全 文 ：— 39 —现代中药研究与实践2010年第24卷第4期Chin Med J Res Prac,2010 July,Vol.24 No.4
九牛造原植物为大戟科湖北大戟 Euphorbia
hylinoma Hand-Mazz.，民间常以根入药，用于治疗肝
硬化腹水、瘀血作痛、积聚腹胀等 [1]。化学成分研究
表明九牛造中含有大量鞣酸类化合物，多羟基结构对
九牛造提取物抗氧化活性研究
郑其萍 1，郭增军 2*，徐 颖 2， 谭 林 2， 马依然 2
（1. 西安市铁路中心医院药剂科 , 陕西 西安 710054 ；2. 西安交通大学医学院，陕西 西安 710061）
摘要：目的 研究九牛造的抗氧化活性。方法 以抗坏血酸为阳性对照，通过DPPH法、邻苯三酚自氧
化法、邻二氮菲-Fe2+法测定九牛造不同极性萃取物清除DPPH•、•O2–和•OH的能力。结果 丙酮提取物对三
种自由基均有较好的清除作用，其能力优于或相当于维生素C，且其抗氧化物质主要集中于95%乙醇洗脱部
分。结论 九牛造具有一定的抗氧化活性，尤其是丙酮部分有进一步分离开发的价值。
关键词 ：九牛造 ；DPPH• ；•O2- ；•OH ；抗氧化活性
中图分类号 ：R285.5 文献标识码 ：A 文章编号 ：1673-6427(2010)04-0039-03
Study on Antioxidant Activities of Euphorbia hylinoma Hand-Mazz.
ZHENG Qi-ping 1, GUO Zeng-jun 2 , XU Ying 2, TAN Lin2, MA Yi-ran 2
(1. Department of Pharmacy, Xi’an Railway Central Hospital , Xi’an 710054, China; 2. Faculty of Pharmacy,
School of Medicine, Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710061, China)
Abstract: Objective To evaluate the antioxidant activities of Euphorbia hylinoma. Methods With
activity of ascorbic acid as reference, DPPH assay, Pyrogallol self-oxidation assay and Orthophenanthroline-
ferrous assay were employed to assess the effect of various polar fractions from E. hylinoma. Results The
scavenging activities of acetone fraction against to three kinds of free radical were as high as or even higher than
that of ascorbic acid, and 95% ethanol elution contained most of antioxidant agent. Conclusion It was found that
various polar fractions especially the acetone fraction had higher antioxidant activity from E. hylinoma.
Key words: Euphorbia hylinoma Hand-Mazz.; DPPH•; •O2-; •OH; antioxidant activities
于开发天然抗氧化剂具有一定价值。本实验通过对不
同极性溶剂提取部分进行抗氧化活性的测定，了解抗
氧化活性成分在各相的分布，为进一步进行单体化合
物的分离以及抗氧化与抗癌活性的研究提供依据。
1 材料与仪器
九牛造药材于 2005年 10月采自陕西太白县境
内，由本课题组郭增军博士鉴定为大戟科湖北大戟
Euphorbia hylinoma Hand-Mazz.的根；DPPH（美国
收稿日期：2009-12-10
作者简介：郑其萍，女，副主任药师，主要从事临床药学及心血管药物研
究工作。
*通讯作者：郭增军，博士，硕士研究生导师。Tel：029-82655133，
E-mail：guozj@mail.xjtu.edu.cn
子宫组织中 PGF2α含量和提高内源性镇痛物质 β-EP
含量有关，这一观点为研究该方物质基础的作用机制
提供了一定的研究思路。
4.2 相关文献 [2-5]表明该方组方药味中的脂溶性成分
具有显著的生物活性，是活血止痛的重要活性物质基
础。其中占石油醚提取物含量比重最多的桃仁脂肪酸
能明显的延长小鼠凝血时间，改善小鼠耳廓微循环，
改变急性血疲模型大鼠血液流变学的指标的作用 [5]。
实验结果表明桃红四物汤的醇提部位的镇痛作用要
优于桃红四物汤水提部位，而醇提物细分部位中石
油醚部位的药效作用最好，并具有一定的量效关系，
提示本方在临床用药过程中应注重其脂溶性成分对
镇痛功效的贡献。
参考文献
[1] 刘 冬 , 谭秦莉 , 李玉宝 , 彭代银 . 桃红四物汤治疗原发性痛经实验研究
[J]. 安徽中医学院学报 .2009, 28 (2): 46-48
[2] 刘琳娜 , 梅其柄 , 尚 磊 , 等 . 当归精油对大鼠离体子宫平滑肌收缩的影
响 [J]. 中成药 , 2004, 26 (4): 308-311
[3] 宿树兰 , 华永庆 , 段金廒 , 等 . 当归 - 川芎挥发性成分与其抗子宫痉挛
活性相关性分析 [J]. 中国实验方剂学杂志 ,2009, 15 (2): 64-67
[4] 徐 立 , 时 乐 , 李 祥 , 等 . 加减桃红四物汤醇提物对寒凝血瘀模型小鼠微
循环和凝血时间的影响 [J]. 江苏中医药 ,2008, 40(11): 120-122
[5] 颜永刚 , 桃仁质量研究 [D]. 成都中医药大学博士学位论文 ,2008: 42-49.
