全 文 ：论　著
水红花子中抗肝脏肿瘤有效成分的
提取工艺研究
丑　静 ,孟宪生 ,包永睿 ,郭小瑞
(辽宁中医药大学药学院 ,辽宁 大连 116600)
摘要:目的 筛选抗肝脏肿瘤药材水红花子的最佳提取工艺。方法 以花旗松素 、槲皮素含量和干膏收率为考察指标 , 先对提取溶媒进
行单因素考察 ,再采用正交设计进行优选 ,最终筛选出水红花子的最佳提取工艺。结果 水红花子中抗肝脏肿瘤有效成分最佳提取工
艺为用 6倍量 60%乙醇回流提取 3次 ,每次 2 h。结论 验证实验表明 ,筛选的水红花子最佳提取工艺稳定 、可行 ,本实验为充分利用
此药材提供了基础资料。
关键词:水红花子;花旗松素;槲皮素;提取工艺;正交设计
中图分类号:R284.2　　　　　　文献标志码:A　　　　　　　文章编号:1673-4610(2010)12-0012-03
基金项目:“重大新药创制” 科技重大专项 “十一五”计划(编号:2009ZX09103-354)
作者简介:丑　静 , 硕士研究生 , Tel:0411-87406496, E-mail:357075362@163.com
通讯作者:孟宪生 , 博士 , Tel:0411-87406496;E-mail:mxsvvv@126.com
StudyonExtractionMethodforEfectiveAnti-liverTumor
ComponentsinFructusPolygoniOrientalis
CHOUJing, MENGXian-sheng, BAOYong-rui, GUOXiao-rui
(ColegeofPharmacy, LiaoningUniversityofTraditionalChineseMedicine, Dalian, Liaoning116600, China)
Abstract:ObjectiveToselectthebestextractionmethodfortheefectiveanti-livertumorcomponentsinfructus
polygoniorientalis.MethodsThecontentoftexifolinandquercetinanddryextractyieldratewereusedasindex.The
singlefactorexamwasperformedontheextractionsolvent, andthentheorthogonaldesignmethodwasusedtooptimize
andselectthebestwaterextractionmethod.ResultsThebestextractionmethodforefectiveanti-livertumorcomponents
inFructusPolygoniOrientaliswasasfolow:6 timesof60% ethanolandextractedfor3 times, 2 heachtime.
ConclusionTheselectedmethodisstableandfeasible.Theexperimentprovidesbasisforthefurtheruseofthis
medicine.
Keywords:fructuspolygoniorientalis;taxfolin;quercetin;extractionprocess;orthogonaldesign
　　水红花子系蓼科植物红蓼 (Polygonumorientale
L.)的干燥成熟果实 ,具有散血消癥 、消积止痛 、利水消
肿的功能 ,主要用于癥瘕痞块 、瘿瘤 、食积不消 、胃脘胀
痛 、水肿腹水等症的治疗 [ 1] 。现代药理研究表明 ,该药
具有抗急性心肌缺血 ,扩张血管 ,降血压 ,抗菌和抗肿
瘤等广泛的药理活性[ 2] 。花旗松素和槲皮素为水红花
子的抗肝脏肿瘤的主要有效成分 。花旗松素具有重要
的生物学活性 ,能够抑制或激活多种酶 ,从而产生不同
的生理效应 。还具有抗病毒和抗肿瘤活性[ 3] 。槲皮素
具有非常广泛的生理活性 ,它具有抗炎 、抗氧化 、抗过
敏 、抗菌 、抗病毒 、抗癌等作用 ,槲皮素对恶性肿瘤生长
和转移的抑制作用是近年来一个十分活跃的研究课
题 [ 4] 。
本研究以乙醇作为溶剂 ,通过单因素考察提取溶
媒 ,以正交实验优选水红花子的提取工艺 ,以花旗松
素 、槲皮素含量以及干膏收率为指标 ,最终筛选出水红
12
PharmacyToday· 2010 12 Vol.20 No.12·
花子的最佳提取工艺 ,为水红花子的进一步研究奠定
生产基础 。
1　仪器与试剂
1.1　仪器
Agilent-1100高效液相色谱仪 , DAD检测器 ,自动
