全 文 ：间 (10、20、30、60 min)的提取效率。综合考虑
提取效率和溶剂用量，选择 50 倍量 75%甲醇超声
提取 30 min。
3. 2 检测指标的选择 马钱子在处方中起着重要
作用，具有通络止痛、散结消肿的功效。士的宁和
马钱子碱既是其中主要有效成分，也是有毒成
分［11-12］，因此士的宁和马钱子碱是痹祺胶囊质量
控制的关键指标。丹参活血化瘀、通络止痛，主要
成分为丹酚酸 B、丹参酮ⅡA 和隐丹参酮;甘草调
和诸药，甘草苷和甘草酸为其主要成分。综上所
述，本实验选取士的宁、马钱子碱、甘草苷、丹酚
酸 B、甘草酸、隐丹参酮和丹参酮ⅡA 作为检测指
标，能更全面反映痹祺胶囊的质量，保证临床用药
的安全性和有效性。
3. 3 检测波长的选择 由于本实验选取的 7 个检
测指标的最大吸收波长不同，因此为了达到检测灵
敏度高、干扰小且真实反映痹祺胶囊各个有效成分
含有量的目的，采用波长切换的方法。结合各化合
物的最大吸收波长和出峰时间，利用二级阵列管检
测器波长切换的功能，确定了检测波长。
3. 4 质谱离子模式的选择 由于本实验选取的 7
个检测指标在正、负离子模式的响应不同:士的
宁、马钱子碱、甘草苷、隐丹参酮和丹参酮ⅡA 在
正离子检测模式下响应高;丹酚酸 B、甘草酸在负
离子检测模式下响应高，最终确定离子检测模式为
0 ～ 14 min:正离子检测模式;14 ～ 28 min:负离子
检测模式;28 ～ 50 min:正离子检测模式。
参考文献:
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医问药，2008(9) :28．
HPLC法同时测定返魂草颗粒中 6 种活性成分
马鸿雁1，2， 杨 莉1， 王长虹1， 王峥涛1*
(1. 上海中医药大学中药研究所 中药标准化教育部重点实验室，上海 201203;2. 广东药学院中药学院，
广东 广州 510000)
收稿日期:2011-12-20
基金项目:上海市科学技术委员会择优委托项目 (09dZ1974302) ;中药现代化专项资助 (10DZ1975900)
作者简介:马鸿雁 (1981—) ，女，生药学博士，从事中药活性物质基础研究。Tel: (020)39352327，E-mail:Hongyan203@ 126. com
* 通信作者:王峥涛，教授。Tel: (021)51322507，E-mail:wangzht@ hotmail. com
摘要: 目的 利用 HPLC法同时测定返魂草颗粒中同型原儿茶酸、原儿茶酸、对羟基苯乙酸、绿原酸、咖啡酸和金
丝桃苷。方法 以 Agilent Zorbax SB-C18色谱柱 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，乙腈-0. 1%三氟乙酸溶液梯度洗脱，体
积流量 1. 0 mL /min，柱温 30 ℃，检测波长 280 nm。结果 6 种成分均达到基线分离，同型原儿茶酸、原儿茶酸、对
羟基苯乙酸、绿原酸、咖啡酸和金丝桃苷的质量浓度与峰面积，分别在 1. 14 ～ 114 μg /mL (r = 0. 999 9)、0. 74 ～ 186
μg /mL (r = 0. 999 2)、5. 26 ～ 526 μg /mL (r = 0. 999 8)、2. 88 ～ 288 μg /mL (r = 0. 999 8)、1. 50 ～ 148 μg /mL (r =
0. 999 9)、1. 42 ～ 205 μg /mL (r = 0. 999 9)范围呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为 100. 4%、99. 4%、
98. 4%、99. 5%、96. 2%、97. 6%;RSD 分别为 1. 3%、2. 2%、2. 2%、3. 6%、1. 8%、3. 4%。结论 该方法准确，
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简便，灵敏，为返魂草颗粒的质量评价提供了依据。
关键词:返魂草颗粒;有机酸;黄酮;HPLC
中图分类号:R927． 2 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2012)08-1496-05
Simultaneous determination of six active components in Fanhuncao Granule
by HPLC
MA Hong-yan1，2， YANG Li1， WANG Chang-hong1， WANG Zheng-tao1*
(1. Key Laboratory of Standardization of Chinese Medicine，Ministry of Education，Shanghai Univeristiy of Traditional Chinese Medicine，Shanghai
201203，China;2. School of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Pharmaceutical College，Guangzhou 510006，China)
ABSTRACT:AIM To develop an HPLC method for simultaneously determining homoprotocatechuic acid，proto-
