全 文 ：1 9 9 5 ; 2 2 (1 ) 生物化学与生物物理进展 P rog .吕i oc he二 BI ., p h y s . . 5 3 。
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19 8 9 ; 1 9
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正仁! y a e h k o N , eL v a s ho v A V , M a r t in e k K
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M o l B i o l
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1 G a nz u o
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J n s沐 r s i o n 反 1 T e e h n o l , 1 9 8 3 ;
4 : 1 9
蔡武城 . 袁厚积 . 生物物质常用化学分析法 . 北京 : 科学
出版社 , 1 9 8 2 : 8一 1 0
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1 0
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图 ` 徽乳液中冬对鲁双倒数曲线
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水溶液中粤对咨双倒数曲线
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参 考 文 献
F e n dl er J H
. 程虎民等译 . 膜模拟化学 . 北京 : 科学出版
社 , 1 9 9 1 : 2 0 0一 2 0 8
M a r t i n e k K
,
L e v a s h o v A V
,
K ly a e h ko N e t 以 . E u r J
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o e h e m
,
1 9 8 6 ; 1 5 5
: 4 5 3
L u i s i P L
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B io e h e m B i-o
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5 1 .〕 n . L i G a n z u o , R e n X u e z h e n , L i u y a n
(之介h o l of hC e m l’st yr ,· S h a n d o n g U n l’v e sr i yt ,
J i ” a n 2 5 0 10 0 , C h i n a ) ; W a n g F u n i n g
,
Z h e n g
H o n g y i n g ( D尸户a材 m e n t of B I O I O舒 , S h a n d o n g
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w i t h t h a t i n a q u e o u s s o l u t i o n
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t h a t t h e o P t im u n t e m P e r a t u r e a n d P H o f t h e
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, e e n t y l t r im e t h y l a m m
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b r o m id e
裂褶菌多糖的构象研究 `
周义发 张丽萍 杨庆尧’ ` 张翼伸
(东北师范大学生物系 , 长春 一3 0 0 2 4 )
摘要 从裂褶菌中提取一水溶性多搪 cs l . 气相色谱 . 高碘酸盐氧 化 , 甲基化分析等确定它为葡聚搪 .
1
一
3糖昔键构成其主链 , 平均三分之一的主链残基在 6 位带有分枝 . 红外光谱和三氧化铬氧化表明 cS l
全部残基为归构型 . 在不同的温度和不同的酸碱浓度状态下 , 检查 棍 链与刚果红形成络合物的能力以
, 国家自然科学基金资助项 目 . 上海师范大学生物系 . 收稿日期 : 1 9 9 3 一1 2一 25 , 修回日期 : 19 9 4 一。 2一 08
生物化学与生物物理进展 p r o g . B i oc h e m . B i o p h y s . 1 9 9 5 ; 2 2 ( 1 )
及 Sc l 水溶液的粘度和旋光值 . 推测低温近中性 Sc l 主要呈单股螺旋构象 . 升温或提高酸碱浓度导致
有规则的螺旋构象转变成无规则的线团 . 高碘酸盐氧化去掉分枝则多股螺旋比例在构象中增加 .
关镇词 裂褶菌多糖 , 构型 , 构象
裂褶菌多糖是一水溶性胞外多糖 , 存在于
细胞壁 , 能分成多种级分 . 国外已进行许多研
究 , 报道有较好的抗肿瘤活性 . 本文对人工发
酵产生的裂褶菌多糖的一个级分进行了构象行
为的探讨 .
1 材料和方法
1
.
1 样品制备
上海师范大学 S c 一 2 菌株 , 葡萄糖为碳源 ,
黄豆饼为氮源发酵培养 48 h . 发酵液经超滤 ,
真空薄膜浓缩 , 1 : 1 95 %的 乙醇在 o一 8℃醇
析得一多糖 . 此多糖溶在温水中 , S ve ag 法脱
蛋白三次 , 冰冻干燥得裂褶菌多糖 S 。 1 .
1
.
2 理化分析
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一
50 1 气相色谱仪 ( 国产 ) 测糖组成 lj[ .
