免费文献传递   相关文献

霜桑叶提取物对胰脂肪酶活性抑制作用的研究



全 文 :霜桑叶提取物对胰脂肪酶活性抑制作用的研究
张 丹 1, 姚正颖 2, 侯北伟 2,张卫明 2, 孙力军 2,*1
( 1. 南京师范大学 生命科学院,南京 210023;2. 南京野生植物综合利用研究院,南京 210042 )
摘 要:为发掘霜桑叶中的活性成分,采用分光光度法测定霜桑叶的不同极性提取物对胰脂
肪酶的抑制活性;通过酶反应动力学方法确定正己烷提取物对胰脂肪酶的抑制类型,并考察
其经人工肠液模拟消化后对胰脂肪酶抑制效果的影响。结果表明,霜桑叶提取物中对胰脂肪
酶的抑制活性由强到弱依次是正己烷提取物(半数抑制浓度 IC50=1.14 mg/mL)>二氯甲烷提
取物(IC50=8.51 mg/mL)>乙酸乙酯提取部位(IC50=13.60 mg/mL)。正己烷提取物对胰脂
肪酶的作用类型为非竞争性抑制。体外模拟消化后,正己烷提取物对胰脂肪酶仍有较强的抑
制效果,而且抑制率随浓度的升高而增大。由此可见,霜桑叶的正己烷提取物可作为良好的
胰脂肪酶抑制剂,具有调节脂质代谢的潜在功效。本研究为进一步以霜桑叶为原料开发降脂、
减肥的功能性食品提供了理论依据。
关键词:霜桑叶,胰脂肪酶,半数抑制浓度,非竞争性抑制
Research of inhibitory activity of extract from frost mulberry
leaves on pancreatic lipase
ZHANG Dan 1, YAO Zheng-ying 2, HOU Bei-wei 2, ZHANG
Wei-ming 2, SUN Li-jun 2, *
(1. College of Life Sciences,Nanjing Normal University,Nanjing 210023, China; 2. Institute for
the Comprehensive Utilization of Wild Plants,Nanjing 210042, China)
Abstract: The active substances in frost mulberry leaves were extracted using different solvents
and the pancreatic lipase inhibitory activities of different polar extracts were measured by
spectrophotometry. The inhibition type of hexane extracts was confirmed by enzymatic kinetics
assay. After simulated digesting by artificial intestine fluid, the inhibitory effect of hexane extracts
on pancreatic lipase was determined. The results showed that the order sequenced by inhibitory
ability on pancreatic lipase from strong to weak was: hexane extracts (IC50 = 1.14 mg/mL) >
methylene chloride extracts (IC50 = 8.51 mg/mL) > ethyl acetate extracts (IC50 = 13.60 mg/mL).
Moreover, the inhibition type of hexane extracts was non-competitive inhibition. In addition, the
digested hexane extracts still exhibited strong lipase inhibitory activity and its inhibitory rate was
increased with the rising of concentration. Thus, the hexane extracts of frost mulberry leaves can
be used as a good pancreatic lipase inhibitor and exert a potential effect on regulating lipid
metabolism. This study provided a theoretical basis for the further development of lipid-lowering,
weight loss functional foods using the frost mulberry leaves as raw material.
Keywords: frost mulberry leaves; pancreatic lipase; half maximal inhibitory concentration;
                                                              
第一作者:张丹(1991- ),女,硕士研究生,研究方向:植物资源开发,E-mail:
botanyshengwu@163.com。
*通讯作者:孙力军(1978- ),男,博士,副研究员,研究方向:植物资源综合利用和开发,E-mail:
shengwudiqiu@126.com。 
基金项目:“十二五”国家科技支撑计划( 2011BAD33B02) ; 国家自然科学基金项目( 31100224)。 
网络出版时间:2016-11-22 16:17:20
网络出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/11.1759.TS.20161122.1617.016.html
non-competitive inhibition
中图分类号: TS202.1 文献标识码:A