catechuic acid，p-hydroxy benzeneacetic acid，chlorogenic acid，caffic acid and hyperoside in Fanhuncao Granule
(Senecio cannabifolius Less or Senecio cannabifolius var． integrilifolius)． METHODS Agilent Zorbax SB-C18
column (4. 6 mm ×250 mm，5 μm)was used with acetonitrile-1% trifluoroacetic acid as the mobile phase in gra-
dient elution． The flow rate was 1 mL /min． The column temperature was maintained at 30 ℃，and the detection
wavelength was set at 280 nm． RESULT Six active components were in baseline separation． Homoprotocatechuic
acid was linear in the range from 1. 14 to 114 μg /mL (r = 0. 999 9)and the average recovery was 100. 4% (RSD
= 1. 3%)． Protocatechuic acid was linear in the range from 0. 74 to 186 μg /mL (r = 0. 999 2)and the average re-
covery was 99. 4% (RSD =2. 2%)． p-Hydroxy benzeneacetic acid was linear in the range from 5. 26 to 526 μg /
mL (r = 0. 999 8)and the average recovery was 98. 4% (RSD =2. 2%)． Chlorogenic acid was linear in the range
from 2. 88 to 288 μg /mL (r = 0. 999 8)and the average recovery was 99. 5% (RSD = 3. 6%)． Caffic acid was
linear in the range from 1. 50 to 148 μg /mL (r = 0. 999 9)and the average recovery was 96. 2% (RSD =1. 8%)．
Hyperoside was linear in the range from 1. 42 to 205 μg /mL (r = 0. 999 9)and the average recovery was 97. 6%
(RSD = 3. 4%)． CONCLUSION The method is accurate，simple and feasible． It can be used as a quality
evaluation for Fanhuncao Granules．
KEY WORDS:Fanhuncao Granules;organic acids;flavonids;HPLC
返魂草颗粒，又名肺宁颗粒，是以麻叶千里光
Senecio cannabifolius Less或其变种单麻叶千里光 Se-
necio cannabifolius var． integrilifolius为原料制成的单
方制剂。该成药被广泛用于治疗肺内感染、慢性支
气管炎、喘息性支气管炎等［1］。卫生部部颁标准
仅有采用薄层色谱法对返魂草颗粒定性鉴别的描
述，部分学者采用 HPLC法对返魂草颗粒中绿原酸
和咖啡酸的含有量进行了测定［2-6］，但尚未见对其
多种成分含有量的研究报道。国内学者对返魂草的
化学成分进行了系统的研究，发现该草药富含有有
机酸类和黄酮类成分，这两类都显示出多种生物活
性［7-12］。因此，以有机酸和黄酮为指标性成分建立
该制剂的含有量测定方法，对于更加系统、有效地
评价该制剂的质量具有重要意义，并能为含有同属
植物的制剂的质量控制提供参考。
1 仪器与试药
Agilent 1100 型高效液相色谱仪 (自动进样器，
四元泵，柱温箱，DAD检测器) (Agilent，美国) ，
KQ-250DB 数控超声波清洗仪 (昆山市超声仪器有
限公司) ，BP211D型电子天平 (Satorius Co． Ltd．，
德国)。
甲醇、三氟乙酸均为分析纯 (上海国药集团
试剂有限公司) ，乙腈 (色谱纯，Merck 公司) ，
超纯水为 Milli-Q 处理水 (Millipore Co．)。对照品
同型原儿茶酸、原儿茶酸、对羟基苯乙酸、绿原
酸、咖啡酸、金丝桃苷为自制，纯度经高效液相色
谱按面积归一化法测定均大于 98%。返魂草颗粒;
市售，厂家 1 (批号 080101，070909) ，厂家 2
(批号 071208，070103) ;厂家 3 (批号 20071213，
20080113) ;厂家 4 (批号 20080109，20080127) ;
厂家 5 (批号 20071121)。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Agilent Zorbax SB-C18色谱柱 (4. 6
