全 文 ：收稿日期:2011-02-15; 修订日期:2011-10-08
基金项目:吉林省科技厅科技发展计划项目(No． 20090901)
作者简介:刘伟峰(1982-) ，男(汉族) ，吉林德惠人，现为吉林农业大学硕
士研究生，主要从事药用菌物学研究工作．
* 通讯作者简介:王 琦(1963-)，女(汉族)，黑龙江齐齐哈尔人，现任食药
用菌教育部工程研究中心教授，博士学位，主要从事菌物学研究工作．
裂褶菌液体发酵多糖
对荷瘤小鼠化疗的减毒增效作用
刘伟峰，陈 莹，王 琦*
(吉林农业大学 食药用菌教育部工程研究中心，吉林 长春 130118)
摘要:目的 研究裂褶菌(Schizophyllum commne)胞内多糖(SPG1)、胞外多糖(SPG2)对环磷酰胺(CTX)化疗 S180荷瘤小
鼠的减毒增效作用。方法 建立荷瘤小鼠模型，随机分为 8 组，即空白对照组，CTX(30 mg /kg)阳性药组，SPG1 高、中、低
(500，250，125 mg /kg)联合 CTX组，SPG2 高、中、低(500，250，125 mg /kg)联合 CTX 组。空白对照组 ip 生理盐水 20 ml /
kg，给药组 ip不同剂量多糖 20 ml /kg，连续给药 10 d，停药次日处死小鼠，测定各组荷瘤小鼠体质量、瘤重、脾重及胸腺
重。结果 中、低剂量 SPG1 与 SPG2 联合 CTX 治疗可抑制肿瘤生长，与 CTX 组无显著差别，最大抑瘤率为 74． 48%;与
CTX组相比，联合治疗可使荷瘤小鼠体重有不同程度增加，中、低剂量 SPG1 与 SPG2 联合 CTX给药组与 CTX组差异具有
极显著意义(P ＜ 0． 01) ;与 CTX组相比，CTX + SPG2 低剂量合用组小鼠的胸腺系数有显著性升高(P ＜ 0． 05) ，脾系数有
极显著性升高(P ＜ 0． 01)。结论 裂褶菌发酵多糖作为生物反应调节剂可提高机体的免疫力，提高 CTX化疗作用的同时
减轻其毒性，起到了减毒增效的作用。
关键词:裂褶菌; 液体发酵多糖; 环磷酰胺; 减毒增效
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 02． 030
中图分类号:R285． 5 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2012)02-0321-02
裂褶菌 Schizophyllum commune Fr．又名白参(云南)、树花(陕
西)、八担柴等，隶属担子菌亚门(Eumycophyta)、层菌纲(Basidio-
mycetes)、伞菌目(Agaricales)、裂褶菌科 Schizophyllaceae、裂褶菌
属(Schizophyllum) ，是一种食药兼用菌［1］。其分布广泛，在民间
被广泛用于治疗小儿盗汗、妇女白带增多、神经衰弱、头昏耳鸣等
症［2］。在我国西南诸省，孕妇分娩后，常用裂褶菌和鸡蛋煮汤食
用，促使产妇子宫提早恢复正常，并促进产妇分泌乳汁［3］。裂褶
菌多糖是指从裂褶菌子实体、菌丝体以及发酵液中提取出来的水
溶性多糖，是裂褶菌中最主要的生物活性物质之一，具有抗肿瘤、
抗菌消炎、抗辐射、提高机体免疫力等多种药理活性，分子量 4 ×
104，由单一组分的 β －(1 － 3)－ D葡聚糖组成，其中每 3 个葡萄
糖分子上连有一个 β －(1 － 6)的分支［4 ～ 6］。
恶性肿瘤是危害人类健康和生命的严重疾病之一。目前，化
学治疗是肿瘤治疗中必不可少的手段之一，但单纯化疗常引起免
疫抑制，导致恶性反复感染，机体衰弱，时常出现各种不同程度