A lp h a e e n t a u r i F i r i 红外光谱仪测红外光谱 ,
澳化钾压片 . 高碘酸盐氧化与 S m iht 降解按文
献仁2〕进行 . H a k o m o r i法 甲基化 [ , 〕 , P 一 E 9 1 o气
相 色谱仪与 70 7 0 2 一 H F双聚焦质谱仪联机分析 .
0
.
3m m X 5 0m 毛细管柱 , 3写O V 一 2 2 5 固定液 ,
恒温 1 7 0℃ , 程序升温 1 1 0一 2 0 5 oC , 3 ℃ /m i n ·
样品与三氧化铬反应按文献 [ 4〕进行 , 间隔一
定时间取出部分样 品进行气相色谱分析 . 5 。 1
和高碘酸盐氧化后的样品分别与刚果红水溶液
混合 , 加氢氧化钠调 p H , 测不 同氢氧化钠浓
度下的最大吸收波长 , aB o km a n D u 一 S B 紫外可
见分光光度计 , 自动扫描 . 乌氏四球毛细管粘
度计常规方法测不同酸碱浓度及不同温度下的
粘度 . W X G 一 6( 国产 ) 自动旋光仪 , 钠灯光源测
旋光值 .
2 结果和讨论
2
.
1 组成及结构
& 1呈白色丝状 , 溶于热水 , 冷水中略呈
胶状 . eS p ha or se C L 一4 B 柱层析 出现单一峰 ,
分子量约 1 90 0 0 . 气相色谱 、 高碘酸盐氧
化 、 甲基 化分析等表 明 cS l 为葡聚糖 , 纯度
95
.
5%
.
1
一
3 连接构成其主链 , 1 3/ 主链残基带
有仅一个残基的侧链 .
2
.
2 构型
cS l 与三氧化铬作用 , h2 后全部反应 . 文
献 〔4〕报道 a 型毗喃糖不与三氧化铬反应 , p型
进行反应 , 可见 S C I 构型为 日型 . 其红外光谱
在 890 。 m 一 `处有 p糖昔键引起的吸收峰 .
2
.
3 构象
2
.
3
.
1 与刚果红形成络合物试验 刚果红与
具有螺旋构象的多糖可形成络合物 , 主要和单
股螺旋部分结合 . 络合物的最大吸收波长较刚
果红移向长波阁 . 5 。 1 与刚果红络合物的最大
吸收波长随氢氧化钠浓度而变化 (图 1) .
三
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图 1 . 大吸收波长与 C No H的关系
一。 一。 一 : cS l ; 一 . 一一 : 高碘酸盐处理的 S C I ;
-一 : 纯刚果红 .
氢氧化钠浓度小于 0 . 35 m ol / L , 吸收移向
长波 , 表明糖与刚果红形成络合物 , cS l 呈有
规 则 的 螺 旋 构 象 . 氢 氧 化 钠 浓 度 大 于
.0 35 m ol / L
, 最大吸收波长降至基本与对照相
同 , 螺旋构象解体 , 变成无规则的线团形式 .
cS l 经高碘酸盐处理除掉侧链 , 此时与刚
果红络合物的最大吸收波长变化同原来相似 ,
但略有不同 . 最初随氢氧化钠浓度升高 , 最大
1 9 9 5; 2 2 ( l ) 生物化学与生物物理进展 P r o g. B loc h em . B io p h y s. . 5 5
吸收波长移向长波 , 然后再降至和对照相近 .
推测去掉侧链易形成螺旋构象 , 且多股为主 .
2
.
3
.
2 粘度和旋光值随温度变化的关系 多
糖以螺旋构象存在其比浓粘度较无规则线团
大 , 多股比单股还要大 ; 旋光性也增强 , 但单
股 比多股增强的幅度大 , 可能因单股较多股有
更大的空间不对称性困 .
cS l 水溶液比浓粘度 华p , 旋光值 味〕。 与温
度的关系见图 2 .