DOI:10.13728/j.1673-6427.2010.04.031
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Sigma公司）、邻苯三酚（天津市博迪化工有限公司）、
邻二氮菲（天津市河东区红岩试剂厂），其它试剂均
为分析纯。
752型紫外可见分光光度计（上海第三分析仪
器厂），Spectrum-2000分光光度计（上海光谱仪器有
限公司），电热恒温水浴锅（广东省汕头市医疗器械
二厂），SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵（河南省巩义
市英峪予华仪器厂），SENCO R系列型旋转蒸发仪（上
海申生科技有限公司）。
2 实验方法
2.1 九牛造提取物及其它样品的制备 九牛造根 200
g粉碎 ,甲醇为溶剂，用索式提取器回流提取两次，
每次 24 h，合并提取液，减压蒸馏回收溶剂，得浓缩
浸膏 67 g。将浸膏依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、
正丁醇萃取，减压蒸馏回收溶剂，得到石油醚萃取
物 4.5 g、氯仿萃取物 2.5 g、乙酸乙酯萃取物 3.6 g、
正丁醇萃取物 9 g，水相残余液 35.2 g。上述水相残
余液的浸膏在大孔吸附树脂下用 30%，50%，70%，
95%不同浓度的乙醇溶液进行洗脱，从而将水部分
初步分离成不同浓度乙醇溶液的洗脱部分。
另取九牛造根 1.5 kg，粉碎，丙酮浸提取两次，
每次 24 h，提取液合并，回收溶剂，得到丙酮提取
物 300 g。上述丙酮提取物浸膏在大孔吸附树脂下用
95%，70%，50%，30%不同浓度的乙醇溶液以及水
进行洗脱，从而将丙酮部分初步分离成不同浓度乙醇
溶液的洗脱部分。
2.2 清除 DPPH•活性的测定 取 4 mg DPPH于 100
mL容量瓶中定容成 0.1 mmol/L的甲醇溶液，振摇
30 min，使其充分溶解，避光保存（当天使用）。将
试验样品配制成适当浓度甲醇溶液，微孔滤膜过滤。
取 7 对比色皿，在对照组中分别加入 0、5、10、
20、40、70、100 µL样品溶液和 3 mL甲醇作为空白
对照组，在样品组中分别加入 0、5、10、20、40、
70、100 µL样品溶液和 3 mL DPPH溶液，用滴管混
合均匀，闭光反应 30 min，然后在 517 nm处依次以
相应对照调零，测定样品组的吸光度 A，以所测得的
吸光度计算样品对自由基的清除率，公式如下：
CR（％）=（ADPPH－ A样品）/ADPPH × 100 %
式中：
CR:清除率；
ADPPH:不加样品只加 DPPH管吸光度；
A样品 :既加样品也加 DPPH管吸光度；
然后计算半数清除浓度 IC50，平行测定三次，
取其平均值，并与抗坏血酸的 IC50进行比较来初步
判定样品的抗氧化活性。
2.3 清除 •O2-活性的测定 采用 Marklund法 [2]再
加以改良，在 3 mL 反应体系中，加入缓冲液 1.5
mL，然后分别加入 6 mmol•L-1 邻苯三酚盐酸溶液 0.3
mL，再用双蒸水将反应体系总体积补充至 3 mL，用
滴管迅速混匀，在 λ420 nm波长下每 30 s测定一次吸光
度，连续测定 10 min，以对照管调零，计算邻苯三
酚自氧化速率。然后在 3 mL比色皿中加入缓冲液 1.5
mL、适量样品液、双蒸水后混匀，再加入邻苯三酚
溶液 0.3 mL，使总体积为 3.0 mL，用滴管迅速混匀，