的毒副反应，预后不良而加速患者的死亡［7］。如何提高肿瘤组
织对化疗的敏感性、减轻其毒副反应，是肿瘤治疗领域中备受重
视、并且值得探讨的问题。环磷酰胺(CTX)作为临床常用的化疗
药物，不仅干扰淋巴细胞的增殖，而且对免疫系统有抑制作用。
因此，寻找新的高效低毒抗癌药物或抗癌减毒增效剂，探索具有
抗肿瘤作用的天然活性成分是人类战胜恶性肿瘤的可能途径之
一［8］。据报道裂褶菌发酵多糖提取物具有免疫调节作用，对 S －
37、S180、艾氏腹水瘤等有较强的抑制作用
［9 ～ 12］。本实验通过建
立 S180荷瘤小鼠模型，研究裂褶菌发酵多糖与 CTX联合应用对肿
瘤治疗的减毒增效作用，为裂褶菌发酵多糖作为化疗辅助药的进
一步开发利用提供科学依据。
1 材料
1． 1 菌株 裂褶菌菌种由四川省绵阳市食用菌研究所提供。
1． 2 动物及瘤株 昆明种小鼠，雌性，体质量(20 ± 2)g，6 周龄，
由长春高新医学实验动物中心提供，合格证号:10 － 5113。肉瘤
S180，购于吉林省肿瘤研究所。
1． 3 仪器 电子天平(梅特勒 AL104)、生物洁净工作台(北京东
联 BCN － 1360)、旋转蒸发仪(上海亚荣 RE － 52AA)、恒温振荡
器(江苏金坛 SHZ － 88)、真空泵(北京莱伯泰科 VP30)、鼓风干
燥箱(上海福玛 DHG －92438)。
1． 4 试剂 阳性药:复方环磷酰胺(CTX)片，通化茂祥制药有限
公司产品，规格为每片含环磷酰胺 50 mg，人参茎叶总皂苷 50
mg，批号:090601。葡萄糖、硫酸镁、磷酸二氢钾均为国产分析纯。
2 方法
2． 1 裂褶菌液体发酵培养 将配制好的综合培养基分装入容量
为 250 ml的三角瓶内，每瓶装液量为 100 ml，121℃，20 min 灭
菌、冷却至室温备用。在超净工作台上，每瓶接种直径为 6 mm
的菌饼 5 ～ 7 片。接种后静置培养 12 h 后置于 26℃，120 r /min
摇床上培养 7 d［13］，然后转入装有 400 ml综合培养基的 1 000 ml
三角瓶中，置于 26℃，120 r /min摇床上培养 7 d，发酵结束后，抽
滤分离菌丝体及发酵液，菌丝体 60℃烘干至恒重，备用。
2． 2 裂褶菌胞内(外)多糖的提取与纯化 收集的菌丝体按液料
比 1∶ 5 在室温条件下用蒸馏水超声提取 1 次，每次 30 min，超声
频率 70 Hz，然后置于 80℃的恒温水浴锅中浸提 5 次，浸提的时
间分别为 5，4，3，2，1 h。合并水提液，加入 0． 5%的活性炭吸附
20 min，过滤脱碳，减压浓缩，用 3 倍体积的 95%乙醇进行沉淀，
于 4℃冰箱中静置过夜。将获得的白色纤维状沉淀，复溶，用 3
倍体积的 95%乙醇再沉淀，重复 3 次，收集沉淀，再用无水乙醇
洗涤 3 次，直至析出液中无还原糖反应为止。于 60℃条件下烘
干，得裂褶菌胞内多糖(SPG1)［14］。
发酵液活性炭脱色，过滤，减压浓缩，用等 3 倍体积的 95%
乙醇进行沉淀，与胞内多糖的纯化方法相同，于 60℃条件下烘
干，得裂褶菌胞外多糖(SPG2)［15，16］。
2． 3 肿瘤动物模型的建立 取腹腔内传代 7 d的肉瘤 S180小鼠，脱
臼处死小鼠，在无菌条件下抽取腹腔内瘤细胞，并以生理盐水洗涤
3次，2 500 r /min离心 3 min，弃上清液，用无菌生理盐水调整肿瘤
细胞浓度为 5 ×106 /ml，接种于小鼠右腋窝皮下(0． 2 ml /只)。
接种 24 h 后称重并随机分为 8 组，每组 10 只，分别为空白
