全 文 ：第 17卷第 1期第 21页
2009年 2月 　　　　　　　
中国中西医结合消化杂志
Chin J Integ r T rad West Med Dig
　　　　　　　Vol.17 No.1 P.21
Feb.2009
收稿日期:2008-07-18
基金项目:湖南省科技厅重点课题(04SK1007-10)
作者简介:蔡　莹(1982-),女 ,湖南长沙人 ,医学硕士 ,助教 ,主要从事消化系统疾病研究
通讯作者:蔡光先 , E-mail:Chaerin 2004@163.com
文章编号:1671-038X(2009)01-0021-04
生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠推动
及其机制研究
蔡　莹1 , 　刘柏炎2 , 　蔡光先3
(1湖南中医药大学基础医学院 医史文献教研室 ,湖南 长沙 410007;2 湖南中医药大学
中医内科实验室 ,湖南 长沙 410007;3 湖南中医药大学 中医内科实验室 ,湖南 长沙 410007)
　　摘要:[ 目的] 探讨生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠推动的影响及其作用机制。[ 方法] 选用雄性昆明种小鼠 ,
随机分为正常(A)组 、模型(B)组 、生晒参传统饮片(C)组 、生晒参超微饮片全剂量(D)组及生晒参超微饮片 1/ 2 剂
量(E)组 , 采用利血平法制备脾虚动物模型 , 分别给予 0.85%氯化钠 、生晒参传统饮片及生晒参超微饮片 , 观察各
组体重变化及对脾虚小鼠小肠推动率的影响 ,运用 RT-PCR方法观察用药后各组钙调蛋白(CAM)mRNA 表达水
平。[ 结果]造模小鼠均出现小肠推动率加快 ,各治疗组均不同程度改善脾虚小鼠小肠运动功能 。其中 C、D、E 组
与 B组比较差异均有统计学意义(P<0.05);C 、D、E 组之间差异均无统计学意义。 A 组小鼠小肠有一定水平的
CAM 表达 ,造模后 CAM mRNA 表达增高;C 、D、E 组 CAM mRNA 表达下降 ,其中C 、D 组与 B组比较以及 C 、D 组
间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。[结论] 生晒参超微饮片通过影响 CAM mRNA 表达水平 , 调节脾虚小鼠
小肠运动 ,对小肠功能紊乱有调节作用;且对 CAM mRNA 表达水平的调节作用优于生晒参传统饮片。
　　关键词:脾虚;　生晒参;　超微饮片;　小肠推动;　半定量逆转录多聚酶链反应;　钙调蛋白 mRNA
　　中图分类号:R 256.39;　R 282.21　　　文献标志码:A
Effect and action mechanism of dry Radix ginseng ultramicro-
decoction pieces on the small intestine motility in mice with
spleen difficiency syndrome
CAI Y ing1 ,LIU Bai-yan2 ,CAI Guang-x ian3
(1 School of preclinicel M edicine , Hunan Unive rsity o f Chine se Medicine ,ChangSha 410007 ,
China;2 Laboratory of Chinese Inte rnal M edicine , Hunan University of Chinese
M edicine ,Changsha 410007 ,China;3 Labo rato ry of Chinese Internal Medicine ,
Hunan Universi ty of Chinese M edicine ,Changsha 410007 ,China)
　　Abstract:[Objective] To approach the ef fect and mechanism of dry Radix g inseng ult ramicro
decoction pieces on the small intestine mo tili ty in mice wi th spleen dif ficiency syndrome.[Meth-
ods] T he maleness Kunming Mice w ere divided into 5 groups :no rmal g roup(A), blank group(B),
dry Radix g inseng herbal medicine g roup(C), dry Radix ginseng ult ramicro decoction piece s no r-
mal do se g roup(D)and dry Radix ginseng ult ramicro-decoction pieces 1/2 dose g roup(E), which
w as given isotonic Na chloride ,dry Radix g inseng ult ramicro f ilte r , and dry Radix ginseng decoc-
tion respectively.Spleen dif ficiency mice model w as duplicated by reserpine.The change of BM
and the ef fect of dif ferent do sage form of dry Radix ginseng in small intestine mo tility in mice
wi th spleen dif ficiency syndrome w as observed.The CAM mRNA was detected by RT-PCR.[ Re-
sults] In the model group , intest ine moti li ty markedly accelerated.The intestine moti li ty of g roup
C , group D and group E decreased compared wi th g roup B(P <0.05), but the intestine mot ility
had no signi ficant dif ference be tw een the three treatment g roup.The mRNA expression of CAM
in group A increased .The CAM expression of the three t reatment group w as declined.Com-
pared w ith g roup B , the CAM expression o f group C and group D had signi ficant dif ference(P<
0.05).[ Conclusion ] Through affect ing express level of CAM mRNA , dry Radix ginseng ult ram i-
cro-decoction pieces can regulate intestinal mo tility to adjust intest ine functional diso rder.The
adjusting action on CAMmRNA of dry Radix g insihog ult ramicro decoction pieces outw eigh i ts
herbal medicine.