进样器(Agilent科技有限公司);HS6150型超声波清洗
器(天津恒奥科技发展有限公司);CP225D电子分析天
平(Sartorius)。
1.2　试药
花旗松素(供含量测定用 ,批号 A0082,购自成都
曼思特生物科技有限公司),槲皮素(供含量测定用 ,批
号 100081-200406,购自中国药品生物制品检定所),
甲醇 、磷酸(色谱纯 ,均购于天津市科密欧化学试剂开
发中心),水为去离子水;其它试剂均为分析纯。水红
花子样品购于大连市保健大药房 ,经辽宁中医药大学
翟延君教授鉴定为正品 。
2　测定方法
2.1　HPLC法测定花旗松素与槲皮素含量
2.1.1　色谱条件 [ 5] 　色谱柱:AgilentTC-C18色谱柱
(4.6 mm×250mm, 5μm);流动相:1%磷酸水 (A)-
甲醇 (B),二元线性梯度洗脱 0 ～ 20min:25%B※35%
B、检测波长 290 nm;20 ～ 35 min:35%B※60%B、检测
波长 371nm;流速 1 ml/min;柱温:25℃;进样量 10μl。
2.1.2　供试品制备　(1)对照品溶液的制备:取适量
花旗松素和槲皮素对照品 ,精密称定 ,加甲醇制成花旗
松素和槲皮素浓度分别为 0.147 96 mg/ml, 0.059 52
mg/ml的混合对照品溶液 , 过 0.45 μm微孔滤膜 ,即
得。 (2)样品溶液的制备:精密吸取样品溶液适量(相
当于水红花子约 1g),置 25 ml量瓶中 ,加乙醇定容至
刻度 ,过 0.45 μm微孔滤膜 , 即得。对照品与样品的
HPLC色谱图见图 1。
2.1.3　标准曲线绘制　用自动进样器分别按上述色
谱条件精密量取混合对照品溶液 2、4、6、8、10、12 μl注
入色谱仪测定 ,在上述条件下进行分析 ,测定对照品色
谱峰面积 ,以色谱峰面积对进样量进行回归分析 ,得到
花旗松素和槲皮素的回归方程 、相关系数分别为:
Y=509.85X+11.847 　r=0.999 9(n=6)
Y=265.5X-6.706 7 　r=0.999 5 (n=6)
结果表明 , 花旗松素 、槲皮素进样量 (X)分别在
0.299 52 ～ 1.797 12 μg、0.119 04 ～ 0.714 24 μg范围
内 ,与峰面积的值(Y)呈良好的线性关系。
图 1　对照品(A)与样品(B)HPLC色谱图
1.花旗松素;2.槲皮素
2.2　干膏收率的测定
精密量取定容后的提取液 ,置于干燥至恒重的蒸
发皿中 ,水浴挥干 ,于烘箱中 105℃烘 3 h,移置干燥器
中 ,冷却 30min,称重 ,恒重后计算干膏收率 。
3　提取工艺优化研究
3.1　水红花子提取溶媒的考察
3.1.1　不同提取溶媒的考察　取水红花子粉末 4份 ,
每份 10 g,精密称定 ,分别加水 、乙酸乙酯 、95%乙醇各
100ml,水浴加热回流提取 1 h,取提取液测定花旗松素
与槲皮素的含量(见表 1)。
表 1　水红花子不同提取溶媒的考察
含量(mg/g) 水 乙酸乙酯 95%乙醇
花旗松素 0.635 2 1.430 8 2.095 8
槲皮素 0.112 0 0.044 7 0.380 4
　　结果表明:水红花子用 95%乙醇提取时花旗松素
与槲皮素含量均较高 。
3.1.2　不同醇浓度的考察　取水红花子粉末 7份 ,每
份 10 g, 精密称定 , 分别加 30%、 40%、 50%、 60%、
70%、80%、90%乙醇各 100ml,水浴加热回流提取 1 h,
取提取液测定花旗松素与槲皮素的含量(见表 2)。
表 2　不同醇浓度提取液中水红花子中花旗松素与槲皮素的含量
浓度含量(mg/g) 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90%
花旗松素 1.744 9 3.071 8 3.452 0 3.843 6 3.701 9 3.473 9 3.232 1
槲皮素 0.084 1 0.265 3 0.321 9 0.450 8 0.349 9 0.312 8 0.380 4
13
· 2010年 12月第 20卷第 12期 · 今日药学
　　结果表明 ,用 60%乙醇提取时水红花子中花旗松
素和槲皮素的提取量均较高 , 因此确定提取溶媒为
60%乙醇 。
3.2　正交试验设计
选择提取时间 、溶媒量 、提取次数 3个因素 ,对主
要影响因素各取 3个水平 ,进行 L9(34)正交试验考察 ,
优选最佳提取条件。用加权综合评分 ,以花旗松素和
槲皮素含量为主指标(权重系数均为 0.4),干膏收率
(权重系数为 0.2)为次指标 ,即综合评分作为考察指
标确定水红花子提取条件。正交试验 L9(34)设计正交
试验因素水平表 ,见表 3,正交试验设计表及结果见表