对照组、阳性对照组(CTX，30 mg /kg)、SPG1 高剂量(500 mg /kg)
+ CTX组、SPG1 中剂量(250 mg /kg)+ CTX组、SPG1 低剂量(125
mg /kg)+ CTX组、SPG2 高剂量(500 mg /kg)+ CTX组、SPG2 中
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 2 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 2 期
剂量(250 mg /kg)+ CTX组、SPG3 低剂量(125 mg /kg)+ CTX组。接种 24 h
后灌胃给药(20 ml /kg)10 d，停药后次日处死，称重，取瘤块、胸腺及脾脏，
计算抑瘤率、胸腺指数及脾脏指数。
抑瘤率(%)=(空白组瘤重 －给药组瘤重 /空白组瘤重)× 100%
胸腺指数 =胸腺重 /体质量(mg /g)
脾脏指数 =脾重 /体质量(mg /g)
2． 4 统计学处理 SPSS12． 0 软件进行统计学处理，分析组间差异，试验结
果用 珋x ± s表示。
3 结果
3． 1 SPG1 及 SPG2 对荷瘤小鼠化疗的减毒作用 实验结果显示，给药后，
CTX组小鼠体质量明显下降，与该组相比，多糖与 CTX 联合治疗可使小鼠
体质量有不同程度的升高，以低剂量组最为显著(P ＜ 0． 01) ;与 CTX 组相
比，SPG2 低剂量与 CTX合用组小鼠胸腺系数有显著性升高(P ＜ 0． 05) ，为
2． 88 ± 1． 53，脾系数则有极显著性升高(P ＜ 0． 01) ，为 8． 91 ± 1． 76。以上表
明，裂褶菌多糖 SPG1 及 SPG2 能缓和 CTX导致的体质量下降，减轻其对免
疫系统的破坏作用，具有减毒功效。如表 1 所示。
表 1 SPG1 及 SPG2 对荷瘤小鼠化疗的减毒作用(珋x ± s)
组别
剂量 C /mg·kg － 1
CTX
裂褶菌
多糖
小鼠体质量 m /g
给药前 给药后
胸腺系数 脾系数
空白对照 0 0 19． 00 ± 0． 47 22． 98 ± 1． 69 3． 53 ± 2． 06 10． 48 ± 1． 03
CTX对照 30 0 19． 35 ± 0． 82 19． 71 ± 1． 68 1． 50 ± 0． 86 6． 70 ± 1． 20
SPG1 高剂量 + CTX 30 500 19． 10 ± 1． 60 21． 49 ± 1． 54* 1． 79 ± 0． 89 7． 36 ± 1． 67
SPG1 中剂量 + CTX 30 250 19． 15 ± 1． 38 22． 14 ± 2． 57* 2． 11 ± 0． 92 7． 90 ± 1． 60
SPG1 低剂量 + CTX 30 125 19． 45 ± 1． 79 22． 56 ± 2． 39＊＊2． 45 ± 1． 45 7． 97 ± 0． 85*
SPG2 高剂量 + CTX 30 500 19． 35 ± 1． 25 21． 30 ± 1． 99 1． 89 ± 1． 08 6． 87 ± 1． 84
SPG2 中剂量 + CTX 30 250 19． 35 ± 1． 18 21． 99 ± 2． 46* 2． 49 ± 1． 28 8． 04 ± 1． 85
SPG2 低剂量 + CTX 30 125 19． 65 ± 1． 31 22． 63 ± 2． 47＊＊2． 88 ± 1． 53* 8． 91 ± 1． 76＊＊
与 CTX对照组比较，* P ＜0． 05，＊＊P ＜0． 01