放入紫外可见分光光度计中，在 λ420 nm波长下，每
30 s测定一次吸光度，连续测定 10 min，同时以邻苯
三酚空白对照调零，在 6 min内考察其线性关系，由
吸光度 A对时间 t（min）线性回归，回归方程的斜
率为邻苯三酚自氧化速率△ A（吸光度值 /min）。然
后以抑制率 IR（%）对样品浓度进行线性回归得到
浓度 -抑制曲线，其中抑制率计算公式如下：
IR(%) =（△ A邻苯三酚- △ A样品）/ △ A邻苯三酚×100%
式中：
IR：抑制率，%
△ A邻苯三酚 ：不加样品时自氧化速率，吸光度值 /min
△ A样品 ：加入样品后自氧化速率，吸光度值 /min
再将 IR=50% 带入浓度 -抑制曲线计算得到样品
IC50值，平行测定三次，取其平均值。
2.4 清除 •OH活性的测定 参考文献 [3]的方法，在
10 mL试管中，分别加入 0.3 mol•L-1 PBS 缓冲液（pH
=7.4）、7.5 mmol•L-1邻二氮菲溶液，充分混匀后再加
入 7.5 mmol•L-1 FeSO4溶液，再充分混匀，防止局部
颜色过浓，影响试验结果重复性，再将样品配成适当
的浓度，分别加入 0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.7、1.0
mL的样品溶液，然后加入 0.1％ H2O2溶液，最后用
蒸馏水将体积补为 4.0 mL，以 H2O2空白为对照。加
样完成后 37 ℃保温 1 h，然后在 λ536nm测定各管的吸
光度值，结果用对照管吸光度 A0减去测试管吸光度
值 A1的结果△ A来反应产生羟自由基的量，并计算
清除率，公式如下：
CR(%) ＝△ A样品 / △ AH2O2 ×100%
式中：
CR：清除率；
△ A样品 ：样品测定空白管与样品测定管的吸光度差值；
△ A H2O2 ：标准空白管与H2O2 标准管的吸光度差值；
以清除率对样品浓度进行对数回归，即得到清
除曲线，再将 CR=50%带入回归方程式中计算样品
IC50值，平行测定三次，取其平均值。
3 实验结果
将 CR=50%分别代入各个样品的三个指数方程
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中计算 IC50值，取其平均值，各样品及抗坏血酸清
除自由基的 IC50见表 1。
由表 1可以看出，丙酮提取物对于三种自由基
均有较好的清除作用，其清除 DPPH•和 •OH的能力
优于维生素 C，此外水相对于三种自由基清除能力一
致性较差，故对丙酮提取物及水相上 D101大孔吸附
树脂后，不同乙醇洗脱液进行抗氧化活性测定，结果
分别见表 2和表 3。
由表 2可以看出，丙酮部分 95%乙醇洗脱液部
分抗氧化活性最强，有进一步分离单体化合物的价
值。
由表 3可以看出，水相 30%乙醇洗脱液部分及
95%乙醇洗脱液部分抗氧化较优。
4 讨论
综合三种抗氧化实验，结果都表明九牛造丙酮
提取物具有良好的抗氧化活性，其自由基清除能力优
于或相当于维生素 C，推测这与丙酮提取物中含大量
鞣花酸化合物相关，进一步测定鞣花酸类单体化合物
的活性可证实此推测。此外体外抗肿瘤活性亦表明丙
酮提取物对肿瘤细胞的增殖具有良好的抑制作用，
抗氧化活性与抗肿瘤活性的关联性也有待进一步阐
释。
参考文献
[1] 郭增军 , 吕居娴 , 李映丽 , 等 . 九牛造生药学研究 [J]. 西安医科大学
报 ,1996,17(3):313-318.