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图 3
. 一二 cS l 的 华, ,
n , 随酸玻度的变化
0 一。 : 高碘酸盐氧化后的 肠
一 \~ 、 、 、 _ 、 份 参 考 文 献
.的召工,切已。
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石德成 , 张具伸 . 东北师大学报 , 19 82 ; 3 : 43
T o m记a M . C h e m Pha r m B u ll , 19 7 2 仁 20 : 1 19
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.
J B ioc he m (OT k扣 ) , 19 6 4 . 5 5 : 2 0 5
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A e t a C he m 反 a nd . 1 9 7 2 ; 肠 : 6 6 1
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.
Y a d o山 a e T . aC r bo h yd r R e s , 1 9 8 7 ; 1 5 9 : 2 93
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C a r bo h yd
r R e s
,
19 8 6 ; 1 58
:
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图 2 , , 和 〔司 。 随沮度的变化
. 一 . : cS l 的 华 p , 0 一 。 : 高碘酸盐氧化后的
华 p , △一 △ : cS l 的 〔司。 , 口一 口 : 氧化后的 〔司 .D
15 ℃附近肠和 〔。 〕。 都明显下降 , cS l 构象
由螺旋变成无规则的线团 . 高碘酸盐氧化去掉
侧链 , 产生这种变化的温度在 20 ℃左右 , 肠变
化比原来增大 , 〔Q〕D 变化比原来减小 . 因此去
掉侧链形成螺旋构象趋势增强 , 三股螺旋的比
例增大 .
2
.
3
.
3 比浓粘度与酸碱浓度的关系 如图 3
所示 , 氢氧化钠浓度高于 0 . 35 m ol / L , 盐酸浓
度高于 0 . Zm ol / L , 乍p有一 显著变化 , 发生螺
旋到无规则线团的变化 . 去 掉侧链变化更明
显 , 因多股螺旋 比例增加 .
综上所述 , cS l 为葡聚糖 , 主链为 1一 3 连
接 , 侧链为 1一 6 糖昔键 . 低温近中性水溶液构
象呈有规则的螺旋形式 . 升高温度 , 酸和碱都
会破坏规则的螺旋构象 . 去掉侧链形成螺旋构
象的能力增强 , 多股螺旋 比例增加 .
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n al S t u d i es o n S e h ioz P h y l l
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Z h a n g Y i s h e n (场户a 厅enz t of B I O IO舒 , N 。八h
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e a st N 厉执 a l U n iv esr t’y , hC a n邵 h u n 1 3 0 0 2 4 ,
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1 U n iv esr t’y , S h a n g h a i 2 0 0 2 3 4 ,
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A b s t r a e t A w a t e r s o l u b l e s e h i z o p h y l l a n
( cS l ) w
a s is o l a t e d f r o m t h e f u n g u s S c h i z *
P勿 l l u m e om m u n e . G a s e h r o m a t o g r a p h y , p e -
r i o d a t e o x id a t io n
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e t h y l a t i o n a n a l y s is a n d
o t h e r e x P e r im e n t s s h o w e d t h a t t h e m a i n
e h a i n s a r e e o m p o s e d o f ( l
一 3 ) l in k e d g l u e o s e
r e s id u e s o n e t h ir d o f w h ie h h a v e s id e e h a i n s i n
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T h e r e s u l t o f o x id a t i o n w i t h
e h r o m i u m t r i o x id e a n d IR s u g g e s t e d t h a t a l l
