全 文 ： Apr 2015 CHINA FOOD SAFETY 99
科技文苑
裂 褶 菌（S c h i z o p h y l l u m
commune.） 又 名 白 参， 树 花 等。
裂褶菌在真菌分类上隶属于担子
菌 亚 门（Basidiomycoti）、 层 菌 纲
（Hymenomycetes）、伞菌目（Agaricales）、
裂褶菌科（Schizophyllaceae）、裂褶菌
属（Schizophyllum），是一种具有较高
营养和药用价值的大型真菌。裂褶菌性
平，味甘，具有滋补强壮，扶正固本和
镇静作用，可治疗神经衰弱，精神不振，
头昏耳鸣和出虚汗等。裂褶菌多糖（SPG）
是从裂褶菌子实体，菌丝体或发酵液中
提取出来的水溶性多糖，
多糖广泛参与细胞的各种生命活
动而产生多种生物学功能 , 如增强免
疫特性、抗肿瘤、抗病毒、抗凝血、
延缓衰老等功能。在对多糖的结构及
其活性的研究中，科技人员注意到以
下问题：(1) 自然界中存在的多糖并不
都具有活性。(2) 有些多糖由于结构或
理化性质等障碍而不利于其生物学活
性的发挥。(3) 也有些多糖尽管药效良
好，但同时也会产生一些不良反应，
甚至毒副作用。(4) 有些从天然生物体
内分离的多糖活性较弱，有待进一步
提高。因此，采取一定的方法对多糖
结构进行适当修饰是解决以上问题的
根本途径。目前国内外对裂褶菌多糖
的研究主要集中在多糖提取、纯化及
结构分析方面，设计化学改性的报道
较少，本文就提取裂褶菌多糖，浓硫
酸法引入硫酸基团得到多糖硫酸酯及
其抗氧化活性进行探讨。
1. 方法
1.1 菌种活化
将保存菌种接至 PDA 平板，26 ℃
培养 7 d。
1.2 摇瓶培养
用内径为5 mm的打孔器在长满菌
丝的平板上打取带有菌丝的培养基圆
片，然后将该圆片接入液体培养基中，
每瓶接入 5片，置 26 ℃、110 rpm 震
荡器上培养 7 d。
1.3 裂褶菌胞外多糖提取
发酵物抽滤分离得发酵液于 70 ℃
浓缩至原体积的 1/10，加入无水乙醇
至终浓度 80 %，静置 48 h，后过滤得
沉淀，蒸馏水复溶后分别加入多糖溶液
1/50体积的 10 %亚铁氰化钾和 30 %
硫酸锌溶液，震荡30 min后静置12 h，
3000 rpm 离心 10 min，收集上清液置
65 ℃烘箱内烘干即得到胞外多糖。
1.4 多糖的硫酸化修饰
取浓硫酸 15 mL、正丁醇 5 mL 置
于三角瓶中，再加入浓硫酸25 mL搅拌，
冰浴冷却至 0 ℃，缓慢加入多糖粉末 1
g 并不断搅拌，于 0 ℃反应 30 min 氢
氧化钠中和后离心，上清液转移至透析
袋透析，每4 h换蒸馏水一次，透析24 h。
透析结束后加入无水乙醇至终浓度 80
%，静置 48 h，收集沉淀并干燥。
1.5 红外光谱扫描
称取干燥样品 1 mg，在玛瑙研钵
中充分磨细后，再加入 150 mg 干燥的
KBr，继续研磨至完全混匀。取 100 mg
混合物装于干净的压模内于 10 MPa 压
力下压制制成透明薄片，然后进行扫描。
1.6 抗氧化性检测
采用邻苯三酚自氧化法进行检
测多糖的抗氧化活性。8.4 mL 50
mmol/L Tris-HCl （PH 8.20） 缓 冲
液中加入 0.3 mL 多糖溶液，25 ℃水
浴 10 min，然后加入 25 ℃预温的 60
mmol/L 邻苯三酚 0.3 mL 充分混匀，
准确反应3 min加入5 %抗坏血酸0.15
mL 终止反应，静置 10 min 后在 420
nm 处测吸光度。以等体积 10 mmol/L
HCl 代替邻苯三酚溶液为空白调零，对
照组以等体积纯水代替样品，加样方
法见表 1。清除率按下式计算。
E = [(A0 — A) / A0] × 100%
裂褶菌胞外多糖的硫酸化修饰及红外
表征
□司丽娜　郑州市质量技术监督检验测试中心
摘　要：通过对提取出的裂褶菌胞外多糖的硫酸化修饰获得硫酸化多糖 , 用红外光谱检测硫酸化的结果。邻苯三酚自