mm × 250 mm，5 μm) ;体积流量 1. 0 mL /min;柱
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温 30 ℃;进样量 20 μL;流动相为乙腈 (A)-
0. 1%三氟乙酸溶液 (B) ，洗脱程序如下:0 min
2% A，23 min 11% A，45 min 22% A;平衡时间
11 min;紫外数据采集范围为 200 ～ 400 nm，检测
波长 280 nm。按照上述色谱条件进行测定，结果
显示，各待测组分得到很好的分离，与相邻组分分
离度均大于 1. 5，各成分理论塔板数不低于 3 000。
对照品与代表样品的色谱图见图 1。
图 1 对照品 (A)及样品 (批号 071208) (B)
HPLC色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of mixed reference
substance (A ) and sample (lot No．
071208) (B)
1. 同型原儿茶酸 2. 原儿茶酸 3. 对羟基苯乙酸 4. 绿原
酸 5. 咖啡酸 6. 金丝桃苷
1. homoprotocatechuic acid 2. protocatechuic acid 3. p-hydroxy
benzeneacetic acid 4. chlorogenic acid 5. caffic acid
6. hyperoside
2. 2 对照品溶液的制备 分别取对照品同型原
儿茶酸 (3，4-二羟基苯乙酸)、原儿茶酸、对羟
基苯乙酸、绿原酸、咖啡酸、金丝桃苷适量，
精密称定，同置一量瓶中，用 50% 甲醇溶解，
制成含上述对照品 114、186、526、1 440、
148、122、710 μg /mL 的混合溶液，作为对照
品贮备溶液 dz-1。
2. 3 供试品溶液制备 称取返魂草制剂 1. 0 g，精
密称定，加入水，溶解，定容到 10 mL，摇匀，过
0. 45 μm微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
2. 4 线性关系考察 将对照品贮备溶液 dz-1 适量
稀释至不同质量浓度，分别进样 20 μL，以进样量
对色谱峰面积进行最小二乘法线性回归，分别绘制
各对照品的标准曲线。逐步稀释样品，按信噪比为
3 和 10 分别计算最低检测限 (LOD)和最低定量
限 (LOQ)。同型原儿茶酸，原儿茶酸，对羟基苯
乙酸，绿原酸，咖啡酸，金丝桃苷的回归方程分别
为 Y = 14. 424X － 1. 759 4 (r = 0. 999 9) ，Y =
26. 939X － 30. 8 (r = 0. 999 2) ，Y = 9. 382 5 X +
9. 630 1 (r = 0. 999 8) ，Y = 28. 813X － 32. 397 (r
= 0. 999 9 ) ，Y = 20. 414X + 1. 187 6 (r =
0. 999 9) ，Y = 20. 383X － 12. 108 (r = 0. 999 9)。
结果表明，6 个测定成分的线性范围分别为 1. 14 ～
114. 0 μg /mL、0. 74 ～ 186 μg /mL，5. 26 ～ 526
μg /mL，2. 88 ～ 288 μg /mL，1. 50 ～ 148 μg /mL，
1. 42 ～ 205 μg /mL。6 个测定成分的 LOD 分别为
0. 25、0. 16、0. 18、0. 13、0. 14、0. 03 μg /mL。6
个测定成分的 LOQ 分别为 0. 76、0. 54、0. 46、
0. 41、0. 47、0. 11 μg /mL。
2. 5 精密度实验 精密吸取同一质量浓度的混合
对照品溶液，在 2. 1 项下色谱条件，重复进样 6
次，记录峰面积。同型原儿茶酸、原儿茶酸、对羟
基苯乙酸、绿原酸、咖啡酸、金丝桃苷峰面积的
RSD 分别为 1. 00%、2. 00%、1. 66%、1. 13%、
2. 70%、1. 23%。
2. 6 重复性实验 精密称取返魂草颗粒 6 份，按
2. 3 项下制备供试品溶液，进样测定，结果同型原
儿茶酸、原儿茶酸、对羟基苯乙酸、绿原酸、咖啡
酸、金丝桃苷峰面积的 RSD 分别为 1. 10%、
2. 80%、3. 60%、2. 16%、2. 78%、3. 20%。
2. 7 稳定性实验 取返魂草颗粒供试品溶液，分
别在 0、8、12、16、24 h，在 2. 1 项下色谱条件测
定，并记录峰面积。同型原儿茶酸、原儿茶酸、对
羟基苯乙酸、绿原酸、咖啡酸、金丝桃苷峰面积的
RSD 分别为 1. 84%、2. 07%、2. 59%、3. 49%、
3. 79%、1. 90%。说明供试品溶液在 24 h 稳定性
良好。
2. 8 加样回收率实验 精密称定已知含有量的返
魂草颗粒 (批号 071208)5 份，每份 0. 5 g，分别
精密加入对照品溶液，按 2. 3 项下操作制备供试
液，进样 20 μL，记录各色谱峰峰面积，计算平均
回收率，结果见表 1。
2. 9 样品测定 按 2. 3 项下操作制备供试液，进
样 20 μL，在上述色谱条件下测定，计算 6 种成分
的质量分数，结果见表 2。
3 讨论
本实验对色谱柱、流动相及检测波长等方面进
行了考察、优化。分别考察了 Ultmate RP18 (150
mm × 4. 6 mm，5 μm) ，Phenomex polar C12 (250