肥胖正成为本世纪全球健康的最大威胁之一,英国《柳叶刀》周刊发表的一项研究指出,
全球的胖子人数已经超过瘦子。最近 40 年来,肥胖人数呈迅速增加的趋势:从 1975 年的
1.05 亿增加到 2014 年的 6.41 亿[1]。其中,中国的男性肥胖人数为 4320 万人,女性肥胖人数
为 4640 万人,高居全球第一。肥胖问题“将给健康带来前所未有的威胁”,重度肥胖危机
正步步逼近,高脂、高糖饮食导致的疾病将越来越多[2]。因此,如何合理有效地解决肥胖给
人类健康带来的影响是医药界、食品界面临的重要研究课题。
胰脂肪酶是膳食中脂肪水解过程的关键酶,负责代谢 50%~70%的甘油三脂,因此,抑
制胰脂肪酶的活性可有效抑制膳食中脂肪的水解和吸收,从而减少人体内脂肪沉积,达到预
防与治疗肥胖的目的[3]。而植物来源的天然化合物具有安全性高、来源广泛等特点,因此从
植物中筛选新的、副作用更小的胰脂肪酶抑制剂一直是研究热点。最新研究报道表明,扁豆
[4]、黄芩[5]、山竹果[6]、芒果[7]等植物提取物对胰脂肪酶具有较好的抑制活性。
桑叶为桑科植物桑(Morus alba L.)的干燥叶,具有很高的食用价值和药用价值。霜桑
叶,即初霜后采集的桑叶。中医历来认为冬桑叶、霜桑叶具有上乘品质,历版《中国药典》
中收录的桑叶药材也为“霜桑叶”[8]。现代药学研究认为,桑叶主要含黄酮及其苷类、甾体
及三萜类化合物、多糖、生物碱等多种化学成分[9],具有降血糖[10]、降血脂[11]、抗氧化[12]、
增强免疫[13]等药理学功效。因此桑叶在降脂减肥产品开发方面有着良好的发展潜力。现已
发现桑树的桑枝和桑白皮醇提物对胰脂肪酶表现出较强的抑制作用[14],桑叶中的胰脂肪酶
抑制剂值得进一步研究。本文以霜桑叶为研究对象,以胰脂肪酶抑制活性为指导,旨在从霜
桑叶提取物中筛选抑制胰脂酶活性的最佳极性组分,探讨其抑制机理;并通过体外模拟人体
小肠内脂肪消化环境,研究消化环境对活性成分发挥抑制作用的影响。