　　Key words:Spleen di fficiency , dry radix ginseng ;ult ramicro-decoction piece;mucous mem-
brane of small intestine;PT-PCR;CAM mRNA
　　脾虚证是中医常见证型 ,可见于消化系统多种
疾病 ,现代研究表明 ,中医的脾本质是以消化系统为
主的多系统功能综合单位 ,脾虚主要表现在小肠功
能的改变[ 1] 。小肠既是药物吸收的主要场所 ,又是
脾虚证主要病变部位 ,生晒参具有益气健脾之功效 ,
且健脾作用通过推动小肠平滑肌运动 ,促进小肠上
皮细胞吸收来实现。笔者研究在建立脾虚模型的基
础上 ,通过观察生晒参不同剂型饮片对脾虚小鼠小
肠推进功能及平滑肌钙调蛋白(CAM)mRNA 表达
水平 ,探讨小肠平滑肌运动机制。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　动物　健康雄性昆明种小鼠 ,清洁级 ,体重
(20±2)g ,由湖南中医药大学实验动物中心提供 ,
合格证号:医动字号 20-002。
1.1.2　药物　生晒参道地药材 ,由湖南省中药超微
工程技术中心检测合格后 ,按有关工艺分别加工为
超微和传统饮片 。传统饮片第 1次煎加水 500 ml ,
煎汁 150 m l ,第 2次煎加水 300 ml ,煎汁 150 m l ,两
煎混合;超微饮片先以 60℃水 1 000 m l搅拌 ,静止
10 min ,过滤取上清液 ,再加水 1 000 ml ,如前取上
清液 ,2次液混合 。将传统饮片及超微滤液浓缩成
每 1 ml含生药 1 g ,冷藏备用 。
1.1.3　试剂　利血平注射液 ,广东邦民有限公司产
品(批号:040620 ,规格:1 m l/mg);阿拉伯胶 , 活性
碳粉 ,购于长沙化学试剂公司;碳末混悬液制备 ,由
10%阿拉伯胶和 5%活性碳粉组成 , Trizo l , Invit ro-
gen公司产;MMLV PCR一步法扩增试剂盒 ,合成
引物 ,β-actin均购于上海生工生物技术有限公司;
DNA M arker购于晶美生物技术公司 。
1.1.4　主要仪器与设备 　GB204 电子天平(瑞士
梅特勒), 台式高速冷冻离心机(美国 BECKMAM
公司),AF-100制冰机(意大利 SCOTMAN 公司),
基因扩增仪(杭州大和热磁), DYY-Ⅲ33型电泳槽
(北京市六一仪器厂), 紫外线分光光度计(美国
UVP 公司)。
1.2　实验方法
1.2.1　动物分组与造模　将小鼠 50只随机分为 5
组 ,各 10只 ,分别为正常(A)组 、模型(B)组 、生晒参
传统饮片(C)组 、生晒参超微饮片全剂量(D)组及生
晒参超微饮片 1/2剂量(E)组 。除 A 组外 ,余 4组
采用利血平法制备脾虚动物模型[ 2] ,即皮下注射利
血平 0.25 mg/ml ,共 14 d。
1.2.2　给药方法　造模成功后 , B 组予 0.85%氯
化钠 20 ml/(kg ·d),C 、D组分别予生晒参传统饮
片 、生晒参超微饮片全剂量(含生晒参生药 2.5 g/
kg ,按成人 70 kg 体重每次服用 10 g 折算 2倍含量
给药), E 组予生晒参超微饮片 1/2 剂量(含生药
1.25 g/kg ,均灌胃给药 ,连续 12 d。
1.2.3　观察指标与方法
1.2.3.1　一般状况:观察小鼠反应 、体毛 、活动 、粪
便等情况 ,重点观察体重的变化 。
1.2.3.2　小肠碳末推进率[ 3] :将 10%阿拉伯胶加
热至澄清后加入 5%碳末 ,搅匀定容 ,待用 。各组小
鼠禁食不禁水 18 h 后 ,以 0.2 m l/20 g 体重加相同
体积的药物(用药组加生晒参汤剂及超微生晒参饮