4 ,方差分析见表 5。
表 3　水红花子回流提取因素水平表
水平 因素A提取时间(h) B料液比(倍) C提取次数
1 1 1∶6 1
2 1.5 1∶8 2
3 2 1∶10 3
表 4　正交试验设计表及结果(%)
因素
水平
A
提取时间
B
料液比
C
提取次数
D
空白
花旗松素含量
(mg/g)X
槲皮素含量
(mg/g)Y
出膏率
(%)Z
综合评
分 Q
1 1 1 1 1 4.167 6 0.440 1 7.083 3 0.518 0
2 1 2 2 2 5.530 3 0.748 8 11.184 2 0.768 2
3 1 3 3 3 5.818 1 0.821 3 12.973 7 0.835 8
4 2 1 2 3 5.624 8 0.949 6 11.333 3 0.846 4
5 2 2 3 1 5.929 4 1.147 3 15.210 5 0.986 1
6 2 3 1 2 5.006 4 0.639 9 8.027 8 0.654 6
7 3 1 3 2 6.142 8 1.242 2 12.526 3 0.997 8
8 3 2 1 3 4.996 8 0.723 5 8.500 0 0.689 4
9 3 3 2 1 5.958 7 1.058 3 12.078 9 0.915 8
K1 0.71 0.79 0.62 0.81
K2 0.83 0.82 0.84 0.81
K3 0.87 0.80 0.94 0.79
R 0.16 0.03 0.32 0.02
注:花旗松素评分(X)=(花旗松素含量 /最大槲皮素含量)×0.4;槲皮素评分(Y)=(槲皮素含量 /最大槲皮素含量)×0.4;干膏收率
评分(Z)=(干膏收率 /最大干膏收率)×0.2;综合评分(Q)=X+Y+Z
表 5　方差分析
方差来源 偏差平方和 自由度 F值 P值
A 0.042 2 42.00 <0.05
B 0.001 2 1.00 >0.05
C 0.161 2 161.00 <0.05
D 0.00 2
注:F0.05(2.2)=19.00
以直观分析及方差分析对实验结果进行评价 ,结果
表明 ,影响提取工艺的因素主次顺序为 C>A>B,其中
提取次数(C)和提取时间(A)对药材提取率影响最大 ,
具有显著性意义(P<0.05)。料液比(B)的水平之间差
异不大 ,根据生产实际为节省乙醇 ,选定料液比为 1∶6
为最佳溶剂用量。因此筛选确定提取条件为 A3B1C3,
即以 6倍量 60%乙醇回流提取 3次 ,每次 2 h。
3.3　水红花子提取工艺验证
实验为了进一步考察优选工艺的可靠性及稳定性 ,
分别取药材 3份各 100 g,按上述最优工艺条件 A3B1C3
进行验证试验 ,按 “2.1”项下方法进行测定 ,结果花旗松
素提取量为 6.100 8、6.383 6、6.231 5 mg/g,平均含量
6.238 6mg/g, RSD为 2.27%;槲皮素提取量为 1.206、
1.188 、 1.149 mg/g, 平均含量 1.181 mg/g, RSD为
2.47%;平均干膏收率为 13.190 2%, RSD为 2.39%。
各项指标均优于正交试验方案中的最高值 ,说明优化是
成功的 ,适合于生产应用 。
4　结论与讨论
在正交试验中要综合考虑直观分析和方差分析的结
果 ,同时还应结合生产实际 ,在经济有效的前提下确定
出最优工艺 ,考虑到在生产中经济的因素 ,本实验得到
(下转第 47页)
14
PharmacyToday· 2010 12 Vol.20 No.12·
和用药错误 。经过多年实践证明 ,本院药房药袋的使
用 ,患者满意 ,同行认可 ,已有多家医院借鉴使用 。
处方点评制度是一个对医院 、医师 、药师和患者都
有利的制度。是药师从规范处方书写与合理用药的角
度出发 ,对处方或医嘱单的不合理用药现象进行分析 、
评价 、干预 。开展处方点评主要解决两方面的问题:一
方面指导 、规范医院用药 ,避免 、防止不规范用药;另一
方面是建立医院合理用药环境 、规范合理使用药品 、推
进临床合理用药 、确保患者用药安全。目前要做好处方
点评工作 ,关键是要根据实际 ,点评的分寸把握要适当 ,
既不能太过于针对某个医师 ,造成矛盾 ,又不能毫无针
对性地泛泛而谈 ,应分步实施 。
综上所述 ,在计算机网络技术高速发展的今天 ,应
充分借助医院局域网信息资源这一平台 ,建立创新型药
学服务模式 ,推动全程化药学服务 ,更好地为广大患者
和医药工作者服务 。
参考文献
[ 1] 胡晋红.全程化药学服务 [ M] .上海:第二军医大学出版
社 , 2001:10.
[ 2] 孙忠实 , 朱珠.当代药物不良反应的特点与对策(1)[ J] .
中国医药导刊 , 2003, 5(1):68.