1 材料与方法
1.1 材料与仪器
霜桑叶为 2015 年采于安徽省潜山县;胰脂肪酶(酶活力 1:3000)购于国药集团化学试
剂有限公司;棕榈酸对硝基苯酯及奥利司他购于上海源叶生物科技有限公司;其余试剂均为
国产分析纯
旋转蒸发仪 上海亚荣仪器厂;磁力搅拌器 上海司乐仪器有限公司;离心机 上海安
亭科学仪器厂;雷磁 PHS-3C pH 计 上海仪电科学仪器股份有限公司;酶标仪 赛默飞世
尔(上海)仪器有限公司。
1.2 霜桑叶不同极性提取部位样品的制备
霜桑叶粉碎,过 60 目筛备用。称取霜桑叶粉末装入三角烧瓶中,按料液比 1:5 加入 70%
乙醇浸提过夜,真空抽滤后,提取液经减压旋转蒸发浓缩后,浸膏分散水中,依次用正己烷、
二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取至萃取层无色,合并各部位萃取液,浓缩成浸膏。用 DMSO
将各极性提取样品溶解成 10 mg/mL,备用。以奥利司他作为阳性药物对照。
不同极性提取部位的提取率按以下公式计算:
/ % 100%AX
BY
 提取率
其中,A 为 70%醇提浸膏质量(g),B 为提取的总干物质量(g),X 为不同极性溶剂
依次萃取后分别所得的浸膏质量(g),Y 为萃取时实际称取的 70%醇提浸膏质量(g)。
1.2.1 胰脂肪酶抑制活性检测方法 取 50 mmol/L 棕榈酸对硝基苯酯溶解在 DMSO 中,用
蒸馏水稀释至 10 mmol/L。胰脂肪酶用蒸馏水溶解配成 10 mg/mL,4℃,13000 r/min,离心
5 min。整个反应体系总体积为 0.2 mL,包括 0.02 mL 提取物,0.02 mL 酶液,0.14 mL Tris
缓冲液(pH 7.4),0.02 mL 底物溶液。37℃孵育 20 min 于 405 nm 处读数[15]。
胰脂肪酶抑制率按以下公式计算:
 E I IB
E
- -
/ % 100%
A A A
A
 抑制率
其中,AE为不加样品时吸光值;AI为加入抑制剂时得吸光值;AIB为加入抑制剂但未加
底物和酶液时吸光值。
1.2.2 霜桑叶正己烷提取物对胰脂肪酶的抑制动力学实验
1.2.2.1 抑制反应顺序实验 以霜桑叶正己烷提取物作为抑制剂,加入浓度为 2.5 mg/mL,底
物浓度为 10 mmol/L。改变底物、抑制剂和胰脂肪酶加入顺序:
( 1 ) 底物与胰脂肪酶预热 10 min 后,加入抑制剂,即 S+E+I;
( 2 ) 抑制剂与胰脂肪酶预热 10 min 后,加入底物乳液进行反应,即 I+E+S;
( 3 ) 底物与抑制剂预热 10 min 后,加入胰脂肪酶进行反应,即 S+I+E;
测定残余酶活,计算抑制率。
1.2.2.2 抑制动力学实验 霜桑叶正己烷提取物浓度以及脂肪酶量一定的条件下,以一系列不
同浓度底物进行反应初速率测定(37℃孵育 1 min 于 405 nm 测定 OD 值)。设添加抑制剂
和未添加抑制剂 2 组;以 1/[S]对反应速率 1/V 作图,根据 Lineweaver-burk 双倒数作图法结
果的特征分析,推断霜桑叶中正己烷提取物对脂肪酶的抑制类型。
1.3 模拟消化液中霜桑叶抑制活性的测定
1.3.1 消化初始液制备 20%(w/w)玉米油与 80%(w/w)5 mmol/L pH 7.0 的磷酸缓冲液,
缓冲液中含有 2.5%(w/w)Tween 80,室温下 800 r/min 乳化过夜,制成乳化液[16]。取一定
量乳化液,霜桑叶正己烷提取物或奥利司他,加入 5 mmol/L 磷酸缓冲液(pH 7.0),室温
下 800 r/min 乳化过夜,最终得到样品-玉米油混合液,即含 2.0%(w/w)玉米油;0.2%(w/w)
或 0.4%(w/w)霜桑叶正己烷提取物或 0.2%(w/w)奥利司他,作为体外消化模型初始液。
1.3.2 正己烷提取物在模拟消化液中的抑制活性测定 初始消化液加入胰脂肪酶(24
mg/mL),14 mL 胆盐(54 mg/mL),盐溶液(0.25 mol/L CaCl2,3.0 mol/L NaCl)。以上
添加液都溶解在 5 mmol/L,pH 7.0 磷酸缓冲液中,且反应体系在加入胰脂肪酶前需将 pH 调
为 7.0 左右。以每隔一段时间 0.1 mol/L NaOH 滴定时所消耗的体积来计算脂质释放的游离
脂肪酸(FAA)释放量。计算公式如下:
NaOH NaOH Lipid
Lipid
FAA / % 100
2
V C MW
W
     


其中,VNaOH为滴定时消耗的 NaOH 溶液的体积(L);CNaOH为滴定用 NaOH 溶液的摩
尔浓度(mol/L);MWLipid 为玉米油的平均摩尔质量(872 g/mol);WLipid 为滴定体系中玉
米油质量(g)。
1.4 数据分析处理
采用 Excel 2010 和 SPSS 13.0 进行数据分析。

2 结果与分析
2.1 霜桑叶不同极性部位提取物的提取率
霜桑叶 70%乙醇初提物提取率为 22.95%,依次经正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁
醇萃取后,提取率分别为 1.67%、2.71%、3.32%及 18.5%(见表 1)。由此可知,霜桑叶提
取物的提取率随着萃取溶剂极性的增加而提高;极性最小的正己烷相,提取率最低。表明霜
桑叶中活性成分在不同极性相中的分布含量有所差异,因此可对不同极性溶剂萃取的活性成
分进行胰脂肪酶抑制活性测定,以确定抑酶活性物质的分布情况及初步判断含量多少。
表 1 霜桑叶不同极性部位提取物的提取率
Table1 Extraction rate for different solvents extracts
不同溶剂物 正己烷相 二氯甲烷相 乙酸乙酯相 正丁醇相
提取率/% 1.67 2.71 3.32 18.5