氧化法对多糖和硫酸化多糖的抗氧化活性进行了比较。随着多糖溶液浓度的增加 , 胞外多糖和硫酸化胞外的抗氧化活性也
增强 .当多糖溶液浓度为 500 μg/mL 时，硫酸化胞外多糖对氧自由基的清除率达到 32.73 %，提高了 28.88 %。
关键词：裂褶菌多糖；硫酸化修饰；抗氧化；红外光谱
DOI:10.16043/j.cnki.cfs.2015.12.056
100 食品安全导刊 2015年4月
Technology科技科技文苑
式中：E，清除率，A 0 为对照组 OD 值，A 为样品组的 OD值
2 结果与分析
2.1 裂褶菌胞外多糖红外分析
500100015002000250030003500
65
70
75
80
1648.8804
1124.9459
621.7319
3430.8500
2924.6759
1453.5150
500100015002000250030003500
65
70
75
80
Wavenumber cm-1
Tr
an
sm
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王 1 of 1
硫酸化修饰多糖
未修饰多糖
图 1　裂褶菌胞外多糖红外分析
由图1可知，在1124 cm-1附近，
硫酸化修饰的多糖的峰增强。可以得
出通过浓硫酸法把硫酸根引入到多糖
上，得到硫酸多糖，所以通过浓硫法
可以对胞外多糖进行硫酸化修饰。而
在 2000 cm-1 附近修饰后的多糖红外
光谱中新出现了一个峰，这表明在硫
酸化过程中有新的物质生成。
2.2 抗氧化性检测结果
由图 2 可知，胞外多糖经硫酸化
修饰后其抗氧化活性显著提高，而且
随着浓度的增大，清除率也随着增大。
在试验浓度范围内，当多糖溶液浓度
为 500 μg/mL 时，硫酸化胞外多糖对
氧自由基的清除率达到 32.73 %，提
高了28.88 %。但在相同浓度条件下，
未修饰胞外多糖对氧自由基的清除率
比未修饰胞内多糖仅高了 2.20 %。
2.3 讨论与结论
裂褶菌胞外多糖及硫酸多糖红外
检测结果表明，浓硫酸法可以对多糖
进行硫酸化修饰，修饰结果可以通过
红外光谱定性分析，在 1124 cm-1 左
右有吸收，为 S=O 伸缩振动 , 证明硫
酸基已连接到多糖上。裂褶菌胞外多
糖及硫酸多糖抗氧化结果表明，当多
糖溶液浓度为 500 μg/mL 时，硫酸
化胞外多糖对氧自由基的清除率达到
32.73 %，提高了 28.88 %, 硫酸化
后的多糖的抗氧化性明显增强了。
还发现硫酸化后的胞外多糖的红
外光谱在 2000 cm-1 左右新出现了一
个峰，这表明在硫酸化过程中有新的
物质生成，而这种物质具体是什么还
不清楚，有待进一步的研究。
参考文献 :
[1] 王兆梅,李琳,郭祀远,等.糖
结构修饰研究进展 [J]. 国医药工业杂
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[2] 赖 萍 , 林 跃 鑫 . 天 然 多 糖
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[3] 王振河 , 霍云凤 . 裂褶菌及
裂褶菌多糖研究进展 [J]. 微生物学杂
志 ,2006,26(1):73-76.
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5
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20
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30
35
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多糖浓度（μg/mL）
清
除
率
（
%
）
未修饰胞外多糖
硫酸化修饰胞外多糖
图 2　胞外多糖抗氧化性