全 文 ：·科技简报 ·
[作者简介] 马力 ,男 ,硕士 ,主管药师 ,电话:027-85726073 , E-m ail:m gm12345@yah oo.com .cn
正交试验法优选辛夷花多糖的提取方
法
马力1 ,严慧娟1 ,张驰2 ,张玉良1 ,张玉1 　(1.华中科技
大学同济医学院附属协和医院药剂科 ,湖北 武汉 430022;2.
湖北中医学院 ,湖北 武汉 430065)
[ 摘要] 　目的:设计正交试验 , 探讨水提醇析法提取 、分离纯
化辛夷花多糖的最佳工艺。方法:按正交试验设计方案 ,设
定对提取率和含量影响较大的 4 因素即提取温度 、时间 、乙
醇浓度和氯仿萃取次数 ,各因素设定 3 水平 , 研究辛夷花多
糖提取的最佳工艺。辛夷花多糖的百分含量以硫酸-苯酚法
测定。结果:按正交试验方案进行试验 ,经过计算和综合分
析 ,得出辛夷花多糖的最佳提取工艺为水浸提 2 h , 浸提温度
90 ℃,氯仿萃取 2 次 , 沉析用乙醇浓度为 80%。结论:该优
选工艺可用于提取辛夷花多糖 , 且所得辛夷花多糖含量较
高。
[ 关键词] 　辛夷花多糖;正交试验法;提取
[中图分类号] R927.2　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-
5213(2010)09-0797-02
　　多糖在抗肿瘤 、抗炎 、抗病毒 、降血糖 、抗衰老 、抗凝血 、
促进免疫等方面都具有重要的生物活性[ 1] 。辛夷花是木兰
科植物望春花 F los magnoliae 的花蕾 , 为常见中药 , 具有散
风寒 、通鼻窍的功能。临床用于治疗风寒头痛 、鼻塞 、鼻渊 、
鼻流浊涕等。但尚未见辛夷花多糖提取的研究报道。本实
验拟用正交试验法优化从辛夷花中提取多糖。以辛夷花多
糖提取收率和含量为指标 ,对提取过程中影响提取效果的水
浸提时间 、浸提温度 、氯仿萃取次数和乙醇浓度等 4 个因素
以三水平按正交试验方法进行研究 , 以确定提取辛夷花多糖
的最佳条件 ,为辛夷花多糖的开发利用提供实验依据。
1　材料
UV-2450 型紫外可见分光光度计(日本岛津公司);辛
夷花(华中科技大学医学院附属协和医院药剂科 , 经张玉良
中药师鉴定为 F los magnoliae 的花蕾);试剂均为分析纯。
2　方法
2.1　辛夷花多糖的提取　辛夷花多糖的提取采用水提醇沉
法[ 2] ,取适量辛夷花于 30 倍水中不同温度恒温浸泡 , 过滤 ,
浓缩 , Sevag 法[ 3]除蛋白 , 再用氯仿 , 石油醚等除去脂溶性杂
质 ,水层加乙醇至一定浓度 , 收集醇沉物 , 分别用丙酮和乙醚
洗沉淀 2 次 , 经干燥即得到无定形灰白色粉末的辛夷花多
糖 ,称量 , 计算收率 ,并用苯酚硫酸法测定含量。
2.2　辛夷花多糖的含量测定
2.2.1　标准曲线的绘制　精密称取干燥恒重的葡萄糖对照
品10.2 mg 置 100 mL 量瓶中 , 加水溶解并稀释至刻度 , 摇
匀 ,即得到葡萄糖对照品溶液。准确量取上述对照品溶液
1.0 , 2.0 , 3.0 , 4.0 , 5.0 m L , 分别置于 10 mL 量瓶中 , 再分别
各取0.5 mL 加浓硫酸7.5 m L和 5%苯酚1.5 mL , 于40 ℃保
温 30 min , 在 490 nm 波长处测定吸光度 , 得回归方程 C=
102.34A -11.916(r=0.999 3)。结果表明 , 在10.2 ～ 51.0
mg·L-1的质量浓度范围内具有良好的线性关系。