3． 2 SPG1 及 SPG2 对荷瘤小鼠化疗的增效作用 实验结果显示，SPG1、
SPG2 与 CTX联合应用均对肉瘤 S180表现出较好的抑制作用，随着多糖浓度
降低，抑瘤率增加。与 CTX组比较，无显著差异。SPG2 低剂量 + CTX 组的
抑瘤率最高，达 74． 48%。如表 2 所示。
表 2 SPG1 及 SPG2 对荷瘤小鼠化疗的增效作用(珋x ± s)
组别
剂量 C /mg·kg －1
CTX 裂褶菌多糖
瘤重 m / g 抑瘤率(%)
空白对照 0 0 2． 64 ± 0． 32 －
CTX对照 30 0 0． 94 ± 0． 38 64． 47
SPG1 高剂量 + CTX 30 500 1． 44 ± 0． 36＊＊ 45． 30
SPG1 中剂量 + CTX 30 250 0． 90 ± 0． 39 65． 75
SPG1 低剂量 + CTX 30 125 0． 77 ± 0． 39 70． 88
SPG2 高剂量 + CTX 30 500 1． 43 ± 0． 11＊＊ 45． 87
SPG2 中剂量 + CTX 30 250 0． 84 ± 0． 45 68． 29
SPG2 低剂量 + CTX 30 125 0． 67 ± 0． 18 74． 48
与 CTX对照组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01;n = 10
4 讨论
环磷酰胺是临床上常用的一种烷化剂类的化疗药物，主要用于恶性淋
巴瘤、多发性骨髓瘤、急性淋巴细胞白血病等多种恶性肿瘤的治疗。但由于
其对免疫系统的抑制作用，可引起病人机体衰弱，恶性反复的感染，继发性
肿瘤，进而病情恶化，加速病人死亡［17］。因此研究既能提高其疗效，又可减
轻毒副作用的药物显得十分重要。
近年来，研究表明，真菌多糖不仅具有抗肿瘤作用，而且在免疫调节方
面具有多功能、双向调节及毒副作用小等优点，被认为是较好的化疗辅助药
物。袁强［18］研究表明，金针菇多糖与小剂量 CTX 联用能明显提高 CTX 对
小鼠移植性 S180肉瘤的抑瘤率，同时能明显对抗 CTX 所致的小鼠白细胞减
少和免疫器官萎缩，拮抗 CTX 所致的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的降低，
恢复免疫受抑小鼠的淋巴细胞转化功能以及细胞杀伤活性。马岩等［19］实
验结果显示，黄蘑多糖与 CTX 配伍使用具有良好的减毒和增效作用，可增
强荷瘤小鼠机体免疫力，提高淋转和 IL － 2 的水平。
本实验研究表明，通过液体发酵得到的裂褶菌胞内及胞外多糖对环磷
酰胺具有明显的减毒增效作用。CTX 组小鼠在服药
期间表现出食欲不佳，精神状态差，身体明显消瘦，体
质量、胸腺系数和脾脏系数均明显下降。与 CTX 组相
比，SPG2 低剂量与 CTX 合用组小鼠胸腺指数有显著
性升高，脾脏指数则有极显著性升高，因此认为裂褶菌
发酵多糖能减少环磷酰胺的毒副作用，具有一定的减
毒作用。此外，中、低剂量多糖与 CTX 联用可抑制肉
瘤 S180的增长，且比单独化疗效果好，其中 SPG2 低剂
量 + CTX组的抑瘤率最高，为 74． 48%，因此认为裂褶
菌发酵多糖能提高环磷酰胺的抗肿瘤效果，具有一定
的增效作用。
裂褶菌多糖对其他抗肿瘤药如顺铂、阿霉素、5 －
氟尿嘧啶等是否具有减毒增效作用，以及其具体的减
毒增效机制还有待于进一步研究。
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