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h e l ie a l e o n f o r m a t i o n i n
生物化学与生物物理进展 P r o g . B ioc h e m . B io Ph y s · 1 9 9 5 ; 2 2 ( l )
w a t e r s o l u t i o n a t l o w e r t e m P e r a t u r e
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h e l i e a l e o n f o r
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m a t i o n w i l l i n e r e a s e
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T h e h e l i e a l e o n f o r m a t i o n
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s l i g h t l y h i g h e r t e m p e r a t u r e
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K e y w o r d s s e h i z o p h y l l a n
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,
e o n f o r m a t io n
神经节昔脂 G M 3 对 J 6 一 2 细胞蛋白质
磷酸化的影响 `
董 征 马克里 韩 锐” 崔肇春
(大连医科大学生物化学教研室 , 大连 1 1 6 0 2 3)
摘要 通 过研究神经节昔脂 G M 3对国人单核样白血病细胞系 J 6 一 2细胞蛋 白质磷酸化的影响 , 在 [ 7 -
32 P ] A T P
,
G M
3 ,
A T P
,
M g汁与 J 6一 2 细胞液及颗粒两部分共同反应 , 1 0m i。 (3 。℃ ) 体系中 , 观察到
G M
3对两部分蛋白质磷酸化的调节作用 . G M 3 ( 1 0 0料m o l / L ) 促进颗粒部分分子量为 1 8 0 0 0 0 , 8 7 0 0 0 ,
7 8 0 0 0
,
6 7 0 0 0
,
4 3 0 0 0 及 3 1 0 0 0 的蛋白质磷酸化 , 促进胞液部分分子量为 8 7 0 0 0 及 5 6 0 0 0 的蛋白质
磷酸化 , 而且能抑制 70 0 0 及 43 00 蛋白质磷酸化 . 由于 G M : 已被前人证实能对 J6 一 2 细胞起分化作
用 , 其作用时间长达 4一 d6 , 很可能 G M : 对蛋白质磷酸化作用的调节是 G M 3 促分化作用的早期信号 .
关镇词 神经节昔脂 (G M 3 ) , 白血病细胞 , 蛋白质磷酸化
神经节昔脂 ( g a n g l i o s id e , G l s ) 广泛存在
于各种脊椎动物细胞质膜的外侧面 . 它不仅是
细胞膜的构件单位 , 而且可能在细胞的物质代
谢 、 分化 、 增殖及肿瘤发生方 面担任重要角
色 l1[ . lG s 对 白血病细胞系促分化前后形态 、 功
能 、 组织化学方面以及某些生化指标已有所报
导 2[] , 但对其促分化的机制仍属未知 . 由于 lG s
对蛋白激酶 C 作用的影响 , 以及蛋白激酶 C 在
信息传递中的重要作用 , 有理 由进一步探讨
G M
3 对蛋白质磷酸化作用的影响 , 尤其还应找
出有磷酸化变化的蛋白质 , 为进一步探讨 G M 3
对蛋白质的生物学功能的影响奠定基础 .
1 材料与方法
1
.
1 材料
单核样白血病细胞系 J 6一 2 细胞 (中国医学
科学院天津血液病研究所 ) , 新生小牛血清 (大
连旅顺龙头检验试剂厂 ) , R P M I 1 640 培养基
(美国 G I B CO 公司 ) , [下一 3 2 P ] A T P (北京福瑞
生物工程公司 ) , G M 3 为自行提取纯化 3[] (层析
纯 ) .
1
.
2 方法
L .2 1 J 6
一
2 细胞培养 用含 20 %小牛血清的
R PM I 1 6 4 0 培养液 , 3 7℃ , 5 % C O Z 孵育箱中培
养 .
L .2 2 J6
一
2 细胞胞液及颗粒部分的制备 [’]
收 集对 数 生 长 期 J 6 一 2 细胞 , 用 冷 P B S 洗两
遍 , 再用冷提取缓冲液 (件g l y e e r o p h o s p h a t e
s o m m o l / L ; E G T A Zo m m o l / L ; M g C 1
2
1 sm m o l / L ; N a
3
V O
4 l m m o l / L ; N a F 1 0m m o l / L ;
PM S F l m m o l / L ; p H 7
.
6 ) 洗两遍 . 匀浆液以
1 0 0 0 r /m i n 离心 l o m i n , 去掉沉淀 , 上清液 以
10 0 0 0她 离心 h1 , 上清液作为胞液部分 , 沉淀
溶解在含 0 . 1 % T ir ot n 一 X 1 0 的提取缓冲液中 ,
作为颗粒部分 . 用 H ar t er e 氏法 sj[ 测定各部分
` 国家自然科学基金资助项 目 .
二 大连医科大学附属二院 .
收稿日期 : 19 9 4一 0 1一 0 7 , 修回 日期 : 1 9 9 4一 0 7一 2 1