2.2.2　多糖含量测定　精密称取辛夷花粗多糖 10 mg , 于
50 m L 量瓶中 ,加水溶解并定容至刻度。将以上溶液用水稀
释 4 倍后 ,按标准曲线项下方法“再分别各取0.5 mL 加浓硫
酸7.5 mL 和 5%苯酚1.5 mL……”测其吸光度 ,代入浓度-吸
光度标准曲线经计算得到多糖含量。
2.3　正交试验设计　按照上述提取工艺 , 将较重要的影响
因素确定为水浸提时间 、浸提温度 、50 mL 氯仿萃取次数和
沉淀乙醇的浓度等 4 个因素 , 每个因素考察三水平 , 以辛夷
花多糖的产率和含量为考察指标 , 用 L9(34)正交表安排试
验[ 2] 。见表 1。
表 1　正交试验因素与水平考察表
Tab 1　The factor s and levels of affecting poly saccha rides
e xtr action in o rthogonal test
水平 浸提时间(A)/ h
浸提温度
(B)/ ℃
氯仿萃取
次数(C)
乙醇浓度
(D)/ %
1 2 70 1 50
2 3 80 2 70
3 4 90 3 80
3　结果
3.1　工艺优化试验　按正交试验设计方法提取辛夷花多
糖 ,收率和含量结果见表 2。
表 2　正交试验设计与结果
Tab 2　The schedule of o rthogonal te st and results
A B C D 收率/% 含量/ %
1 1 1 1 1 0.03 34.65
2 1 2 2 2 0.12 20.32
3 1 3 3 3 0.26 76.61
4 2 1 2 3 0.11 17.59
5 2 2 3 1 0.10 38.74
6 2 3 1 2 0.31 27.82
7 3 1 3 2 0.09 15.54
8 3 2 1 3 0.41 25.78
9 3 3 2 1 0.30 42.49
收率K 1 0.41 0.25 0.75 0.43
K 2 0.52 0.64 0.53 0.52
K 3 0.80 0.87 0.45 0.78
R 0.13 0.21 0.10 0.12
含量K 1 131.58 67.78 88.25 115.88
K 2 84.15 84.84 80.40 63.68
K 3 83.81 146.92 130.89 119.98
R 15.92 26.38 16.83 18.77
3.1.1　最佳提取条件的确定　表 2 中收率可以看出 , 影响
提取收率的因素排序为 B>A>D>C , B的影响最大 , C 的影
响最小。经过运算可得出各个因素各水平之和 K 1 , K 2 , K 3 。
综合各因素 K 值和直观比较 , 得出理论上最佳提取产率的
工艺条件为 A 3B3C1D3 。故以收率为指标确定辛夷花多糖最
佳提取工艺条件为:浸提时间为 4 h , 浸提温度为90 ℃, 等量
氯仿萃取次数为 1 次 ,沉析用的乙醇体积分数为 80%。以表
2 中含量来分析 , 影响提取含量的因素排序为 B>D>C>A 。
B和 D 的影响较显著 , A和 C 则不显著。说明提取过程中浸
提温度对辛夷花的含量影响最大 ,温度高有利于提高辛夷花
多糖的含量;乙醇浓度对辛夷花多糖含量的影响也较大;浸
·797·中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 9期 Chin H osp Pharm J , 2010 May , Vol 30 , No.09
提时间和氯仿提取次数的则影响较小。从其含量的 K 1 、K 2 、
