每次每只动
物给 0.9%生理盐水 0.5 mL ,共给 6次 ,每次间隔
24 h;第 2 组为巴旦杏仁对照组(以巴旦杏仁粉剂
0.4 g为标准),同样给 6次 0.5 mL 生理盐水+0.4
g 标准灌胃 ,间隔 24 h;第 3组和第 4组为阳性对照
组。第 3组 ,每次每只动物给环磷酰胺 145 mg/kg ,
共给两次 ,间隔 48 h;第 4组 ,每次每只动物给丝裂
霉素 100 mg/kg 。共给 2 次 ,间隔 48 h 。第 5 实验
组为 CP 145 mg/kg+0.4 g 标准共给 2次 ,间隔 48
h。第 6实验组为 CM 100 mg/kg +0.4 g 标准 ,共
给 2次 ,间隔 48 h ,以上 3种药均为腹腔注射 ,巴旦
杏仁灌胃 。末次给药后 6 h取样 。
1.2.2　取材与制片　经上述处理后的小鼠断掉 ,处
死 ,剥离下肢 ,取两根股骨 ,用纱布擦干净肌肉和血
污 ,剪掉股骨 ,用 6 号针头插入骨髓腔 ,以 1 mL 生
理盐水冲洗于刻度离心管中 ,在打碎细胞团后 ,以
2 000 r/min离心 3 ～ 5 min ,弃上清液。在沉渣中滴
入灭活小牛血清 2滴 ,用滴管轻轻打匀 ,用血常规涂
片法制片 ,自然干燥 。
1.2.3　固定与染色　自然干燥后的骨髓涂片 ,用分
析纯甲醇固定 10 min ,凉干后用 Giemsa应用液染色
10 ～ 15 min(缓冲液 pH =6.9),然后用相同的磷酸
缓冲液冲洗分析 ,滤纸吸干 ,经二甲苯后用光学树胶
进行封片 。
1.2.4　观察计数　低倍镜粗检后 ,转油镜观察计
数。以出现微核的细胞为统计单位 ,一个细胞中出
现一个或一个以上的微核均计数为一个 。每只小鼠
计有核细胞和嗜多染红细胞各 1 000 ～ 2 000个。出
现微核的细胞数以千分率表示。将测得的实验组 、
正常对照组 、阳性对照组的微核千分率分别进行比
较。用 t测验检查其显著性 。
表 1　对小白鼠不同处理的微核率
Tab.1　The micro-nuclear rate of mice under
the different treatments
组别 实验天数 动物数
微 核率(‰)
有核细胞
X±SD
嗜多染红细胞
X±SD
正常对照组 6 2 4.06±4.5 2.58±0.41
巴旦杏对照组 6 4 3.08±3.6 2.06±3.2
环磷酰胺阳性对照组 3 4 18.33±2.98 30.36±3.81
丝裂霉素阳性对照组 3 4 10.23±5.19 15.06±2.23
C P+巴旦杏实验组 3 4 2.29±0.65 2.25±0.01
CM+巴旦杏实验组 3 4 3.25±0.67 4.12±0.35
2　结果和讨论
(1)正常小鼠骨髓有核细胞微核千分率为 4.06
±4.5 ,嗜多染红细胞微核千分率为 2.58±0.41(表
1),与国内报道一致。
(2)经环磷酰胺处理过的小鼠 ,有核细胞微核千
分率为 18.33±2.89 ,嗜多红细胞微核率为 30.36±
3.81。说明同一条件下 ,嗜多染红细胞微核出现的
频率高于有核细胞 ,嗜多染红细胞系统敏感于有核
系统。
(3)经丝裂霉素处理过的小鼠 ,有核细胞微核率
为 10.23±5.19 ,嗜多染红细胞的微核率为 15.06±
2.23。说明同一件条件下 ,嗜多染红细胞核出现的
频率也高于有核细胞 ,嗜多染细胞系统敏感于有核
系统。
(4)环磷酰胺和丝裂霉素同样有核细胞微核率
和嗜多染红细胞微核率 ,分别与正常组比较 P <
0.01 ,差异非常显著 。进一步证明 CP 和 CM 是阳
性诱变剂。
(5)经巴旦杏仁连续 6次处理 ,间隔 24 h ,其有
核细胞微核率 3.08±3.6 ,嗜多染红细胞微核率为
2.06±3.2 ,国内未见报道。
(6)经 CP 和巴旦杏仁两次处理 ,间隔 48 h ,其
有核细胞微核率为 2.29±0.65 ,嗜多染红细胞微核
率为 2.25±0.01 ,分别与阳性对照组比较差异非常
显著(P <0.01)。
(7)经 CM 和巴旦杏仁两次处理 ,间隔 48 h ,其
有核细胞微核率为 3.25±0.67 ,嗜多染红细胞微核
率为4.12±0.35 ,分别与阳性对照组比较 P<0.01 ,
差异非常显著。
从上述结果可以看出 ,巴旦杏具有很强的抗氧
化延缓衰老的作用 。染色体是细胞正常分裂和遗传
表达的基础 ,染色体结构变异导致细胞异常分裂和
遗传表达的失控 。当染色体遇到氧化性损伤时
DNA发生突变 ,从而产生很多的疾病 。本实验结果
表明 ,它是一种有效的抗突变物质。抗突变作用的
机理可能涉及多方面 ,这种作用可能与酶和非酶系
统的清除自由基 、抗氧化作用及与致突变物质的直
接作用有关 。而且它的抗氧化作用与其营养成分有
牵连 。据实验报告(刘金荣等〔7〕 , 2002)巴旦杏仁中
蛋白质含量丰富 ,除色氨酸外 ,氨基酸种类齐全 ,必
须氨基酸含量高达 5.43%。巴旦杏仁的脂肪含量