2.2 霜桑叶不同极性提取物及奥利司他胰脂肪酶抑制活性
胰脂肪酶作用于棕榈酸对硝基苯酚酯分解出对硝基苯酚,该产物在 405 nm 处有吸收峰,
浓度与吸光值成正比。在胰脂肪酶浓度为 10 mg/mL、底物浓度为 10 mmol/L、反应时间为
20 min 的条件下,测定霜桑叶不同极性部位在不同质量浓度条件下与酶反应后的吸光度,
从而得出其对胰脂肪酶的抑制活性。从表 2 可知,霜桑叶的正己烷提取物、二氯甲烷提取物
和乙酸乙酯提取物对脂肪酶都有抑制效果,IC50分别为 1.14、8.51、13.60 mg/mL,在同等浓
度下正丁醇提取部位对胰脂肪酶无抑制活性。此外,阳性对照奥利司他作为目前市场上批准
使用的抑制胰脂肪酶的减肥药物[17]在同等试验条件下的 IC50 为 0.072 mg/mL,抑酶活性最
强。对胰脂肪酶抑制能力为:奥利司他>正己烷提取物>二氯甲烷提取物>乙酸乙酯提取物>
正丁醇提取物。这一结果说明,霜桑叶对胰脂肪酶的抑制活性成分主要存在于极性较小的正
己烷提取部位中,且在同等质量浓度条件下随着极性增大而抑制效果减弱。

表 2 霜桑叶不同极性提取物对抑制胰脂肪酶活性的半数抑制浓度
Table 2 Pancreatic lipase inhibition IC50 for different solvents extract
不同溶剂取物 正己烷相 二氯甲烷相 乙酸乙酯相 奥利司他
IC50 (mg/mL) 1.14±0.11b 8.51±1.25c 13.60±2.34d 0.072±0.008a
注:n=3。数据后标有不同字母表示差异显著(P<0.05),数据后标有相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
2.2.1 霜桑叶正己烷提取物对胰脂肪酶抑制动力学的影响
2.2.1.1 作用机理的初步确定 由图 1 可以看出,先使抑制剂与酶预热 10 min,再加入底物
时的抑酶活性最高,而先加入底物与酶或者底物与抑制剂时的抑酶活性差异不明显。表明所
加霜桑叶正己烷提取部位可能主要与酶作用,并形成复合物,该复合物再与底物相结合,复
合物使酶的三维结构发生改变,不能直接生成产物,从而导致了酶催化反应速率下降[18]。


图 1 反应物加入顺序对抑制作用的影响
Fig.1 Effect of the order of reactants on inhibition
S:底物,I:抑制剂,E:酶
注:n=3。标有不同字母表示差异显著(P<0.05),标有相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
2.2.1.2 抑制类型的确定 根据 Lineweaver-burk 双倒数作图,得出加入抑制剂和未加入抑制
剂时的双倒数曲线(图 2)。根据双倒数方程 m max max1/V=K /V [S]+1/V ,以 1/V 对 1/[S]作图得
到一直线,由图可知,双倒数作图相交于横轴,属于非竞争性抑制作用类型,与荷叶总生物
碱[19]、茶多酚[20]、水蓊花提取物[21]等抑制类型相似。