片 ,A 、B组加 0.85%氯化钠)灌胃 ,给药后 30 min ,
脱颈处死打开腹腔分离肠系膜 ,剪取上端至幽门 ,下
端至回盲部的肠管 。取出的小肠平铺于米尺上测量
肠管的总长度及从幽门端到碳末前沿的距离 ,作为
“墨汁”在肠内推进距离 ,用碳末在肠内推进的距离
比小肠的总长度即为小肠的碳末推进率。
1.2.3.3　CAM mRNA 表达水平:采用 RT-PCR
方法[ 4]检测。用药 12 d后处死动物 ,快速取小肠组
织 , -70℃保存 。以 T rizol 试剂提取总 RNA , 用
MMLV PCR一步法扩增试剂盒分别对 CAM 进行
PCR扩增。引物序列为:CAM(244bp)上游引物:
5′-ACGGGGATGGGACAA TAACAA′,下游引物:
·22· 中国中西医结合消化杂志　2009年 2月第 17卷第 1期
5′-TGCTGCACTAA TA TAGCCA TTGC-3′。取扩
增产物 6μl 进行琼脂糖凝胶电泳 ,紫外灯下观察 ,
电脑照相储存 ,行吸光度容积半定量分析 ,内标 B-
actin为参比对照。
1.3　统计学处理方法
采用 SPSS11.5软件进行处理 ,数据以 x ±s表
示 ,多个样本间均数比较用方差分析。
2　结果
2.1　各组小鼠一般状况比较
A组小鼠皮毛光泽色白 ,活跃 ,饮食正常 ,体重
增长;B组小鼠于第 3 、4天出现腹泻 ,多为便溏 ,肛
周污秽 ,第 5天出现饮食减少 ,第 6 、7天出现明显的
成群蜷卧 、嗜睡 、反应迟钝 、活动减少等 ,同时皮毛失
去正常光泽 ,并有毛发疏散 、竖立的情况。到第 8 、9
天多数动物体重明显减轻 。C 、D 、E 组经过治疗后
上述症状和体征逐渐消失 ,基本恢复正常。
2.2　各组小鼠治疗前后体重变化比较
结果见表 1。
表 1　各组治疗前 、后体重变化比较
g , x ±s
组别 n 造模前 治疗前 治疗后
B组 10 19.93±2.24 17.18±1.722) 17.43±1.54
C组 10 20.97±2.09 18.32±1.812) 18.72±1.66
D组 10 20.53±2.20 17.88±2.052) 19.07±1.712)4)5)
E组 10 21.32±2.41 18.72±2.002) 19.06±1.59
A组 10 20.86±2.05 27.51±2.10 28.82±2.12
　　与 A 组比较2)P<0.01;与 B组比较4)P<0.01;与 C组比较5)P
<0.05
2.3　各组小鼠治疗后小肠碳末推进率及 CAM mRNA水
平的比较
　　结果见表 2 ,图 1。
表 2 　各组小鼠治疗后小肠碳末推进率及
CAM mRNA 水平的比较 x ±s
组别 n 小肠碳末推进率/ cm CAM mRNA 水平
B组 10 84.14±8.10 1.41±0.70
C 组 10 69.94±12.513) 1.24±0.403)
D 组 10 67.32±7.303) 1.06±0.154)
E组 10 69.78±16.813) 1.22±0.443)
A 组 10 64.72±4.333) 1.15±0.113)
　　与 B 组比较3)P<0.05 , 4)P<0.01
图 1　各组小鼠小肠 CAM mRNA 表达的比较
3　讨论
脾虚 ,既为脾胃功能不足 、升降出入功能失调 ,
治疗此证应以运化水谷 、健脾益气 、升发脾阳为主要
原则。药效学研究以运化水谷 、健脾益气为主 ,笔者
实验研究选取了目前较为常用的反应胃肠道机械动
力的指标 ,即小肠推进运动实验来观察生晒参不同
剂型的药理作用。肠道推进性运动是胃肠平滑肌在
神经 、体液因素调节下电活动 、机械活动协调的结
果 ,因此检测肠道推进性运动可以准确反映胃肠动
力状态[ 5] 。首都医科大学生理学教研室[ 6] 对实验性