mm ×4. 6 mm，5 μm) ，Agilent SB-C18 (250 mm ×
4. 6 mm，5 μm)等不同厂家的色谱柱，结果显示
Agilent SB-C18 (250 mm ×4. 6 mm，5 μm)的分离
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表 1 回收率测定结果 (n =5)
Tab. 1 Recovery results of the analytes (n =5)
组分
样品中
量 /mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率
/%
平均回收率
/%
RSD
/%
组分
样品中
量 /mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率
/%
平均回收率
/%
RSD
/%
同型原儿 0. 227 0. 227 0. 456 100. 4 100. 44 1. 3 绿原酸 0. 143 0. 143 0. 298 104. 3 99. 48 3. 6
茶酸 0. 228 0. 227 0. 454 99. 8 0. 143 0. 143 0. 282 98. 7
0. 226 0. 227 0. 447 98. 7 0. 142 0. 143 0. 276 97. 0
0. 229 0. 227 0. 460 101. 0 0. 143 0. 143 0. 273 95. 4
0. 226 0. 227 0. 464 102. 3 0. 142 0. 143 0. 291 102. 0
原儿茶酸 0. 281 0. 281 0. 545 97. 1 99. 42 2. 2 咖啡酸 0. 012 0. 012 0. 023 95. 6 96. 22 1. 8
0. 281 0. 281 0. 573 101. 8 0. 012 0. 012 0. 023 96. 4
0. 279 0. 281 0. 545 97. 3 0. 013 0. 012 0. 024 94. 3
0. 282 0. 281 0. 561 99. 7 0. 012 0. 012 0. 024 99. 1
0. 279 0. 281 0. 567 101. 2 0. 012 0. 012 0. 023 95. 7
对羟基苯 0. 097 0. 097 0. 187 96. 4 98. 40 2. 2 金丝桃苷 0. 122 0. 122 0. 234 95. 8 97. 62 3. 4
乙酸 0. 097 0. 097 0. 189 97. 5 0. 123 0. 122 0. 238 97. 2
0. 096 0. 097 0. 188 97. 6 0. 122 0. 122 0. 232 95. 4
0. 097 0. 097 0. 191 98. 4 0. 123 0. 122 0. 253 103. 4
0. 096 0. 097 0. 197 102. 1 0. 122 0. 122 0. 235 96. 3
表 2 样品的测定结果
Tab. 2 Determination results of samples
编号 批号
同型原儿茶酸 /
(mg·g － 1)
原儿茶酸 /
(mg·g － 1)
对羟基苯乙酸 /
(mg·g － 1)
绿原酸 /
(mg·g － 1)
咖啡酸 /
(mg·g － 1)
金丝桃苷 /
(mg·g － 1)
1 080101 － － － 0. 173 － －
2 070909 0. 339 0. 476 0. 215 0. 181 0. 005 0. 048
3 071208 0. 454 0. 560 0. 193 0. 285 0. 023 0. 244
4 070103 0. 466 0. 721 0. 223 0. 467 0. 025 0. 305
5 20071213 0. 235 0. 450 0. 124 0. 119 0. 007 0. 044
6 20080113 0. 288 0. 758 0. 257 0. 138 0. 004 0. 024
7 20080109 － － － － － －
8 20080127 － － － － － －
9 20071121 － － － 0. 742 0. 014 0. 077
注: －表明质量分数低于检测限。
效果优于其它色谱柱。
在检测波长的选择中，绿原酸和咖啡酸在 312
nm和 325 nm处有最大吸收，对羟基苯乙酸在 225
nm和 275 nm 处有最大吸收，原儿茶酸在 260 mn
和 295 nm有最大吸收，同型原儿茶酸在 290 nm有
最大吸收，金丝桃苷在 280 nm和 360 nm有最大吸
收，经实验比较，280 nm 检测 6 个化学对照品均
有较强的吸收，且干扰较小。在流动相的选择中，
比较了乙腈-水，甲醇-水，乙腈-0. 5%乙酸，乙腈-
0. 1%磷酸，乙腈-0. 1%三氟乙酸等系统，结果表
明如果流动相中不加酸，峰形很差，乙腈-0. 1%三
氟乙酸系统的条件为最佳，三氟乙酸不仅可改善色
谱峰的拖尾，而且由于其具有的离子对效应，对色
谱峰的分离度和峰形等都具有较好的效果。
样品测定结果显示，不同厂家的产品中 6 种产
品测定成分的质量分数差异很大，即使是同一厂家
(样品 1 与样品 2，样品 3 与样品 4，样品 5 与样品
6) ，不同批号之间的差别也比较大，而来自厂家 3
的样品 7 和样品 8 中这几种成分均未检测到。这反