图 2 霜桑叶正己烷提取物 Lineweaver-Burk 的双倒数曲线
Fig.2 Lineweaver-Burk curves of hexane extracts
2.3 体外模拟霜桑叶胰脂肪酶活性抑制测定
小肠是脂肪消化、吸收的主要场所,当食物进入小肠时,脂质首先被胆汁中的胆盐乳化
成微滴,从而扩大脂肪的表面积,之后再与分泌入小肠的胰脂肪酶等酶类结合而被消化吸收。
因此,抑制剂能否在小肠消化液发挥作用决定着抑制剂的生物利用度。在模拟肠道消化实验
中,玉米油作为胰脂肪酶消化底物,霜桑叶正己烷提取物及奥利司他作为抑制剂。一般情况
下,在反应刚开始的几分钟内 FFA 释放量会急剧升高,随着反应时间变化之后便缓慢增加,
图 3 中无抑制剂组可能是试验过程中脂质未达到完全乳化,胰脂肪酶作用不完全,导致游离
脂肪酸最终释放率未达到 100%。由图 3 可知,霜桑叶正己烷提取物及奥利司他处在肠道消
化液环境中,相比于无抑制剂组都使体系内游离脂肪酸释放量减少,说明霜桑叶正己烷提取
部位及奥利司他在此环境下在一定程度上抑制了胰脂肪酶的活性。最终脂质消化率依次下降
分别为:无抑制剂组(86.1%)>0.2%(w/w)正己烷提取物(64.37%)>0.4%(w/w)正己
烷提取物(49.3%)>0.2%(w/w)奥利司他(4.97%),即最终胰脂肪酶抑制活性依次下降为:
0.2%(w/w)奥利司他>0.4%(w/w)正己烷提取物>0.2%(w/w)正己烷提取物>无抑制剂
组。因此可知,霜桑叶正己烷提取物可通过抑制胰脂肪酶活性,降低肠道内脂质消化程度,
且呈剂量依赖性。在同等浓度条件下,奥利司他几乎完全抑制胰脂肪酶活性,使机体完全不
吸收脂质。


图 3 霜桑叶正己烷提取物及奥利司他在肠道消化环境中脂肪酸释放率
Fig.3 Free fatty acids (FFAs) released rate from emulsions during simulated intestinal digestion process with hexane extracts from
frost mulberry leaves or orlistat
3 讨论
来源于植物的胰脂肪酶抑制剂大致可分为以下几种化学成分:皂苷类、萜类及酚类。目
前,大多数研究集中在开发植物多酚类相关的胰脂肪酶抑制剂,如绿茶、乌龙茶、红茶类多
酚及可可多酚等[22-25]。又如,Anna[16]等测定了30种富含多酚的水果提取物对胰脂肪酶的抑
制活性,结果发现各水果70%丙酮提取物的IC50在4.07 mg/mL至80 mg/mL之间,且多酚的含
量与抑酶活性有一定相关性。此外,研究表明麝香葡萄及其籽的甲醇提取物对胰脂肪酶的
IC50分别为34.41 mg/mL及8.63 mg/mL,而且乙酸乙酯提取部位有较强的胰脂肪酶抑制活性
[26]。范婷婷等[19]发现荷叶总生物碱类具有降脂减肥作用,当浓度为0.6 mg/mL时,对胰脂肪
酶的最大抑制率为25.6%。
丁双华[27]等通过测定桑叶不同极性提取部位的多酚类成分及活性表明,极性最小的石
油醚相几乎不含芦丁、绿原酸、槲皮苷等多酚类成分。而本研究发现,霜桑叶的正己烷提取
部位对胰脂肪酶的IC50则为1.14 mg/mL(换算为干物质,霜桑叶的IC50则为68 mg/mL),而其
它极性部位抑制效果不明显。另据报道,桑叶中植物甾醇含量比一般植物高3至4倍[28],而
且,为得到植物性食物中的植物甾醇,常选择极性较小的溶剂作为萃取条件,如石油醚、正
己烷等[29, 30],因此推测,霜桑叶正己烷相中的抑酶活性物质并非多酚等物质,而可能是植
物甾醇类物质,但是发挥抑制作用的活性单体物质有待深入研究。
奥利司他是长效的特异性胃肠道脂肪酶抑制剂,能阻止甘油三酯水解为可吸收的游离脂
肪酸和单酰基甘油,使其不被吸收,从而减少热量摄入,控制体重。长期服用该药会出现上
呼吸道感染、流行性感冒、头痛、月经失调、疲劳、腹泻、胃肠胀气及胰腺炎等等副作用[17,31]。
本研究通过对霜桑叶不同极性提取物的脂肪酶抑制活性测定,表明其正己烷提取物的提取率
为 1.67%,IC50 为 1.14 mg/mL,而在同样条件下,减肥药物奥利司他为 IC50=72 µg/mL,由
其较低的 IC50 可以看出,奥利司他在极低的浓度下就几乎完全抑制了胰脂肪酶活性。据此
可推测奥利司他可能由于其胰脂肪酶抑制活性太强,严重干扰了正常脂肪代谢,导致使用后
出现一系列的副作用。虽然本研究中霜桑叶不同极性提取物与减肥药物奥利司他的抑酶活性
有一定差距,但是由于其来自于天然的植物提取物而非合成药物,因此,如果开发天然的降
脂、减肥功能性产品,霜桑叶不失为一种优秀的植物源原料。