也较丰富 ,脂肪中不饱和脂肪酸含量占总脂肪酸的
85%,是保健油的优质原料(张庆会〔8 ,9〕 ,2002)。巴
911 期　　　　　　　　　　多力坤·买买提玉素甫等:巴旦杏仁对小白鼠 PCE抗诱变活性的探讨　　　　　　　　　　
旦杏仁中有较高含量的维生素 E(VE),它是一种有
效的自由基清除剂 ,能有效地防止油的氧化 ,食用后
还可阻止动物体所产生的自由基。同时 ,他们认为
巴旦杏仁中含丰富的矿物元素 ,常量元素钾含量最
高 ,比高钾食物高出很多 ,其与高血压病有关 ,过多
摄入钠盐会损耗体钾的储存 ,导致钠钾比例失调 ,
从而影响血压值 。巴旦杏仁中还有一定比例的 Ca 、
Na 、Mg 、Fe 、Mn 、Zn 、Cu等微量元素。巴旦杏仁中的
微量元素 Zn的含量颇高 ,Zn在长寿与维持视觉方
面具有特殊功能 ,新疆南部长寿人血液中 Zn 含量
高于其他非长寿人。另外 ,巴旦杏仁的明目作用可
能与 Zn有关 。总之 ,巴旦杏仁作为一种珍贵的保
健营养资源 ,值得深入开发利用研究。
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Amygdalus communis Reducing the Rate of Micro-nucleus Induced by
Cyclophosphamide and Mitomycin in the Red Blood Cells of Mice
Dolikun M.1 , 　Abdulla A.1 , 　MEN Jin1 , 　ZHAO Xiao-qin1 , 　Zibibula2 , 　Kueban M.2
(1 College of Life Science and Technology , X injiang University , Urumqi 830046 , China;
2 College of Environment and Resources In formation Sciences , X injiang University , Urumqi 830046 , China)
Abstract:　Along with the rapid agricultural and industrial development in recent years , environmental pollu-
tion becomes mo re and more serious , the problem that whether the physiochemical factors under the polluted en-
vironment are harmful or not to people s health , especially to the potential heredity , is extensively paid at tent ion
to.This paper explores the mutation-resistance action of Amygdalus communis by the detection test of the rate
of micro-nucleus in PCE.The results show that the Amygdalus communis has an obvious effect of reducing the
high rate of micro-nucleus induced by ei ther Cyclophosphamede or mitomycin w ith the ex tremely obvious differ-
ence (P <0.01).Which reveals that the Amygdalus communis has the functions of resistance to the mutat ion
and of protecting the chromosomes against harm as well as of promot ing the DNA repair.The study is of pract i-
cal significance in the development of the mutation-resistance food and the health protection.
Key words:　mice;micro-nuclear;Amygdalus communis;anti-mutation effect.
92　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　干　旱　区　研　究　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　21 卷