映出不同厂家的返魂草颗粒生产工艺不统一，其投
料的药材质量不稳定。而厂家 3 的样品其投料的原
药材究竟是否是返魂草有待进一步考证。
本实验选用 HPLC-UV 法首次建立了同时测定
返魂草颗粒中 6 种有效成分含有量的方法，以表征
该制剂的质量。建立的方法简便，灵敏度高，结果
可靠，可用来全面评价和监测返魂草颗粒的质量。
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夏桑菊颗粒质量标准研究
林丽美1，2，3， 许招懂2， 姚江雄2， 刘菊妍3， 李 春4， 王智民4*
(1． 湖南中医药大学，湖南 长沙 410208;2． 广州星群 (药业)股份有限公司，广东 广州 510288;
3． 广州医药集团有限公司，广东 广州 510130;4． 中国中医科学院中药研究所，北京 100700)
收稿日期:2011-09-26
基金项目:湖南省科技厅项目 (2011FJ7008) ;湖南省教育厅项目 (11C0958)
作者简介:林丽美 (1979—) ，女，副教授，从事中药物质基础及质量标准化研究。Tel: (0731) 88458232，E-mail:lizasmile
@ 163. com
* 通信作者:王智民 (1964—) ，男，研究员，博士研究生导师，从事中药化学标准化研究。Tel: (010)84014128，E-mail:zhmw123
@ 263. net
摘要:目的 建立夏桑菊颗粒 (夏枯草、桑叶、野菊花)的质量标准。方法 采用薄层色谱法 (TLC)对夏桑菊颗粒
中的迷迭香酸和蒙花苷进行定性鉴别;采用反相高效液相色谱法 (RP-HPLC)对迷迭香酸和蒙花苷分别进行定量测
定，色谱柱 Agilent Eclipse XDB-C18 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，体积流量 1. 0 mL /min，柱温 30 ℃，进样体积 10 μL，
检测波长 329 nm，流动相分别为 20%乙腈-80%水 (含 1. 0%醋酸)和 25%乙腈-75%水 (0. 5%磷酸)等度洗脱。结
果 薄层鉴别均斑点清晰，阴性对照无干扰;定量测定中迷迭香酸进样在 0. 22 ～ 8. 80 μg范围内，与峰面积线性关系
良好 (r = 0. 999 9) ，平均回收率为 101. 08%，RSD为 1. 75%。蒙花苷在 0. 101 ～ 2. 02 μg范围内，与峰面积线性关系
良好 (r = 0. 999 6) ，平均回收率为 102. 01%，RSD 为 0. 48%。结论 所建立方法操作简单、专属性和重复性良好，
可作为该制剂的质量控制方法之一。
关键词:夏桑菊颗粒;质量标准;TLC;RP-HPLC;迷迭香酸;蒙花苷
中图分类号:R927． 2 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2012)08-1500-06
Quality standards for Xiasangju Granules
LIN Li-meil，2，3，， XU Zhao-dong2， YAO Jiang-xiong2， LIU Ju-yan3， LI Chun4， WANG Zhi-min4*
(1. Hunan University of Chinese Medicine，Changsha 410208，China;2. Guangzhou Xingqun Pharmaceutical Co．，Ltd．，Guangzhou 510288，China;
3. Guangzhou Pharmaceutical Holdings Ltd．，Guangzhou 510130，China;4. Institute of Chinese Materia Medica，China Academy of Chinese Medical Sci-
ences，Beijing 100700，China)
ABSTRACT:AIM To establish the quality standard for Xiasangju Granules (Prunellae Spica，Mori Folium，
Chrysanthemi indici Flos)． METHODS Rosmarinic acid and linarin in Xiasangju Granules were identified by
TLC and the contents of rosmarinic acid and linarin were determined by RP-HPLC． Chromatography conditions were
Agilent Eclipse XDB-C18 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)column with mobile phase of 20% acetonitrile-80% water
(1. 0% acetic acid)for rosmarinic acid and 25% acetonitrile-75% water (0. 5% phosphoric acid)for linarin，re-
0051
2012 年 8 月
第 34 卷 第 8 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
August 2012
Vol. 34 No. 8