4 结论
本文利用分光光度法研究霜桑叶不同极性提取部位对胰脂肪酶活性的抑制作用,结果表
明抑酶活性随提取物极性增大而减弱,正己烷提取物的抑制效果最佳,其IC50为1.14 mg/mL。
酶反应动力学研究表明正己烷提取物对胰脂肪酶的作用类型是非竞争性抑制。通过体外模拟
人体小肠内脂肪消化环境表明,0.4%(w/w)的正己烷提取部位的游离脂肪酸释放率为49.3%,
与对照组(86.1%)相比,其降低了游离脂肪酸的释放量,因此霜桑叶正己烷提取物可通过抑
制胰脂肪酶活性,降低肠道内脂质消化程度。本研究成果有效提升了霜桑叶的利用率,其正
己烷提取物在开发天然减肥产品方面有着良好的应用前景。
参考文献
[1] NCD Risk Factor Collaboration. Trends in adult body-mass index in 200 countries from 1975 to
2014: a pooled analysis of 1698 population-based measurement studies with 19.2 million
participants[J]. Lancet, 2016,387(10026):1377-1396.
[2] Rosen E D, Spiegelman B M. What we talk about when we talk about fat[J]. Cell,
2014,156(1):20-44.
[3] 李强 , 任虹 , 王友升 . 植物源脂肪酶抑制剂研究进展 [J]. 天然产物研究与开发 ,
2015,27(2):360-366.
[4] Zhang B, Deng Z, Ramdath D D, et al. Phenolic profiles of 20 Canadian lentil cultivars and their
contribution to antioxidant activity and inhibitory effects on α-glucosidase and pancreatic lipase[J].
Food Chemistry, 2015,172(7):862-872.
[5] Wan L, Jiang X, Liu Y, et al. Screening of lipase inhibitors from Scutellaria baicalensis extract
using lipase immobilized on magnetic nanoparticles and study on the inhibitory mechanism[J].
Analytical and Bioanalytical Chemistry, 2016,408(9):2275-2283.
[6] Adnyana I K, Abuzaid A S, Iskandar E Y, et al. Pancreatic lipase and α-amylase inhibitory
potential of mangosteen (Garcinia mangostana Linn.) pericarp extract[J]. International Journal of
Medical Research & Health Sciences, 2016,5(1):23-28.
[7] Itoh K, Murata K, Nakagaki Y, et al. A Pancreatic lipase inhibitory activity by mango (Mangifera
indica) leaf methanolic extract[J]. Journal of Plant Studies, 2016,5(2):72-78.
[8]  国家药典委员会. 中华人民共和国药典[M]. 北京: 化学工业出版社,2015: 297.
[9] 苏方华. 桑叶的化学成分及临床应用研究进展[J]. 中国医药导报, 2010,7(14):9-12.
[10] 唐明敏, 刘洋, 田思敏, 等. 桑叶不同提取部位对α-葡萄糖苷酶抑制活性体外研究[J]. 新疆
医科大学学报, 2015,38(6):711-714.
[11] 邹莉芳, 王玲, 丁晓雯, 等. 桑叶水提物预防小鼠高脂血症的作用研究[J]. 食品安全质量检
测学报, 2016,7(8):3039-3045.
[12] 张贵会, 王贺, 杨玲. 新疆药桑叶中黄酮类化合物的分离及其抗氧化活性评价[J]. 中国酿造,
2016,3(2):101-105.
[13] 侯瑞宏 , 廖森泰 , 刘凡 , 等 . 桑叶多糖对小鼠免疫调节作用的影响 [J]. 食品科学 ,
2011,32(13):280-283.
[14]  孙晓丽, 张锴镔, 纪秀红, 等. 药食两用中药中脂肪酶以及α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选[J].
中国中药杂志, 2012,37(9):1319-1323.
[15] Podsedek A, Majewska I, Redzynia M, et al. In vitro inhibitory effect on digestive enzymes and