K 3看到 ,所得的辛夷花多糖含量最佳的工艺条件为 A1B3C3
D3。以含量为指标 , 优化的辛夷花多糖的提取工艺条件应
为:浸提时间 2 h ,浸提温度90 ℃, 50 m L氯仿萃取次数 3 次 ,
沉析用的乙醇体积分数为 80%。对以上两指标进行综合分
析 ,结合经济成本和环境效益考虑 , 可将辛夷花多糖的提取
工艺定为以下条件:A 1B3C2D3。
3.1.2　验证试验　为验证最佳工艺 , 称取辛夷花 50 g ,按照
优化后所得最佳提取工艺即加入 30 倍量水提取 3 次 , 浸提
时间为 2 h , 浸提温度为90 ℃, 50 m L 氯仿萃取次数为 2 次 ,
沉析乙醇体积分数为 80%进行提取 ,每次 2 h ,对所得多糖称
重并进行含量测定。 结果表明 , 多糖得率为0.40%, 辛夷花
相对百分含量为78.10%, 可知与正交表中的最优水平一致 ,
说明本研究所确定的工艺合理。
4　讨论
4.1　提取条件的影响　从表 2 的结果可以看出:(1)水浸提
时间有 3 个 ,分别为 2 , 3 , 4 h , 这 3 个时间条件对产率的影响
结果表明 ,浸提时间越长 , 收率越高 , 但辛夷花多糖的含量在
浸提 3 和 4 h 时有所下降 , 且在浸提 2 h 时 3 号的含量比其
他的高很多 ,因此选取浸提时间为 2 h , 时间越长 , 浸提的杂
质越多。另外从时间与效率 、成本来看 , 浸提时间选 2 h 是
恰当的。(2)浸提温度对收率和含量的影响都很大 , 温度升
高 ,收率和含量也升高 , 因此适当提高浸提温度很有必要 ,因
此选择90 ℃作为浸提最佳温度;(3)氯仿萃取次数对收率和
含量的影响都很小 , 随着萃取次数的增加 , 收率和含量的变
化不明显 ,从时间与效率 、成本来看 ,萃取 2 次就可以了;(4)
考察 3 个水平沉析用的乙醇体积分数 , 分别为 50%, 70%,
80%。其对产率的影响虽不是很大 , 但乙醇浓度越高 , 收率
越高 , 而且乙醇浓度对含量的影响较大 , 浓度越高 , 收率越
高 ,故从产率与产品的质量来考虑 , 选用乙醇体积分数为
80%最好 , 不但可降低乙醇的使用量 , 还可以减少乙醇回收
的成本。考虑辛夷花多糖的提取收率 、纯度与成本等因素 ,
对醇析水提法提取辛夷花多糖的条件再次优化 , 笔者总结其
工艺条件为:水浸提时间为 2 h , 浸提温度为90 ℃, 50 m L氯
仿萃取 2 次 ,沉析用的乙醇体积分数为 80%。
4.2　除去多糖蛋白质的方法　大部分多糖是与蛋白质结合
的 ,目前用于除去多糖中的游离蛋白质可用蛋白沉淀剂如三
氯醋酸 、鞣酸等 , 少量蛋白则用 Sevag 除去[ 4] 。在实际应用
中也可先用氯仿 、石油醚等除去脂溶性杂质后 , 再用 Sevag
试剂法除蛋白 ,这样并不影响辛夷花多糖的提取。
参考文献:
[ 1] 　白玉静 ,佟丽华.香菇多糖的提取工艺和含量测定方法研究
[ J] .黑龙江医药科学, 2006 , 29(1):55-56.
[ 2] 　张玉 ,马力 ,陈文.醇析水提法提取金银花多糖[ J] .医药导报 ,
2006 , 25(11):1118-1120.
[ 3] 　李亚清 ,杨海波.亚心形扁藻多糖的提取分离纯化及组成分析
[ J] .微生物学杂志 , 2006 , 26(3):20-22.
[ 4] 　汪红 ,王强 ,王顺春 , 等.丹参多糖的提取分离及结构鉴定[ J] .
中国中药杂志 , 2006 , 31(13):1075-1077.