[ 3] 黄际薇 , 李瑞珍 ,庄华玲.临床药物信息系统的网络化管
理 [ J] .现代食品与药品杂志 , 2007, 17(1):67.
[ 4] 黄际薇.介绍一种医院药学信息管理系统 [ J] .中国医院
药学杂志 , 2004, 24(2):121.
[ 5] 李瑞珍 , 陈伟兰 ,庄华玲 , 等.药品说明书的网络管理和应
用 [ J] .中国药房 , 2006, 17(6):426.
[ 6] 张永明 , 黄际薇 ,李艳芳 , 等.医院门诊药房调配计算机管
理 [ J] .中国药学杂志 , 2003, 38(5):390.
[ 7] 黄际薇.我院门诊药房调剂方式的改进及效果 [ J] .中华
医院管理杂志 , 2004, 20(12):754.
[ 8] LesarTS, BricelandL, SteinDS.Factorsrelatedtoerrorsin
medicationprescribing[ J] .JAMA, 1997, 277(4):312-317.
[ 9] ThǜrmannPA.Prescribingerrorsresultinginadversedruge-
vents:howcantheybeprevented[ J] .ExpertOpinDrug
Saf, 2006, 5(4):489-493.
[ 10] LeGarlantezecP, AupéeO, AlmérasD, etal.Drugadmi-
nistrationerrorrelatedtocomputerizedprescribing[J].JOncol
PharmPract, 2009, [ Epubaheadofprint] .
[ 11] Pastó-CardonaL, Masuet-AumatelC, Masuet-AumatellC,
etal.Incidentstudyofmedicationerrorsindruguse
processes:prescription, transcription, validation, prepara-
tion, dispensingandadministeringinthehospitalenviron-
ment[ J] .FarmHosp, 2009, 33(5):257-268.
[ 12] MonaneM, MathiasDM, NagleBA, etal.Improvingpre-
scribingpatternsfortheelderlythroughanonlinedruguti-
lizationreviewintervention:asystemlinkingthephysi-
cian, pharmacist, andcomputer[ J] .JAMA, 1998, 280
(14):1249-1252.
[ 13] FranklinBD, GradyK, DonyaiP, etal.Theimpactofa
closed-loopelectronicprescribingandadministrationsys-
temonprescribingerrors, administrationerrorsandstaf
time:abefore-and-afterstudy[ J] .QualSafHealthCare,
2007, 16(4):279-284.
[ 14] 李瑞珍 ,张平, 张永明.计算机技术在临床用药分析和评
价中的应用 [ J] .现代食品与药品杂志 , 2007, 17(2):68.
[ 15] 黄际薇 , 张永明 ,曲彩虹 , 等.医院药品数量网络化管理
系统的设计与应用 [ J] .中国医院药学杂志 , 2005, 25
(5):463.
(收稿日期:2010-08-31)
(上接第 14页)
了水红花子的最佳提取工艺 A3B1C3,即 6倍量 60%乙
醇回流提取 3次 ,每次 2h。按照此最佳工艺条件进行
验证性试验 ,结果表明该结果具有重复性 ,提示该提取
工艺稳定 、可行 ,为节省提取工艺成本 、降低能耗和工
业化生产的合理化提供了科学依据 ,并为水红花子药
材的开发应用研究奠定了实验基础 。
笔者曾将水红花子的水提取物 、乙酸乙酯提取物 、
最佳工艺乙醇提取物进行对比 ,分别作用于人肝癌细
胞株 HepG2和 SMMC-7721,通过体外 MTT比色法检
测细胞抑制率 ,结果 3种水红花子提取物对肝脏肿瘤
细胞均有抑制作用 ,且以最佳工艺乙醇提取物抑制效
果最好 ,笔者正在对其抗肿瘤作用做进一步深入研究 ,
为生产抗肝脏肿瘤的临床有效制剂提供生药材基础。
参考文献
[ 1] 国家药典委员会.中国药典(一部)[ S] .北京:化学工业
出版社 , 2010:77-78.
[ 2] 中华本草编委会.中华本草 [ M] .上海:上海科学技术出
版社 , 1999:681-683.
[ 3] 乔华 ,谢銎 , 张晓云.花旗松素的生物活性及其应用 [ J] .
中草药 , 2003, 34(8):15-17.
[ 4] 薛磅 ,李凤仪.中草药中槲皮素测定方法的研究 [ J] .江
西化工.2006, 4 (12):9-14.
[ 5] 郑宗建 ,翟延君 ,张慧 ,等.HPLC法测定不同采收期水红
花子中的花旗松素 [ J] .中草药.2008, 39(12):1890 -
1891.
(收稿日期:2010-09-03)
47
· 2010年 12月第 20卷第 12期 · 今日药学