antioxidant potential of commonly consumed fruits[J].  Journal of Agricultural and Food
Chemistry, 2014,62(20):4610-4617.
[16] Espinal-Ruiz M, Restrepo-Sánchez L, Narváez-Cuenca C, et al. Impact of pectin properties on
lipid digestion under simulated gastrointestinal conditions: Comparison of citrus and banana
passion fruit (Passiflora tripartita var. mollissima) pectins[J]. Food Hydrocolloids,
2016,52:329-342.
[17] Ahmad F A, Mahmud S. Acute pancreatitis following orlistat therapy: report of two cases[J]. 
Journal of the Pancreas, 2010,11(1):61-63.
[18] 任秀娟.葡萄籽中脂肪酶抑制剂的分离提取及对营养型大鼠减肥效果的研究[D]. 镇江:江苏
大学, 2009.
[19] 范婷婷, 法鲁克, 方芳, 等. 荷叶总生物碱降脂减肥作用的体内外试验[J]. 浙江大学学报(农
业与生命科学版), 2013,39(02):141-148.
[20] 张忠. 茶多酚对胰脂肪酶活性的抑制作用[J]. 食品工业, 2013,34(08):168-170.
[21] 张丽娜.水翁花对胰脂肪酶和α-淀粉酶抑制活性及作用机制初步探讨[D]. 上海:华东理工大
学, 2012.
[22] Zhu Y, Ren X, Yuan L, et al. Fast identification of lipase inhibitors in oolong tea by using lipase
functionalised Fe3O4 magnetic nanoparticles coupled with UPLC-MS/MS[J]. Food Chemistry,
2015,173(8):521-526.
[23] Tenore G C, Campiglia P, Giannetti D, et al. Simulated gastrointestinal digestion, intestinal
permeation and plasma protein interaction of white, green, and black tea polyphenols[J]. Food
Chemistry, 2015,169(4):320-326.
[24] Uchiyama S, Taniguchi Y, Saka A, et al. Prevention of diet-induced obesity by dietary black tea
polyphenols extract in vitro and in vivo[J]. Nutrition, 2011,27(3):287-292.
[25] Gu Y, Hurst W J, Stuart D A, et al. Inhibition of key digestive enzymes by cocoa extracts and
procyanidins[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2011,59(10):5305-5311.
[26] You Q, Chen F, Wang X, et al. Anti-diabetic activities of phenolic compounds in muscadine
against alpha-glucosidase and pancreatic lipase[J]. LWT-Food Science and Technology,
2012,46(1):164-168.
[27] 丁双华.桑叶多酚类物质分离提取及活性的初步研究[D]. 杭州:浙江工商大学, 2011.
[28] 王 芳 , 励 建荣 . 桑 叶 的化 学 成 分 、 生 理 功 能 及 应 用 研 究 进 展 [J]. 食 品 科 学 ,
2005,26(S1):111-117.
[29] 张建书, 王强, 刘红芝, 等. 不同地区花生品种VE、植物甾醇组成与含量的分析比较[J]. 食
品科学, 2012,33(22):191-195.
[30] 彭丽霞 , 朱亿竹 , 魏阳吉 , 等 . 葡萄籽油中植物甾醇的提取与鉴定[J]. 中国食品学报 ,
2012,12(03):185-191.
[17] Ahmad F A, Mahmud S. Acute pancreatitis following orlistat therapy: report of two cases[J]. 
Journal of the Pancreas, 2010,11(1):61-63.
[31] 马凌悦 , 周颖 , 崔一民 . 奥利司他的不良反应与药物间相互作用研究 [J]. 中国药房 ,
2012,23(22):2090-2092.