[ 收稿日期] 2009-01-23
[作者简介] 李娟 ,女 ,学士 ,主管药师 ,电话:027-82937069 , E-m ail:laodajie@163.com
高效液相色谱法测定酮洛芬肠溶胶囊
和搽剂的含量
李娟　(武汉市食品药品监督检验所 ,湖北 武汉 430012)
[ 摘要] 　目的:建立高效液相色谱法测定酮洛芬肠溶胶囊和
搽剂的含量 ,为质量控制提供有效的分析手段。方法:色谱
柱为 Venusil M p-C18(150 mm×4.6 mm , 5 μm);流动相为乙
睛-水-磷酸盐缓冲液(43∶5∶2);流速 1.0 mL·min-1 ;检测波
长 255 nm , 样品用流动相超声溶解 ,并定量稀释制成每 1 mL
中约含酮洛芬0.1 mg 的溶液。 结果:制剂中辅料和有关物
质对主药无干扰 , 酮洛芬的线性范围为0.01 ～ 1 g·L-1(r=
1.000 0);最低检测限为 0.3 mg·L-1 ;定量限为 1 mg·L-1 ;
日内精密度 RSD 为 0.54%(n =6);日间精密度 RSD 为
0.70%(n=6);酮洛芬肠溶胶囊的平均回收率为100.6%(n
=9);酮洛芬搽剂的平均回收率为101.0%(n=9)。结论:此
法操作简便 、灵敏 、准确 , 重复性好 , 适用于酮洛芬肠溶胶囊
和搽剂的含量测定。
[ 关键词] 　高效液相色谱法;酮洛芬肠溶胶囊和搽剂;含量
测定
[中图分类号] R927.2　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-
5213(2010)09-0798-03
　　酮洛芬(ketopr ofen)为非甾体抗炎药 , 除抑制环氧化酶
外 ,尚有一定抑制脂氧酶及减少缓激肽的作用 , 减轻炎症和
损伤部位疼痛感觉 , 此外尚有一定的中枢性镇痛作用;临床
主要用于治疗强直性脊柱炎 、风湿性关节炎及骨关节炎。酮
洛芬肠溶胶囊及搽剂系中国药典 2005 年版二部收载品
种[ 1] ,其他各国药典均未收载。中国药典中酮洛芬肠溶胶囊
含量测定方法采用容量法 , 用0.1 mo l·L-1氢氧化钠滴定液
滴定 ,酮洛芬搽剂含量测定方法采用紫外分光光度法 ,在 255
nm 波长处测定 , 2 种方法专属性均不强。本研究建立了高
效液相色谱法测定酮洛芬肠溶胶囊和搽剂的含量 , 使测定方
法专属性更强 ,测定数据更准确 , 可用于酮洛芬肠溶胶囊和
搽剂的含量测定 ,更好控制产品质量。
1　材料
Ag ilent1100 高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);Wa-
te rs2695 高效液相色谱仪(美国沃特斯公司);UV2550 紫外
可见分光光度计;酮洛芬对照品(中国药品生物制品检定所 ,
批号 100337-200502);酮洛芬肠溶胶囊样品 A 厂家(批号
080104)、B 厂家(批号 080102)、C 厂家(批号 070801);酮洛
芬搽剂样品 H 厂家(批号 20070401);乙腈为色谱纯;其他试
剂均为分析纯;水为纯化水。
2　方法与结果
2.1　溶液的制备
2.1.1　酮洛芬对照品溶液　精密称取酮洛芬对照品适量 ,
加流动相制成 1 g·L-1的溶液 , 即得。
2.1.2　酮洛芬肠溶胶囊样品溶液　取本品 , 除去胶囊壳 ,内
容物混合均匀 ,精密称取适量(约相当于酮洛芬 25 mg), 加
流动相适量 ,超声处理 20 min 使溶解 , 用流动相定量稀释制
成0.1 g·L -1的溶液 ,摇匀 , 滤过 , 即得。
·798· 中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 9期 Chin H osp Pharm J , 2010 May , Vol 30 , No.09