脾虚证的上消化道动力学的研究表明 ,胃 、十二指
肠 、空肠运动振幅皆增强 ,频率加快 ,其中对十二指
肠的体外实验证实 ,运动频率仍是加快的 。金若敏
等[ 7] 在中药逍遥片改善正常或脾虚小鼠肠运动相关
功能的研究 ,显示逍遥片能明显促进正常小鼠的小
肠运动 ,又能对抗脾虚小鼠小肠运动的亢进 ,表现该
药能调节胃肠功能紊乱 。笔者实验观察了生晒参不
同剂型对利血平所致脾虚小鼠小肠推动的影响 ,结
果显示:利血平复制的脾虚小鼠小肠推动加快 ,超微
生晒参全剂量饮片可明显拮抗利血平所致脾虚小鼠
推进功能增强 ,对脾虚小鼠出现的便溏 、腹泻 、畏寒
有预防和治疗作用 ,表明该剂型能调节肠道功能紊
乱 。
由于胃肠道运动的基础是胃肠道平滑肌细胞的
收缩 ,平滑肌细胞的收缩和舒张是由其内部的收缩
蛋白质体系来实现 ,因为研究不同胃肠道运动状态
下蛋白质的变化将有利于从分子水平阐明胃肠道运
动功能紊乱机制。平滑肌的收缩成分指粗肌丝和细
肌丝[ 8] ,粗肌丝由肌凝蛋白组成 ,细肌丝由肌动蛋白
和调节蛋白质组成。CAM 是平滑肌中具调节功能
的一种蛋白质分子 ,参与了平滑肌细胞收缩的自身
调控 ,具有结合 Ca2+的能力。1分子肌钙蛋白结合
4个 Ca2+后可激活细胞内肌凝蛋白轻链激酶(ML-
CK),MLCK 使调节性轻链磷酸化 ,是触发平滑肌
收缩的关键一步。由此可见 Ca2+及其受体蛋白
CAM 在平滑肌收缩活动中起了关键性作用 ,它最
终触发平滑肌细胞内的肌球蛋白而致肌收缩。修宗
·23·蔡　莹 ,等.生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠推动及其机制研究
昌等[ 9] 研究结果表明 ,脾虚时运化失职 ,空肠肌平滑
细胞内 Ca2+增加 ,CAM 活性增强 ,Ca2+-CAM 复合
物形成增多 ,MLCK 活性增强 ,促进了 MLC发生磷
酸化 ,以致空肠平滑肌细胞收缩 ,肠蠕动加快 ,吸收
不利 ,故出现大便溏薄 、消瘦 、倦怠等症状。笔者实
验研究发现B 组CAM mRNA水平较高 , C 、D 、E 组
CAM mRNA 水平下降 。
中药超微饮片是一种新型的中药饮片 ,它采用
超微粉体等先进技术将中药材超微细粉化 ,其微粉
粒径在 1 ～ 75μm ,能保持传统中药固有药效学物质
基础的粒度。细胞破壁率达 90%以上的中药超微
饮片 ,能大大提高中药成分的利用率 ,减少中药资源
的浪费[ 10] 。中医认为 ,人参味甘 、微苦 ,入脾 、肺 、心
经 ,有大补元气 ,补益脾肺 ,生津安神之功 ,为健脾益
气之要品 。前期研究[ 11] 发现人参大中小粒径超微
粉 Rg1含量均高于人参饮片 ,说明人参类药材经超
微粉碎后人参皂甙类成分的浸出明显优于其传统饮
片。笔者实验研究发现生晒参不同剂型饮片均能通
过影响 CAM mRNA 表达水平 ,调节脾虚小鼠小肠
运动 ,且生晒参超微饮片对 CAM mRNA 表达水平
的调节作用优于生晒参传统饮片。
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(上接第 20页)
脏血供进一步减少 ,呈现低灌注 、高阻力特点[ 8] 。
笔者研究表明:湿热内蕴型 、肝肾阴虚型肝硬化
患者肾动脉及分支的 RI、PI 明显增高 , Vmin 、
TAMX 明显低于对照组 ,而且肝肾阴虚型患者的肾
动脉的 RI 、PI以及 TAMX与肝郁脾虚型相比差异
有统计学意义。表明随着肝硬化病情的加重 ,证型
的变化 ,超声声像图特征亦不同 ,超声表现所反映的
肝硬化患者肾脏血流动力学演变也有一定的规律 。
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·24· 中国中西医结合消化杂志　2009年 2月第 17卷第 1期