[2] Marklund S , Marklund G. Eur. J .Biochem, 1974 ,47(3):469~474.
[3] 金 鸣 , 蔡亚欣 , 李金荣，等 . 邻二氮菲－ Fe2 ＋氧化法检测H2O2/Fe2+
产生的羟自由基 [J]. 生物化学与生物物理进展 ,1996,23(06):553-555.
表3 水相不同乙醇洗脱液清除自由基的IC50
Tab.3 IC50 of water extract for free radical scavenging activity from E.
hylinoma
样品
水相
30%乙醇洗脱液
50%乙醇洗脱液
70%乙醇洗脱液
95%乙醇洗脱液
维生素C
DPPH•(µg•mL-1)
6.89±0.35
1.96±0.34
4.89±1.02
10.61±1.84
2.93±0.43
3.02±0.23
•O2-(µg•mL-1)
204.23±32.01
87.20±3.34
140.53±10.45
324.18±23.53
85.21±9.06
34.91±1.25
北苍术炮制前后挥发油部位保肝作用比较研究
沙多依， 杭永付， 宋 菲 ， 许 瑞 ，丁选胜 *
（中国药科大学临床药学教研室 江苏 南京 210009）
摘要：目的 比较生苍术及麸炒苍术挥发油部位的保肝作用。方法 提取制备生苍术和麸炒苍术挥
发油；采用四氯化碳（CCl4）复制急性肝损伤模型，观察不同组别药物对小鼠血清转氨酶以及摄食量、饮
水量、体重、肝、肾、脾、胸腺等脏器系数的影响。结果 麸炒苍术挥发油组能显著降低小鼠血清AST和
ALT水平。结论 麸炒苍术挥发油部位的保肝作用强于生苍术。
关键词 ：北苍术 ；生苍术 ；麸炒苍术 ；挥发油 ；保肝作用
中图分类号 ：R283.1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1673-6427(2010)04-0041-03
Study on the Protecting-liver Effect of Volatile Oil of pre and post Processing Cangzhu
SHA Duo-yi, HANG Yong-fu, SONG Fei, XU Rui, DING Xuan-sheng
（Department of Clinical Pharmacy，China Pharmaceutical University，Nanjing 210009，China）
收稿日期：2010-02-18
作者简介：沙多依（1974-），女，药理学专业硕士研究生（突尼斯籍留学生）。
*通讯作者：丁选胜，副教授，硕士生导师。E-mail：dxs0162@sina.com
表1 九牛造不同极性提取物清除自由基的IC50
Tab.1 IC50 of various polar fractions for free radical scavenging activity
from E. hylinoma
样品
石油醚萃取物
氯仿萃取物
乙酸乙酯萃取物
正丁醇萃取物
水相
丙酮提取物
维生素C
DPPH•(µg•mL-1)
12.33±2.12
6.12±0.19
1.68±0.84
2.92±0.43
6.89±0.35
3.15±0.47
3.02±0.23
•O2-(µg•mL-1)
649.29±75.43
975.76±86.35
564.24±43.85
886.97±94.56
204.23±32.01
180.72±10.25
34.91±1.25
•OH(µg•mL-1)
129.56±20.83
406.92±76.46
132.16±15.43
237.91±35.92
217.56±34.76
50.72±6.38
268.45±10.28
表2 丙酮提取物不同乙醇洗脱液清除•DPPH的IC50
Tab.2 IC50 of acetone extract for free radical scavenging activity from E.
hylinoma
样品
IC50(µg•mL
-1)
丙酮提
取物
3.15±
0.47
95%
乙醇
1.73±
0.32
70%
乙醇
2.710
±0.57
50%
乙醇
3.82±
0.37
30%
乙醇
2.46±
0.32
水洗
脱液
7.55±
0.47
维生素
C
3.02±
0.23